一、发展中的山东济宁医学院附属医院（论文文献综述）
杨淑侠,蔡素丽,杨宁,姚慧,刘宏生[1]（2021）在《幽门螺杆菌感染对代谢综合征患者血糖血脂代谢的影响》文中进行了进一步梳理目的分析幽门螺杆菌（Hp）感染对代谢综合征患者血糖血脂代谢的影响。方法对2017年11月-2020年11月于济宁医学院附属医院就诊的1 196例代谢综合征患者进行研究。依据14C-尿素呼气试验结果将1 196例代谢综合征患者分为Hp阳性组（n=498）和Hp阴性组（n=698）。对两组的血脂、血糖相关指标水平进行比较,对两组各项血脂、血糖异常率和其余临床资料进行比较,并归纳Hp阳性的影响因素。结果 Hp阳性组的体质量指数（BMI）、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）高于Hp阴性组（P<0.05）;Hp阳性组的血清葡萄糖（GLU）、空腹血糖（FBG）、餐后2 h血糖（2h PG）、糖化血红蛋白（HbA1c）和空腹胰岛素（FINS）高于Hp阴性组（P<0.05）;Hp阳性组的BMI、甘油三酯、总胆固醇、LDL-C、GLU、FBG、2h PG、HbA1c和FINS异常率高于Hp阴性组（P<0.05）;Hp阳性组的体质量、腰围、臀围、腰臀比（WHR）高于Hp阴性组（P<0.05）;回归过程采用逐步后退法,以进行自变量的选择和剔除,设定α剔除=0.10,α入选=0.05。回归结果提示:体质量指数（BMI）、甘油三酯、GLU、FBG是Hp阳性的影响因素（P<0.05）。结论 Hp感染会加重代谢综合征患者的血糖和血脂代谢紊乱,增大各项血脂、血糖异常发生率,且糖脂代谢紊乱也为Hp感染的影响因素。
李庆伟,张勇,孟纯阳[2]（2021）在《一切为了大众健康——记发展中的山东省济宁医学院附属医院脊柱外科》文中进行了进一步梳理光阴荏苒,岁月如梭。回顾百年历史,在中国共产党领导下,中国人民一步步从站起来,富起来,到强起来,正满怀豪情地走进新时代,走向实现中国梦的伟大征程。济宁医学院附属医院沐浴着党的光辉,一路走来,书写着"一切为了大众健康"的历史诗篇。回顾百年前,济宁市医疗卫生条件极差,缺医少药,各种传染病、慢性病严重威胁着人民群众的生命健康。新中国成立后,党和政府高度重视人民群众健康,大力发展卫生事业,逐步改变了当地极为落后的医疗条件。
韩发兰[3]（2021）在《ATG16L1基因启动子在急性心肌梗死病人中的遗传变异及功能研究》文中研究表明背景:急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）是由遗传因素和环境因素相互作用引起的一种常见的复杂疾病,是冠状动脉性心脏病（coronary artery disease,CAD）的一种严重类型,也是导致世界范围内死亡的主要原因。自噬是溶酶体介导的细胞器和蛋白质降解的过程,在维持细胞稳态中起重要作用。自噬与心血管疾病、神经退行性疾病、恶性肿瘤、免疫性疾病等的发生、发展相关。在心血管系统中,自噬对维持血管和心脏的稳态和功能至关重要,并参与许多心血管病的发生与发展。有研究表明,自噬缺陷会损伤血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和心肌细胞,导致心脏功能障碍。自噬相关16L1（autophagyrelated 16-like 1,ATG16L1）是自噬的关键调控因子,在诱导自噬过程中发挥关键作用,虽然有一些关于ATG16L1在免疫、动脉粥样硬化和心肌细胞背景下的研究和报道,还没有关于ATG16L1基因在冠心病或AMI发生发展中相关作用的研究。我们推测ATG16L1基因启动子区域序列的变异,可能会作为低频危险因素参与人类AMI的发生与发展。目的:通过鉴定AMI和对照组中ATG16L1基因启动子区域的序列变异情况,并对DNA序列变异（DNA sequence variants,DSVs）及单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）进行数据统计分析,完成对ATG16L1基因启动子区域的遗传变异研究。通过进一步研究ATG16L1基因启动子区域的变异序列对ATG16L1基因转录活性的影响,以及与AMI相关的DSVs和SNPs对ATG16L1基因启动子与转录因子的结合改变情况,对ATG16L1基因启动子进行功能分析,从基因水平研究AMI发病的遗传因素和分子机制,结合环境因素,为AMI的评估、预防、治疗研究提供分子遗传学基础。方法:1.采用病例对照的研究方法,对329例AMI患者和359例对照人群的ATG16L1基因启动子用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增片段并测序,结合DNA测序后的序列及比对SNPs数据库后进行数据统计和分析。2.采用Fisher’s确切概率检验法进行两组SNPs的等位基因分布频率Hardy-Weinberg平衡检验,分析本次所研究的群体是否达到了遗传平衡,以及本次群体研究的数据可信度。等位基因和基因型频率的显着性差异用卡方检验评估。采用Logistic回归分析的优势比（OR）和95%置信区间（CI）来衡量SNPs与AMI发病的相关性。利用在线软件SNP-Stats（https://www.snpstats）在校正年龄和性别后对五种遗传模型（显性、共显性、过显性、隐性和对数加性）与AMI发病的关联进行分析。3.使用HaploView软件（4.2版本）进行SNPs间的连锁不平衡分析（linkage disequilibrium,LD）,并使用 SHE-sis 在线软件（http://analysis.bio-x.cn/SHEsisMain.htm）进行单倍型关联分析。使用广义多因子降维法（generalized multifactor dimensionality reduction,GMDR）软件分析SNP-SNP之间的交互作用。4.针对ATG16L1基因启动子的变异序列构建含有目的基因片段的重组质粒,通过转染HEK-293和H9c2细胞,利用双荧光素酶报告基因检测（dual luciferase reporter assay,DR）荧光素酶的表达水平,对ATG16L1基因启动子区域的变异序列进行功能分析。5.对于仅在AMI病人中鉴定出的ATG16L1基因启动子变异位点,利用TRANSFAC数据库分析预测在人类中受影响的转录因子,并通过凝胶电泳迁移率实验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测蛋白质与DNA序列在体外的相互作用。研究结果:1.对690名受试者的ATG16L1基因启动子区PCR片段进行序列检测,共鉴定出12个DSVs,包括10个SNPs。在5例AMI患者中鉴定出3个SNPs（g.233250693 T>C[rs185213911],g.233250946 G>A[rs568956599]和 g.233251133 C>G[rs1301744254]）,对照组中未发现。此外,6 个 SNPs（g.233250522 G>C[rs75824126],g.233250873 G>A[rs146693112],g.233250963 T>C[rs1816753],g.233251039 T>C[rs12476635],g.233251112 A>T[rs74599577],and g.233251699 T>G[rs2289477]）在的 AMI 患者和对照组中均出现,且在两组中频率相似（P>0.05）。2.经Hardy-Weinberg平衡检验,两组中 SNPs（rs75824126,rs185213911,rs146693112,rs568956599,rs1816753,rs12476635,rs74599577,rs1301744254,rs2289477）等位基因分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡（对照组:P=0.747、1.000、0.380、0.158、0.747、1.000、0.747、1.000、0.380、0.158、0.747、1.000;AMI组:P=0.550、0.959、0.967、0.138、0.398、0.550、0.956）,这表明样本来自遗传平衡群体且有很好的代表性。卡方检验分析呈示,AMI组和对照组间基因型分布及等位基因频率无统计学的差异（P>0.05）。非条件Logistic回归分析显示,ATG16L1基因启动子区的9个SNPs与AMI发病无统计学的关联（P>0.05）。ATG16L1启动子区的SNPs与AMI间的五种遗传模型差异无统计学意义（P>0.05）。3.利用HaploView和SHE-sis软件对ATG16L1基因启动子区域9个SNPs的LDs和单倍型分析结果显示,rs75824126和rs74599577之间存在完美LD（D=1.000,r2=1.000）,rs1816753 和 rs2289477 彼此连锁（D’>0.800,r2>0.330）;rs1816753和rs12476635组成LD单倍型模块。在单倍型分析区域中,ATG16L1启动子的单单倍型在AMI组与对照组的频率分布上没有显着差异（P>0.05）。SNP-SNP之间的交互作用均无统计学差异（P>0.05）。4.通过构建包含野生型和变异型（wild-type,pGL3-WT,pGL3-233250693C,pGL3-233250873A,pGL3-233250946A,pGL3-233251039C,pGL3-233251111T,pGL3-233251133G,pGL3-233251186G,pGL3-233251524C,pGL3-233251563T,and pGL3-233251699G）的ATG16L1启动子的荧光素酶PGL3报告基因载体,将已经构建好的报告基因载体与内参质粒pRL-TK在体外共转染到HEK-293和H9c2细胞内,检测双荧光素酶活性,将ATG16L1基因启动子突变体的转录活性与野生型（100%）比较结果显示,三个仅在 AMI 组中鉴定的 SNPs（233250693 T>C[rs185213911],233250946 G>A[rs568956599],233251133 C>G[rs1301744254]）显着增加了 ATG16L1 基因启动子的转录活性（P<0.05）。