一、Hyperplasia of pulmonary artery smooth muscle in primary and secondary pulmonary hypertension is causally related to serotonin transporter overexpression（论文文献综述）
王羽[1]（2021）在《SOX6在低氧诱导的人肺动脉平滑肌增殖中的作用及机制的初步研究》文中进行了进一步梳理低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）是特发于低氧条件下的疾病,其病理变化主要集中在肺血管上,表现为长期的收缩及显着的结构改变,其肺动脉压力持续保持在较高的水平和右心室的渐进性肥大是其主要临床特征,在平原地区常继发于肺部疾病导致的低氧状态,如慢性阻塞性肺疾病等。HPH同时也是很多高原特发疾病的中心环节,HPH会加重心脏负荷,进一步影响心功能,严重影响高原居民生活质量、生命健康。因此阐明HPH的发生发展进程,有助于我们掌握其发病基础,为制定确实有效的防治手段提供重要的理论支撑。低氧引起的肺组织中血管结构的明显改变是HPH主要的病理特征,也是维持肺动脉压力在较高水平的病理基础,而低氧引发的肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）显着增殖是导致肺组织中血管结构发生改变的主要原因。低氧诱导的PASMCs增殖一直是HPH发病机制的研究热点,但因其是一个受多种因素交互影响的复杂过程,目前仍未阐明其发生机制。低氧时,PASMCs内离子通道的改变、氧化应激损伤、mi RNA谱和酸碱平衡的改变以及ROCK和HIF等信号通路的激活都会促进其增殖。且越来越多的证据表明,肿瘤和低氧引起的PASMCs增殖在发生机制方面有很多共通之处,多种在肿瘤细胞增殖中有着关键作用的分子机制,也被证实在低氧引发的PASMCs增殖中发挥着重要的调控作用。研究发现,低氧可使大鼠肺组织中的细胞因子信号转导抑制因子3（suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3）的表达发生变化,而增加其表达可显着缓解低氧引起的大鼠肺血管结构重构。且SOCS3对由炎症因子、低氧引起的血管平滑肌增殖反应有显着的抑制作用,而这种作用与STAT3信号通路有着密不可分的关系,同时在SOCS3的启动子区域有识别SOX6的特征序列,SOCS3的转录表达直接受SOX6调控。SOX6（sex determining region Y-box 6）是Y染色体性别决定区基因家族中的成员,调控胚胎发育、软骨形成等重要的发育进程。最近的研究发现,SOX6可以作为一种抑癌分子来发挥作用,使肿瘤细胞处于G0/G1期的比例增多,进而阻碍其增殖。但有关SOX6在正常细胞增殖和低氧诱导的PASMCs增殖中的作用均未见报道。鉴于低氧对SOCS3表达的影响,及其在血管平滑肌细胞增殖中的作用和相关机制,结合其上游调控分子SOX6在调控肿瘤细胞增殖中的功能,因此推测SOX6可能在低氧引起的PASMCs增殖中有着重要的作用,其机制与SOCS3和STAT3信号通路有着密切的关系。因此,本课题拟通过si RNA、慢病毒转染等技术研究SOX6在低氧引起的HPASMCs增殖中的作用及机制,找到调控低氧诱导HPASMCs增殖的新靶点,充实HPH的发病机制研究,同时也为制定HPH防治措施找到新的方向。方法1.以人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary artery smooth muscule cells,HPASMCs）作为细胞模型,基于处理模式不同将全部细胞划分为3组:常氧组（21%O2）、低氧24 h组（4%O2）、低氧48 h组（4%O2）。2.通过si RNA下调HPASMCs中的SOX6和SOCS3的表达。用慢病毒转染上调细胞中SOX6的表达,然后用4%O2处理48h诱导其增殖。3.q RT-q PCR和Western blot检测各组细胞中SOX6、SOCS3、PCNA、磷酸化信号转导与转录激活因子3（phosphorylated-signal transduction and activators of transcription 3,p-STAT3）的表达变化。其中PCNA的蛋白表达水平与CCK-8检测结果一起用来判断细胞增殖情况。结果1.低氧对SOX6表达和HPASMCs增殖的影响:低氧可使HPASMCs的CCK-8相对水平和PCNA蛋白表达都显着升高（P<0.05）,而SOX6蛋白则显着下调（P<0.01）。2.SOX6在低氧诱导的HPASMCs增殖中的作用:用si RNA干扰SOX6表达,可使HPASMCs中SOX6的m RNA和蛋白都显着下调（P<0.001）,而细胞的CCK-8相对水平和PCNA蛋白水平都显着升高（P<0.05）。慢病毒转染使细胞中的SOX6蛋白显着上调（P<0.05）,后将其放在4%O2条件下处理48h,细胞的CCK-8相对水平和PCNA蛋白水平都显着降低（P<0.05）。3.SOX6调控低氧诱导的HPASMCs增殖的机制:低氧、干扰SOX6表达都可使SOCS3蛋白显着下调（P<0.05）,而过表达SOX6则使细胞中的SOCS3蛋白显着上调（P<0.01）。用si RNA干扰可显着下调SOCS3的m RNA和蛋白水平,但CCK-8相对水平和PCNA水平都明显升高,且存在统计学差异（P<0.05）。低氧、敲低SOX6表达、敲低SOCS3表达都可使HPASMCs中的p-STAT3蛋白显着上调（P<0.01）,而过表达SOX6可使HPASMCs中的p-STAT3蛋白显着下调（P<0.01）。结论1.低氧显着下调SOX6表达,诱导HPASMCs增殖。2.SOX6调控低氧诱导的HPASMCs增殖。3.SOX6通过SOCS3影响STAT3信号通路来调控低氧诱导的HPASMCs增殖。
肖芳平[2]（2020）在《血清雌激素、miR-18a-3p和miR-330-3p表达与高血压心脏病的关系研究》文中指出
何倩[3]（2020）在《青蒿素对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的作用》文中进行了进一步梳理肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）是以肺血管重构并伴有内皮细胞功能紊乱、平滑肌细胞过度增殖,肺动脉阻力升高进而导致右心衰竭为特征的一种进行性疾病,预后极差,病死率高,尚无药物可完全治愈。已有研究表明,抑制泛素蛋白酶体功能可体外抑制肺动脉高压肺血管平滑肌细胞的增殖,降低肺血管壁的厚度。青蒿素及其衍生物是一类高效低毒的抗疟药物。以往研究对疟疾治疗时发现青蒿素可协同蛋白酶体抑制剂的作用,然而其在肺动脉高压中的作用尚不明确。因此本研究通过一次性腹腔注射50mg/kg野百合碱（monocrotaline,MCT）构建肺动脉高压大鼠模型,用60mg/kg青蒿素连续给药28天,采用HE染色、Masson染色及免疫荧光染色观察青蒿素对大鼠肺动脉压、右心肥厚,肺血管重塑等的影响,Western Blot检测肺样品泛素化核心蛋白VCP（Valosin Containing Protein,VCP）的表达、血管重塑相关蛋白IP3R3表达差异,初步探讨其作用机制,揭示青蒿素的治疗潜力。主要结果如下:（1）右心导管血流动力学结果提示,相比对照,野百合碱模型组28天后大鼠肺动脉平均压力极显着升高（p<0.001）,青蒿素组该指标显着降低（p<0.001）。