一、雷公藤红素升高细胞浆游离Ca~(2+)浓度与其诱导HMC-1细胞凋亡有关（论文文献综述）
刘丹丹[1]（2021）在《基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点》文中研究表明实验目的:本研究从细胞水平和动物水平,基于合成的雷公藤红素探针（celastrol-prob,cel-p）,联合串联质谱标签（Tandem Mass Tag,TMT）标记、细胞热转变分析（Cellular Thermal Shift Assay,CETSA）、免疫荧光（immunofluorescence,IF）、蛋白免疫印迹（western blotting,WB）等实验技术研究了活性天然产物雷公藤红素（celastrol,cel）对体内外脑缺血再灌注（ischemic-reperfusion,I/R）损伤的神经保护作用,并探索了其可能的靶点及机制,为合理开发利用天然产物celastrol提供了有力的科学支撑。实验方法:细胞水平1.提取原代新生Sprague-Dawley大鼠皮层神经元细胞体外培养并通过IF方法检测其纯度。建立原代神经元细胞氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）模型体外模拟脑I/R损伤,并用cell counting kit-8（CCK-8）方法确立OGD模型的最佳造模时间。采用CCK-8方法确认celastrol及合成的cel-p对神经元细胞的半数抑制浓度（50%inhibiting concentration,IC50）、是否具有体外神经保护性、最佳给药剂量及给药时间。2.采用 SDS polyacrylamide gel electrophoresis（SDS-PAGE）凝胶电泳方法,研究cel-p对原代神经元细胞的蛋白质组反应谱和生物结合效率,并验证是否与母体化合物celastrol竞争性结合位点相同。采用IF和cel-p点击化学（click chemistry reaction）实验方法,研究cel-p在原代神经元细胞中随时间的定位。3.基于TMT标记,采用亲和标签的pull-down实验和液相色谱-串联质谱（Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS/MS）的实验方法检测 cel-p在原代神经元细胞上结合的以及被竞争掉的靶蛋白。对cel-p结合的靶蛋白进行分析,分析celastrol作用于原代神经元细胞发挥神经保护性的可能靶点。4.根据分析结果,选取可信度较高的HMGB1蛋白进行验证。采用pull-down及SDS-PAGE凝胶电泳方法,研究celastrol是否可以与cel-p竞争性结合HMGB1蛋白。采用CETSA实验,研究celastrol是否可以增强HMGB1蛋白的热稳定性。5.采用WB和IF实验方法,研究建立原代神经元OGD模型后,celastrol对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白表达的影响。通过检测细胞培养上清中的HMGB1蛋白,研究模型组HMGB1蛋白随时间延长分泌的变化以及celastrol对HMGB1蛋白的分泌量的影响。6.采用重组人HMGB1、HMGB1 A box和B box蛋白,结合SDS-PAGE凝胶电泳方法和click chemistry reaction研究cel-p是否结合了 HMGB1蛋白的半胱氨酸位点。cel-p 是否减少了 B box 与 Toll 样受体 4（Toll like receptor4,TLR4）、晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products,RAGE）的结合,从而使其失去致炎作用。cel-p是否通过结合HMGB1蛋白抑制了其升高小鼠巨噬细胞样细胞系RAW 264.7细胞TNF-α分泌的能力。动物水平1.采用线栓法建立雄性成年Sprague-Dawley大鼠大脑中动脉阻断（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型体内模拟脑I/R损伤,以依达拉奉注射剂（edaravone injection,eda,6 mg/kg）为阳性对照,确认 celastrol（1 mg/kg）是否具有体内神经保护性。在MCAO模型1.5 h后拔出线栓进行再灌注,再灌注后Sham组及Model组腹腔注射1 mL生理盐水,M+cel组腹腔注射celastrol（lmg/kg）,M+eda 组尾静脉注射 edaravone（6 mg/kg）,然后分别于 24 h、48 h各给药一次,共三次。24 h、48 h、72 h进行Zea-Longa法行为学评分,72 h后取出大鼠脑组织进行 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色。2.在72 h后,每组取四只大鼠,经PBS、4%多聚甲醛灌流后取脑组织进行脱水、石蜡包埋,切片后对皮层组织神经元进行尼氏染色分析,对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白进行IF分析。每组取四只大鼠,分离患侧大脑中皮层组织对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白进行WB分析,进一步体内验证celastrol发挥神经保护性的靶点和机制。实验结果:细胞水平1.提取的原代神经元细胞纯度大于90%,可用于其他的实验研究。CCK-8方法确立OGD模型的最佳造模时间为缺糖缺氧4 h,celastrol与cel-p的IC50相近（celastrol IC50=2.06±0.52 μM,cel-p IC50=2.24±0.59 μM）,均具有明显的神经保护性。最佳给药剂量为0.1-0.8 μM,最佳给药时间为OGD模型后立即连续给药48 h。因此,合成的cel-p与母体化合物celastrol具有等效性,可代替原药用于后续靶点研究。2.采用SDS-PAGE凝胶电泳方法证实,对于原代神经元细胞,cel-p具有较高的生物结合效率,在低至0.8μM浓度下产生明显可见的条带,并与原药celastrol 8 ×（6.4 μM）竞争条件下具有相同的结合位点。采用IF方法和click chemistry reaction实验证实,cel-p可以在4 h内从细胞胞浆进入胞核,因此可用于标记胞浆和胞核的蛋白。3.采用TMT标记、pull-down和LC-MS/MS的方法检测cel-p在原代神经元细胞上结合的以及被竞争掉的靶蛋白。对cel-p结合的靶蛋白进行分析,发现共鉴定蛋白1405个,其中为高可信度的蛋白120个。4.根据分析结果,选取可信度较高的HMGB1蛋白进行验证。采用pull-down及SDS-PAGE凝胶电泳方法,证实celastrol可以与cel-p竞争性结合HMGB1蛋白,因此可进一步展开生物学实验以探究celastrol在细胞水平的作用靶点。采用CETSA实验,证实celastrol与HMGB1结合明显增强了 HMGB1的热稳定性。5.采用WB实验方法,证实建立原代神经元细胞OGD模型后,celastrol不能影响HMGB1的整体表达以及胞浆胞核的表达,明显升高了 HSP70的表达,降低了 NF-κB p65的表达。采用IF技术,证实cel-p与HMGB1蛋白具有共定位现象,对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响趋势与WB结果一致。通过检测OGD模型组细胞培养上清中的HMGB1蛋白发现,模型组HMGB1蛋白随时间延长逐渐分泌出去到培养基中,在24 h以后达到高峰。而celastrol在OGD模型后给药48 h并没有减少培养基中HMGB1蛋白的分泌量。由以上结论我们推测,celastrol可能无法影响HMGB1蛋白的出入核和分泌,而是通过直接结合HMGB1蛋白使其失去致炎活性。6.采用重组人HMGB1蛋白,证实cel-p可以结合HMGB1蛋白,并且可以竞争性抑制已知的HMGB1蛋白抑制剂（甘草次酸、二甲双胍）与HMGB1的结合。N-Hex-5-ynyl-2-iodoacetamide（IAA-yne）与二硫键型 HMGB1 蛋白的结合可以被celastrol几乎全部抑制,用Dithiothreitol（DTT）还原HMGB1二硫键后,celastrol同样可以几乎全部抑制IAA-yne与HMGB1蛋白的结合。由此可知,celastrol可以结合二硫键型HMGB1蛋白的106位半胱氨酸,也可以结合全还原型HMGB1蛋白的23、45、106位半胱氨酸。采用重组人A box和B box蛋白,证实cel-p与Abox、B box的结合几乎不能被2-iodoacetamide（IAA）抑制,而IAA-yne与A box、B box的结合可以被celastrol几乎全部抑制。因此,celastrol除了结合HMGB1蛋白的半胱氨酸,还有其他的结合位点。Celastrol明显抑制了HMGB1引起的RAW 264.7细胞TNF-α分泌。此外,celastrol可明显抑制HMGB1 B box与TLR4、RAGE受体的结合,因此使其失去致炎活性。动物水平1.各组大鼠在MCAO后72 h进行TTC染色病理学分析显示,M+cel和M+eda组的大鼠脑组织损伤侧梗死体积相较于Model组显着降低（p<0.05）。神经功能缺损评分（Zea-Longa）显示,M+cel和M+eda的大鼠在MCAO 24 h、48 h和72 h时间点均显着降低神经功能缺损评分,改善运动功能和行为。因此,TTC染色、Zea-Longa法行为学评分结果表明,celastrol 1 mg/kg体内同样具有神经保护性。2.尼氏染色结果显示,相较于Model组大鼠,M+cel和M+eda组大鼠皮层神经元细胞尼氏小体数量显着增多,排列紧密。WB和IF实验结果表明,celastrol几乎不能影响HMGB1的表达水平,但是明显升高了 HSP70的表达,降低了 NF-κB p65,结果与体外实验趋势一致。因此,celastrol通过作用于HSP70和NF-κB p65在体内发挥抗炎作用和神经保护性。结论:由以上可知,celastrol对体内外脑缺血再灌注损伤均具有明显的神经保护性,一是通过直接结合HMGB1蛋白,使其不能与TLR4、RAGE受体结合,从而失去致炎作用,二是提高细胞或者组织HSP70的表达,降低NF-κB p65的表达而发挥抗炎作用。
阳秀林[2]（2021）在《雷公藤红素抑制慢性肾脏病大鼠血管钙化的机制研究》文中研究表明研究背景:心血管疾病是慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）患者最常见的并发症,而CKD患者的血管钙化与心血管疾病的死亡率密切相关。血管钙化的机制与骨生成过程有类似之处,在高磷高钙、氧化应激和炎性细胞因子的刺激下,血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）经历了成骨样分化的过程。氧化应激在CKD患者的血管钙化进程中起关键作用。但是,迄今为止尚无有效地治疗CKD患者血管钙化的方法。雷公藤红素（celastrol,Cel）是从雷公藤植物中提取的天然产物,可以缓解氧化应激和炎症。血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HMOX-1）是一种抗氧化酶,具有抗炎和抗氧化作用,对动脉粥样硬化疾病的发展具有保护作用。然而,目前尚不清楚Cel是否通过调节HMOX-1抑制氧化应激和改善慢性肾脏病血管钙化。在本研究中,我们将采用血管平滑肌细胞、动脉环和CKD大鼠钙化模型系统地研究Cel在血管钙化中的作用及具体机制。研究目的:研究雷公藤红素对慢性肾脏病血管钙化的作用及具体的分子调控机制。研究方法:采用高磷高钙诱导细胞和血管环钙化,用不同浓度的Cel（1、10、20、50 nM）处理大鼠VSMCs以及大鼠和人的动脉环。用茜素红染色以及甲酸定量检测钙沉积;比色法检测钙离子浓度的变化;蛋白免疫印迹方法测成骨样分化标记物的表达水平;用抑制剂和小分子干扰RNA敲减HMOX-1处理平滑肌细胞,检测钙化程度变化;体内实验用慢性肾脏病大鼠模型,随机将大鼠分为对照组,模型组和Cel给药组（1 mg/kg/day）;用肌酐试剂盒检测大鼠血清肌酐水平;Micro-CT及茜素红染色检测大鼠主动脉钙化情况;用免疫荧光技术检测大鼠主动脉平滑肌细胞ROS水平。研究结果:茜素红染色和基因表达分析表明:Cel剂量依赖性地抑制大鼠VSMC钙化和成骨样分化;离体组织培养研究显示Cel抑制大鼠和人动脉环钙化;Micro-CT,茜素红染色和钙含量分析证实:Cel可抑制CKD大鼠的主动脉钙化;Cel处理可增加VSMC中HMOX-1的mRNA和蛋白水平,并降低ROS的水平;此外,HMOX-1特异性抑制剂和小干扰RNA敲减HMOX-1均消除了 Cel对血管钙化的抑制作用。敲减HMOX-1可逆转Cel介导的降低ROS水平的效应。研究结论:1.雷公藤红素抑制大鼠血管平滑肌细胞成骨样分化和钙化。2.雷公藤红素抑制大鼠和人动脉环钙化。3.雷公藤红素抑制CKD大鼠主动脉钙化。4.雷公藤红素通过激活HMOX-1信号通路抑制血管钙化。