5.通过TRANSFAC数据库分析预测受DSVs影响的转录因子的结合位点,发现在AMI患者中鉴定的SNPs可以创造、修饰和消除转录因子的假定结合位点。其中,SNP g.233250693 T>C（rs185213911）可创造转录因子 NF-kappaB、GKLF 的结合位点,削弱转录因子ETS1的结合,消除转录因子RBP-Jkappa、TCF-1的结合位点;g.233250946 G>A（rs568956599）创造转录因子PPAR和VDR的结合位点,增强转录因子T3R-β的结合,削弱转录因子AP-2 α和CP2的结合,消除转录因子Elk-1、Fli1、ETS1的结合位点;g.233251133 C>G（rs1301744254）可创造转录因子 ZIC3、Zbtb44 和 SREBP-1/2的结合位点,削弱转录因子c-MAF的结合,消除转录因子meis1、HDAC1、ATF-4和CTCF的结合位点。EMSA结果显示,g.233250693 T>C（rs185213911）削弱了转录因子与ATG16L1基因启动子的结合,g.233251133 C>G（rs1301744254）消除了转录因子与ATG16L1基因启动子的结合,而g.233250946 G>A（rs568956599）没有影响转录因子的结合。因此,DSVs可能通过干扰转录因子与ATG16L1基因启动子的结合来改变ATG16L1基因启动子的活性,影响ATG16L1基因转录水平,进而改变自噬水平及功能以影响AMI的发生和发展。研究结论:在本研究中,对ATG16L1基因启动子在AMI中的遗传变异及功能进行分析。在AMI患者中鉴定出三个DSVs,显着改变了 ATG16L1基因启动子的转录活性,其中两个DSVs明显影响了相关转录因子的结合。因此,这些DSVs可能导致ATG16L1基因表达失调,作为低频危险因素通过自噬及非自噬功能促进AMI的发生发展。
王健,张师前,刘玉光,崔才三,杜广中,齐峰,卢雪峰,麻琳,夏庆华,于灵芝[4]（2021）在《女性慢性盆腔疼痛临床管理的专家共识（2021年版）》文中研究表明女性慢性盆腔疼痛（chronic pelvic pain, CPP）是一种涉及多系统多学科的常见疾病,严重影响患者的身体健康和生活质量,也是全球妇科医生面临的最大挑战之一。CPP症状复杂,临床表现多样化,病变部位可能涉及女性生殖系统、泌尿系统、消化系统、肌肉骨骼系统,还能影响情绪心理等方面[1]。欧洲泌尿外科协会（European Association of Urology, EAU）和英国皇家妇产科学院（Royal College of Obstetricians and Gy-necologists, RCOG）的指南均强调多学科联合评估和跨学科之间的联合干预。
范琳琳[5]（2021）在《慢性心力衰竭患者血浆外泌体miR-206的表达及临床意义》文中进行了进一步梳理目的:通过对慢性心力衰竭（Chronic heart failure,CHF）患者及对照组患者进行血浆外泌体mi R-206（Exosomal micro RNA-206,Exo-mi R-206）水平的检测,探讨Exo-mi R-206在CHF诊断及其严重程度评估中的意义,有望为CHF的诊断提供新的评价指标。方法:选择符合《2018中国心力衰竭诊断和治疗指南》的射血分数降低的CHF患者51例为CHF组,其中根据病因可具体分为缺血性心肌病（n=21）、高血压性心脏病（n=16）、扩张型心肌病（n=14）;并选取年龄、性别、体重指数（Body mass index,BMI）、吸烟、饮酒、高血压、糖尿病发生率相匹配的住院患者35例为对照组。两组患者均进行:（1）入院后2小时内急查血浆脑钠肽（Brain natriuretic peptide,BNP）,并在清晨空腹抽取肘静脉血完成血常规、肝功、肾功、心肌酶、D-二聚体等指标测定;（2）超声心动图测量左房内径（Left atrium diameter,LAD）、左室舒张末期内径（Left ventricular end-diastolic diameter,LVDd）、左室射血分数（Left ventricular ejection fraction,LVEF）;（3）标本检测:（1）差速离心法提取血浆外泌体;（2）透射电镜鉴定外泌体形态,蛋白免疫印记法检测外泌体标记蛋白CD63、热休克蛋白70;（3）超纯RNA提取试剂盒提取外泌体mi RNA;（4）实时荧光定量PCR技术检测血浆中Exo-mi R-206的表达;（4）采用SPSS22.0系统分析比较两组血浆Exo-mi R-206水平及BNP、LAD、LVDd、LVEF之间的差异以及上述指标诊断CHF的效能。结果:对两组患者的基本数据（性别、年龄、BMI、吸烟、饮酒、高血压及糖尿病发病率）比较,差异无统计学意义（P>0.05）;CHF组BNP水平、LAD和LVDd高于对照组（P<0.05）,LVEF低于对照组（P<0.05）。CHF组血浆Exo-mi R-206高于对照组（P<0.05）,且随着NYHA分级升高而升高（P<0.05）,不同病因（缺血性心肌病、高血压性心脏病、扩张型心肌病）组间血浆Exo-mi R-206无明显差异（P>0.05）。LAD、LVDd和BNP与CHF患者血浆Exo-mi R-206水平呈正相关（r=0.415,r=0.514,r=0.428,P<0.05）,LVEF与CHF患者血浆Exo-mi R-206水平呈负相关（r=-358,P<0.05）。BNP、LAD、LVDd和LVEF诊断CHF的受试者工作特征（Receiver operating characteristic,ROC）曲线下面积（Area under curve,AUC）分别为0.864、0.699、0.717和1.000;Exo-mi R-206对诊断CHF的AUC为0.804;Exo-mi R-206+BNP+LAD+LVDd联合对诊断CHF的AUC为0.897。结论:（1）CHF患者血浆Exo-mi R-206水平明显升高,并随着心衰严重程度而增高,且不同病因CHF患者表达水平无明显差异。（2）Exo-mi R-206对诊断CHF有较好的敏感度和特异性,是诊断CHF的特异性标志物之一。
高雅文[6]（2021）在《三子养亲汤合定喘汤对支气管哮喘急性发作期IL-4、IFN-γ、CysLTs和肺功能的影响》文中研究指明目的:支气管哮喘急性发作期患者口服三子养亲汤合定喘汤联合常规西药治疗,通过检测治疗前后患者血清IL-4、IFN-γ、CysLTs、肺功能的改变,探讨三子养亲汤合定喘汤对支气管哮喘急性发作患者的治疗效果,并从炎症反应方面探讨中药方剂的治疗机制。方法:选取2019年5月-2020年10月于济宁医学院附属医院呼吸与危重症医学一科就诊的轻中度支气管哮喘急性发作患者,根据治疗方法的不同,将患者分为常规治疗组（对照组,40例）和三子养亲汤合定喘汤联合常规治疗组（治疗组,50例）。通过电子病案系统获取研究人群的临床基线资料,通过ELISA方法检测患者治疗前后血清中IL-4、IFN-γ、CysLTs的水平。通过收集临床数据,比较治疗前后两组患者肺功能（FEV1、FVC、PEF）的变化。结果:与治疗前相比,治疗组与对照组血清中IL-4、CysLTs的水平均比治疗前降低,且治疗组低于对照组,IFN-γ水平均比治疗前升高,且治疗组升高水平高于对照组（P<0.05）;治疗组与对照组FEV1、FVC、PEF水平均较前升高,且治疗组高于对照组（P<0.05）。结论:三子养亲汤合定喘汤对轻中度支气管哮喘急性发作期患者疗效显着,可以提高患者FEV1、FVC、PEF水平,明显降低患者血清中IL-4、CysLTs的水平,升高IFN-γ水平,这可能是通过减少Th1/Th2偏移,抑制CysLTs的通路来抑制炎症反应。
刘斌[7]（2020）在《炎症微环境的免疫调控与血管重构分子机制的研究》文中指出1研究背景急性冠脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）是由于冠状动脉粥样硬化斑块糜烂或破裂,从而引起斑块表面血栓形成和/或远端血栓栓塞,造成完全或者不完全的心肌缺血为特征的一组临床疾病。2016年流行病学的报告显示:我国有2.9亿心血管疾病患者,2015年心血管病死亡是城乡居民总死亡首位原因,城市为42.61%,农村为45.01%,其中ACS占比近50%,并且ACS的发病年龄逐步有年轻化的趋势。根据心肌梗死全球通用定义（第三版）,ACS分为ST抬高型心肌梗死（ST segment elevation myocardial infarction STE-ACS）和非ST段抬高型 ACS（non-ST segment elevation ACS,NSTE-ACS）。冠状动脉内血栓形成和/或血栓栓塞是ACS最主要的致病因素,易损斑块的破裂是ACS发作的基础。因此,深入研究易损斑块的分子细胞生物学机制,探讨预测动脉粥样硬化斑块易损性的新生物标志物,对降低急性冠脉综合征的发生,最大程度地减少严重心血管事件的发生具有重要的临床意义。巨噬细胞、单核细胞及其炎症反应在斑块进展中发挥了重要的作用。巨噬细胞和单核细胞能吞噬胆固醇微粒,在泡沫细胞的形成、死亡以及坏死核心的形成中起到了重要的作用,并参与炎症反应和斑块破裂,从而加快了斑块破裂的进展。近期的研究表明,巨噬细胞和单核细胞在斑块中聚集的机制可能是局部细胞增生（而非浸润）。此外,中性粒细胞来源的cathelicidins可诱导循环单核细胞的粘附,从而表明中性粒细胞可能先于单核细胞参与血管炎症反应。与白细胞活化相关的炎症介质分子也可能与动脉粥样硬化性疾病的进展有关。白介素6（interleukin-6,IL-6）能促使血管损伤部位中活化的白细胞和平滑肌细胞分泌C反应蛋白。研究表明,IL-6受体的Asp358Ala等位基因变异是冠心病的危险因素,提示IL-6信号通路在动脉粥样硬化的进程中发挥了重要的作用。