（2）HE染色、Masson染色观察结果显示,相比对照,MCT组大鼠的右心极显着肥厚（p<0.001）,肺小动脉肌化重构（p<0.001）,青蒿素处理减轻了MCT组大鼠的心脏肥厚程度（p<0.01）、纤维蛋白沉淀和肺小动脉的肌化程度（p<0.01）,对肺动脉高压的发生发展起到一定的保护作用。（3）免疫荧光染色α-SMA和VCP结果显示,相比对照,泛素化降解核心蛋白VCP在MCT组中表达及分布增多,而青蒿素组表达量下降,提示VCP参与了肺动脉高压的形成,青蒿素可能通过调节泛素化对肺动脉高压的发生发展产生影响。（4）血相分析结果显示相比对照,MCT组大鼠的血液RBC、HCT%、HGB g/dl升高（p<0.05）,青蒿素组干预后大鼠血氧饱和度提升,以上指标明显降低（p<0.05）。（5）蛋白质印迹检测对照组、药物载体组、MCT组和青蒿素干预组中VCP、IP3R3的表达。相比对照,MCT组肺组织中IP3R3上调,VCP上调（p<0.001）,青蒿素干预后恢复至于对照无差异（p>0.05）。肺动脉高压血管平滑肌中IP3R3上调（p<0.001）,VCP下调（p<0.05）。青蒿素组缩小差异。综上述,本研究表明青蒿素有效改善肺血管重塑来减缓肺动脉高压发生发展,揭示了青蒿素重要的治疗潜力,为靶向治疗提供参考,因此具有重要意义。
胡进[4]（2020）在《非瓣膜性房颤三尖瓣返流程度与肺动脉高压基因的相关性研究》文中提出目的:本文研究非瓣膜性房颤三尖瓣返流程度与肺动脉高压基因的相关性,探讨是否非瓣膜性房颤患者如有较多的肺动脉高压基因突变表达,则更容易触发肺动脉高压的形成机制,从而造成更为严重的三尖瓣返流,为研究房颤所致的三尖瓣返流机制提供理论基础,且可望通过对房颤患者肺动脉高压相关基因的检测来预测患者合并功能性三尖瓣返流的风险,并为尽早开展个体化干预,如对高危患者尽可能早期转复窦性心律及应用肺动脉高压靶向药物都具有重要的临床指导意义。方法:本研究以2018年9月-2020年03月期间于皖南医学院附属弋矶山医院心血管内科及老年医学科收住入院的心房颤动患者25例为研究对象,经皖南医学院伦理委员会通过并签署知情同意书。记录患者的一般资料,包括患者的基础疾病、房颤病程及心电图、超声心动图、血常规、血生化、B型尿钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）等常规资料,并对患者进行纽约心脏病协会（New York Heart Association,NYHA）心功能分级,排除其中风湿性瓣膜病患者2例,最后纳入研究中的患者为23例。根据超声心动图中不同程度的三尖瓣返流结果,将患者分成4组:不伴三尖瓣返流者即对照组11例,轻度三尖瓣返流者3例,中度三尖瓣返流者5例,重度三尖瓣返流者4例。对上述患者进行3个已知肺动脉高压基因外显子测序,即骨形成蛋白2型受体（bone morphogenetic protein receptor 2,BMPR2）基因、激活素受体样激酶-1（activin receptor-like kinase1,ACVRL1）激活素受体样激酶-1（activin receptor-like kinase1,ACVRL1）基因、微囊蛋白（Caveolae-1,CAV-1）基因,利用一代（sanger）测序法,设计引物进行PCR扩增、测序、电泳,最后进行分析,得出突变结果。结果:1.三尖瓣返流程度与年龄、左心房大小、EF值之间差异无统计学意义（p>0.05）。2.三尖瓣返流程度与房颤病程、BNP水平、NYHA心功能分级之间差异有统计学意义（p<0.05）。3.三尖瓣返流程度与肺动脉高压基因突变数量（P<0.05,ρ=0.95）之间存在正相关关系。4.ACVRL1基因与BMPR2基因在三尖瓣返流中突变表达数量之间的差异有统计学意义（P<0.05）,检测突变数量明显高于后者;与CAV-1基因的突变表达数量间差异无统计学意义（p>0.05）。5.CAV-1基因与BMPR2基因在三尖瓣返流中突变表达数量之间的差异有统计学意义（P<0.05）,且突变数量明显高于后者。结论:非瓣膜性房颤患者三尖瓣返流程度越重,肺动脉高压基因突变率越高,且ACVRL1基因及CAV-1基因突变检测率较高。
刘志元[5]（2019）在《CXCL12/CXCR4通过中枢敏化机制调控大鼠脊神经结扎导致的神经病理性疼痛》文中研究表明神经病理性疼痛（Neuropathic Pain,NP）是指由躯体感觉神经系统的损伤或疾病所直接引起的疼痛。神经病理性疼痛的产生原因很多,包括物理,化学损伤,代谢性复合性神经病变外伤,代谢紊乱,感染,中毒,血管病变,肿瘤,神经压迫等多种病因均会导致中枢或外周性神经损伤,从而进·步导致神经病理性疼痛的产生。神经病理性疼痛发病机制可概括为外周机制和中枢机制。脊髓及脊髓水平以上的中枢敏化,是神经病理性疼痛产生和维持的重要因素。趋化因子（chemokine）是一类在损伤后诱导白细胞向损伤部位迁移、聚集的具有细胞因子活性的小分子。在中枢神经系统,小胶质细胞,星形胶质细胞以及神经元（包括初级传入神经元和脊髓背角的二级神经元）均能合成趋化因子以及相应的受体,提示趋化因子同样参与了痛觉的传递。近年来,学者们进行了大量关于趋化因子和疼痛的相关性研究。作为近期比较热门的趋化因子,CXCL12及其受体CXCR4在病理病理性疼痛中的调控作用越来越受到重视。目的:探讨CXCL12/CXCR4信号通路是否通过中枢敏化机制调控脊神经结扎（SNL）后神经病理性疼痛的发生和发展。方法:1、制作大鼠SNL模型并评估神经病理性疼痛的发生和发展。2、通过免疫荧光组织化学染色和蛋白质印迹法检测CXCL12及其受体CXCR4的表达和分布。3、通过行为学测试研究外源性CXCL12,CXCL12中和型抗体,CXCR4拮抗剂和星形胶质细胞的代谢抑制剂对正常或者SNL模型的大鼠的痛觉敏感性或神经病理性疼痛的影响。4、通过RT-PCR检测c-Fos和CGRP mRNA的表达水平以评估神经元兴奋性;检测GFAP和iba-1的mRNA水平来评估星形胶质细胞和小胶质细胞的活化;检测促炎症因子（TNF-α,IL-1β和IL-6）评估神经炎症的发展过程;同样方法检测星形胶质细胞源性的神经病理性疼痛相关调节因子（Connexin 30,Connexin 43,EAAT 1,EAAT2）基因的表达水平。结果:1、大鼠SNL损伤后引起了典型的神经病理性疼痛的行为学表现,同时伴有胶质细胞的激活以及促炎症因子表达的增加。SNL模型同样引起相应脊髓节段CXCL12和CXCR4蛋白的表达上调。2、在SNL模型中,CXCL12主要在神经元中表达,而CXCR4在脊髓背角的星形胶质细胞和神经元中均有表达。3、鞘内注射外源性CXCL12能够诱导正常大鼠的痛觉过敏状态,并且能够被星形胶质细胞的代谢抑制剂fluorocitrate部分逆转。此外,CXCL12还能够增加c-Fos,GFAP和iba-1的mRNA水平。4、单次鞘内注射CXCL12中和性抗体能够短暂逆转大鼠SNL模型引起的神经性疼痛的发生。连续使用CXCL12中和性抗体能够使神经病理性疼痛的发生出现明显的延迟,并减少脊髓背角中GFAP和iba-1的蛋白表达。5、鞘内注射CXCR4拮抗剂AMD3100同样能够抑制神经性疼痛的发生并部分缓解神经性病理性疼痛的持续。进一步研究证实AMD3100是通过降低神经细胞兴奋性（c-Fos,CGRP）,减少胶质细胞活化（GFAP,iba-1）以及减少促炎症因子（TNF-α,IL-1β和IL-6）的表达来实现上述作用。不仅如此,CXCR4拮抗剂AMD3100还能够引起其定位细胞星形胶质细胞源性的神经病理性疼痛调节因子表达的上调或下调,其中Connexin 30和Connexin 43表达降低,而EAAT 1和EAAT 2 mRNA水平增加。结论:CXCL12/CXCR4信号通路能够通过中枢敏化机制以及神经元和星形胶质细胞的相互作用来调控SNL模型引起的神经病理性疼痛的发生和发展过程。有效干预CXCL12/CXCR4轴是治疗神经病理性疼痛的一种有效方法。