黄涛[3]（2020）在《α7nAChR激动剂PHA568487对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究》文中提出研究背景肾缺血再灌注损伤（Renal ischemia/reperfusion injury,IRI）是指肾脏缺血后血流再灌注或氧气再灌注后自身损伤加重,这一独特的病理生理反应可致肾功能严重损害,严重者甚至可致患者死亡。现有研究表明炎症反应的发生在肾IRI中发挥了重要作用,但具体机制仍未完全阐明。迷走神经的神经递质乙酰胆碱可以通过激 α7 烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetycholine receptor,α7nAChR）调节炎症反应,缓解炎症。PHA568487为一种乙酰胆碱受体激动剂,通过激活α7nAChR活化胆碱能抗炎通路,在IRI过程中具有调控炎症反应的功能,具有较好的临床应用前景。在机体创伤或病理改变致使细胞损伤时,体内的核因子E2相关因子2（nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2）表达上调,激活氧化应激反应,最终可增强细胞对氧化应激的耐受能力。在缺血再灌注导致的器官损伤中,Nrf2信号通路依赖还原型辅酶以及醌氧化还原酶被激活后产生的诱导效应,对各种代谢引起的氧化应激反应发挥保护作用。血红素加氧酶（heme oxygenase,HO）广泛分布于机体的各组织器官中,具有保护组织免受IRI的作用。目前已有研究发现,激活后的Nrf2/HO-1信号通路广泛参与心、脑、肾和神经系统等组织器官的抗氧化应激损伤,保护细胞免受氧化应激的损伤,发挥抗氧化和抗凋亡的作用。但在肾IRI过程中,PHA568487是否对Nrf2/HO-1通路有调节作用尚无相关报道。环状RNA（circularRNA,circRNA）是一种没有5’帽状结构和3’腺苷酸尾的以首尾相接的方式构成的非编码RNA,它具有调节微小RNA（microRNA,miRNA）的特殊功能。近年来,有文献报道具有调节多种炎症相关人类疾病的功能。CircRNA不仅可以作为预测肾相关疾病的生物标志物,还可以通过调节靶向基因的功能以调节疾病发展进程。且除去传统的炎症通路,PHA568487能否调节circRNA的表达及其与肾IRI炎症过程的相关性仍无一例研究。目的本研究旨在探究α7nAChR激动剂PHA568487对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用,并分析可能涉及的调控机制。我们建立了大鼠肾IRI动物模型,并探究PHA568487预处理对肾IRI大鼠血清中尿素氮、血肌酐水平、血清炎症相关细胞因子的水平、大鼠肾组织的病理变化以及肾组织细胞的凋亡情况等方面的影响以明确PHA568487对大鼠肾IRI是否有缓解作用。最后,我们通过细胞生物学实验探究其下游信号通路及分子机制,为临床药物治疗及靶向治疗提供理论依据。方法1.我们通过大鼠肾组织缺血后复灌注的方法构建肾IRI的Wista大鼠动物模型,并通过再灌注前2 h腹腔注射2.4 mg/kg PHA568487以构建PHA568487预处理的Wista大鼠肾IRI动物模型。（1）观察各组大鼠的一般状态并采集各组大鼠的血液样本和肾组织样本。（2）血液生化检测仪测定血清尿素氮和血肌酐水平,酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定各组大鼠血清 C 反应蛋白（C-reactiveprotein,CRP）、白细胞介素-1（interleukin-1g,IL-1r）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）和IL-6的表达。（3）收集大鼠肾脏组织,制作肾组织病理切片,行高碘酸-雪夫氏染色法（Periodic Acid-Schiff stain,PAS）染色,观察各组大鼠肾组织的病理变化。（4）TUNEL法检测各组大鼠肾组织细胞的凋亡情况。（5）qRT-PCR和Western Blot检测各组大鼠肾组织中Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达情况。2.我们通过将人肾小管上皮细胞HK-2置于缺氧复氧环境下以构建肾IRI的模型;PHA568487预处理以构建PHA568487预治疗的体外肾IRI细胞模型;并使用Nrf-2特异性抑制剂ML385和PHA568487共同提前处理细胞,以探究Nrf-2在IRI的HK-2细胞中的作用。（1）首先我们通过CCK-8法检测各组细胞的增殖活性;（2）流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;（3）提取各组细胞的总RNA和总蛋白,采用 qRT-PCR 和 Western Blot 法分别检测 Nrf-2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达情况。3.首先,我们通过将人肾小管上皮细胞HK-2置于缺氧缺葡萄糖、复氧环境下以构建肾IRI的模型;通过PHA568487预处理以构建PHA568487预治疗的体外肾细胞IRI模型。（1）采用qRT-PCR检测了 PHA568487处理后IRI的HK-2细胞中circYAP1表达情况。（2）随后转染circYAP1过表达质粒到HK-2细胞中并构建IRI细胞模型,使用CCK-8法和流式细胞术检测circYAP1对细胞活力和凋亡的影响。使用ELISA和活性氧（reactive oxygen species,ROS）分别检测circYAP1过表达后对IL-1对、IL-6分泌以及ROS形成的作用。（3）通过生物预测网站预测与circYAP1存在靶向关系的miRNA,通过qRT-PCR检测敲低circYAP1后IRI的HK-2细胞中miR-21-5p表达情况,并使用荧光素酶报告基因实验进一步分析circYAP1与miR-21-5p的结合情况。（4）同时过表达circYAP1和miR-21-5p并构建IRI细胞模型,检测miR-21-5p对细胞活力、凋亡、炎症因子分泌和ROS形成的影响。最后,利用Westen Blot实验检测IRI的HK-2细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况。结果1.（1）在构建成功的Wista肾IRI大鼠动物模型中,大鼠食欲降低,进食、饮水均减少,精神萎靡、活动较少且迟缓;血液生化检测结果表明大鼠血清中尿素氮和肌酐水平明显增高;此外,PAS染色显示大鼠肾组织中肾小球体积增大,可观察到间质区内有大量炎性细胞浸润、肾小球细胞呈空泡变性。另外,肾IRI大鼠血清中CRP、TNF-中、IL-1中、IL-6水平明显高于对照组大鼠;而且IRI组大鼠肾组织的细胞凋亡率明显较高,肾组织中Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显下降而Bax和Caspase-3的表达均明显增高。（2）与IRI组大鼠相比,经过PHA568487预处理的Wista肾IRI大鼠饮水、进食、精神状态和活动量均较好,血清中尿素氮和肌酐水平均有所降低且肾组织病理状态得到改善,这表明PHA568487能够明显改善肾缺血-再灌注损伤大鼠的肾脏组织病变。此外,经过PHA568487预处理,肾IRI大鼠血清中CRP、TNF-中、IL-1中、IL-6水平和组织细胞凋亡率显着降低,且Bcl-2的表达有所回升、Bax和Caspase-3的表达受到抑制。2.（1）在模拟肾IRI的HK-2细胞模型中,细胞增殖活性较对照组有所降低,但细胞凋亡率较高,同时伴随着Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平的降低和Caspase-3和Bax表达水平的提高。（2）经过PHA568487预处理,肾IRI的HK-2细胞的增殖活性增加、凋亡率降低,且PHA568487还能够提高肾IRI的HK-2细胞中Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平并抑制Caspase-3和Bax的mRNA和蛋白表达。（3）与PHA568487预处理组相比,经过PHA568487和Nrf2抑制剂共孵育组的细胞增殖活性明显降低、凋亡率明显增高,Nrf2、HO-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平明显降低,而Caspase-3和Bax mRNA和蛋白的表达水平明显增高。3.（1）与IRI的HK-2细胞相比,PHA568487预处理可以提高HK-2细胞中的circYAP1表达水平。（2）转染circYAP1过表达质粒到HK-2细胞中并构建IRI细胞模型,CCK-8法和流式细胞术结果显示过表达circYAP1后细胞活力增强、细胞凋亡率降低,且可抑制IRI上调IL-1 β和IL-6以及ROS水平的作用。这表明,上调circYAP1表达能够缓解HK-2细胞的炎症损伤。（3）生物信息学数据库和qRT-PCR实验表明有多个miRNA与circYAP1存在靶向互补序列,且在下调circYAP1的HK-2 IRI细胞模型中可检测到相应miRNA表达水平的上升。随后,我们通过荧光素酶报告基因实验验证circYAP1在模拟IRI的HK-2细胞中充当miR-21-5p的海绵。进一步的细胞生物学实验也表明miR-21-5p可能参与了circYAP1调节的HK-2细胞炎症损伤过程,上调miR-21-5p后,原本circYAP1过表达对HK-2细胞炎症损伤的缓解作用减弱。最后,Western Blot实验结果表明circYAP1过表达通过抑制miR-21-5p表达水平,促进PI3K、AKT和mTOR蛋白的磷酸化,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路。结论本研究主要集中于α 7nAChR激动剂PHA568487对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究,主要得出以下结论:1、PHA568487预处理能够有效保护因缺血-再灌注而引发的肾功能损害,抑制肾组织细胞凋亡;2、PHA568487预处理对肾IRI的保护作用主要是通过其能够抑制炎症因子的表达,抑制促凋亡基因水平、促进凋亡抑制基因表达来实现的;3、Nrf-2/HO-1通路通过抑制促凋亡基因Caspase-3和Bax的表达,促进凋亡抑制基因BCL-2的表达,进而发挥抑制IRI的HK-2细胞凋亡的作用,而PHA568487对HK-2细胞的作用部分是通过Nrf-2/HO-1来实现的。4、在IRI的HK-2细胞中,PHA568487预处理可以提高circYAP1表达水平;CircYAP1通过靶向结合miR-21-5p,减轻HK-2细胞的IRI反应、促进损伤细胞凋亡、激活PI3K/AKT/mTOR信号通路。