白介素等相关炎症因子信号通路与动脉粥样硬化的发生和进展密切相关,但是,目前确切的分子机制仍然不明确。白介素增强子结合因子3（ILF3）是一种双链RNA结合蛋白,参与了 DNA代谢、转录调控,翻译,RNA稳定以及microRNA的加工和定位。最近的研究表明其在ACS中可能的生理作用,包括早期心肌损伤、血栓形成、中风、发炎和血脂异常。但是人们对其在动脉粥样硬化斑块易损性中的作用知之甚少,同时血清中的ILF3作为普通人群预测ACS危险的生物标志物的临床价值和潜在的病理机制仍不清楚。在本研究中,我们在人的血清样品以及冠脉狭窄患者斑块组织中探讨了ILF3对动脉粥样硬化斑块易损性的作用,同时通过血清ILF3预测急性冠脉综合征,为临床早期检测和诊断ACS提供了新的靶点。2目的（1）明确人血清ILF3含量的变化是否与ACS的发生相关（2）明确ILF3在血管及心肌组织的表达变化,探讨血清ILF3含量的变化是否与血管损伤或心肌损伤的发生相关,探讨其可能的分泌部位（3）探讨ILF3能否作为新的AS斑块破裂的预测标志物3方法3.1研究人群该研究包括回顾性研究和前瞻性验证队列。从山东省的四家医院的急诊科选择了因胸痛就诊的526名ACS患者（包括221例AMI和305例UA）。此外,本研究还纳入了 210名健康对照者。其中,在300例ACS患者（包括150例AMI患者和150例UA患者）和85名健康对照者（发现队列）确定了准确的蛋白质定量分析临界值,对226名潜在入选受试者（包括71例AMI患者、155例UA患者）和125例健康对照者的临床表现进行了评估,其中病例组和对照组的年龄,性别和体重指数（body mass index,BMI）分布相似。该研究方案已经通过当地伦理委员会批准,批准号为（KYLL-2018（KS）-233）;所有纳入的参与者均提供了书面知情同意书。所有患者均接受了初步临床评估,包括临床病史,体格检查,12导联心电图,连续心电图监测,脉搏血氧饱和度,标准血液检查和胸部X光检查。只要有临床指征,在就诊时以及1至3小时后都检测hs-cTnI。患者的入选时机和治疗由主治医师决定下进行的。所有最终诊断均基于详实的医疗记录,包括患者病史,体格检查,实验室和放射学检查结果,ECG,超声心动图,心脏运动实验和冠状动脉造影。在监护人的许可下,通过医院急诊科分诊处使用的电子病历系统获得了患者信息和临床检查结果。所有的心肌梗死患者均按最新的指南进行诊断。通过hs-cTnI的上升和/或下降模式诊断出坏死,其中至少一个值高于第99个百分位数,hs-cTnI分析的不精确度为10%。对于hs-cTnI的分析,最低检测下限是0.01g/L。因此,为了表现肌钙蛋白升高的趋势,初始值正常的患者肌钙蛋白水平必须升高到0.04 g/L的才能满足AMI的诊断标准。肌钙蛋白T水平正常且典型的静息性心绞痛,或者先前稳定的心绞痛发作突然加重,或心脏运动试验阳性或心脏导管检查显示冠状动脉狭窄70%的情况下,诊断为UA。既往有过心脏方面的病史,但不包括冠状动脉症状（例如,心包心肌炎,快速性心律失常）和非心脏症状。如果急诊科排除了急性心肌梗死,但没有足够的临床证据来进一步明确诊断,则将此类归类为来源不明的胸痛患者。通过对纳入者问卷调查的方式收集有关健康的信息。对与吸烟有关的问题分类为当前,以前或从不吸烟。肌酐通过Jaffe法测定,每日变异系数为3.5%。在山东大学齐鲁医院的检验科,对所有纳入者进行了非禁食血清的检测,得到了总胆固醇,高密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯的数值。健康队列中的临床检查由训练有素的护士进行,包括血压,体重,身高以及腰围和臀围的标准化测量。健康的参与者（志愿献血者）均来自山东大学齐鲁医院济南院区。3.2血清ILF3和hs-cTnI的测定ELISA法测定人外周静脉血血清中ILF3和hs-cTnI的水平。3.3临床样本收集我们从山东省红十字捐赠的遗体标本中筛选患有动脉粥样硬化疾病和健康对照者的冠状动脉组织标本（每组三个以上样本）进行了评估。从在山东大学齐鲁医院因严重颈动脉狭窄行内膜切除术的患者中获得颈动脉斑块,总计15例患者（男9例,女6例）。在收集样本之前,每位患者均签署书面知情同意书,并获得了山东大学齐鲁医院伦理委员会的伦理学批准。利用颈动脉超声确定颈动脉粥样硬化损伤程度,颈动脉内膜切除术获得动脉粥样硬化病变的人颈动脉节段,固定在中性福尔马林溶液中,通过石蜡包埋后进行免疫组织化学分析。3.4免疫组织化学和免疫荧光染色分别用苏木精&伊红和Masson三色染色对8微米厚组织切片进行了染色,观察了动脉粥样斑块的形态和胶原蛋白含量。同时还进行了 3,3-二氨基联苯胺染色,(将石蜡包埋的组织切片脱蜡并用抗体染色,然后用生物素偶联的二抗（1:1000）染色,然后用辣根过氧化物酶偶联的链霉亲和素染色（Dianova,Rodeo,CA）。使用抗Mac-3（鼠类巨噬细胞标记物）鉴定巨噬细胞。为行免疫荧光染色,将切片脱蜡并用特异性抗体染色,然后用荧光标记的第二抗体染色。细胞核用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）进行复染。通过激光扫描共聚焦显微镜（LSM710,卡尔·蔡司,德国）获得特定的荧光成像。3.5统计分析在发现队列中,我们比较了至少一根主要的冠状动脉存在70%狭窄的患者和冠状动脉没有达到70%狭窄患者的基线特征。使用Fisher精确检验比较了 AMI,UA和健康对照组之间的二分变量（性别,糖尿病史等）。使用Wilcoxon秩和检验比较连续变量（BMI,生物标志物等）。确定了 ILF3和hs-cTnI的预测概率的受试者工作特征（ROC）曲线,并使用逻辑回归模型评估疾病风险。为了评估ILF3和hs-cTnI的诊断价值,使用发现队列ROC曲线以至少85%的敏感性选择了临界点。使用验证队列确定相应的敏感性,特异性和准确性。为了消除数据的多重共线性,我们对生物标志物的值进行了对数转换,并删除了具有较大方差膨胀因子的变量。所有实验至少独立进行三次,所有的分析均使用带有pROC 23和ggplot2软件包的R版本3.5.0软件24（R统计学计算基金会,维也纳,奥地利）。所有测试均为双面测试,显着性差异性设置为0.05。4结果4.1研究流程入选的526名ACS病人和210名健康对照人群分为回顾性研究队列和前瞻性研究队列。回顾性研究队列包括150名UA病人,150名AMI病人,和85名健康对照人群。我们将通过回顾性研究队列构建ILF3变化对ACS的诊断系,筛选出最佳诊断阈值后,在前瞻性研究队列人群验证。前瞻性研究队列包括155名UA病人,75名AMI病人和125名健康对照人群。所有的入选招募的患者来自四个不同急诊科,并采集了血液样本。测量了生物标志物,并将其与最终诊断和随后的住院过程相关联。具体流程见相关流程见（图1）4.2 ILF3的水平的变化研究发现,与健康对照人群相比,ACS患者血清中的ILF3清浓度明显高于健康对照组,增加了 23倍以上,存在显着的差异。其中急性冠脉综合征患者中有155位不稳定型心绞痛（UA）和71位急性心肌梗塞（AMI）患者,尽管UA患者的ILF3水平略高于AMI患者,但差异无统计学意义。在四个诊断中心中,患者的ILF3水平在诊断组中的相对差异基本一致。没有不确定的结果,也没有限制异常值。4.3 ILF3预测ACS发生的准确性通过ROC曲线下面积（AUC）来量化血清ILF3的预测准确性,对于所有ACS患者、UA患者和AMI患者,ILF3的预测的准确性都很高。ILF3联合hs-cTnI（ILF3+hs-cTnI）预测ACS的准确度为0.99,明显高于单纯hs-cTnI的准确度（P<0.001）。ILF3+hs-cTnI联合诊断的曲线下面积（AUC）分析显示ILF3+hs-cTnI联合诊断的UA的准确性要显着高于单独应用hs-cTnI预测UA风险的AUC。ILF3、hs-cTnI和ILF3+hs-cTnI预测AMI的准确性相似。根据ROC曲线确定最佳临床决策限值。ACS的ILF3和hs-cTnI 阳性诊断值。然后将这些诊断值应用于对验证队列患者中ACS、UA和AMI的预测,在所有ACS病例中显示出高的敏感性（>84%）和100%的特异性;除敏感性外,ILF3对ACS的预测性能指标均不低于hs-cTnI。更重要的是,ILF3对ACS的阴性预测值也高于hs-cTnI。4.4 ACS患者血清ILF3水平的升高与心肌损伤无显着相关性。与血清hs-cTnI相比,ACS患者血清ILF3水平的变化没有随着胸痛发作时间的延长而进行性升高,说明ACS患者血清ILF3的升高与心肌细胞坏死的严重程度无关,表明ILF3不是心肌细胞坏死特异性的生物标志物。4.5 ACS患者血清ILF3含量与冠状动脉粥样硬化的严重程度无显着相关性我们评估了 ACS患者的血清ILF3水平升高是否与血管造影冠状动脉病变程度的相关性。在发现队列中,通过对300例ACS患者血管造影资料分析其血管狭窄的程度,及单支病变、双支病变和多支病变的程度发现:血清ILF3水平也与冠状动脉病变狭窄程度（通过Genisi评分）和病变血管支数无显着的相关性。这些数据表明,ACS患者血清ILF3水平的升高不能反映冠状动脉粥样硬化的严重程度,而可能反映冠状动脉粥样硬化斑块的炎症水平。4.6 ILF3含量与炎症因子显着相关为了确定血清ILF3和hs-cTnI升高的临床意义,我们采用logistic多元回归分析方法来评估其与动脉粥样硬化血管的危险因素如:年龄、性别、吸烟、血清总胆固醇和一些炎症细胞因子的相关性。结果显示:ACS患者血清hs-cTnT的升高与与冠心病和IL6密切相关,而ILF3的升高与性别、糖尿病、他汀类药物治疗、IL1β、IL6和TNFα密切相关。这些结果提示ACS患者血清hs-cTnT升高是心肌损伤的标志,而ILF3的升高更可能与AS斑块内的炎症程度相关。4.7 ILF3特异性在动脉粥样硬化斑块的M1巨噬细胞表达升高。人冠状动脉的免疫荧光和免疫组织化学染色显示,与非动脉粥样硬化的血管组织相比,ILF3在人动脉粥样硬化斑块中表达明显升高,并且在坏死核心区域大量表达。