王玉秀,徐兴祥,迟焙元,龚道辉,闵凌峰[6]（2019）在《5-羟色胺在肺动脉高压中作用机制的研究进展》文中研究指明肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）是以肺动脉阻力的进行性升高为特点,导致患者右心后负荷的增加,最终因右心衰竭而死亡的一种极度恶性的进行性疾病。其主要病理特征主要表现为:肺小动脉的血管痉挛、肺动脉内膜的增生以及血管重构[1-2]。2014年指南指出PAH的定义是指静息状态下右心导管测定的平均肺动脉压（mean pulmonary arterial pressure,m PAP）≥25 mm Hg （1 mm Hg=0.133 k Pa）,或运动后m PAP>30 mm Hg[3]。研究显示平滑肌细胞表型的改变以及过度增殖在肺血管重构以及肺动脉高压的发生中起着重要作用。在低氧等诱导刺激下,肺动脉平
李海燕[7]（2019）在《鞣花酸对缺氧肺动脉高压影响的研究》文中提出目的:研究鞣花酸对缺氧肺动脉高压的影响及其可能的机制。方法:1.动物实验及分组40只SD雄性大鼠（体重180-220g）,随机分为四组,每组10只。分别为:A常氧组:于室温常氧环境下饲养4周。B常氧+鞣花酸组:于室温常氧环境下,每日给予鞣花酸15mg/kg灌胃,饲养4周。C低氧组:室温下将大鼠每日置于10%氧气浓度的低氧箱中8h,连续四周。D低氧+鞣花酸组:室温下将大鼠低氧暴露之前,给予鞣花酸15mg/kg灌胃,然后于10%氧气浓度的低氧箱中8h,连续4周。2.测定右心室收缩压将大鼠按上述分组处理4周后,经右颈静脉插入导管至右心室另一端连接压力传感器,经生理信号记录仪分析系统测定大鼠右心室收缩压（RVSP）。3.右心室肥厚指数测定取实验大鼠出心脏,去除左右心房后分离右心室（RV）及左心室+室间隔（S+LV）并准确称量重量。以公式（RVHI）=（RV）/（LV+S）计算右心室肥厚指数。4.肺组织中的超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量测定:称取各组大鼠相同部位（右肺下叶）肺组织100mg,磨碎制作组织提取液按照试剂盒说明步骤测定肺组织内的SOD和MDA含量。5.免疫组化染色肺组织内α-SMA检测取各实验组大鼠同一部位肺组织（左肺下叶）制作肺组织生理切片后进行α-SMA抗体免疫染色。6.大鼠肺动脉平滑肌细胞体外培养及实验分组取健康大鼠肺动脉血管进行细胞传代培养后取3-5代生长良好的肺动脉平滑肌细胞,按以下方法分组:A:常氧+加等量PBS液组;B:低氧+等量PBS液组;C:低氧+5μmol/L鞣花酸组;D:低氧+10μmol/L鞣花酸组;E:低氧+15μmol/L鞣花酸组;F:低氧+20μmol/L鞣花酸组。将分组处理好的细胞置于37℃恒温培养箱内培养48h。7.台盼蓝实验胰蛋白酶消化培养的各组细胞,制作细胞悬液,将细胞浓度调整至1×105/ml,按细胞悬液/%0.4台盼蓝溶液=9:1比例滴加台盼蓝溶液,混匀。显微镜下观察计数各组中存活细胞和死亡细胞。8.Western-blot方法检测测定各组细胞中p38MAPK和ERK1/2蛋白的表达。结果:1.与常氧组大鼠及常氧+鞣花酸组大鼠相比,低氧组大鼠右心肥厚指数[RV/（LV+S）]明显增高（p<0.05）,单纯低氧组大鼠右心肥厚指数高于低氧+鞣花酸组大鼠（p<0.05）,常氧组大鼠与常氧+鞣花酸组大鼠右心肥厚指数差异无统计学意义（p>0.05）。2.与常氧组大鼠及常氧+鞣花酸组大鼠相比,低氧组大鼠右心肥厚指数[RV/（LV+S）]明显增高（p<0.05）,单纯低氧组大鼠右心肥厚指数高于低氧+鞣花酸组大鼠（p<0.05）,常氧组大鼠与常氧+鞣花酸组大鼠右心肥厚指数差异无统计学意义（p>0.05）。3.过对α-SMA染色观察肺血管的变化发现,常氧组大鼠与常氧+鞣花酸组大鼠相比较,肺血管结构物明显变化。低氧组大鼠肺血管与常氧组相比,肺血管中膜增厚明显。低氧+鞣花酸组大鼠与单纯低氧组大鼠相比较,肺血管中膜厚度明显下降。4.与常氧组大鼠相比,低氧组大鼠SOD含量明显降低（p<0.05）,单纯低氧组与低氧+鞣花酸组大鼠相比较,单纯低氧组大鼠肺组织SOD含量较低（p<0.05）,常氧组大鼠与常氧+鞣花酸组大鼠肺组织SOD含量差异无统计学意义（p>0.05）。5.与常氧组大鼠相比,低氧组大鼠MDA含量明显增高（p<0.05）,单纯低氧组与低氧+鞣花酸组大鼠相比较,低氧+鞣花酸组大鼠肺组织MDA含量明显下降（p<0.05）,常氧组大鼠与常氧+鞣花酸组大鼠肺组织MDA含量差异无统计学意义（p>0.05）。6.与常氧组肺动脉平滑肌细胞相比,低氧组肺动脉平滑肌细胞ROS明显增高（p<0.05）,低氧+鞣花酸组肺动脉平滑肌细胞ROS水平与单纯低氧组肺动脉平滑肌细胞相比明显下降（p<0.05）。7.与常氧组相比较,低氧组大鼠肺动脉平滑肌细胞的p38MAPK和ERK1/2蛋白的表达水平明显升高（p<0.05）,与单纯低氧组相比,低氧+鞣花酸组大鼠肺动脉平滑肌细胞p38MAPK和ERK1/2蛋白的表达水平明显明显下降（p<0.05）。
马秀涛[8]（2019）在《川牛膝醇提物对野百合碱诱导大鼠肺动脉局压的影响》文中研究指明研究目的研究川牛膝醇提物对野百合碱（MCT）诱导的大鼠肺动脉高压的影响及其相关机制的探讨。研究方法随机将48只SD大鼠平均分为6组（n=8）:对照组,MCT组,MCT+川牛膝醇提物高（24g/kg）、中（12g/kg）、低（6g/kg）剂量组,西地那非治疗（30mg/kg）组。后5组大鼠一次性腹腔注射野百合碱（60mg/kg）建立肺动脉高压模型,对照组注射等量生理盐水。野百合碱注射第28天,给药组给予相应的川牛膝醇提物和西地那非。6周后测量各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）和右室收缩压（RVSP）,检测血清丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性,苏木素一伊红（HE）染色法观察并计算肺小动脉中膜厚度指数（WT）,称重法计算右心室肥厚指数,采用Westem blot和RTPCR法分别观察大鼠肺组织PI3K/Akt蛋白和mRNA含量。结果MCT组与对照组检测结果比较,MCT组mPAP、RVSP、RV/（LV+S）（%）、WT（%）明显升高（P<0.05）,PI3K/Akt蛋白、mRNA表达水平较对照组明显升高（P<0.05）。与MCT组检测结果比较,西地那非治疗组和川牛膝醇提物高、中剂量组mPAP、RVSP、RV/（LV+S）（%）、WT（%）明显降低（P<0.05）,高、中剂量组PI3K/Akt蛋白、mRNA表达水平较MCT组明显降低（P<0.05）。西地那非治疗组、高、中剂量组与对照组比较,mPAP、RVSP、RV/（LV+S）（%）、WT（%）差异无统计学意义（P>0.05）。川牛膝醇提物高、中、低剂量组SOD活性明显高于对照组,MDA含量明显低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论川牛膝醇提物可以降低野百合碱诱导的肺动脉高压、抑制氧化应激反应,降低肺血管重构,其机制可能与下调肺组织PI3K/Akt信号通路有关。