王鑫[4]（2020）在《山莴苣素对脂肪细胞脂质沉积的作用及机制研究》文中认为在猪肉生产中,瘦肉率往往和肉品质息息相关,但是过多的脂质沉积会大大降低瘦肉率,影响猪肉的风味和品质,同时也会对猪的繁殖性能造成影响;对于人而言,过度的脂质沉积,会导致肥胖的患病率上升,进而危及机体健康。因此,迫切需要寻找安全有效的抗脂质沉积策略,一方面可以应用于猪肉生产中,为提高瘦肉率,改善肉品质提供理论依据;另一方面,可以为治疗肥胖以及相应的并发症提供新策略。山莴苣素是来源于菊苣属植物中的一种天然化合物,具有抗菌、抗疟疾、助睡眠以及调节肝脏代谢的作用,属于倍半萜内酯类化合物。在本研究中,分别通过体内和体外实验,评估了山莴苣素对脂质沉积的影响。1.山莴苣素对小鼠脂质沉积的影响。给高脂饲喂的小鼠每天灌胃山莴苣素溶液20mg/kg,连续7周,每天记录体重和采食量,并进行胰岛素敏感性和葡萄糖耐受性实验。7周过后,采集小鼠脂肪组织并称重,然后进行组织切片,并检测脂质合成相关基因的蛋白和m RNA水平。结果显示,山莴苣素处理会降低高脂饲喂小鼠的体重（P<0.05）和脂肪含量（P<0.05）,不影响采食量和粪便中TG的含量（P>0.05）。同时处理组小鼠血清中TG和LDL的水平明显下降（P<0.05）,脂肪组织中的脂肪细胞也明显减少（P<0.05）,与TG合成相关的PPARγ,C/EBPα和C/EBPβ的m RNA和蛋白水平降低（P<0.05）,JAK2/STAT3信号通路的表达下降（P<0.05）。此外,山莴苣素还可以改善高脂饲喂小鼠的胰岛素敏感性和葡萄糖耐受性（P<0.05）,降低肝脏中ACC和FAS的表达（P<0.05）。以上研究结果表明,山莴苣素可以抑制小鼠脂质沉积,并改善机体葡萄糖稳态,发挥这一作用或许与JAK2/STAT3信号通路有关。2.山莴苣素通过下调JAK2/STAT3介导的有丝分裂克隆扩增来抑制3T3-L1细胞的成脂。首先用不同浓度山莴苣素处理3T3-L1细胞来检测细胞活性,结果显示≤80μM的山莴苣素均不会对细胞活力产生影响（P>0.05）;随后用20μM的山莴苣素处理细胞。经油红O染色观察到,山莴苣素处理的细胞在分化期间脂质蓄积较少（P<0.05）,并且脂质合成相关基因（PPARγ,C/EBPα和C/EBPβ等）的表达水平降低（P<0.05）。流式结果显示,经过处理的细胞无法进行有丝分裂克隆扩增（mitotic clonal expansion,MCE）（P<0.05）,表明山莴苣素可能是在脂肪形成的早期阶段发挥作用。进一步的研究表明,山莴苣素诱导的MCE阻滞可能是由于JAK2/STAT3信号通路表达的降低（P<0.05）造成的。随后,用STAT3激活剂Colivelin和山莴苣素共处理细胞,与山莴苣素处理组相比,MCE阻滞得到缓解（P<0.05）,脂质蓄积也显着增加（P<0.05）,同时脂质合成相关基因PPARγ,C/EBPα和C/EBPβ等的表达也显着上升（P<0.05）,JAK2/STAT3信号通路的表达也上升。以上研究结果表明,山莴苣素可以通过抑制JAK2/STAT3信号通路的表达,进而影响细胞有丝分裂克隆扩增,最终影响细胞成脂。3.山莴苣素对IL-6/GP130相关信号通路的影响。在3T3-L1细胞分化后期,添加20μM的山莴苣素,发现其可以促进脂质分解,然后检测脂肪细胞脂酶ATGL和HSL的表达以及培养基中FFA的含量。结果显示,山莴苣素处理可以显着促进ATGL和HSL的表达（P<0.05）,培养基中FFA的含量也显着增加（P<0.05）,表明山莴苣素处理可显着促进脂质分解。此外,通过小分子作用位点预测网站预测了山莴苣素的靶位点为GP130,进而检测IL-6、IL-6R、GP130、ATX的表达,结果显示山莴苣素可以促进这些基因m RNA和蛋白的表达（P<0.05）。为了确定靶位点是GP130,用其特异性抑制剂SC144处理细胞,油红O染色显示SC144处理可以缓解山莴苣素的促脂解作用（P<0.05）,培养基中FFA也有下降（P<0.05）。检测相关基因的蛋白和m RNA表达,显示IL-6、ATGL和ATX表达均下降（P<0.05）,其他基因则没有显着变化（P>0.05）。以上研究结果表明,山莴苣素促进脂解的作用可能与IL-6/GP130相关信号通路有关。综上所述,活体上山莴苣素可以抑制小鼠脂质沉积并改善脂肪肝和葡萄糖稳态;离体上,山莴苣素可以通过抑制JAK2/STAT3介导的MCE来影响脂肪细胞成脂分化;同时亦可通过IL-6/GP130相关信号通路促进细胞脂质分解。
王俐钧[5]（2020）在《茵杞调脂饮调控LXRα通路改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究》文中认为目的:观察茵杞调脂饮治疗非酒精性脂肪肝（NAFLD）的临床疗效,探讨其作用机制,为中医药防治NAFLD提供理论基础和实践依据。方法:理论研究:通过查阅古今文献,总结中西医对本病的研究。综述NAFLD历史渊源、流行病学、治疗方法等方面的进展,探讨了LXRα通路及其相关靶点在NAFLD中的作用,基于“肝郁生浊”理论阐述了NAFLD的病因病机,在此理论指导下以清肝化浊法为治疗原则,论述了茵杞调脂饮的组方依据。临床研究:将73例NAFLD湿热蕴结型患者随机分为治疗组和对照组,其中脱落3例,最终纳入治疗组35例,对照组35例。两组患者均予以健康宣教及引导改变生活方式,在此基础上,治疗组口服茵杞调脂饮煎剂,对照组口服水飞蓟宾胶囊。3个月后观察受试者治疗前后血清ALT、AST、GGT、ALP、TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA水平及中医证候积分、肝脏彩超影像图、脂肪衰减参数CAP值与不良反应发生的变化,评估药物的疗效与安全性。实验研究:采用高脂饮食诱导建立NAFLD大鼠模型,将50只雄性SD大鼠分为正常组9只,模型组41只,分别给予普通饲料、高脂饲料,12周后从两组中分别随机选取1只,进行肝组织病理切片染色,明确造模是否成功。造模完成后,正常组剩余大鼠为正常对照组,模型组剩余大鼠随机分为模型对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、水飞蓟宾组。正常对照组和模型对照组大鼠灌胃生理盐水,各药物组给予不同剂量的中药或西药灌胃。8周治疗后称取大鼠体重并计算肝指数、Lee’s指数,观察肝组织HE染色、油红O染色,检测血清ALT、AST、TG、TC及肝组织TC、TG、FFA、MDA、SOD、GSH、TNFα、IL-6水平,RT-PCR法检测LXRα、SREBP-1c、FAS、DGAT2m RNA表达,Western Blot法检测LXRα、SREBP-1c、FAS蛋白表达。结果:临床研究:治疗后两组患者血清ALT、AST、GGT、ALP、TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA水平及中医证候积分、肝脏彩超影像图、脂肪衰减CAP值、临床综合疗效均较治疗前显着改善（P?0.05,P?0.01）,无不良反应。在改善血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C、FFA水平及中医证候积分、肝脏彩超影像图、CAP值方面治疗组优于对照组（P?0.05,P?0.01）;在改善血清GGT、ALP及HDL-C水平方面两组无明显差异（P>0.05）;治疗组总有效率85.71%,对照组总有效率62.86%,治疗组优于对照组（P?0.01）。实验部分:经12周高脂饮食诱导成功建立NAFLD模型大鼠。在大鼠体重、肝指数、Lee’s指数、血清ALT、AST、TC、TG方面,与正常对照组相比,模型对照组大鼠上述指标发生显着异常（P?0.01）;与模型对照组相比,各药物干预组大鼠上述指标不同程度改善（P?0.05,P?0.01）;与水飞蓟宾组相比,茵杞调脂饮高剂量组上述指标显着改善（P?0.05）;中药各剂量组之间比较,高剂量组上述指标较低剂量组明显改善（P?0.05,P?0.01）,中剂量组体重、Lee’s指数、ALT、AST、TC、TG较低剂量组明显改善（P?0.05）,高剂量组上述指标较中剂量组明显改善（P?0.05）。在肝组织TC、TG、FFA、MDA、SOD、GSH、TNFα、IL-6指标方面,与正常对照组相比,模型对照组大鼠肝组织上述指标发生显着异常（P?0.01）;与模型对照组相比,各药物干预组大鼠上述指标不同程度改善（P?0.05,P?0.01）;与水飞蓟宾组相比,茵杞调脂饮高剂量组上述指标均显着改善（P?0.05）;中剂量组在降低FFA方面效果显着（P?0.05）;中药各剂量组之间比较,高剂量组上述指标较低剂量组明显改善（P?0.05,P?0.01）,中剂量组TC、TG、FFA、MDA、SOD、TNFα、IL-6指标低剂量组明显改善（P?0.05）,高剂量组TC、FFA、MDA、SOD、GSH、TNFα、IL-6指标较中剂量组明显改善（P?0.05）。在肝组织LXRα、SREBP-1c、FAS、DGAT2m RNA和蛋白表达方面,与正常对照组相比,模型对照组上述指标发生显着异常（P?0.01）;与模型对照组相比,各药物干预组大鼠上述指标不同程度降低（P?0.05,P?0.01）;与水飞蓟宾组相比,茵杞调脂饮高剂量组LXRα、FAS、DGAT2表达显着降低（P?0.05）;中药各剂量组之间比较,中、高剂量组上述指标较低剂量组明显降低（P?0.05,P?0.01）,高剂量组LXRα、FAS、DGAT2表达较中剂量组显着降低（P?0.05）。结论:1.肝失疏泄、郁浊内生是NAFLD发生的关键因素和中心环节,以清肝化浊法为基本原则契合本病的发病机理,是行之有效的治疗方法。2.茵杞调脂饮能缓解NAFLD病情,减轻临床症状、体征,恢复肝功能,降低血脂水平,改善肝脏彩超影像图、CAP值,疗效确切,安全可靠。3.茵杞调脂饮对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠具有较好的治疗效果,机制可能与调控LXRα通路有关,进而改变下游脂代谢相关靶点SREBP-1c、FAS、DGAT2的表达,减轻肝脏脂质堆积,缓解肝组织氧化应激及炎症反应,降低血清转氨酶及血脂水平,改善肝组织病理学。中药高剂量组效果最为显着,提示较高浓度的茵杞调脂饮能更好地调节LXRα通路,缓解病变。
张晓莉[6]（2020）在《SAA通过TLR2信号通路促进类风湿关节炎NETs形成的研究》文中研究表明目的类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一种常见的全身性自身免疫性疾病,该病的重要特征为关节的慢性炎症,最终可导致关节破坏。RA的发病机制很复杂,目前尚未完全阐明。既往的研究已证实固有免疫和适应性免疫都参与了RA的病理病生。众所周知,中性粒细胞是宿主固有免疫的主要参与者,研究显示其在RA炎症中发挥了至关重要的作用,特别是中性粒细胞形成的胞外诱捕网（Neutrophil Extracellular Traps,NETs）。NETs是一种由DNA、组蛋白和中性粒细胞蛋白（如髓过氧化物酶等）组成的纤维网状结构,可诱捕病原体发挥抗感染作用。但是,如果NETs形成过多或清除障碍,可能诱发RA等自身免疫性疾病。目前有研究报道在RA的炎症环境中,外周血和局部关节的中性粒细胞中都容易形成NETs,而且NETs是RA瓜氨酸化蛋白抗原的自身抗体的重要来源。本课题组既往研究已证实在RA中血清淀粉样蛋白A（serum amyloid A,SAA）可以诱导NETs的形成并促进血管新生。本研究的主要目的是探究RA患者中SAA通过Toll样受体2（Toll-like Receptor 2,TLR2）诱导NETs形成的分子机制,为阐明RA的病理机制及随后的诊断与治疗提供实验依据。方法1.采用密度梯度离心法分别提取RA患者和健康体检者（healthy controls,HC）外周血中性粒细胞,并应用瑞氏染色和DAPI染色观察评估中性粒细胞纯度和形态。2.采用DAPI染色和免疫荧光显微镜分别评估RA和HC人群各实验组（SAA刺激组、LPS刺激组（阳性对照组）、及阴性对照组）的NETs形成情况,并以NETs形成百分比作为衡量;应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各实验组细胞培养的上清液中组蛋白H3含量。3.采用荧光酶标仪检测SAA诱导中性粒细胞过程中ROS含量,并加入NADPH氧化酶抑制剂分析对此过程的影响。4.采用Western Blot观察SAA刺激的中性粒细胞中TLR2表达情况。5.提取健康人的中性粒细胞作为细胞模型,免疫荧光法评估TLR2中和抗体对SAA诱导NETs形成的影响,并应用ELISA检测各实验组细胞培养的上清液中组蛋白H3含量。6.Western Blot分析在中性粒细胞中SAA-TLR2的作用,再分别加入TLR2中和抗体、PI3K/Akt抑制剂,分析其对PI3K/Akt信号途径活化的影响。7.采用免疫荧光法及ELISA探究PI3K/Akt信号通路的激活对SAA-TLR2诱导NETs形成的影响。结果1.瑞氏染色和DAPI染色结果显示中性粒细胞纯度和形态都符合实验要求。2.免疫荧光显微镜结果显示:与HC人群相比,RA人群形成NETs数量更多,且NETs百分比增高;SAA刺激组形成NETs的百分比显着高于阴性对照组,但是比LPS刺激组低;检测各组细胞培养上清中H3的含量发现与形成的NETs百分比变化一致。3.荧光酶标仪检测结果显示,与阴性对照相比,SAA刺激组ROS含量明显升高,略低于PMA组（阳性对照组）;加入NADPH抑制剂后SAA组检测到少量ROS,PMA组几乎检测不到ROS。4.Western Blot蛋白表达水平检测结果显示:经SAA刺激的中性粒细胞TLR2表达量增多。5.DAPI染色及免疫荧光显微镜观察结果显示:加入TLR2中和抗体处理即SAA+抗TLR2抗体组所形成的NETs百分比远低于SAA刺激组;ELISA检测各实验组细胞培养上清中H3的含量与形成的NETs水平变化一致。6.Western Blot结果显示:中性粒细胞经SAA刺激并加入TLR2中和抗体后,TLR2、p-Akt的表达下调;加入PI3K/Akt抑制剂后,p-Akt的表达明显下调,而TLR2的表达无明显变化。7.免疫荧光显微镜观察结果显示:SAA刺激组的NETs形成百分比明显高于其他组,而SAA+抗TLR2抗体组、SAA+PI3K/Akt抑制剂组的NETs形成百分比均降低;ELISA检测细胞培养上清液中H3含量与NETs的百分比变化一致。结论1.与健康对照相比,RA患者的中性粒细胞经SAA刺激更容易形成NETs,而且此过程可经SAA与TLR2相互作用。此外,SAA诱导NETs形成过程中有ROS产生,且可能是有NADPH氧化酶依赖型途径参与的。2.SAA通过SAA-TLR2-PI3K/Akt信号通路诱导NETs形成,从而直接参与了RA关节炎的病理机制。