此外,我们在人颈动脉斑块中在巨噬细胞中观察到ILF3和iNOS（Ml巨噬细胞生物标志物）的共定位,表明ILF3是在斑块的炎性M1巨噬细胞中表达。5结论ILF3可能作为一种新的预测动脉粥样硬化斑块易破裂的生物标志物,对急性冠脉综合征的患者提供早期的诊断作用。1研究背景冠状动脉内的易损斑块,是指不稳定的、易形成血栓的,而突然导致急性心脏事件发生的斑块。易损斑块导致血栓形成是急性冠脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）的重要发病机制。它可以表现为斑块破裂继发血栓形成,或是斑块侵蚀或钙化结节等病变诱发血栓形成等。斑块破裂在病理上为脂质斑块的纤维帽缺损并延伸到脂质核心,常有血小板及纤维蛋白构成的非闭塞性血栓。破裂的脂质斑块常伴有薄纤维帽及较大的脂质核心,纤维帽中有大量的巨噬细胞浸润,而脂质核心中富含胆固醇结晶。目前的研究表明,巨噬细胞是ACS发病的中心环节。巨噬细胞对纤维帽基质降解是斑块易损性的重要因素,测定纤维帽中巨噬细胞的含量,可以评估动脉粥样硬化斑块是否稳定。白介素增强子结合因子3（ILF3）是一种双链RNA结合蛋白,目前研究表明可调节细胞代谢的过程,包括转录调控以及mRNA加工和定位。最近的研究发现其在ACS中可能的生理作用,包括早期心肌损伤、血栓形成、中风、炎症和血脂异常。然而,人们对其在动脉粥样硬化斑块易损性中的作用知之甚少。在前期研究中,我们发现ACS患者的血清ILF3水平明显升高,在动脉粥样硬化斑块中ILF3表达明显升高,并且定位于巨噬细胞中,我们通过巨噬细胞特异性过表达ILF3小鼠和小鼠原代巨噬细胞来阐明ILF3对动脉粥样硬化斑块易损性的潜在影响,进一步探讨动脉粥样斑块易损性的机制。2目的（1）建立巨噬细胞特异性过表达ILF3的ApoE-/-小鼠AS模型,观察ILF3对AS斑块的形成及易损性的作用;（2）阐明过表达ILF3的巨噬细胞在动脉粥样硬化发生及发展中的作用及相关机制。3方法3.1巨噬细胞特异性过表达ILF3小鼠的构建所有动物实验均根据山东大学实验动物使用和管理机构委员会批准的方案进行。载脂蛋白E（ApoE-/-）敲除的小鼠来自北京大学健康科学中心实验动物科学系。LyzMCre转基因小鼠由山东大学张文程教授惠赠。ILF3条件性过表达小鼠（ILF3 Tg）及ILF3条件性敲除小鼠（ILF3KO）由北京唯尚立德公司构建合成。ILF3条件性小鼠与ApoE-/-小鼠交配,经鼠尾基因鉴定得到ApoE-/-ILF3Tg与ApoE-/-ILF3Tg小鼠,ApoE-/-ILF3Tg与ApoE-/-ILF3Tg小鼠继续与 LyzMCre小鼠交配,经鼠尾基因鉴定得到巨噬细胞特异性过表达ILF3小鼠（ApoE-/-ILF3M-Tg）与巨噬细胞特异性敲除ILF3小鼠（ApoE-/-ILF3M-KO）。野生型小鼠为对照小鼠,所有小鼠背景均为C57/B6背景。3.2动脉粥样硬化不稳定斑块模型的诱导与治疗8周龄的雄性ApoE-/-小鼠和ApoE-/-ILF3M-Tg小鼠高脂喂养（WD,Teklad调整卡路里 88137:21%（wt/wt）脂肪;0.15%（wt/wt）胆固醇;19.5%（wt/wt）酪蛋白;无胆酸钠）4周;在右颈动脉周围植入套管,继续高脂喂养12周。在处死前一周向小鼠腹膜内（i.p.）注射脂多糖（LPS;Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,美国）或对照盐水（每只小鼠每天5ugLPS,每组N=15）。3.3巨噬细胞分离和油红O染色腹膜内注射100%石蜡油7天后,从WT和ILF3M-Tg小鼠的腹腔灌洗中收获腹膜巨噬细胞。将细胞在磷酸盐缓冲液（PBS）中洗涤,在Dulbecco改良的Eagle培养基（含10%胎牛血清）中培养过夜,并用氧化低密度脂蛋白（oxLDL;50 g/ml;北京联合生物有限公司）刺激24小时,以评估巨噬细胞上ILF3的表达是否受脂蛋白调节。4%多聚甲醛固定细胞,PBS洗涤,并在37℃下用Oil-red-O染色20分钟。各组间油红O含量通过Image-Pro plus软件进行定量。3.4免疫组织化学和免疫荧光染色分别用苏木精&伊红和Masson三色染色对8微米厚组织切片进行了染色,观察了动脉粥样斑块的形态和胶原蛋白含量。同时还进行了 3,3-二氨基联苯胺染色,将石蜡包埋的组织切片脱蜡并用抗体染色,然后用生物素偶联的二抗（1:1000）染色,然后用辣根过氧化物酶偶联的链霉亲和素染色（Dianova,Rodeo,CA）。使用抗Mac-3（鼠类巨噬细胞标记物）鉴定巨噬细胞。为行免疫荧光染色,将切片去石蜡并用特异性抗体染色,然后用荧光标记的第二抗体染色。用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对细胞核进行复染。通过激光扫描共聚焦显微镜（LSM710,卡尔·蔡司,德国）获得特定的荧光成像。3.5免疫印迹分析首先用10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,然后将其转移到硝酸纤维素膜上。用含0.1%Tween-20的5%脱脂牛奶封闭1小时,脱脂牛奶用PBS配置,然后一抗孵育1小时,再在室温下与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育1小时。通过化学发光（Milipore,Billerica,MA,美国）检测结合的第一抗体,并通过Image J软件（NIH,Bethesda,MD,美国）定量。所有表达水平标准化于对照。3.6实时定量PCR使用Trizol试剂（Invitrogen）提取总RNA,然后反转录为cDNA。使用序列检测器系统（IQ5实时PCR循环仪,Bio-Rad实验室,加利福尼亚州,美国）进行基于SYBR Green的实时定量PCR。表达水平标准化于β-actin。3.7流式细胞术有研究表明oxLDL触发巨噬细胞的M1极化,从而诱导和促进动脉粥样硬化中的炎症反应。因此用50μg/ml oxLDL处理腹膜巨噬细胞,并通过流式细胞术评估M1和M2亚型的标志物。将腹膜巨噬细胞（2×105/孔）铺板,加入ox-LDL孵育24小时。为了分析ILF3过表达后激活的CD86和CD209阳性细胞,将小鼠单克隆的抗CD86抗体和抗CD209抗体（1:1000）（Abcam,剑桥,英国）在4℃避光情况下孵育30分钟。用PBS洗涤3次后,在4℃用二抗抗小鼠PerCP-Cy5-5-A和APC-A（Abcam,剑桥,英国）孵育30分钟。洗涤并收集标记的细胞,并使用FACS流式细胞仪系统进行分析。3.8精氨酸酶1启动子荧光报告表达载体的构建通过ensemble网站进行查询Arg-1启动子序列,选取-560 bp至-210 bp这一部分启动子序列进行分析,采用逐段删除法将Arg-1启动子片段合成后构建入报告基因载体 PGL3-basic 中,顺序分别为:-260 bp,-310 bp,-360 bp,-410 bp,-460 bp,-510 bp,-560 bp。3.9双荧光报告基因检测技术首先制备细胞裂解液,在冰上加入裂解液进行裂解细胞,然后离心,转移细胞裂解产物于新的离心管备用。然后按照荧光素酶试剂盒说明书进行处理细胞裂解液,并及时用光度计进行检测。结果分析:计算firely luciferase活性值与内参β-gal活性值的比值,利用T检验进行数据分析,P<0.05为具有统计学意义。3.10 染色质免疫共沉淀技术（Chromatin immunoprecipitation,ChIP）（1）细胞准备根据试剂盒要求准备一定量的细胞用于CHIP实验（2）CHIP实验,按照MilliporeCHIP试剂盒的说明书逐步完成实验。3.11 ILF3干扰慢病毒载体的构建由 博尚 生物公 司 负责合 成构 建,干扰 序列 为GCCAATGGACTGAAGTCATGT,loop 采用 TTCAAGAGA。3.12统计分析所有数据均使用SPSS19.0软件包进行统计分析,所有的实验至少重复3次。计量资料用均数±标准差表示,计数资料用数值和百分比表示。两组之间比较采用采用独立样本的t检验。P<0.05被认为差异具有统计学意义。4结果4.1巨噬细胞特异性过表达ILF3小鼠建立如图所示,将公司合成的ILF3全身loxp小鼠与巨噬细胞cre（Lyz2-cre）小鼠经过杂交而得到ILF3M-Tg小鼠,将该小鼠与ApoE-/-小鼠杂交而得到ApoE-/ILF3M-Tg 小鼠。4.2巨噬细胞特异性过表达ILF3小鼠鉴定经鉴定成功构建ApoE-/-ILF3M-Tg小鼠,基因鉴定结果。4.3 ILF3促进泡沫细胞形成在野生型腹膜巨噬细胞中,ILF3的蛋白水平随oxLDL的剂量和处理时间的升高而升高。油红O染色显示ApoE-/-ILF3M-Tg小鼠的巨噬细胞较ApoE-/-对照小鼠的巨噬细胞对oxLDL的摄取能力明显增强。与野生型小鼠相比,ApoE-/-ILF3 M--Tg小鼠的巨噬细胞脂质吞噬相关基因HMGCR,CD36及ABCA1的表达明显升高。4.4巨噬细胞特异性过表达ILF3加剧小鼠动脉粥样硬化的形成与喂养12周的ApoE-/-小鼠相比,ApoE-/-ILF3 M-Tg小鼠在主动脉窦和主动脉部位的动脉粥样硬化明显加重。4.5巨噬细胞特异性过表达ILF3加剧动脉粥样硬化斑块的易损性斑块的形态分析结果表明:ApoE-/-ILF3M-Tg小鼠的动脉粥样硬化斑块包含较大的坏死核心,胶原蛋白含量和平滑肌细胞数量明显降低,在ApoE-/-ILF3 M-Tg小鼠的斑块中有更多的巨噬细胞浸润。4.6巨噬细胞特异性过表达ILF3加剧动脉粥样硬化斑块中的血管生成与ApoE-/-小鼠泡沫细胞区域相比,ILF3过表达区域显示出VEGF的大量表达。然而,在ILF3高表达的区域内,每单位面积的微血管数量明显增加。4.7 ILF3上调增强了 oxLDL诱导的促炎性M1巨噬细胞极化流式结果表明,ILF3M-Tg巨噬细胞中CD86阳性细胞（M1）的百分比显着增加。oxLDL处理后未检测到CD209阳性细胞（M2）发生明显变化。4.8 ILF3过表达加剧动脉粥样硬化斑块中的炎症表达。