宋嘉琳[9]（2019）在《Nox4-ROS-TRPM2通路对慢性低氧肺动脉高压中PASMCs增殖、迁移和凋亡的调控》文中认为肺动脉高压（pulmonary hypertension,PH）的重要临床特征是肺动脉（pulmonary arteries,PAs）压力持续增高和重塑,主要由于肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs）胞浆内不断升高的游离Ca2+浓度(intracellular free calcium concentration,[Ca2+]i)导致的。研究表明,PASMCs的异常是肺动脉高压发生发展的重要病理学特征,其钙稳态的失衡以及增殖凋亡失衡是肺血管重塑的关键。研究表明,严重PH患者的肺组织炎症与氧化应激（Oxidative stress）相关,在心血管系统中为活性氧（Reactive oxygen species,ROS）主要来源的NADPH氧化酶（NADPHoxidase,Nox）蛋白家族表达显着增加,并且瞬时受体电位（transientreceptor potential,TRP）超家族中唯一一个氧化敏感型通道瞬时受体电位M型2（transient receptor potential melastatin 2,TRPM2）的表达也显着上升。然而,Nox家族与TRPM2在肺动脉高压中的作用机制尚不明确。本研究在正常（control,CON）和慢性低氧性肺动脉高压（chronic hypoxia-induced pulmonary hypertension,CHPH）大鼠中,首先检测PAs中Nox家族和TRPM2的表达,继而探讨Nox和TRPM2对5-HT及CH介导的PASMCs增殖迁移凋亡变化的影响,以及PH发展过程中Nox家族蛋白主要作用的亚型及其与TRPM2功能之间的关系,从而为PH发病机制的阐明及其靶向治疗提供新的科研依据。第一部分CHPH大鼠中不同Nox亚型对大鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响目的:检测CHPH大鼠PAs中Nox家族基因表达的变化,观察不同Nox亚型对大鼠PASMCs增殖迁移凋亡的影响。方法:清洁级雄性SD大鼠常压CH处理3周构建CHPH大鼠模型,在此基础上采用:（1）血流动力学检测方法检测大鼠右心室收缩压（right ventricular systolic pressure,RVSP）,分别计算两组模型中右心室重量指数（right ventricular mass index,RVMI）的变化;（2）实时荧光定量PCR和Western blot检测方法,测定大鼠去内皮PAs中Nox亚型m RNA和蛋白的表达水平;（3）MTS法和Ed U掺入法,观察CHPH对PASMCs增殖的作用以及Nox抑制剂（Nox1抑制剂:ML171;Nox2抑制剂:gp91ds-tat;Nox4抑制剂:GKT137831）对5-HT及CH介导的PASMCs增殖水平的影响;（4）划痕愈合法和Transwell小室法,观察CHPH对PASMCs迁移的作用以及三种抑制剂对5-HT及CH对PASMCs迁移水平的影响;（5）Annexin V FITC/PI试剂盒检测法,观察CHPH对PASMCs凋亡的作用以及三种抑制剂对5-HT及CH对PASMCs凋亡水平的影响（6）采用si RNA干扰技术特异性敲减Nox4基因,并观察敲减Nox4后对大鼠PASMCs增殖迁移凋亡的影响;结果:与CON组大鼠相比,（1）RVSP从CON组的24.8±0.5 mm Hg升高到CH组的50.8±0.9 mm Hg,RVMI也从CON组26.3±0.5%升高到CHPH组36.5±1.4%,提示PH大鼠模型构建成功;（2）CHPH大鼠去内皮PAs中Nox1、2、4的m RNA表达显着升高,而蛋白表达以Nox1和Nox4升高为主,提示在PH的发展过程中参与的Nox亚型主要以Nox1和Nox4为主;（3）与CON组相比,CHPH大鼠中PASMCs细胞数目显着增高（OD值由CON组的0.79±0.01增加到CH组的1.34±0.09）,且Ed U的掺入率在CHPH大鼠PASMCs也显着增加,Ed U掺入率由0.31±0.02增加到0.45±0.02,提示CHPH大鼠PASMCs中细胞增殖水平显着增强;CHPH大鼠中PASMCs 24h划痕愈合面积显着增加,且Transwell小室中迁移到下室的细胞数目在CHPH大鼠PASMCs也显着增加,由CON组的71.8±4.34增加到CH组的146.91±5.05,提示CHPH大鼠PASMCs中细胞迁移水平显着增强;CHPH大鼠中PASMCs FITC标记的Annexin V结合率显着减少,提示CHPH大鼠PASMCs中细胞凋亡水平显着抑制;（4）与CH引起的PASMCs增殖迁移增强,凋亡减少的作用相似,5-HT对CON组PASMCs也具有促进增殖迁移,抑制凋亡的作用,提示在CHPH过程中可能是通过5-HT的作用而产生的PASMCs增值迁移凋亡的改变。（5）在5-HT诱导的CON大鼠PASMCs和CHPH模型大鼠PASMCs中,ML171可抑制5-HT和CH引起的PASMCs OD值增加,以及5-HT引起的细胞增殖水平升高,但对CH引起的细胞增殖水平增加没有明显抑制作用。同时ML171可以明显抑制5-HT和CH引起的PASMCs细胞迁移。GKT137831对5-HT和CH引起的PASMCs增殖和迁移均有显着的抑制作用,但gp91 ds-tat对5-HT和CH引起的PASMCs增殖和迁移均无显着的抑制作用。在细胞凋亡中,ML171、gp91ds-tat和GKT137831均可以进一步促进5-HT引起的细胞凋亡抵抗,而在CH组中,三种抑制剂均可以减少慢性低氧引起的细胞凋亡抵抗至正常水平。提示在三种Nox亚型中,对慢性低氧PASMCs增殖迁移凋亡的影响可能是以Nox4发挥主要作用;（6）特异性敲低Nox4基因均能抑制正常PASMCs的增殖迁移凋亡,与前述抑制剂的效果一致,提示Nox4对PASMCs的增殖迁移凋亡具有不可缺少的作用。结论:CH预处理3周能够成功诱导大鼠发生PH和右心肥厚;其机制可能是CHPH大鼠Nox-ROS-TRPM2信号通路中由5-HT引起Nox1和Nox4的表达显着增加,以Nox4作用为主,引起ROS的来源增加,进一步引起增殖迁移和凋亡变化,促进PAs血管重塑,导致PH的发生发展。第二部分CHPH中TRPM2对大鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响目的:观察Nox-ROS-TRPM2信号通路中TRPM2在CHPH组PAs的表达变化,以及TRPM2对5-HT诱导CON大鼠PASMCs和CHPH模型大鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡水平的影响,进一步探讨Nox4和TRPM2在PASMCs增殖迁移上的共同作用,以明确在CHPH发病过程中Nox-ROS-TRPM2对细胞增殖迁移凋亡的调控作用。方法:（1）实时荧光定量PCR和Western blot检测方法,测定大鼠去内皮PAs中TRPM2的表达水平;（2）采用TRPM2抑制剂（2APB:100μM、ACA:30μM、PJ34:100μM）分别孵育24h,应用MTS法和Ed U掺入法,划痕愈合法和Transwell小室法,Annexin V FITC/PI试剂盒检测法,分别观察三种抑制剂对5-HT及CH诱导PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响;（3）采用si RNA干扰技术特异性敲减TRPM2基因,并观察敲减TRPM2后对大鼠PASMCs增殖迁移凋亡的影响;（4）应用GKT137831分别和ACA、2APB、PJ34联合作用,观察同时抑制Nox4和TRPM2时,5-HT及CH诱导的大鼠PASMCs增殖迁移的变化。