彭小芝[7]（2020）在《鞘蕊苏抗肿瘤活性成分的药效作用与化学合成研究》文中研究说明从中药中筛选抗肿瘤活性成分以及抗肿瘤先导化合物是抗肿瘤药物研究领域的一大热点,如紫杉醇、喜树碱、长春新碱等天然成分己作为许多肿瘤治疗的首选药物。我国的药用植物自然资源丰富,如果能将中药抗肿瘤有效成分分离出来,明确其抗肿瘤作用及机理,对于抗肿瘤药物的研制开发具有非常重要的意义。鞘蕊苏为民间中药,具有清热利湿、散寒解表、祛痰止咳之功效,民间将其用于治疗哮喘、肿瘤等疾患,疗效显着,具有广泛的生理活性。其植物名为毛喉鞘蕊花Coleus forskohlii Briq.,系唇形科（Labiatae）鞘蕊花属（Coleus lour.）植物,印度民间称其为“神药”,我国民间则称之为“灵药草”。现代药理研究表明,鞘蕊苏提取物对支气管哮喘、充血性心力衰竭、抑制肿瘤细胞增殖等具有明显药效。为了阐明鞘蕊苏的抗肿瘤药效物质基础及作用机制,寻找抗肿瘤活性先导化合物,本论文结合实验室前期研究基础,主要从以下四个方面进行研究:1.运用中药化学、药理学和分子生物学的学科交叉研究方法,采用系统溶剂方法将鞘蕊苏提取分离为不同物质部位,通过生物活性跟踪分离,从中筛选抗肿瘤有效物质部位Q3,采用色谱方法将活性部位进一步分离纯化,用MTT法从鞘蕊苏药材中筛选出系列抗肿瘤有效成分,其中14-去氧鞘蕊酮U（14-Deoxycoleon U）表现出良好的抗肿瘤活性。2.通过体内和体外实验检测14-去氧鞘蕊酮U的抗肿瘤药效。通过对四种肿瘤细胞株的生物活性筛选,MTT实验结果表明14-去氧鞘蕊酮U对不同肿瘤细胞增殖均有较显着的抑制作用,抗癌谱较广;且有一定的选择性,结果表明14-去氧鞘蕊酮U的敏感瘤株为A549和LLC细胞,对人肺腺癌细胞株A549(IC50=18.99μg/mL)和小鼠肺癌细胞LLC(IC50=10.04μg/mL)抑制增殖作用显着;体内实验利用C57BL/6小鼠的Lewis肺癌模型研究14-去氧鞘蕊酮U的体内抗肿瘤活性,结果显示,与空白对照组相比,14-去氧鞘蕊酮U对肿瘤的生长具有明显的抑制作用,抑瘤率达到40.38%;与空白对照组相比,小鼠体重平稳,肝、肾、脾、肺各脏器系数与无明显影响,表明14-去氧鞘蕊酮U是一种天然的安全性较高的活性成分。3.运用体外实验进一步探讨14-去氧鞘蕊酮U诱导肿瘤细胞凋亡、自噬和周期阻滞的分子机制,探讨其抗肿瘤作用机制,为14-去氧鞘蕊酮U抗肿瘤药物研发和临床应用提供重要的理论指导和实验依据。通过Hoechst 33258染色观察不同浓度14-去氧鞘蕊酮U对A549细胞凋亡形态学变化,实验结果显示随着14-去氧鞘蕊酮U浓度的增加发现细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒状荧光,细胞的凋亡小体逐渐增多,表明14-去氧鞘蕊酮U能够诱导肿瘤细胞凋亡发生。通过蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测A549和LLC细胞中凋亡相关蛋白的表达,实验结果表明,14-去氧鞘蕊酮U通过诱导半胱氨酸蛋白酶Caspase3和PARP表达增加来诱导细胞凋亡,且成剂量依赖性关系;但对促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2没有显着影响,结果表明14-去氧鞘蕊酮U不能通过下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达这条线粒体途径来诱导A549和LLC细胞凋亡。通过WB检测A549和LLC细胞中内质网应激（ER stress）介导的相关蛋白的表达,实验结果表明,14-去氧鞘蕊酮U上调了IRE1-α,XBP1s和CHOP的表达,提示ER应激被激活,ER stress发生caspase-12或caspase-4被激活,14-去氧鞘蕊酮U诱导细胞发生了内质网和线粒体联合应激,并最终导致细胞凋亡发生。运用Alexa Fluor?488 Conjugated LC3Ⅰ/Ⅱ染色荧光分析实验,通过激光共聚焦扫描显微镜观察14-去氧鞘蕊酮U对A549细胞自噬相关蛋白和自噬体的影响,实验结果证实14-去氧鞘蕊酮U能够促进细胞自噬体的形成,诱导A549和LLC的细胞自噬发生。进一步通过WB检测A549和LLC细胞中自噬相关蛋白的表达,结果显示14-去氧鞘蕊酮U可上调LC3II/I蛋白的比例和Atg5的表达,对Beclin-1蛋白表达无明显影响,表明14-deoxycoleon U通过上调LC3II/I和Atg5促进细胞自噬体的形成和诱导细胞凋亡。通过WB检测A549和LLC细胞中周期阻滞相关蛋白的表达,实验结果显示14-去氧鞘蕊酮U下调细胞周期蛋白D3（CyclinD3）、细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）,细胞分裂周期蛋白2（CDC2）和上调p21,表明14-去氧鞘蕊酮U可以通过影响CyclinD3、CDK6、CDC2和p21蛋白表达从而抑制细胞从G2进入M期,引起肿瘤细胞周期阻滞。但是,由周期蛋白E激活并导致G1/S过渡的CDK2不受14-去氧鞘蕊酮U的影响。4.根据鞘蕊苏抗肿瘤活性成分的结构特点和化学合成可行性,为增强抗肿瘤活性,选取鞘蕊苏抗肿瘤活性成分二萜类化合物Coleolic acid为先导化合物,在分子中引入小分子抗肿瘤药物中常见的苯环、杂环等基团,在Coleolic acid的11位碳上设计并合成了18个新型的Coleolic acid衍生物,所有终产物经1H NMR、13C NMR结构确证。实验结果证明所采用的合成路线经济、操作简便和收率较高,通过MTT检测了它们的体外抗肿瘤活性,筛选出抑制肿瘤细胞增殖活性最优化合物PX15,其IC50值为1.84μg/mL,与先导化合物Coleolic acid(IC50=40.47μg/mL)相比,有了很大的提高。综上所述,本研究结合生物活性跟踪分离,从鞘蕊苏中筛选出单体活性成分14-去氧鞘蕊酮U,并在细胞水平、整体动物水平、和分子水平三方面探讨其抑制肿瘤细胞增殖的作用和机制,并以抗肿瘤有效成分Coleolic acid为先导化合物,通过结构改造,合成系列衍生物,发现有研究前景的抗肿瘤活性化合物,为鞘蕊苏抗肿瘤研究提供物质基础,为研制抗肿瘤化学药物提供可供进一步优化的先导化合物。
徐波[8]（2020）在《滑膜巨噬细胞焦亡激活膝骨关节炎痛敏及“易层”贴敷的干预机制》文中指出目的明确KOA滑膜组织中是否存在巨噬细胞焦亡现象,寻找它与滑膜炎症、软骨退变、痛敏状态的内在联系;基于滑膜巨噬细胞焦亡/TRPs信号通路研究“易层”贴敷有效抑制KOA疼痛的疗效机制。方法（1）建立KOA大鼠模型,运用HE染色、免疫荧光、Western Blot等实验方法,明确滑膜巨噬细胞是否发生焦亡及其与滑膜炎症、软骨退变的关系;（2）建立KOA大鼠模型,通过检测冷痛敏和机械痛敏参数、背根神经节组织TRPs通道蛋白和基因的表达,明确滑膜巨噬细胞焦亡对背根神经节TRPs蛋白表达及痛敏的干预作用;（3）体外构建巨噬细胞焦亡模型,运用钙离子成像、Western Blot、PCR等实验方法,探讨巨噬细胞焦亡对神经元细胞TRPs通道蛋白表达和功能的干预作用;（4）建立KOA大鼠模型,通过检测冷痛敏和机械痛敏参数、背根神经节组织TRPs通道蛋白和基因的表达,探索“易层”贴敷缓解KOA疼痛的疗效机制;（5）建立KOA大鼠模型,运用HE染色、免疫荧光、Western Blot等实验方法,观察“易层”贴敷对滑膜组织巨噬细胞焦亡的干预作用。结果（1）KOA模型组大鼠出现典型的滑膜炎症、软骨退变表现,同时滑膜组织中存在巨噬细胞焦亡相关蛋白的高表达;运用巨噬细胞特异性caspase-1低表达腺相关病毒抑制巨噬细胞焦亡,可以显着减轻滑膜炎症和软骨退变;（2）KOA模型组大鼠表现出典型的冷痛敏和机械痛敏状态;巨噬细胞焦亡被抑制后,大鼠痛敏状态显着改善,冷刺激缩足潜伏期较模型组延长,机械刺激缩足阈值较模型组显着升高,背根神经节组织TRPA1、TRPM8、TRPV4蛋白和基因表达较模型组均有所下调;（3）体外运用LPS/ATP干预巨噬细胞,成功构建细胞焦亡模型;使用巨噬细胞的培养上清液干预神经元细胞,观察其对神经元细胞膜TRPs通道的干预作用。发现巨噬细胞焦亡产物能够显着上调TRPs蛋白和基因的表达,焦亡被抑制后此作用被消除;通过神经元钙离子成像技术观察细胞内钙离子浓度,发现巨噬细胞焦亡产物能够显着升高细胞内的钙离子浓度,抑制焦亡能够降低细胞内的钙离子浓度;（4）“易层”贴敷可改善KOA大鼠的冷痛敏和机械痛敏状态,延长冷刺激缩足潜伏期,升高机械刺激缩足阈值;“易层”贴敷干预可降低KOA大鼠背根神经节组织TRPs通道蛋白的表达;（5）“易层”贴敷可下调KOA大鼠滑膜组织中的巨噬细胞焦亡相关蛋白的高表达,同时改善滑膜炎症,降低血清中促炎因子水平。结论（1）KOA滑膜组织存在巨噬细胞焦亡,推动滑膜炎症、软骨破坏;（2）KOA滑膜组织巨噬细胞焦亡,释放促炎因子,激活TRPs通道,参与构建冷痛敏和机械痛敏状态;（3）“易层”贴敷可有效改善KOA的冷痛敏、机械痛敏状态;（4）“易层”贴敷通过干预巨噬细胞焦亡/TRPs信号通路,发挥抑制KOA疼痛的治疗效应。
孔翠翠[9]（2020）在《蟾蜍灵诱导宫颈癌细胞凋亡与自噬及机制研究》文中提出目的:宫颈癌作为最常见的女性生殖系统肿瘤之一,肿瘤细胞对凋亡的耐受进而引起的多重耐药现象（MDR）是晚期宫颈癌治疗中的主要问题。因此,寻找诱导多重死亡方式的药物尤为重要。蟾蜍灵（bufalin）为中华大蟾蜍皮肤和耳后腺分泌物中所提取的重要活性单体成份药物,对包括乳腺癌、胃癌、肺癌和肠癌等多种肿瘤发挥良好抗肿瘤作用。但其对宫颈癌的作用研究较少。自噬（autophagy）是细胞在应激条件下发生的一种重要防御和保护机制,可将受损的细胞器或大分子蛋白进行包裹、降解,产生新的能量物质供细胞循环再利用,从而维持细胞内环境的稳态。在肿瘤的研究中,发现自噬是诱导肿瘤细胞死亡的一种重要方式。本研究拟探讨bufalin对宫颈癌细胞的作用,以及可能机制,为蟾蜍灵在宫颈癌临床治疗中的应用提供有力的理论基础。方法:1.CCK-8法检测bufalin对宫颈癌细胞C33A与HeLa的杀伤作用。2.流式细胞术检测bufalin诱导宫颈癌细胞系凋亡。3.泛caspase抑制剂z-VAD-fmk逆转bufalin对宫颈癌细胞杀伤作用。4.透射电镜观察bufalin作用宫颈癌细胞自噬体形成的影响。5.流式细胞术DCFH-DA探针染色法检测宫颈癌细胞ROS水平。6.Western blot法测定bufalin对LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白及JNK、p-JNK蛋白的表达影响。7.ROS抑制剂NAC及JNK的抑制剂SP600125对bufalin作用的宫颈癌细胞LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达影响。结果:1.Bufalin对宫颈癌细胞C33A与HeLa的杀伤作用呈剂量-时间依赖性。2.Bufalin诱导宫颈癌细胞系凋亡与自噬。3.Bufalin增加宫颈癌细胞系ROS的产生。4.Bufalin激活JNK信号通路。5.ROS抑制剂NAC与JNK抑制剂SP600125能够逆转bufalin引起的LC3-Ⅱ表达的增加。结论:Bufalin可诱导宫颈癌细胞C33A与HeLa发生凋亡与自噬,杀伤宫颈癌细胞系;Bufalin通过ROS/JNK信号通路调节宫颈癌细胞自噬。