免疫组化染色显示,与ApoE-/-小鼠相比,ILF3M-Tg动脉粥样硬化斑块的iNOS表达增加,但Argl表达下降,表明ILF3过表达的巨噬细胞,oxLDL促进其向促炎性M1巨噬细胞极化。4.9 ILF3过表达加剧巨噬细胞中炎症因子的表达。利用oxLDL刺激腹膜巨噬细胞24小时,随后对RNA进行实时定量PCR分析,结果表明,抗炎相关基因、促炎基因的转录均增加。与野生型对照相比,ILF3过表达的巨噬细胞中Argl和IL-10的mRNA水平显着降低（P<0.001或0.01）,而IL-6、TNF-α、iNOS和IL-1β表达显着增加。4.10 ILF3调控精氨酸酶1的转录表达结果显示,ILF3过表达成功,siILF3干扰效果明显,ILF3过表达或ILF3干扰时影响p65及statl活性的影响并影响ARG1的表达;ILF3过表达及ILF3干扰后对ARGI在mRNA水平的影响与蛋白水平一致;双荧光报告基因显示,ILF3调控ARG-1启动子-460～-410区域的活性;染色质免疫共沉淀（ChIP）结果显示,ILF-3可以直接与精氨酸酶1启动子结合。5结论（1）巨噬细胞特异性过表达ILF3促进了对oxLDL的摄取能力,并促进了泡沫细胞的形成与动脉粥样硬化。（2）巨噬细胞特异性过表达ILF3上调促炎细胞因子的表达,同时抑制抗炎细胞因子的表达,从而促进动脉粥样硬化的发生发展。（3）巨噬细胞中ILF3过表达的通过促进其自身滞留,而促进了动脉粥样硬化斑块的形成和斑块的易损性。（4）巨噬细胞中ILF3可以直接与精氨酸酶1的启动子区域结合,从而抑制ARG1的转录表达,而调控巨噬细胞Ml型的极化,促进AS斑块的易损性。1研究背景腹主动脉瘤（abdominal aortic aneurysm,AAA）作为一种慢性退行性血管疾病,其主要特征是血管壁进行性扩张和重塑,导致主动脉破裂引起致死,尤其是在老年人中[1-2]。然而,AAA的发病机制至今尚无定论。尽管AAA和动脉粥样硬化之间有一些共同的特征,但是治疗冠状动脉疾病的方法并不能降低人的AAA形成或扩张,目前的主要治疗手段仍然是外科手术干预[3]。最近的证据表明,慢性炎症在AAA发病过程中起到了关键作用,抑制炎症反应可能成为预防AAA的一种有效的治疗方法[4]。环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）是前列腺素（prostaglandin synthetase,PGs）合成的关键调节酶,可催化花生四烯酸向PGs的转化。COX-2调节促炎性趋化因子的表达,从而影响细胞的增殖和功能[5-7]。在大多数人体组织中通常无法检测到COX-2,但炎症刺激后可迅速诱导产生(例如脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）或血管紧张素 Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,AngⅡ）[8-9]。在慢性炎性疾病（如动脉粥样硬化）中,COX-2表达明显升高[10]。基因敲除COX-2可显着减轻急性炎症,并降低前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）水平[11]。目前的研究证明免疫系统参与了许多心血管疾病的发病过程[12]。CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）作为免疫系统的重要组成部分,在免疫稳态和耐受性中具有重要的保护作用,防止过度的免疫反应[13]。Tregs的功能受损或缺乏会导致免疫失调和自身免疫性疾病[13]。据报道,Tregs在许多心血管疾病中具有保护作用,包括动脉粥样硬化、高血压、心肌炎和扩张型心肌病等[14]。最近,Tregs被证明能够抑制Ang Ⅱ诱导的小鼠AAA的发生发展[15-16]。然而目前,关于AAA中Treg和COX-2之间的相关性报道甚少。因此,利用AAA模型,我们尝试探索AAA潜在的机制,并寻找其可能的免疫治疗方法。2目的（1）研究Tregs能否抑制AAA的发病;（2）在体内体外实验中,阐明Tregs对COX-2表达的影响,以期明确Tregs发挥保护作用的具体机制;3方法3.1动物模型与干预所有动物实验经山东大学伦理委员会批准,并符合中国卫生部《动物管理规定》的指导原则。从北京大学动物研究中心（中国北京）购买10只C57BL/6J野生型小鼠（雄性,8周龄）,用作Tregs细胞的供体。根据试剂说明书要求,使用CD4+CD25+调节性T细胞分离试剂盒（Miltenyi Biotec,德国）从C57BL/6J小鼠的脾细胞中获得Treg细胞。将纯化的Treg细胞悬浮在磷酸盐缓冲液（PBS,200ul）中以进一步注射。在无菌条件下饲养30只C57BL/6J背景的雄性ApoE-/-小鼠（3个月大）,并保持12小时光照/12小时黑暗的昼夜节律。在整个实验期间,ApoE-/-小鼠均给予高脂饮食（0.25%的胆固醇和15%的可可脂）,并保证足够的食物和水。实验小鼠随机分为三组（每组10只）:对照组（未干预）,PBS组（尾静脉注射PBS）和Tregs组（尾静脉注射106 Treg）。注射一天后,通过皮下置入微量泵连续泵入Ang Ⅱ（1000ng/kg/min）28天,在实验开始2周时再次给予尾注射PBS和Treg[15.17]。实验结束后,对所有小鼠进行安乐死并收集其主动脉组织,储存于-80℃冰箱或用4%多聚甲醛固定以备用。3.2组织学分析小鼠安乐死后,用生理盐水经心脏灌注以清除血管腔中的血液,留取主动脉,用4%多聚甲醛固定。首先,通过测量腹主动脉的最大外径来评估AAA的形成,AAA定义为比正常值扩张至少50%[2]。然后,将腹主动脉包埋在OCT化合物中制作冰冻切片,每张5μm厚,通过苏木精和伊红（H&E）染色及免疫组化染色以评估COX-2的表达（1:500,Abcam,MA,USA）。最后,利用计算机自动辅助图像分析系统（Image Pro Plus 6.0,Media Cybernetics,美国）计算COX-2的表达量。3.3免疫荧光首先将冰冻切片用BSA封闭30分钟,然后将AAA切片与兔抗COX-2（1:100,abcam,MA,USA）,小鼠抗CD68（1:100,abcam,MA,美国）或小鼠抗α-SM-actin（1:100,Sigma-Aldrich,MO,USA）在4℃孵育过夜。随后在室温条件下将切片与二抗孵育,最后使用含DAPI的抗淬灭封片剂（Vector Laboratories,CA,美国）封片。通过激光扫描共聚焦显微镜（LSM 710,Zeiss,德国）获得图像。3.4细胞共培养和处理在体外研究的第一部分中,在37℃下,用DMEM培养基（含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 g/ml链霉素）培养RAW264.7小鼠巨噬细胞（美国弗吉尼亚州马纳萨斯）。巨噬细胞分别与以下三组共培养:对照组,CD25-组（CD4+CD25-T 细胞,5×105）和 Tregs 组（CD4+CD25+T 细胞,5×105）,先用抗CD3抗体刺激细胞48小时（50ng/ml）,然后用AngⅡ（1μM）刺激24h。最后丢弃漂浮的T细胞,并收集巨噬细胞以进一步分析。在体外研究的第二部分中,培养的小鼠主动脉平滑肌细胞（SMC,ATCC,美国）,分别与以下三组共培养:对照组,CD25-组（CD4+CD25-T细胞,5×105）,和Tregs组（5×105）。首先用抗CD3抗体（50ng/ml）刺激48小时,然后再用AngⅡ（1μM）刺激24h。最后丢弃漂浮的T细胞,并收获SMC用于进一步分析。3.5 ELISA收集细胞培养基的上清液,并按照ELISA试剂盒（BlueGene Biotech,上海,中国）的说明书测定PGE2的浓度。3.6 MTT通过MTT测定法（Beyotime,北京,中国）确定SMC的活力。操作步骤如下,首先将SMC以5000个细胞/孔的密度接种到96孔板中,给予相应刺激后每孔加入10 μl MTT（5mg/ml）,并在37℃下孵育4小时。小心弃去上清液,再每孔加入75μl的二甲基亚砜（DMSO）。最后使用Varioskan Flash多功能酶标仪（Thermo Scientific,Waltham,MO,美国）在 570 nm 处分析样品。3.7实时定量PCR根据试剂的说明书,首先使用Trizol试剂（Invitrogen,Carlsbad,CA）从腹主动脉和收获的细胞中提取总RNA,然后使用iScript cDNA合成试剂盒（Bio-Rad,Hercules,美国）用1μgRNA作为模板,逆转录合成cDNA,最后进行实时荧光定量PCR以确定CD68,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）,精氨酸酶-1（Arg-1）,趋化因子配体9（CCL-9）,COX-2和β-actin mRNA的表达。其中,β-actin用作内参。该研究中使用的引物序列见表1。3.8蛋白质印迹分析首先从腹部主动脉或细胞中提取总蛋白。将各组等量的蛋白质加样,在10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳,然后将目的蛋白电转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。在5%脱脂牛奶中室温下孵育2小时后,将膜与COX-2（1:500,Abcam,MA,USA）和β-actin（1:1000,CST,美国）的一抗在4℃下孵育过夜。随后,用TBST洗涤3次,将膜与辣根过氧化物酶偶联的二抗室温下孵育2小时。最后,使用增强的化学发光检测系统（美国皮尔斯）拍摄图像。其中,β-actin表达量作为内参。3.9统计分析使用SPSS15.0（SPSS Inc,美国伊利诺伊州芝加哥）软件进行统计分析。数值以平均值±标准差表示,并采用LSD事后分析的单向ANOVA检验进行多次比较。P<0.05被认为具有统计学意义。4结果4.1体内注射Tregs降低了 Ang Ⅱ诱导小鼠AAA的发病率利用AngⅡ持续微量泵入ApoE-/-小鼠以诱导AAA的实验动物模型[17-18],目前已被广泛应用。