结果:（1）与CON组相比,CH组TRPM2的m RNA和蛋白表达明显增加,提示TRPM2参与CHPH的发生发展;（2）2APB和PJ34可显着抑制5-HT和CH引起的PASMCs增殖迁移水平增强。ACA作用较弱。但同时三种抑制剂均可促进5-HT和CH引起的PASMCs细胞凋亡;提示TRPM2参与CHPH过程中PASMCs增值迁移凋亡的调控;（3）特异性敲低TRPM2基因均能抑制正常PASMCs的增殖迁移凋亡,提示TRPM2对PASMCs的增殖迁移凋亡具有不可缺少的作用。（4）GKT137831与ACA、2APB和PJ34分别联合用药,均可以不同程度度抑制5-HT以及CH引起的PASMCs增殖迁移,提示Nox4和TRPM2在CHPH过程中PASMCs引起的增殖迁移中起协同作用。结论:在CHPH过程中TRPM2表达增强。抑制TRPM2通道均能够显着抑制PASMCs的增殖迁移,并促进凋亡,表明TRPM2参与CHPH发生发展过程中的PASMCs的增殖迁移凋亡调控,在与Nox4同时抑制时,5-HT以及CH引起的PASMCs增殖迁移也被抑制,提示Nox4与TRPM2具有协同作用,TRPM2可能作为Nox4的下游信号调控细胞的增殖迁移凋亡。第三部分Nox4-ROS-TRPM2信号通路在CHPH发病中的作用目的:观察Nox4基因敲除(Nox4-/-)对CHPH的影响以及Nox4-/-对5-HT介导的PASMCs增殖迁移凋亡的作用。观察Nox4基因敲除后TRPM2的变化。进一步明确在CHPH过程中Nox4和TRPM2通道的相互作用以及对PASMCs功能的调控。方法:（1）利用琼脂糖电泳法、western blot、PCR技术验证Nox4-/-小鼠敲除是否成功;（2）与野生型慢性低氧小鼠模型比较,观察Nox4-/-小鼠CH模型血流动力学和RVMI的变化。（3）利用MTS法、划痕愈合法和Annexin V FITC/PI标记法观察Nox4-/-对5-HT诱导的PASMCs增殖迁移凋亡的影响。（4）Western blot和PCR技术检测Nox4-/-小鼠中TRPM2的表达。结果:（1）琼脂糖电泳法显示Nox4-/-小鼠的DNA条带在300bp左右,高于野生型小鼠的DNA条带228bp,提示Nox4-/-小鼠的基因型是纯合子Nox4-/-。Western blo和PCR技术显示与野生型小鼠肺组织相比,Nox4-/-小鼠的Nox4 m RNA和蛋白表达水平几乎没有,提示Nox4基因敲除成功,保证实验的准确性。（2）与野生型小鼠慢性低氧模型比较,Nox4-/-小鼠CH模型中肺动脉压力明显降低、RVMI也显着减小。提示Nox4基因的缺失可以降低CHPH过程中因CH引起的RVSP、RVMI升高,提示Nox4-/-有利于CHPH的预防。（3）与野生型小鼠的PASMCs比较,Nox4-/-可以有效抑制5-HT引起的PASMCs增殖和迁移,且进一步促进PASMCs凋亡,提示Nox4基因确实对CH过程中PASMCs增殖迁移凋亡有不可缺少的作用。（4）与野生型小鼠肺组织相比,Nox4-/-小鼠中TRPM2的m RNA和蛋白的表达水平增加,提示Nox4与TRPM2存在相互调节作用。综上所述,PASMCs中氧化应激水平的增加导致Nox表达和功能活性的增强以及TRPM2功能的上调在CHPH致病过程中发挥了重要作用。CH通过5-HT上调Nox家族主要作用亚型Nox4的表达,通过产生过量的ROS激活TRPM2通道进而调控PASMCs[Ca2+]i变化,引起细胞增殖迁移凋亡水平的变化,导致血管重塑,促进PH的发生发展。此外,在Nox4-/-小鼠中CH所致血管重塑能够有效缓解,且5-HT诱导的细胞增殖迁移也显着降低,进一步表明Nox4在肺动脉高压发生发展中的氧化应激反应起重要作用。Nox4-/-小鼠中TRPM2表达增加,说明TRPM2依赖于Nox4而作用。以上结果为阐明PH的发病机制和PH的靶向治疗提供新的科研依据。
关翘[10]（2019）在《遗传性肺动脉高压高通量药物筛选平台的建立》文中认为肺动脉高压是一种慢性进行性心血管疾病,通常以肺动脉压力升高、肺血管阻力增加（mPAP≥25mmHg、PAWP≤15mmHg、PVR>3WU）为主要特征,患者通常会因诱发右心衰竭而导致死亡。由于该病发病隐匿、发病初期无特异性症状,通常患者在被确诊时病情已经非常严重。其发病机制非常复杂,目前认为主要的病理学改变有肺血管重构,肺中小动脉壁中层平滑肌细胞增殖加快、内层内皮细胞出现功能损伤、新生内膜形成、内膜纤维化、丛状病变等。遗传性肺动脉高压属于肺动脉高压第一分类。目前发现导致肺动脉高压的突变基因有BMPRⅡ、SMAD9、CAV1、KCNK3,其中BMPRⅡ突变所占比例最高,有70%～80%的家族性肺动脉高压均有BMPRⅡ突变。即使在特发性肺动脉高压患者中也有20%～40%的患者有BMPRⅡ突变。部分没有BMPRⅡ突变的病情严重的肺动脉高压患者也被发现出现BMPRⅡ表达量下降的情况。相比没有BMPRⅡ突变的患者,BMPRⅡ突变患者具有发病时间更早,病情更严重的特点。尽管近十年我国已引入一系列药物用于肺动脉高压的治疗,患者5年生存率有所提高,但是远期生存率仍然很低,而且目前临床应用的治疗药物价位高、患者需终生服药,这给社会和个人带来很大的负担。所以迫切需要创新药物的发现和新的药物筛选技术的介入。本论文以遗传性肺动脉高压为研究对象,应用慢病毒介导的shRNA干扰方法成功的敲低了人动脉平滑肌细胞和人肺动脉内皮细胞的BMPRⅡ基因。分别对BMPRⅡ基因敲低后的人肺动脉平滑肌细胞和人肺动脉内皮细胞进行全转录组水平分析和表型分析,找到了适用于遗传性肺动脉高压高通量药物筛选的细胞模型。通过对敲低细胞和对照组细胞的差异表达基因进行KEGG通路分析,结果显示在top10信号通路里,两种细胞中均富集到以下和疾病相关的通路:细胞外基质受体相互作用信号通路、蛋白消化和吸收通路、黏附斑信号通路、PI3K-Akt信号通路。在肺动脉内皮细胞中,敲低细胞和对照组细胞的差异表达基因还富集到Ras信号通路。在肺动脉平滑肌细胞中,BMPRⅡ敲低后细胞增殖能力显着下降。而BMPRⅡ敲低的肺动脉内皮细胞发生了向间质细胞表型转变的过程endothelial-to-mesenchymal transition（EndoMT）,由内皮细胞特有的鹅卵石形态转变成类似于间质细胞的梭形。通过RT-qPCR检测基因表达量,结果显示BMPRⅡ基因敲低导致肺动脉内皮细胞的平滑肌细胞标志性基因αSMA mRNA水平表达量显着上调。EndoMT与肺动脉高压血管重塑密切相关,所以我们认为BMPRⅡ敲低的肺动脉内皮细胞更接近于疾病模型细胞。本研究以构建的BMPRⅡ敲低的人肺动脉内皮细胞作为遗传性肺动脉高压疾病模型细胞,结合基于高通量测序的高通量药物筛选技术HTS2,建立了遗传性肺动脉高压的高通量药物筛选新方法。通过对2148个小分子化合物的筛选,找到一系列有潜在活性的小分子药物。值得一提的是在药物打分排名前30名药物中,有四个药物已有研究报道有益于肺动脉高压。药物打分排名前45名有超过12个小分子化合物的作用靶点已经报道过是肺动脉高压的潜在靶点,主要集中在Ras/Raf/MEK、RhoA/ROCK和PI3K/Akt通路。另外我们发现BMPRⅡ敲低的肺动脉内皮细胞在给予新型K-Ras选择性抑制剂6H05后αSMA mRNA水平的表达量明显下调,这说明6H05可能有逆转EndoMT的作用,可能成为治疗遗传性肺动脉高压候选小分子。研究数据显示了本研究建立的遗传性肺动脉高压药物筛选体系是可行的,这为遗传性肺动脉高压大规模药物筛选奠定了基础,也为遗传性肺动脉高压以及其它遗传性疾病的药物发现提供了新的研究思路。