卢涛[10]（2019）在《预知子种子提取物抑制肝癌细胞增殖和诱导其胞质空泡机制的研究》文中进行了进一步梳理目的:研究行气活血法代表中药预知子,研究其种子提取物抑制肝癌细胞增殖的机制,研究其与常用细胞毒药物、靶向药物和抗癌中药单体的联合用药并探索预知子种子提取物诱导胞质空泡现象的机制。方法:（1）通过查阅考证相关本草文献与相关临床及实验研究报道,分析中药预知子的相关知识。（2）采用MTT法、细胞形态学观察、流式细胞术、基因芯片、PCR等方法观察预知子种子提取物对SMMC7721肝癌细胞增殖、周期、凋亡、坏死和衰老的影响。（3）采用MTT法、细胞形态学观察评估预知子与常用化疗药物、靶向药物及抗癌中药单体联合用药的效果。（4）采用细胞形态学观察、PCR等方法评估预知子种子提取物诱导肝癌细胞胞质内空泡的现象及机制;检测内质网相关基因和副凋亡相关基因的表达,初步探索其机制。结果:（1）澄清了预知子临床应用的学术源流,梳理了其性味及功效主治的历史认识和现代认识。（2）预知子种子提取物干预72h后,7721肝癌细胞的增殖受到显着抑制,IC50为917.4μg/ml。用药预知子种子提取物375μg/ml、750μg/ml 72h后:G0/G1期细胞比例下降、S期细胞比例下降、G2/M期细胞比例上升;凋亡和坏死细胞比例略上升,从6.6%上升到12.6%;β-半乳糖苷酶染色变为阳性。（3）明确了预知子与表阿霉素、奥沙利铂、5-FU、长春新碱、去甲长春花碱、格列卫、丝裂霉素、紫杉醇、雷公藤红素、姜黄素、索拉菲尼联合用药效果。（4）预知子种子提取物诱导了典型的细胞内细胞质空泡化现象;在SMMC7721细胞中诱导空泡化的浓度远低于L02正常肝细胞,诱导的空泡现象在撤药后可自行恢复,但所需时间较长;诱导细胞质空泡化的现象和木通皂苷E的结构有关;空泡内非脂类且其内容物与细胞质不同。预知子提取物用药72h引起了GDF15、PPP1R15A、JUN、IGF1等基因表达的量效上调;引起了ATF6、HSP90B1,WARS、PPIA、PPIB、HSPA4、PDCD5、PDCD6IP、TP53、WNT1等基因的量效下调。结论:（1）1936年前古代文献中预知子兼非今《药典》中所录预知子,1936年后的近现代文献中,预知子多指代木通果实;其基源、性味、功效主治等详见正文。（2）预知子种子乙醇提取物能有效抑制SMMC7721细胞恶性增殖,其影响细胞周期,轻微促进凋亡和坏死,诱导肿瘤细胞出现衰老特征。（3）在体外细胞学实验观察中,预知子种子提取物与奥沙利铂、5-FU、长春新碱、去甲长春花碱、丝裂霉素联合用药是有害的;与索拉菲尼的联合用药是有益的;与表阿霉素、格列卫、紫杉醇、雷公藤红素和姜黄素联合用药有一定的前景。（4）预知子种子乙醇提取物诱导的细胞质空泡化可能与内质网应激相关的ATF6、GDF15、PPP1R15A和ATF4等基因和蛋白有关;可能与副凋亡相关的JUN、PDCD6IP、WNT1、PPIA、PPIB等基因和蛋白有关。
二、雷公藤红素升高细胞浆游离Ca~(2+)浓度与其诱导HMC-1细胞凋亡有关（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、雷公藤红素升高细胞浆游离Ca~(2+)浓度与其诱导HMC-1细胞凋亡有关（论文提纲范文）
（1）基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略语名词对照 |
| 文献综述 雷公藤红素对神经退行性疾病的神经保护作用及主要作用机制 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验一 celastrol发挥体外神经保护作用的靶点和通路 |
| 第一节 celastrol及cel-p的体外神经保护性初步探索 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 新生大鼠原代皮层神经元细胞提取 |
| 1.2.2 定期显微镜下观察神经元形态 |
| 1.2.3 IF鉴定大鼠原代皮层神经元特异性及纯度 |
| 1.2.4 神经元OGD模型条件摸索 |
| 1.2.5 CCK-8法确定celastrol及cel-p的IC_(50) |
| 1.2.6 celastrol及cel-p是否具有体外神经保护作用 |
| 1.2.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 cel-p具有较高的蛋白标记效率 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 cel-p蛋白标记效率探究 |
| 1.2.3 click chemistry reaction及SDS-PAGE凝胶分离 |
| 1.2.4 cel-p细胞成像实验 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三节 TMT标记结合LC-MS/MS确认celastrol的靶蛋白 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 pull-down, TMT标记及LC-MS/MS分析 |
| 1.2.3 cel-p的靶标识别及验证 |
| 1.2.4 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四节 HMGB1是celastrol的直接结合靶蛋白 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 pull-down及WB实验对HMGB1进行验证 |
| 1.2.3 celastrol对HMGB1蛋白热稳定性的影响 |
| 1.2.4 click chemistry reaction荧光实验 |
| 1.2.5 高浓度celastrol和cel-p作用5h对HMGB1蛋白的影响 |
| 1.2.6 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五节 celastrol发挥神经保护性作用的通路 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 celastrol对正常神经元细胞HMGB1蛋白表达的影响 |
| 1.2.3 celastrol对OGD模型后HMGB1蛋白表达的影响 |
| 1.2.4 celastrol对神经元OGD模型HMGB1/HSP70/NF-κB p65的影响 |
| 1.2.5 IF实验观察celastrol对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响 |
| 1.2.6 celastrol是否影响上清中HMGB1蛋白表达 |
| 1.2.7 celastrol是否影响HMGB1蛋白的氧化还原性 |
| 1.2.8 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第六节 celastrol直接结合HMGB1和B box使其失活 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 重组人A box及B box蛋白纯化及表达 |
| 1.2.3 重组人HMGB1蛋白与celastrol及cel-p反应 |
| 1.2.4 HMGB1抑制剂与cel-p的竞争性结合 |
| 1.2.5 重组人A box及B box蛋白与celastrol及cel-p反应 |
| 1.2.6 RAW 264.7细胞复苏、培养、传代、冻存 |
| 1.2.7 celastrol对HMGB1、B box引起的TNF-α分泌升高的影响 |
| 1.2.8 celastrol对B box与受体结合的影响 |
| 1.2.9 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 celastrol对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 |
| 第一节 celastrol的体内药效初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验动物MCAO模型制备 |
| 1.2.2 实验动物分组及给药 |
| 1.2.3 Zea-Longa法评估动物的神经行为缺损 |
| 1.2.4 TTC染色观察大鼠的脑梗死情况 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 celastrol通过HMGB1,HSP70,NF-κB p65发挥体内神经保护性 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验动物MCAO模型制备 |
| 1.2.2 实验动物分组及给药 |
| 1.2.3 大鼠灌流,取脑及脱水 |
| 1.2.4 尼氏染色观察celastrol对尼氏小体的影响 |
| 1.2.5 IF实验观察celastrol对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响 |
| 1.2.6 WB检测大鼠中皮层HMGB1、HSP70、NF-κB p65表达 |
| 1.2.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的成果 |
| 致谢 |
| 中医药科技查新报告书 |
（2）雷公藤红素抑制慢性肾脏病大鼠血管钙化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.主要试剂、耗材、仪器和动物 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要耗材 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 实验动物 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 动脉血管环钙化模型 |
| 2.3 构建大鼠CKD血管钙化模型 |
| 2.4 茜素红染色 |
| 2.5 Micro-CT检测大鼠主动脉钙化 |
| 2.6 大鼠血管平滑肌细胞活力检测 |
| 2.7 钙定量检测 |
| 2.8 小分子干扰RNA实验 |
| 2.9 平滑肌细胞ROS水平的检测 |
| 2.10 实时荧光定量PCR(Real-time qPCR) |
| 2.11 蛋白质免疫印迹(Western blot) |
| 2.12 统计方法 |
| 实验结果 |
| 1.1 雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞活力的影响 |
| 1.2 雷公藤红素剂量依赖性抑制大鼠血管平滑肌细胞钙化 |
| 1.3 雷公藤红素抑制大鼠血管平滑肌细胞成骨样分化 |
| 1.4 雷公藤红素抑制血管平滑肌细胞钙化的时效性 |
| 1.5 雷公藤红素抑制大鼠动脉环钙化 |
| 1.6 雷公藤红素抑制人动脉环钙化 |
| 1.7 雷公藤红素抑制慢性肾脏病大鼠主动脉钙化 |
| 1.8 雷公藤红素抑制慢性肾脏病大鼠主动脉骨相关蛋白的表达 |
| 1.9 雷公藤红素抑制细胞氧化应激和上调HMOX-1的表达 |
| 1.10 抑制HMOX-1可促进大鼠血管平滑肌细胞钙化和氧化应激 |
| 1.11 抑制HMOX-1抵消雷公藤红素对血管平滑肌细胞钙化的抑制 |
| 1.12 敲减HMOX-1促进血管平滑肌细胞钙化 |
| 1.13 敲减HMOX-1消除雷公藤红素抑制血管平滑肌细胞氧化应激 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（3）α7nAChR激动剂PHA568487对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 本文创新和主要贡献 |
| 中英文对照 |
| 前言 |
| 第一部分 α7nAChR激动剂PHA568487对大鼠肾缺血-再灌注损伤的影响 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验试剂及厂家 |
| 1.1.2 器材及厂家 |
| 1.1.3 动物实验分组及大鼠I/R模型的建立 |
| 1.1.4 分离和收集血液样本 |
| 1.1.5 大鼠一般状态观察、肾功能分析和肾组织结构形态学变化观察 |
| 1.1.6 检测血清中C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)及肿瘤坏死因子-α( tumor necrosis factor α,TNF-α)的水平 |
| 1.1.7 检测血清中IL-1β、IL-6水平 |
| 1.1.8 大鼠肾组织标本的制备 |
| 1.1.9 高碘酸-雪夫氏染色(Periodic Acid-Schiff stain,PAS) |
| 1.1.10 TUNEL检测 |
| 1.1.11 检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达情况 |
| 1.1.12 检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况 |
| 1.1.13 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 大鼠一般情况观察 |
| 1.2.2 大鼠肾功能检测 |
| 1.2.3 大鼠肾组织结构形态学变化 |
| 1.2.4 检测大鼠血清CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6水平 |
| 1.2.5 各组大鼠肾组织细胞凋亡检测 |
| 1.2.6 各组大鼠肾组织中Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达情况 |