与既往的研究结果一致,我们的实验发现,在ApoE-/-小鼠中持续泵入AngⅡ可以成功诱导AAA。如图1所示,对照组和PBS组的AAA发生率分别为80%（8/10）和80%（8/10）,而体内注射Tregs（106个细胞）后AAA的发生率只有30%（3/10）,提示Tregs可以明显降低AAA的发生率（P<0.05,图1A和1C）。此外,H&E染色显示,持续泵入Ang Ⅱ显着增加了腹主动脉直径并引起内出血,而注射Treg改善了此现象（P<0.05,图1B和1D）。这些结果证实了以往的研究,即Tregs可以防止AAA的发生和发展。4.2体内注射Tregs降低了小鼠的COX-2表达现有的研究发现,与正常对照小鼠相比,AAA小鼠中COX-2mRNA的表达显着增加[19]。在体内实验中,为了阐明Treg对腹主动脉组织中COX-2表达的潜在影响,我们进行了免疫组织化学染色。与对照组和PBS组相比,Tregs组的COX-2表达明显减弱（P<0.05,图2A和2B）。此外,RT-PCR和蛋白印迹分析还显示,Tregs可显着降低腹主动脉组织中COX-2的mRNA和蛋白质表达（P<0.05,图2C至2E）。4.3 Tregs治疗可降低小鼠SMC和巨噬细胞中COX-2的表达为了观察COX-2在SMC或巨噬细胞中的表达,我们进行了免疫荧光染色。如图3A所示,SMC与COX-2表达共定位,而在AngⅡ+Treg组中,SMC中COX-2的表达明显减少（图3A）。同时,图3B显示在AngⅡ组和AngⅡ+PBS组的巨噬细胞中有COX-2表达,而Treg能够显着降低巨噬细胞中COX-2的表达（图3B）。4.4 Tregs刺激巨噬细胞和SMC后,减少了细胞中COX-2和PGE2的表达已有研究显示在炎性刺激（例如AngⅡ）诱导下COX-2表达明显升高[9]。在内皮细胞中,Ang Ⅱ刺激后,COX-2表达显着增加[20-21]。由巨噬细胞和SMC合成的前列腺素E2（PGE2）可以增加基质金属蛋白酶（MMP）的产生并导致血管壁的降解[22]。先前的研究表明巨噬细胞和SMCs可能是Tregs靶向治疗AAA的主要细胞[15]。因此,在我们的实验中,相继用Tregs和AngⅡ处理巨噬细胞和SMCs,结果发现与对照组相比,Tregs处理可显着降低巨噬细胞中COX-2和PGE2的表达,而CD4+CD25-T细胞对COX-2和PGE2的表达影响不大（P<0.05,图4A至4C）。此外,与对照组相比,Tregs治疗还显着降低了 SMCs中COX-2和PGE2的表达（P<0.05,图4D至4F）。以上结果表明,Tregs治疗可降低Ang Ⅱ诱导的巨噬细胞和SMC中COX-2和PGE2的表达。4.5 Tregs治疗增加SMCs的活力并诱导巨噬细胞表型的转变随后我们研究了 Treg对SMCs活力和巨噬细胞表型的影响。如图5AMTT结果所示,与AngⅡ组相比,Treg治疗增加了 SMC的活性,而CD4+CD25-T细胞没有改变SMC的活性。此外,RT-PCR显示,Tregs刺激后诱导了巨噬细胞表型的转变,表现为M1相关基因（CD86和iNOS）表达下调和M2相关基因（Arg-1和CCL-9）表达上调（P<0.05,图5B至5E）。这些结果表明,Tregs增加了 SMCs的活性并诱导巨噬细胞表型从M1型转变为M2型。5结论在AAA的体内和体外实验中,Tregs治疗均可显着降低AngⅡ诱导的COX-2的表达,这表明Tregs可能通过抑制COX-2的表达对AAA发挥保护作用,该研究可能为AAA的免疫治疗提供启示。
李丹[8]（2020）在《血清胆红素水平与2型糖尿病患者视网膜病变的相关性分析》文中研究表明目的:在不同性别2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者中,探究不同胆红素亚型血清水平与糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）之间的关联性。方法:选取符合纳排标准的2017年6月1日-2019年5月31日于济宁医学院附属医院内分泌科检查并入院治疗的1304例T2DM患者进行回顾性研究。通过电子病案系统获取研究人群的临床基线资料包括性别、年龄、吸烟及饮酒史、既往慢性病史、糖尿病家族史、DM病程、DM相关并发症、女性是否已绝经等;通过体格检查获得患者体重、身高、腰围等测量学资料,计算体质指数（BMI）;化验室检测指标包括血常规、空腹血糖、糖化血红蛋白、肝功、肾功、血脂、甲功三项、电解质、胰岛素+C-肽释放试验、尿常规、尿微量白蛋白等。由眼科专科医生对所有患者均进行眼底病变筛查,并按照眼底照相结果将患者分为DR组与非DR（non-diabetic retinopathy,NDR）组,所有的数据均应用易侕统计软件进行统计学分析。结果:在T2DM患者中,与NDR组相比,DR组总胆红素、直接胆红素、间接胆红素水平显着降低。单因素分析模块结果显示在女性中总胆红素与DR的患病风险呈负相关关系（P<0.05）,间接胆红素、直接胆红素与DR的发生无明显相关性;在男性中,总胆红素、间接胆红素与DR的发生风险呈负相关（P<0.01）。按性别分层分析,调整相关混杂因素后,平滑曲线拟合显示在女性中,总胆红素、间接胆红素水平与DR发生风险呈U型关系;在男性中,总胆红素、间接胆红素与DR发生风险呈负相关。多元回归分析结果显示,在调整混杂因素后,在男性中,总胆红素每增加1umol/L,DR的发生风险降低8%（OR=0.92,95%CI 0.880.98,P<0.01）;间接胆红素增加1 umol/L,DR的发生风险降低10%（OR=0.90,95%CI0.840.96,P<0.01）。在女性中,当总胆红素<12.8 umol/L时,总胆红素每增加1umol/L,DR发生风险降低17%（OR=0.83,95%CI 0.720.95,P<0.01）;当总胆红素≥12.8umol/L时,每增加1 umol/L,DR发生风险增加10%（OR=1.10,95%CI 1.011.20,P<0.05）。当间接胆红素<9.8umol/L时,间接胆红素每增加1 umol/L,DR发生风险降低20%（OR=0.80,95%CI0.680.94,P<0.01）;当间接胆红素≥9.8umol/L时,间接胆红素每增加1umol/L,DR发生风险增加13%（OR=1.13,95%CI 1.011.25,P<0.05）。按是否绝经进行分层分析,结果显示在已绝经患者中,TBIL、IDBIL与DR的发生呈非线性关系;在未绝经患者中,TBIL、IDBIL与DR的发生均无相关性。在已绝经女性中,当总胆红素<8.1 umol/时,总胆红素每增加1umol/L,DR发生风险降低80%,差异有统计学意义（OR=0.20,95%CI 0.060.72,P<0.01）;当总胆红素≥8.1 umol/时,差异无统计学意义（OR=0.99,95%CI 0.921.05,P>0.05）;当IDBIL<10.9 umol/时,IDBIL每增加1 umol/L,DR发生风险降低18%,差异有统计学意义（OR=0.82,95%CI 0.710.95,P<0.01）;当IDBIL≥10.9 umol/时,IDBIL每增加1 umol/L,DR发生风险增加6%,但差异无统计学意义（OR=1.06,95%CI 0.941.20,P>0.05）。结论:本研究表明在2型糖尿病患者中,总胆红素、间接胆红素与DR的发生存在性别差异,直接胆红素与DR患病风险无明显相关性。在女性患者中,总胆红素、间接胆红素水平与DR患病风险存在非线性关系,尤其在已绝经患者中,过高或过低总胆红素、间接胆红素水平都会使DR发生风险增加。在男性患者中,总胆红素、间接胆红素与DR患病风险呈负相关关系。
孙兆庆[9]（2020）在《GATA6基因启动子在急性心肌梗死中的遗传和功能变异分析》文中提出背景:心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）已经成为一种严重威胁人类生命健康的疾病。在中国,随着社会人口老龄化以及多种危险因素水平上升致使CVD患病率持续增长,且发病年龄提前。急性心肌梗死（acute myocardial infraction,AMI）是冠状动脉粥样硬化性疾病（coronary atherosclerotic disease,CAD）发展过程中最为严重的阶段,具有发病急、致死率高等特点。其发病原因主要是由遗传因素和后天环境因素共同作用。虽然已经报道的一些常见遗传变异有助于CAD和AMI的发展,但仍有许多的分子遗传学机制亟待探讨。依据先前的流行病学相关研究,我们发现先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）患者成人的心血管事件和死亡率显着高于一般人群,心肌梗死（myocardial infraction,MI）是导致死亡的主要原因。心脏发育基因的失调可能有助于促进CAD或AMI的发病。然而,GATA6基因不仅在人类胚胎时期的心脏发育生长过程中表达,而且在血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）和不同的原代内皮细胞（endothelial cells,EC）以及小鼠体内的血管EC中均被检测到表达。因此,我们推测GATA6基因启动子区的变异可能作为危险因素参与人类AMI的发生及发展。目的:确认AMI和对照组中GATA6基因启动子区的DNA序列变异体（DNA sequence variants,DSVs）和单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）,并进行数据统计分析,实现对GATA6基因启动子遗传变异的研究。进一步探索与AMI相关的DSVs和SNPs位点是否影响与其他转录因子的结合,并确认其是否改变GATA6基因的转录活性,实现对GATA6基因启动子功能变异的研究,并为AMI的治疗和预防提供遗传学基础。方法:在本研究中,我们采用病例对照研究设计来鉴定和分析AMI患者（352例）和对照组（353例）中GATA6基因启动子区的序列变异体。