二、Hyperplasia of pulmonary artery smooth muscle in primary and secondary pulmonary hypertension is causally related to serotonin transporter overexpression（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Hyperplasia of pulmonary artery smooth muscle in primary and secondary pulmonary hypertension is causally related to serotonin transporter overexpression（论文提纲范文）
（1）SOX6在低氧诱导的人肺动脉平滑肌增殖中的作用及机制的初步研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 低氧对人肺动脉平滑肌细胞增殖和SOX6 表达的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 SOX6 在低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 SOX6 调控低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 低氧诱导的肺动脉平滑肌增殖发生机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（3）青蒿素对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 肺动脉高压、青蒿素和VCP、IP3R3 的研究进展 |
| 1.1 肺动脉高压的研究 |
| 1.1.1 肺动脉高压的分类及特性 |
| 1.1.2 肺动脉高压的临床症状、病理变化及诊断 |
| 1.1.3 肺动脉高压的发病分子机制 |
| 1.1.4 肺动脉高压的治疗方法 |
| 1.2 青蒿素的研究现状 |
| 1.2.1 青蒿素的结构与功能 |
| 1.2.2 青蒿素及其衍生物抗肿瘤机制 |
| 1.2.3 青蒿素的应用 |
| 1.3 泛素化研究内容概况 |
| 1.3.1 泛素蛋白酶体系统组成 |
| 1.3.2 VCP的结构和功能 |
| 1.3.3 p97调节ER应激的可能机制 |
| 1.3.4 VCP、IP3R3 的调节对肺动脉高压的影响 |
| 实验部分 |
| 第二章 青蒿素对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压干预效果 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要设备和仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2 模型的建立及效果评估 |
| 2.2.1 MCT-PAH模型大鼠右心室血流动力学以及心脏指标 |
| 2.2.2 心脏肥厚及心肌纤维形态学观察 |
| 2.2.3 肺小动脉重构检测 |
| 2.2.4 免疫荧光染色评价小动脉的肌化程度 |
| 2.2.5 血相分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 青蒿素干预降低MCT大鼠的血流动力学指标 |
| 2.3.2 青蒿素改善肺动脉高压大鼠心脏肥厚 |
| 2.3.3 青蒿素改善MCT大鼠肺小血管重构 |
| 2.3.4 免疫荧光染色评价小动脉的肌化程度 |
| 2.3.5 血相分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 青蒿素干预对MCT大鼠肺VCP和 IP3R3 表达的影响 |
| 3.1 实验材料与仪器设备 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂耗材 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.1.4 主要试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 Western blot鉴定肺组织蛋白的差异表达 |
| 3.2.2 蛋白印迹鉴定大鼠肺动脉平滑肌蛋白的差异表达 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 青蒿素干预对MCT大鼠肺蛋白VCP和 IP3R3 表达的影响 |
| 3.3.2 青蒿素干预对大鼠肺小动脉平滑肌VCP和 IP3R3 表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 英文缩略词 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）非瓣膜性房颤三尖瓣返流程度与肺动脉高压基因的相关性研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究材料(资料、内容)与方法 |
| 1.研究内容 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 病例选择 |
| 2.1.1 排除标准 |
| 2.2 主要仪器和试剂 |
| 2.2.1 主要实验仪器 |
| 2.2.2 主要实验试剂 |
| 2.3 血清样本收集和保存 |
| 3.实验方法与步骤 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.1.1 实验原理 |
| 3.1.2 实验步骤 |
| 4.统计学处理 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 本研究中存在的不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 |
| 致谢 |
（5）CXCL12/CXCR4通过中枢敏化机制调控大鼠脊神经结扎导致的神经病理性疼痛（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 CXCL12/CXCR4在神经病理性疼痛模型(SNL模型)脊髓中表达的变化以及在脊髓背角的分布 |
| 一 材料 |
| 1 实验动物 |
| 2 主要试剂 |
| 3 主要仪器以及耗材 |
| 4、实验试剂购买以及配制 |
| 二 方法 |
| 1 脊神经选择结扎模型的建立 |
| 2 神经病理性疼痛行为测试 |
| 3 RT-PCR测定GFAP和iba-1以及炎症因子mRNA表达水平 |
| 4 Western Blot检测CXCL12以及CXCR4在SNL后的表达曲线 |
| 5 利用IHC检测CXCL12以及受体CXCR4在脊髓背角表达的空间分布情况以及其定位的细胞 |
| 三 统计学处理 |
| 四 结果 |
| 1 SNL模型产生的机械性痛觉过敏以及温度痛觉敏感 |
| 2 SNL导致活化的神经胶质细胞和炎症因子mRNA表达水平增加 |