| 1.2.7 各组大鼠肾组织中Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况 |
| 1.3 讨论 |
| 第二部分 α7nAChR激动剂PHA568487激活Nrf2/HO-1信号通路抑制缺血再灌注HK-2细胞模型凋亡的机制研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验试剂及厂家 |
| 2.1.2 器材及厂家 |
| 2.1.3 细胞培养 |
| 2.1.4 缺氧/复氧细胞模型的建立 |
| 2.1.5 检测mRNA和蛋白表达情况 |
| 2.1.6 细胞增殖活性检测 |
| 2.1.7 细胞凋亡检测 |
| 2.1.8 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 检测细胞增殖活性 |
| 2.2.2 检测细胞凋亡 |
| 2.2.3 检测Nrf2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达情况 |
| 2.2.4 检测Nrf2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达情况 |
| 2.3 讨论 |
| 第三部分 PHA568487调节Circular RNAYAP1对肾缺血-再灌注损伤细胞的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验试剂及厂家 |
| 3.1.2 器材及厂家 |
| 3.1.3 细胞培养及I/R模型的建立 |
| 3.1.4 细胞转染 |
| 3.1.5 检测细胞活力 |
| 3.1.6 检测细胞凋亡 |
| 3.1.7 检测细胞分析的IL-1 β、IL-6浓度 |
| 3.1.8 检测活性氧(ROS)水平 |
| 3.1.9 荧光素酶报告基因实验 |
| 3.1.10 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 在I/R处理HK-2细胞模型中,PHA568487促进circYAP1表达 |
| 3.2.2 过表达circYAP1减轻HK-2细胞的炎症损伤 |
| 3.2.3 CircYAP1靶向调节miR-21 -5p |
| 3.2.4 CircYAP1通过吸附miR-21-5p参与HK-2细胞的炎症损伤 |
| 3.2.5 在炎症损伤的HK-2细胞中,circYAP1通过吸附miR-21-5p激活PI3K/AKT/mTOR信号通路 |
| 3.3 讨论 |
| 结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 综述 肾缺血再灌注损伤发生机制及其研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及专利 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 附件 |
（4）山莴苣素对脂肪细胞脂质沉积的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 动物脂质沉积研究概况 |
| 1.2 天然产物在动物脂质沉积中的作用 |
| 1.3 倍半萜类化合物的研究现状 |
| 1.4 山莴苣素的来源及生物活性 |
| 1.5 JAK2/STAT3信号通路研究概况 |
| 1.6 GP130在脂质代谢中的研究概况 |
| 1.7 研究的目的与意义 |
| 第二章 山莴苣素对小鼠脂质沉积的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验分组及给药 |
| 2.2.3 小鼠处死及采样 |
| 2.2.4 TG和LDL测定 |
| 2.2.5 脂肪组织切片HE染色 |
| 2.2.6 胰岛素敏感性(ITT)和葡萄糖耐受性(GTT)检测 |
| 2.2.7 组织总RNA的提取及实时定量PCR(RT-qPCR) |
| 2.2.8 组织总蛋白的提取与蛋白免疫印迹 |
| 2.2.9 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 山莴苣素处理对小鼠体重和采食量的影响 |
| 2.3.2 山莴苣素处理对小鼠血液及粪便中TG含量的影响 |
| 2.3.3 山莴苣素处理对小鼠脂肪组织成脂基因表达的影响 |
| 2.3.4 山莴苣素处理对小鼠脂肪组织JAK2/STAT3信号通路的影响 |
| 2.3.5 山莴苣素处理对小鼠胰岛素敏感性及葡萄糖耐受性的影响 |
| 2.3.6 山莴苣素对肝脏脂肪生成的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 山莴苣素通过下调JAK2/STAT3信号通路介导的细胞有丝分裂克隆扩增进而抑制3T3-L1细胞的成脂 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 细胞毒性检测 |
| 3.2.3 细胞培养及形态学观察 |
| 3.2.4 油红O染色 |
| 3.2.5 细胞总RNA的提取与RT-q PCR |
| 3.2.6 细胞总蛋白的提取与蛋白免疫印迹 |
| 3.2.7 2-NBDG检测葡萄糖摄取 |
| 3.2.8 细胞周期检测 |
| 3.2.9 数据分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 山莴苣素对3T3-L1细胞活力的影响 |
| 3.3.2 山莴苣素处理显着抑制3T3-L1细胞的成脂分化 |
| 3.3.3 山莴苣素处理抑制脂肪细胞中TG的合成 |
| 3.3.4 山莴苣素处理抑制JAK2/ST3T3信号通路的表达 |
| 3.3.5 山莴苣素处理抑制3T3-L1细胞有丝分裂克隆扩增 |
| 3.3.6 山莴苣素通过下调JAK2/STAT3介导的有丝分裂克隆扩增来抑制3T3-L1细胞的分化 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 山莴苣素脂肪细胞脂解的影响 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 细胞培养及形态学观察 |
| 4.2.3 油红O染色 |
| 4.2.4 培养基中游离脂肪酸检测 |
| 4.2.5 细胞总RNA的提取与RT-q PCR |
| 4.2.6 细胞总蛋白的提取与蛋白免疫印迹 |
| 4.2.7 数据分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 山莴苣素处理可显着促进3T3-L1细胞分化末期的脂质分解 |
| 4.3.2 山莴苣素处理上调脂肪细胞中IL-6和GP130的表达 |
| 4.3.3 山莴苣素对脂质分解的作用可能与IL-6的表达上升有关 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 综合讨论与结论 |
| 综合讨论 |
| 主要结论 |
| 创新点 |
| 下一步研究计划 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）茵杞调脂饮调控LXRα通路改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.非酒精性脂肪性肝病的研究进展 |
| 1.1 非酒精性脂肪性肝病的流行病学和危险因素 |
| 1.2 LXRα通路与非酒精性脂肪性肝病 |
| 1.3 非酒精性脂肪性肝病的治疗现状 |
| 2.肝郁生浊与非酒精性脂肪性肝病 |
| 2.1 历史渊源 |
| 2.2 肝郁生浊概论 |
| 2.3 从肝郁生浊理论探讨非酒精性脂肪性肝病 |
| 2.4 治疗方法及遣方用药 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 终止标准 |
| 1.6 剔除标准 |
| 1.7 脱落标准 |
| 1.8 不良事件 |
| 1.9 质量控制 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 治疗方案 |
| 2.2 观察指标 |
| 2.3 疗效评定 |
| 2.4 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 基线资料比较 |
| 3.2 疗效比较 |
| 3.3 不良反应发生率比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 清肝化浊法论治NAFLD的理论基础 |
| 4.2 茵杞调脂饮的用药特色 |
| 4.3 试验指标的选择 |
| 4.4 茵杞调脂饮治疗NAFLD的疗效评价 |
| 5 结论 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 茵杞调脂饮对非酒精性脂肪性肝病大鼠生化指标及肝脏病理学的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 动物与饲料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验药物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模及分组 |
| 2.2 给药方法 |
| 2.3 标本采集 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 一般情况观察 |
| 3.2 大鼠体重、肝指数、Lee’s指数的变化 |
| 3.3 大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平的变化 |
| 3.4 肝组织形态学观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 造模方法的选择及探讨 |
| 4.2 水飞蓟宾作为阳性对照药物的选择 |
| 4.3 疗效探讨 |
| 5 结论 |
| 实验二 茵杞调脂饮对非酒精性脂肪性肝病大鼠脂质代谢、氧化应激及炎性因子的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 动物与饲料 |
| 1.2 仪器与设备 |
| 1.3 药物与试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模及分组 |
| 2.2 标本采集 |
| 2.3 指标检测 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 茵杞调脂饮对肝组织TC、TG、FFA水平的影响 |
| 3.2 茵杞调脂饮对肝组织MDA、SOD、GSH水平的影响 |
| 3.3 茵杞调脂饮对大鼠肝组织TNFα、IL-6 水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 肝脂代谢与非酒精性脂肪性肝病 |
| 4.2 氧化应激与非酒精性脂肪性肝病 |
| 4.3 炎性因子与非酒精性脂肪肝 |
| 5 结论 |
| 实验三 茵杞调脂饮对非酒精性脂肪性肝病大鼠LXRα通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 动物与饲料 |
| 1.2 仪器与设备 |
| 1.3 药物与试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模及分组 |
| 2.2 标本采集 |
| 2.3 指标检测 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 茵杞调脂饮对大鼠肝组织LXRα、SREBP-1c基因表达的影响 |
| 3.2 茵杞调脂饮对大鼠肝组织FAS、DGAT2 基因表达的影响 |
| 3.3 茵杞调脂饮对大鼠肝组织LXRα、SREBP-1c、FAS蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 LXRα通路与肝脂代谢 |
| 4.2 LXRα通路与氧化应激 |
| 4.3 LXRα通路与炎性因子 |
| 4.4 茵杞调脂饮对LXRα通路的作用 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 非酒精性脂肪性肝病的中医治疗进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 中英文缩略词表 |
| 附录二 非酒精性脂肪性肝病患者临床登记表 |
| 附录三 扩增曲线和溶解曲线 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 发表论文 |