通过Fisher’s检验的方法对AMI患者和对照组中的每个SNP频率进行Hardy-Weinberg equilibrium（HWE）检验。进行Pearson卡方检验以评估AMI患者和对照组之间的等位基因和基因型频率的差异。通过基于网页的软件SNP-Stats（https://www.snpstats）对五种遗传模型与AMI发病的关联性进行分析。利用HaploView 软件和 SHE-sis 软件平台（http://analysis.bio-x.cn/SHEsisMain.htm）进行连锁不平衡（linkage disequilibrium,LD）和单倍型的分析。通过使用广义多因子降维（generalized multifactor dimensionality reduction,GMDR）软件研究SNP-SNP的相互作用。构建含有目的基因片段的质粒,并转染至体外培养的HEK293和H9c2心肌细胞中,测定荧光素酶的表达水平,从而对鉴定的序列变异体进行功能分析。利用JASPAR在线程序（http://iaspar.genereg.net/）对仅在AMI患者GATA6基因启动子中鉴定的变异体进行转录因子结合位点的影响预测。在体外,选择电泳迁移位移试验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）来检测DNA-蛋白质相互作用。结果:在705例的研究对象中共鉴定出了 10种变异体,包括7种SNPs。一种新杂合 DSV（g.22168409 A>G）和两种 SNPs[g.22168362 C>A（rs1416421760）、g.22168521 G>T（rs1445501474）]仅在三名AMI患者中被发现。相关数据的统计分析,包括AMI患者和对照组之间的等位基因和基因型频率、五种遗传模型、LD和单倍型分析以及SNP-SNP相互作用,均提示无统计学意义（P>0.05）。DSV（g.22168409A>G）和SNP[g.22168362 C>A（rs1416421760）]显着增加GATA6基因启动子的转录活性。EMSA结果显示DSV（g.22168409A>G）和SNP[g.22168362 C>A（rs1416421760）]可影响转录因子的结合。结论:我们研究中的遗传变异分析并未发现有统计学意义的变异位点（P>0.05）。在功能变异分析中的 DSV（g.22168409A>G）和 SNP[g.22168362 C>A（rs1416421760）]可通过影响转录因子的结合来增加HEK-293和H9c2细胞系中的GATA6水平。GATA6基因启动子中鉴定的两种变体是否能通过改变GATA6水平促进人AMI的发展和进展仍需要扩大样本量和进一步的研究来验证。
孙强[10]（2020）在《vWF、sST2、GDF15联合BNP检测评估慢性射血分数保留的心力衰竭的临床意义》文中认为目的:探讨血浆血管性血友病因子（von willebrand factor,vWF）、可溶性人基质裂解素2（soluble suppression of tumorigenicity 2,sST2）、生长分化因子-15（growth differentiation factor-15）及 B 型钠尿肽（brain natriuretic peptides,BNP）对射血分数保留的慢性心力衰竭（heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF）诊断、危险分层及短期预后评估的临床预测价值。方法:连续入选我院心内科2018年7月至2018年12月以慢性心力衰竭（Chronic Heart Failure,CHF）为主要原因住院的患者118例,入选患者均符合《中国心力衰竭诊断和治疗指南2014》中关于心衰的诊断标准,并根据左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）将其分为两组:LVEF≥50%的慢性心衰患者57例为射血分数保留的心力衰竭组（heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF 组）,LVEF<50%的 CHF 患者61例为射血分数降低的心力衰竭组（heart failure with reduced ejection fraction,HFrEF组）,并按照纽约心脏病学会（New York heart disease association,NYHA）心功能分级进一步分为NYHAⅡ级亚组、Ⅲ级亚组和Ⅳ级亚组;纳入同期在我院查体中心体检的无心力衰竭及心脏病史的健康体检者58例作为对照组。收集并记录所有入选者的性别、年龄、体重、身高等一般情况、吸烟饮酒史、查体结果、纽约心脏病协会（NYHA）心功能分级、心衰病因、既往伴随疾病及服药等情况,并计算体重指数,并收集记录检验科检测的项目数值:BNP、空腹血糖（Glu）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、脂蛋白、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、血清白蛋白含量、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血清钾钠氯含量及二氧化碳结合力、心肌酶谱、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、血常规、D-二聚体,入院48 h内对入选患者完善超声心动图检查评价心脏结构及左心室功能。对入选的心衰患者及对照组研究对象均随访6个月,记录出院后6个月终点事件（因心衰加重再次入院和全因死亡）的发生情况。采用ABC-ELISA法检测三组研究对象的血浆vWF、sST2、GDF-15浓度,比较三组研究对象血浆vWF、sST2以及GDF-15浓度的差异,通过Spearman相关分析比较BNP、vWF、sST2及GDF-15与NYHA分级的相关性,通过Pearson相关分析比较BNP、vWF、sST2及GDF-15与LVEF以及BNP的相关性,通过受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,简称 ROC曲线）的曲线下面积（Area Under Curve,AUC）分析血浆BNP、vWF、sST2及GDF-15浓度对HFpEF患者诊断、危险分层及预后评估的价值。结果:（1）与对照组相比,HFpEF组年龄（74.56±10.15）大于HFrEF组（65.46±13.55）,女性占61.4%,合并高血压病者占59.6%,合并心房颤动/扑动者占52.6%,收缩压（139.77±25.74）mmHg,NYHA心功能分级心功能Ⅱ级、Ⅲ级者占多数,分别为17例（占29.8%）、25例（占43.9%）,均高于HFrEF组,两组比较有显着性差异（P<0.01）。相反,HFrEF组患者合并肾功能不全者20例（占32.8%）,心功能Ⅳ级者36例（占59.0%）,血尿酸（474.02±178.25）umol/L,血红蛋白（133.02±28.48）g/L,均高于HFpEF组患者,两组比较有显着性差异（P<0.01）;（2）引起心衰的基础病因比较,HFpEF的常见原因是缺血性心肌病和瓣膜病,而HFrEF的常见原因是缺血性心肌病和扩张型心肌病,两组比较有显着性差异（P<0.05）。对三组研究对象进行心脏彩超检查,结果显示心衰组LVEF、E/A比值显着低于正常对照组,LAED、LVEDD、IVST显着高于正常对照组,差异具有统计学意义（P<0.01）;HFpEF组与HFrEF组比较,HFpEF组患者LVEF显着高于HFrEF组患者,LVEDD、E/A显着低于HFrEF组患者,两组比较具有显着性差异;（3）心衰组患者血浆BNP、vWF、sST2、GDF-15浓度明显高于对照组人群,差异有统计学意义。HFpEF组患者血浆BNP、vWF、sST2浓度均低于HFrEF组患者,两组比较具有显着性差异,P<0.01,但两组患者血浆GDF-15浓度比较无显着性差异。通过Spearman相关分析发现在HFpEF组患者血浆BNP、vWF、sST2及GDF-15与NYHA分级呈正相关,r值分别为0.340、0.398、0.294、0.306,P值分别为0.010、0.002、0.046、0.021;在HFrEF组患者以上标记物与NYHA分级呈正相关,r值分别为0.285、0.308、0.279、0.273,P值分别为0.026、0.016、0.029、0.033;通过 Pearson 相关分析发现血浆 BNP、vWF、sST2及GDF-15在对照组及HFpEF组患者与LVEF均无相关性,在HFrEF组患者与LVEF呈负相关,r值分别为-0.303、-0.349、-0.339、-0.340,P值分别为 0.018、0.006、0.001、0.007;HFpEF 组患者血浆 vWF、sST2 及 GDF-15浓度均与BNP呈正相关,r值分别为0.855、0.896、0.885,P均<0.01;（4）作血浆BNP、vWF、sST2及GDF-15诊断HFpEF的ROC曲线。血浆BNP诊断 HFpEF 的 AUC 为 0.648（95%CI:0.568-0.727）,最佳界值为 89.5pg/ml,敏感度为96.5%,特异度为54.6%;血浆vWF诊断HFpEF的AUC为0.575（95%CI:0.484～0.665）,最佳界值为 67.45mU/ml,敏感度为 80.7%,特异度为 63.9%;血浆 sST2 诊断 HFpEF 的 AUC 为 0.616（95%CI:0.533～0.699）,最佳界值为61.97pg/ml,敏感度为98.2%,特异度为53.8%;血浆GDF-15诊断 HFpEF 的 AUC 为 0.714（95%CI:0.640～0.789）,最佳界值为 11.28pg/ml,敏感度为98.5%,特异度为54.6%;血浆vWF+BNP诊断HFpEF的AUC为0.717（95%CI:0.645～0.789）;血浆 sST2+BNP 诊断 HFpEF 的 AUC 为 0.691（95%CI:0.612～0.769）;血浆 GDF-15+BNP 诊断 HFpEF 的 AUC 为 0.752（95%CI:0.663-0.841）;血浆 vWF+sST2+GDF-15+BNP 诊断 HFpEF 的AUC 为 0.775（95%CI:0.697～0.852）;（5）作血浆 BNP、vWF、sST2 及 GDF-15预测HFpEF患者发生全因死亡/心源性再住院的ROC曲线。