| 3 在SNL诱导神经病理性疼痛后CXCL12/CXCR4在脊髓中表达的变化及其在脊髓背角的分布情况 |
| 五 讨论 |
| 第二章 CXCL12/CXCR4在神经病理性疼痛发生发展以及维持阶段中的作用及其涉及的中枢敏化机制 |
| 一 材料 |
| 1 实验动物 |
| 2 主要试剂 |
| 3 主要仪器以及耗材 |
| 4 实验试剂配制 |
| 二 方法 |
| 1 脊神经选择结扎模型的建立 |
| 2 神经病理性疼痛行为测试 |
| 3 鞘内注射 |
| 4 RT-PCR测定c-Fos,CGRP,GFAP和iba-1以及炎症因子mRNA表达水平 |
| 5 利用IHC检测GFAP以及OX-42在脊髓背角表达的变化 |
| 三 统计学处理 |
| 四 结果 |
| 1 鞘内注射外源性CXCL12能够通过改变神经元(c-FOS)以及胶质细胞(GFAP,iba-1)兴奋性引起正常大鼠痛觉敏感性(包括机械痛域和热痛阈)的变化 |
| 2 CXCL12中和型抗体对SNL模型引起的神经病理性疼痛的发展和维持的影响 |
| 3 阻断SNL后CXCL12的上调能够抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的活化 |
| 4 鞘内注射CXCR4拮抗剂AMD3100对SNL模型中神经病理性疼痛的发展和维持的影响 |
| 5 降低CXCR4活性能够通过调控中枢敏化机制来缓解SNL诱导的神经病理性疼痛 |
| 五 讨论 |
| 第三章 CXCL12/CXCR4通过神经元-胶质细胞相互作用机制调节神经病理性疼痛 |
| 一 材料 |
| 1 实验动物 |
| 2 主要试剂 |
| 3 主要仪器以及耗材 |
| 4 实验试剂配制 |
| 二 方法 |
| 1 IHC免疫荧光双染确定CXCL12及其受体CXCR4在脊髓背角的细胞定位 |
| 2 行为学测试探究星形胶质细胞代谢抑制剂fluorocitrate能否逆转外源性的大鼠CXCL12引起的痛觉敏感状态 |
| 3 RT-PCR检测鞘内注射CXCR4拮抗剂是否能够影响CXCR4定位细胞星形胶质细胞相关的神经性病理性疼痛调控因子mRNA的表达 |
| 三 统计学处理 |
| 四 结果 |
| 1 SNL模型引起CXCL12在神经元表达,CXCR4在神经元以及星形胶质细胞表 |
| 2 氟柠檬酸盐(Fluorocitrate)能够部分缓解CXCL12在正常大鼠引起的痛觉敏感状态 |
| 3 CXCR4拮抗剂AMD3100能够降低星形胶质源性的神经病理性疼痛调节因子的mRNA表达 |
| 五 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 英文缩略语表 |
| 综述(一) 神经性疼痛的病因学以及治疗策略 |
| References |
| 综述(二) 趋化因子在神经病理性疼痛中的作用 |
| References |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）5-羟色胺在肺动脉高压中作用机制的研究进展（论文提纲范文）
| 一、5-HT |
| 二、5-羟色胺在肺动脉高压中的作用 |
| 三、5-羟色胺相关基因多态性研究进展 |
（7）鞣花酸对缺氧肺动脉高压影响的研究（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 肺动脉高压发生发展机制及治疗的探讨 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 中英文缩略词 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
（8）川牛膝醇提物对野百合碱诱导大鼠肺动脉局压的影响（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 6.参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录一：中英文缩略词 |
| 攻读科学型硕士学位期间发表的论文 |
（9）Nox4-ROS-TRPM2通路对慢性低氧肺动脉高压中PASMCs增殖、迁移和凋亡的调控（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 CHPH大鼠中不同No_x亚型对大鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 CHPH大鼠模型的制备和鉴定 |
| 2.2 PCR检测基因表达水平 |
| 2.3 Western-blot检测蛋白表达水平 |
| 2.4 PASMCs的分离、培养 |
| 2.5 MTS法和Ed U掺入法检测PASMCs增殖水平 |
| 2.6 划痕愈合法和Transwell小室法检测PASMCs的迁移水平 |
| 2.7 Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡试剂盒检测 PASMCs 凋亡水平 |
| 2.8 siRNA 敲减目的基因 Nox4 |
| 3.数据处理 |
| 结果 |
| 1.CHPH大鼠动物模型的鉴定 |
| 2.CHPH大鼠去内皮PAs中 No_x亚型表达的变化 |
| 3.慢性低氧对PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响 |
| 4.不同No_x亚型在大鼠PASMCs中增殖、迁移和凋亡的作用 |
| 4.1 不同No_x亚型对大鼠PASMCs增殖的作用 |
| 4.2 不同No_x亚型对大鼠PASMCs迁移的作用 |
| 4.3 不同No_x亚型对大鼠PASMCs凋亡的作用 |
| 4.4 siNo_x4 对大鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 CHPH中 TRPM2 对大鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 CHPH大鼠模型的制备和鉴定 |
| 2.2 PCR检测PAs m RNA表达水平 |
| 2.3 Western-blot检测PAs蛋白表达水平 |
| 2.4 MTS法和Ed U掺入法检测PASMCs增殖水平 |
| 2.5 划痕愈合法和Transwell小室法检测PASMCs迁移水平 |
| 2.6 Annexin V FITC/PI试剂盒检测PASMCs凋亡水平 |
| 2.7 siRNA敲减目的基因TRPM2 |
| 3.数据处理 |
| 结果 |
| 1.TRPM2在CHPH大鼠中的表达变化 |
| 2.TRPM2对大鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡的作用 |
| 2.1 TRPM2 对大鼠PASMCs增殖的作用 |
| 2.2 TRPM2 对大鼠PASMCs迁移的作用 |
| 2.3 TRPM2 对大鼠PASMCs凋亡的作用 |
| 2.4 siTRPM2 对大鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响 |
| 3.同时抑制No_x4和TRPM2对PASMCs增殖迁移的作用 |
| 3.1 同时抑制No_x4和TRPM2对PASMCs增殖的影响 |