（6）SAA通过TLR2信号通路促进类风湿关节炎NETs形成的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、SAA 通过TLR2诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 试剂与仪器 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.1.4 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 中性粒细胞的分离鉴定符合实验要求 |
| 1.2.2 RA患者中 SAA作为刺激剂可诱导 NETs 的形成 |
| 1.2.3 SAA诱导NETs形成中产生ROS且依赖于Nox经典途径 |
| 1.2.4 SAA促进中性粒细胞TLR2 受体的表达 |
| 1.2.5 SAA通过TLR2诱导NETs的形成 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、SAA-TLR2 通过PI3K/Akt信号途径诱导NETs形成研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 试剂与仪器 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.1.4 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 经 SAA 刺激的中性粒细胞可通过与 TLR2 受体相互作用激活 PI3K/Akt 信号途径。 |
| 2.2.2 SAA通过TLR2-PI3K/Akt途径促进NETs形成百分比增加 |
| 2.2.3 SAA 通过 TLR2-PI3K/Akt 途径促细胞培养上清 H3 蛋白含量增加 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 中性粒细胞胞外诱捕网和类风湿关节炎 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）鞘蕊苏抗肿瘤活性成分的药效作用与化学合成研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 鞘蕊苏抗肿瘤活性成分的分离与筛选 |
| 1.鞘蕊苏的物质部位和组分的提取分离及活性筛选 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.1.1 细胞 |
| 1.1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 鞘蕊苏部位和有效组分的制备 |
| 1.2.2 MTT检测鞘蕊苏不同部位对A549 细胞增殖的影响 |
| 1.2.3 MTT检测鞘蕊苏Q3 部位不同流份段对A549 细胞增殖的影响 |
| 1.2.4 统计学方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 Q1-Q9 各部位对A549 细胞增殖的影响 |
| 1.3.2 鞘蕊苏抗肿瘤活性部位Q3 的不同流份段对A549 细胞增殖的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 2.鞘蕊苏抗肿瘤活性组分化学成分的分离鉴定及活性筛选 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 细胞 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 活性流份段G、H、J的分离与纯化 |
| 2.2.2 MTT检测鞘蕊苏活性部位各化学成分抗肿瘤活性 |
| 2.2.3 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 各化学成分对HeLa、A375、HCT-8和LS174-T细胞的增殖抑制作用 |
| 2.4 讨论 |
| 第二章 鞘蕊苏有效成分(14-去氧鞘蕊酮U)抗肿瘤作用的药效学研究 |
| 1.14-去氧鞘蕊酮U体外抑制肿瘤细胞增殖研究 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.1.1 细胞 |
| 1.1.2 主要试剂及仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 药物母液的配制 |
| 1.2.2 MTT法检测不同浓度14-去氧鞘蕊酮U对多种肿瘤细胞增殖的影响 |
| 1.2.3 14-去氧鞘蕊酮U抑制A549和LLC细胞增殖的时间效应变化 |
| 1.2.4 统计学方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 14-去氧鞘蕊酮U对不同肿瘤细胞增殖的影响 |
| 1.3.2 14-去氧鞘蕊酮U抑制A549和LLC增殖的时间效应变化 |
| 1.4 讨论 |
| 2.14-去氧鞘蕊酮U对荷瘤小鼠体内抗肿瘤作用研究 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 模型的建立、分组及给药 |
| 2.2.2 移植瘤平均体积、重量、脏器系数及肿瘤抑制率检测 |
| 2.2.3 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 14-去氧鞘蕊酮U对 LLC荷瘤小鼠体重和抑瘤率的影响 |
| 2.3.2 14-去氧鞘蕊酮U对 LLC荷瘤小鼠瘤体积和脏器系数的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 鞘蕊苏有效成分(14-去氧鞘蕊酮U)抗肿瘤作用机制研究 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.1.1 细胞株 |
| 1.1.2 主要试剂及仪器 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 Hoechst33258 染色检测不同浓度14-去氧鞘蕊酮U对 A549 细胞凋亡形态的影响 |
| 1.2.2 蛋白免疫印迹法(WB)检测A549和LLC细胞中PARP、caspase-3和Cleaved-PARP、Cleaved-caspase-3 蛋白的表达 |
| 1.2.3 蛋白免疫印迹法检测A549和LLC细胞中Bax和Bcl-2 的表达 |
| 1.2.4 蛋白免疫印迹法检测A549和LLC细胞中caspase-4、caspase-12、CHOP、Bip和 IRE1-α的表达 |
| 1.2.5 激光共聚焦扫描显微镜观察14-去氧鞘蕊酮U对 A549 细胞自噬相关蛋白表达的影响 |
| 1.2.6 蛋白免疫印迹法检测A549和LLC细胞中Atg5、beclin-1 和LC3Ⅱ/Ⅰ的表达 |
| 1.2.7 蛋白免疫印迹法检测A549和LLC细胞中CDC2、CDK2、CDK6、CyclinB1、CyclinD3和p21 的表达 |
| 1.2.8 统计学分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 Hoechst33258 染色检测不同浓度14-去氧鞘蕊酮U对 A549 细胞凋亡形态的影响 |
| 1.3.2 14-去氧鞘蕊酮U对 A549和LLC细胞中PARP、caspase-3 和Cleaved-PARP、Cleaved-caspase-3、Bax和Bcl-2 蛋白表达的影响 |
| 1.3.3 14-去氧鞘蕊酮U对 A549和LLC细胞中Bip,IRE1-α,XBP1s、CHOP、caspase-4和Cleaved-caspase-12 蛋白表达的影响 |
| 1.3.4 激光共聚焦扫描显微镜观察14-去氧鞘蕊酮U对 A549 细胞自噬相关蛋白表达的影响 |
| 1.3.5 14-去氧鞘蕊酮U对 A549和LLC细胞中Atg5、beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达的影响 |
| 1.3.6 14-去氧鞘蕊酮U对 A549和LLC细胞中CDC2、CDK2、CDK6、CyclinB1、CyclinD3、p21 蛋白表达的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 第四章 鞘蕊苏抗肿瘤活性成分类似物的化学合成及活性筛选 |
| 1.C-11位不同侧链的Coleolic acid类似物的合成及活性筛选 |
| 1.1 目标化合物的设计 |
| 1.2 目标化合物的合成路线 |
| 1.3 合成实验部分 |
| 1.3.1 主要试剂及仪器 |
| 1.3.2 目标化合物PX1-PX6 的合成 |
| 1.4 C-11 位不同侧链的Coleolic acid类似物的抗肿瘤活性评价 |
| 1.4.1 实验材料与仪器 |
| 1.4.2 实验方法 |
| 1.4.3 实验结果 |
| 1.5 讨论 |
| 2.N-取代氨基二硫代甲酸酯系列衍生物的合成及活性筛选 |
| 2.1 目标化合物的设计 |
| 2.2 目标化合物的合成路线 |
| 2.3 合成实验部分 |
| 2.3.1 主要试剂与仪器 |
| 2.3.2 目标化合物PX7-PX18 的合成 |
| 2.4 N-取代氨基二硫代甲酸酯系列衍生物的抗肿瘤活性评价 |
| 2.4.1 实验材料与仪器 |
| 2.4.2 实验方法 |
| 2.4.3 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 发表论文情况 |
| 致谢 |
（8）滑膜巨噬细胞焦亡激活膝骨关节炎痛敏及“易层”贴敷的干预机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 现代医学对KOA的认识 |
| 1.1 KOA的流行病学和危险因素 |
| 1.2 KOA发病机制的研究进展 |
| 1.3 KOA治疗的研究进展 |
| 1.4 OA疼痛相关危险因素研究进展 |
| 2 中医学对KOA的认识 |
| 2.1 KOA的病因病机 |
| 2.2 KOA的辨证论治 |
| 3 Transient Potential Receptors(TRPs)通道介导KOA痛敏状态 |
| 3.1 TRPs通道简述 |
| 3.2 KOA存在痛敏状态 |
| 3.3 TRPs通道作为KOA镇痛治疗靶点的研究现状 |
| 3.4 炎性微环境是TRPs通道激活的重要条件之一 |
| 3.5 中药对TRPs通道的干预作用 |
| 4 细胞焦亡是形成炎性微环境的重要原因之一 |
| 4.1 细胞焦亡简述 |
| 4.2 细胞焦亡推动多种炎症性疾病的发展 |
| 4.3 中药对细胞焦亡的干预作用 |
| 5 “易层”贴敷对KOA疼痛的干预效应 |
| 5.1 中医贴敷疗法治疗KOA的研究进展 |
| 5.2 “易层”贴敷控制KOA疼痛的良好效应 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1. KOA滑膜组织中是否存在巨噬细胞焦亡 |
| 1.1 目的 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 2. 滑膜巨噬细胞焦亡对背根神经节TRPs蛋白表达及痛敏的干预作用 |
| 2.1 目的 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3. LPS/ATP诱导的巨噬细胞焦亡对神经元细胞TRPs通道蛋白表达和功能的影响 |
| 3.1 目的 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4. “易层”贴敷对TRPs通道介导痛敏的干预效应 |
| 4.1 目的 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5. “易层”贴敷对KOA滑膜巨噬细胞焦亡的干预效应 |
| 5.1 目的 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 本研究的不足与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）蟾蜍灵诱导宫颈癌细胞凋亡与自噬及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 细胞株 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 CCK-8法检测宫颈癌细胞活性 |