血浆BNP预测HFpEF患者发生全因死亡/心源性再住院的AUC为0.527（95%CI:0.374-0.680）,最佳界值为344.5pg/ml,敏感度为55.6%,特异度为56.4%;血浆vWF预测HFpEF患者发生全因死亡/心源性再住院的AUC为0.533（95%CI:0.376～0.691）,最佳界值为183mU/ml,敏感度为55.6%,特异度为53.8%;血浆sST2预测HFpEF患者发生全因死亡/心源性再住院的AUC为 0.538（95%CI:0.388～0.689）,最佳界值为 150.1pg/ml,敏感度为 55.6%,特异度为51.3%;血浆GDF-15预测HFpEF患者发生全因死亡/心源性再住院的AUC 为 0.588（95%CI:0.433～0.742）,最佳界值为 24.47pg/ml,敏感度为 66.7%,特异度为53.8%;血浆vWF+sST2+GDF-15+BNP预测HFpEF患者发生全因死亡/心源性再住院的AUC为0.725（95%CI:0.620-0.829）。结论:（1）与HFrEF组患者比较,HFpHF组患者的年龄大,女性多,且多合并冠心病、高血压及心房颤动等共病。（2）HFpEF组患者的BNP浓度低于HFrEF组患者,BNP对于HFrEF患者的评估价值可能更大。（3）HFpEF患者血浆vWF、sST2、GDF-15、BNP水平明显高于健康人群,与HFpEF及HFrEF患者心功能严重程度明显相关,可作为心功能不全严重程度的新生物标志物;血浆vWF、sST2及GDF-15可作为BNP诊断HFpEF的补充手段,提高对HF-PEF的诊断价值;血浆vWF、sST2、GDF-15及BNP的联合应用比单独使用BNP可提高对HFpEF患者诊断的价值。（4）血浆中vWF、sST2、GDF-15及BNP水平对于HFpEF患者发生全因死亡及心源性再入院的风险有很强的预测指导意义,可作为BNP评估HFpEF患者预后的有力补充,其联合应用可大大提高对HFpEF患者的病情严重程度及心血管事件风险预后的评估能力,在评估HFpEF患者预后方面的作用甚至已超过传统公认的标志物BNP,血浆vWF、sST2及GDF-15浓度是HFpEF患者很有潜在研究价值的新生物标志物。
二、发展中的山东济宁医学院附属医院（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、发展中的山东济宁医学院附属医院（论文提纲范文）
（1）幽门螺杆菌感染对代谢综合征患者血糖血脂代谢的影响（论文提纲范文）
| 1 对象与方法 |
| 1.1 对象 |
| 1.2 Hp感染诊断标准 |
| 1.3 病例定义 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 实验室检测 |
| 1.4.2 资料收集 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结 果 |
| 2.1 两组血脂水平比较 |
| 2.2 两组血糖水平 |
| 2.3 两组各项血脂与血糖异常率情况 |
| 2.4 代谢综合征患者Hp阳性单因素分析 |
| 2.5 代谢综合征患者Hp阳性多因素分析 |
| 3 讨 论 |
（3）ATG16L1基因启动子在急性心肌梗死病人中的遗传变异及功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写说明 |
| 前言 |
| 材料及方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 ATG16L1在心血管病中的调控作用及机制 |
| 参考文献 |
| 附录、附图表 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（4）女性慢性盆腔疼痛临床管理的专家共识（2021年版）（论文提纲范文）
| 一、CPP定义 |
| 二、流行病学 |
| 三、病理生理学 |
| 四、CPP相关疾病 |
| 五、诊断 |
| （一）病史采集及评估 |
| 1. 病史采集： |
| 2. 体格检查： |
| 3. 实验室检查： |
| 4. 影像学检查： |
| （二）非妇科疾病的评估 |
| （三）多学科诊疗 |
| 六、治疗 |
（5）慢性心力衰竭患者血浆外泌体miR-206的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 外泌体miR-122-5p和miR-206与慢性心力衰竭研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（6）三子养亲汤合定喘汤对支气管哮喘急性发作期IL-4、IFN-γ、CysLTs和肺功能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 支气管哮喘诊断及半胱氨酰白三烯受体拮抗剂治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（7）炎症微环境的免疫调控与血管重构分子机制的研究（论文提纲范文）
| 论文Ⅰ :血清白介素增强结合因子3对动脉粥样硬化斑块破裂预测价值的研究 |
| 中文摘要Ⅰ |
| 英文摘要Ⅰ |
| 符号说明 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 论文Ⅱ:白介素增强结合因子3在斑块易损性中的作用与机制研究 |
| 中文摘要Ⅱ |
| 英文摘要Ⅱ |
| 符号说明 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 论文Ⅲ:调节性T细胞抑制COX-2表达对腹主动脉瘤发挥保护作用 |
| 中文摘要Ⅲ |
| 英文摘要Ⅲ |
| 符号说明 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文论文Ⅰ |
| 英文论文Ⅱ |
（8）血清胆红素水平与2型糖尿病患者视网膜病变的相关性分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（9）GATA6基因启动子在急性心肌梗死中的遗传和功能变异分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩写说明 |
| 前言 |
| 材料及方法 |
| 1. 主要实验材料及研究对象 |
| 2. 数据统计分析 |
| 结果 |
| 1. AMI和对照组的临床数据比较 |
| 2. AMI患者和对照组中确定的DSVs和SNPs |
| 3. GATA6基因启动子中所有SNPs与AMI风险之间的关联 |
| 4. 单倍型分析与AMI风险之间的关联 |
| 5. SNP-SNP相互作用和AMI风险 |
| 6. DSVs相关的转录因子的推定结合位点 |
| 7. 双荧光素酶报告基因检测对DSVs的功能分析 |
| 8. DSVs影响转录因子的结合位点分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 转录因子GATA6在心血管疾病中的作用及其调控机制 |
| 参考文献 |
| 附录、附图表 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评审及答辩情况表 |
（10）vWF、sST2、GDF15联合BNP检测评估慢性射血分数保留的心力衰竭的临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 血管性血友病因子在射血分数保留的心力衰竭中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
四、发展中的山东济宁医学院附属医院（论文参考文献）
- [1]幽门螺杆菌感染对代谢综合征患者血糖血脂代谢的影响[J]. 杨淑侠,蔡素丽,杨宁,姚慧,刘宏生. 中华医院感染学杂志, 2021(20)
- [2]一切为了大众健康——记发展中的山东省济宁医学院附属医院脊柱外科[J]. 李庆伟,张勇,孟纯阳. 中国脊柱脊髓杂志, 2021(08)
- [3]ATG16L1基因启动子在急性心肌梗死病人中的遗传变异及功能研究[D]. 韩发兰. 山东大学, 2021(09)
- [4]女性慢性盆腔疼痛临床管理的专家共识（2021年版）[J]. 王健,张师前,刘玉光,崔才三,杜广中,齐峰,卢雪峰,麻琳,夏庆华,于灵芝. 北京医学, 2021(07)
- [5]慢性心力衰竭患者血浆外泌体miR-206的表达及临床意义[D]. 范琳琳. 济宁医学院, 2021(01)
- [6]三子养亲汤合定喘汤对支气管哮喘急性发作期IL-4、IFN-γ、CysLTs和肺功能的影响[D]. 高雅文. 济宁医学院, 2021(01)
- [7]炎症微环境的免疫调控与血管重构分子机制的研究[D]. 刘斌. 山东大学, 2020(01)
- [8]血清胆红素水平与2型糖尿病患者视网膜病变的相关性分析[D]. 李丹. 济宁医学院, 2020(01)
- [9]GATA6基因启动子在急性心肌梗死中的遗传和功能变异分析[D]. 孙兆庆. 山东大学, 2020(02)
- [10]vWF、sST2、GDF15联合BNP检测评估慢性射血分数保留的心力衰竭的临床意义[D]. 孙强. 济宁医学院, 2020(04)
标签：巨噬细胞论文; 冠状动脉粥样硬化论文; 基因合成论文; 启动子论文; bnp论文;