| 3.2 同时抑制No_x4和TRPM2对PASMCs迁移的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 No_x4-ROS-TRPM2 信号通路在CHPH发病中的作用 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 琼脂糖凝胶电泳法基因型鉴定 |
| 2.2 小鼠血流动力学检测 |
| 2.3 PCR检测基因表达水平 |
| 2.4 Western-blot检测蛋白表达水平 |
| 2.5 免疫荧光检测小 PCNA 的表达 |
| 2.6 MTS法检测PASMCs增殖水平 |
| 2.7 划痕愈合法检测PASMCs迁移水平 |
| 2.8 Annexin V FITC/PI试剂盒检测PASMCs凋亡水平 |
| 3.数据处理 |
| 结果 |
| 1.No_x4敲除对 CHPH 的影响 |
| 1.1 No_x4 基因敲除小鼠模型基因型鉴定 |
| 1.2 Western blot检测No_x4 敲除小鼠No_x4 蛋白表达 |
| 1.3 PCR检测No_x4敲除小鼠No_x4 mRNA表达 |
| 1.4 No_x敲除对CHPH的影响 |
| 1.4.1 WTCH和 No_x4~(-/-)CH模型的血流动力学变化 |
| 1.4.2 WTCH和No_x4~(-/-)CH模型的RVMI的变化 |
| 2.No_x4敲除对小鼠PASMCs增殖、迁移和凋亡的影响 |
| 2.1 No_x4敲除对5-HT诱导的小鼠PASMCs增殖的影响 |
| 2.2 No_x4敲除对5-HT诱导的小鼠PASMCs细胞迁移的影响 |
| 2.3 No_x4敲除对5-HT诱导的小鼠PASMCs凋亡的影响 |
| 3.No_x4敲除小鼠TRPM2 的表达变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 NADPH氧化酶及TRPM2在肺动脉高压血管重塑中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）遗传性肺动脉高压高通量药物筛选平台的建立（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1.1. 选题的目的和意义 |
| 1.2. BMPRⅡ信号通路与肺动脉高压的关系 |
| 1.3. 血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的功能 |
| 1.4. 目前的肺动脉高压的药物治疗 |
| 1.5. 药物筛选方法 |
| 1.5.1. 传统药物筛选方法 |
| 1.5.2. 高通量药物筛选 |
| 1.5.3. 基于基因表达谱的筛选方法 |
| 1.5.4. HTS~2高通量筛选方法 |
| 第一章 建立遗传性肺动脉高压细胞模型 |
| 1.1. 材料 |
| 1.1.1. 主要试剂和耗材 |
| 1.1.2. 主要仪器设备 |
| 1.1.3. 细胞来源 |
| 1.1.4. 载体信息 |
| 1.2. 方法 |
| 1.2.1. 细胞培养 |
| 1.2.2. 感受态细胞制备和转化 |
| 1.2.3. 摇菌和菌液保存 |
| 1.2.4. 质粒提取 |
| 1.2.5. 慢病毒包装 |
| 1.2.6. 嘌呤霉素最佳杀灭浓度测定 |
| 1.2.7. 慢病毒感染原代细胞 |
| 1.2.8. Trizol法提取细胞RNA |
| 1.2.9. RT-qPCR |
| 1.2.10. 免疫印迹 |
| 1.2.11. MTS检测细胞增殖能力 |
| 1.2.12. RNA-seq建库 |
| 1.2.13. Qubit检测测序样本浓度 |
| 1.2.14. 测序数据处理和统计分析 |
| 1.3. 结果 |
| 1.3.1. 慢病毒感染的人肺动脉平滑肌细胞BMPRⅡ表达变化 |
| 1.3.2. BMPRⅡ敲低对人肺动脉平滑肌细胞增殖能力的影响 |
| 1.3.3. BMPRⅡ敲低的人肺动脉平滑肌细胞转录组水平的变化 |
| 1.3.4. 慢病毒感染的人肺动脉内皮细胞BMPRⅡ表达变化 |
| 1.3.5. BMPRⅡ敲低的人肺动脉内皮细胞形态观察 |
| 1.3.6. BMPRⅡ敲低的人肺动脉内皮细胞αSMA表达量变化 |
| 1.3.7. BMPRⅡ敲低的人肺动脉内皮细胞转录组水平的改变 |
| 1.4. 本章讨论 |
| 1.5. 本章小结 |
| 第二章 建立遗传性肺动脉高压药物筛选体系 |
| 2.1. 材料 |
| 2.1.1. 主要试剂和耗材 |
| 2.1.2. 主要仪器设备 |
| 2.1.3. 实验溶液配制 |
| 2.1.4. 筛选细胞来源 |
| 2.2. 方法 |
| 2.2.1. 探针磷酸化和回收 |
| 2.2.2. 筛选细胞处理 |
| 2.2.3. 药物处理方式 |
| 2.2.4. RASL-seq建库 |
| 2.2.5. 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.6. 琼脂糖凝胶回收 |
| 2.2.7. Qubit检测测序样本浓度 |
| 2.2.8. 测序数据处理和统计分析 |
| 2.3. 结果 |
| 2.3.1. 基因表达谱的确定 |
| 2.3.2. 样本重复性检测 |
| 2.3.3. 化合物筛选结果分析 |
| 2.3.4. 6H05对BMPRⅡ敲低的人肺动脉内皮细胞的作用 |
| 2.4. 本章讨论 |
| 2.5. 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、Hyperplasia of pulmonary artery smooth muscle in primary and secondary pulmonary hypertension is causally related to serotonin transporter overexpression（论文参考文献）
- [1]SOX6在低氧诱导的人肺动脉平滑肌增殖中的作用及机制的初步研究[D]. 王羽. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [2]血清雌激素、miR-18a-3p和miR-330-3p表达与高血压心脏病的关系研究[D]. 肖芳平. 南华大学, 2020
- [3]青蒿素对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的作用[D]. 何倩. 西北农林科技大学, 2020
- [4]非瓣膜性房颤三尖瓣返流程度与肺动脉高压基因的相关性研究[D]. 胡进. 皖南医学院, 2020(01)
- [5]CXCL12/CXCR4通过中枢敏化机制调控大鼠脊神经结扎导致的神经病理性疼痛[D]. 刘志元. 苏州大学, 2019(06)
- [6]5-羟色胺在肺动脉高压中作用机制的研究进展[J]. 王玉秀,徐兴祥,迟焙元,龚道辉,闵凌峰. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2019(03)
- [7]鞣花酸对缺氧肺动脉高压影响的研究[D]. 李海燕. 广西医科大学, 2019(08)
- [8]川牛膝醇提物对野百合碱诱导大鼠肺动脉局压的影响[D]. 马秀涛. 广西医科大学, 2019(08)
- [9]Nox4-ROS-TRPM2通路对慢性低氧肺动脉高压中PASMCs增殖、迁移和凋亡的调控[D]. 宋嘉琳. 福建医科大学, 2019
- [10]遗传性肺动脉高压高通量药物筛选平台的建立[D]. 关翘. 北京协和医学院, 2019(02)