| 2.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 2.2.4 透射电镜细胞超微结构检测 |
| 2.2.5 ROS检测 |
| 2.2.6 Western blot法检测蛋白表达 |
| 2.2.7 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Bufalin杀伤宫颈癌细胞 |
| 3.2 Bufalin诱导宫颈癌细胞凋亡 |
| 3.3 Z-VAD-fmk部分逆转bufalin诱导的宫颈癌细胞死亡 |
| 3.4 Bufalin诱导宫颈癌细胞自噬 |
| 3.5 Bufalin增加宫颈癌细胞ROS水平 |
| 3.6 Bufalin增加宫颈癌细胞JNK与p-JNK蛋白表达 |
| 3.7 ROS与JNK信号通路调节bufalin诱导宫颈癌细胞自噬 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（10）预知子种子提取物抑制肝癌细胞增殖和诱导其胞质空泡机制的研究（论文提纲范文）
| 专有名词英文缩写中英对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| (1)肝癌仍缺乏有效的治疗 |
| (2)中药预知子具有抗肿瘤的作用 |
| (3)内质网应激 |
| (4)副凋亡 |
| (5)问题和假说 |
| 第一部分 中药预知子相关本草文献与近现代临床应用及实验研究 |
| 1.1 古本草文献中木通及木通果实的记载收录情况 |
| 1.1.1 汉、晋、南北朝本草文献 |
| 1.1.2 隋、唐、五代本草文献 |
| 1.1.3 宋、金、元本草文献 |
| 1.1.4 明、清本草文献 |
| 1.2 古本草文献中预知子的记载收录情况 |
| 1.2.1 五代、宋、金、元本草文献 |
| 1.2.2 明、清本草文献 |
| 1.3 近代本草文献中木通、木通果实及预知子的相关记载 |
| 1.3.1 近代本草文献中木通、木通果实及预知子的记载收录情况 |
| 1.3.2 《中国药典》中木通、木通果实及预知子的记载收录情况 |
| 1.3.3 近现代木通果实与预知子的混淆 |
| 1.4 释名 |
| 1.5 图考 |
| 1.5.1 历代本草文献中木通、木通果实图考 |
| 1.5.2 历代本草文献中预知子图考 |
| 1.6 基原 |
| 1.7 成分 |
| 1.8 性味、功效主治及用法 |
| 1.9 预知子(木通果实)现代临床应用及实验研究 |
| 1.9.1 抗肿瘤作用 |
| 1.9.2 抗菌作用 |
| 1.9.3 利尿作用 |
| 1.9.4 抗炎作用 |
| 1.9.5 抗抑郁作用 |
| 1.9.6 护肝作用 |
| 第二部分 中药预知子种子提取物对SMMC7721肝癌细胞增殖、周期、凋亡和衰老的影响 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验药品和试剂 |
| 2.1.3 实验耗材 |
| 2.1.4 细胞株 |
| 2.1.5 中药原材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 预知子种子乙醇提取物的制备 |
| 2.2.2 预知子种子乙醇提取物细胞用药制备 |
| 2.2.3 试剂配制 |
| 2.2.4 细胞的复苏 |
| 2.2.5 细胞的传代 |
| 2.2.6 细胞铺板 |
| 2.2.7 细胞用药 |
| 2.2.8 细胞拍照 |
| 2.2.9 MTT检测 |
| 2.2.10 PI染色法检测细胞周期 |
| 2.2.11 细胞凋亡检测 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR检测基因表达 |
| 2.2.13 细胞衰老检测 |
| 2.2.14 统计方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 预知子种子乙醇提取物(Akebiaefructusseedsethanolextract,AFSEE)的制备结果 |
| 2.3.2 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞增殖的影响 |
| 2.3.3 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞用药72h的半数抑制率浓度(50%inhibition rate concentration,IC50) |
| 2.3.4 预知子种子乙醇提取物长时用药SMMC7721细胞观察 |
| 2.3.5 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞细胞周期的影响 |
| 2.3.6 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞细胞周期相关基因表达的影响 |
| 2.3.7 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞细胞增殖相关基因表达的影响 |
| 2.3.8 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞细胞凋亡的影响 |
| 2.3.9 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞细胞凋亡相关基因表达的影响 |
| 2.3.10 中药预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞衰老的影响 |
| 2.3.11 木通皂苷D(Akebia saponin D,ASD)与木通皂苷E(Akebia saponin E,ASE)用药72h对 SMMC7721 肝癌细胞细胞增殖的影响 |
| 2.3.12 木通皂苷E长时间用药观察 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 中药预知子 |
| 2.4.2 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞增殖的抑制作用 |
| 2.4.3 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞细胞周期的影响 |
| 2.4.4 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞细胞凋亡的影响 |
| 2.4.5 预知子种子乙醇提取物对SMMC7721肝癌细胞衰老的影响 |
| 2.4.6 木通皂苷D与木通皂苷E |
| 第三部分 预知子种子乙醇提取物与常用细胞毒药物、靶向药物、中药有效组分配伍 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验仪器 |
| 3.1.2 实验药品和试剂 |
| 3.1.3 实验耗材 |
| 3.1.4 细胞株 |
| 3.1.5 中药原材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 细胞复苏、传代、铺板、用药 |
| 3.2.2 MTT检测用药后细胞增殖情况 |
| 3.2.3 联合用药评价 |
| 3.2.4 统计方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 预知子种子乙醇提取物与表阿霉素联合用药 |
| 3.3.2 预知子种子乙醇提取物与奥沙利铂联合用药 |
| 3.3.3 预知子种子乙醇提取物与5-FU联合用药 |
| 3.3.4 预知子种子乙醇提取物与长春新碱联合用药 |
| 3.3.5 预知子种子乙醇提取物与去甲长春花碱联合用药 |
| 3.3.6 预知子种子乙醇提取物与格列卫联合用药 |
| 3.3.7 预知子种子乙醇提取物与丝裂霉素联合用药 |
| 3.3.8 预知子种子乙醇提取物与紫杉醇联合用药 |
| 3.3.9 预知子种子乙醇提取物与雷公藤红素联合用药 |
| 3.3.10 预知子种子乙醇提取物与姜黄素联合用药 |
| 3.3.11 预知子种子乙醇提取物与索拉菲尼联合用药 |
| 3.4 讨论 |
| 第四部分 中药预知子种子提取物诱导胞质内空泡的观察 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验仪器 |
| 4.1.2 实验药品和试剂 |
| 4.1.3 实验耗材 |
| 4.1.4 细胞株 |
| 4.1.5 中药原材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 细胞复苏、传代、铺板、用药 |
| 4.2.2 细胞形态学观察 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR检测基因表达 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 预知子种子乙醇提取物用药后肝癌SMMC7721细胞的形态学改变 |
| 4.3.3 预知子种子乙醇提取物长时用药后,细胞形态学改变 |
| 4.3.4 不同浓度预知子种子乙醇提取物用药72H后细胞形态学改变SMMC7721对比L02 |
| 4.3.5 预知子种子乙醇提取物用药24H后撤药细胞形态学改变 |
| 4.3.6 木通皂苷E与木通皂苷D |
| 4.3.7 肝癌SMMC7721细胞用药预知子种子乙醇提取物、木通皂苷E油红染色观察 |
| 4.3.8 预知子种子乙醇提取物诱导细胞质空泡和内质网线粒体的定位观察 |
| 4.3.9 预知子种子乙醇提取物对肝癌SMMC7721细胞内质网应激相关基因的影响 |
| 4.3.10 预知子种子乙醇提取物对肝癌SMMC7721细胞副凋亡相关基因的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 预知子种子乙醇提取物用药后肝癌SMMC7721细胞的形态学改变 |
| 4.4.2 预知子种子乙醇提取物对肝癌SMMC7721细胞内质网应激相关基因的影响 |
| 4.4.3 副凋亡的概念及其特征 |
| 4.4.4 诱导副凋亡或细胞质空泡化发生的试剂或药物 |
| 4.4.5 抑制副凋亡或细胞质空泡化发生的试剂或药物 |
| 4.4.6 副凋亡涉及的关键的基因和蛋白 |
| 结论 |
| (1)中药预知子相关本草文献与近现代临床应用及实验研究 |
| (2)预知子对肝癌细胞增殖、周期、凋亡、坏死和衰老的影响 |
| (3)联合用药 |
| (4)预知子诱导细胞空泡化与内质网应激和副凋亡 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录一 文献综述 细胞副凋亡的发生及调控机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 在学期间已公开发表的论文(全文) |
四、雷公藤红素升高细胞浆游离Ca~(2+)浓度与其诱导HMC-1细胞凋亡有关（论文参考文献）
- [1]基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点[D]. 刘丹丹. 中国中医科学院, 2021
- [2]雷公藤红素抑制慢性肾脏病大鼠血管钙化的机制研究[D]. 阳秀林. 南方医科大学, 2021
- [3]α7nAChR激动剂PHA568487对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[D]. 黄涛. 山东大学, 2020(04)
- [4]山莴苣素对脂肪细胞脂质沉积的作用及机制研究[D]. 王鑫. 西北农林科技大学, 2020(03)
- [5]茵杞调脂饮调控LXRα通路改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究[D]. 王俐钧. 山东中医药大学, 2020(01)
- [6]SAA通过TLR2信号通路促进类风湿关节炎NETs形成的研究[D]. 张晓莉. 天津医科大学, 2020(06)
- [7]鞘蕊苏抗肿瘤活性成分的药效作用与化学合成研究[D]. 彭小芝. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [8]滑膜巨噬细胞焦亡激活膝骨关节炎痛敏及“易层”贴敷的干预机制[D]. 徐波. 南京中医药大学, 2020(08)
- [9]蟾蜍灵诱导宫颈癌细胞凋亡与自噬及机制研究[D]. 孔翠翠. 中国医科大学, 2020(01)
- [10]预知子种子提取物抑制肝癌细胞增殖和诱导其胞质空泡机制的研究[D]. 卢涛. 上海中医药大学, 2019(03)