一、反复自然流产患者NO与Th1/Th2型细胞因子水平的变化（论文文献综述）
王班琴[1]（2021）在《H2S通过干扰滋养细胞入侵及调控母胎界面TH1/TH2平衡影响早孕的相关作用机制研究》文中进行了进一步梳理流产是影响早期妊娠的关键因素。反复自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）是一种常见妊娠并发症,它被定义为两次或更多次连续的自然流产。RSA的发生,是目前全球范围内面临的主要生育问题。无法解释的RSA（unexplained spontaneous abortion,URSA）通常与母胎界面的免疫学异常相关。但是,关于RSA如何发生的确切机制仍然未知。硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）在体内主要以 L-半胱氨酸（L-Cysteine,L-Cys）作为底物,通过两种酶:胱硫醚-β-合酶（cystathionine β-synthase,CBS）以及胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase,CSE）的催化而合成。CBS和CSE在多种器官中分布不同。近几年研究发现,H2S也存在于人生殖系统,参与多种生殖过程的调节。不仅如此,H2S也参与免疫调节,介导免疫耐受。然而,对于H2S信号如何在妊娠初期发挥作用,还不了解。本研究旨在明确H2S是否影响妊娠初期胚胎的发育以及其发挥作用的机制。实验表明,一方面CBS/H2S信号系统通过调节金属基质蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）,血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）干扰滋养细胞迁移和侵袭,从而影响早孕。在临床样本的研究中发现,RSA孕妇的绒毛组织CBS而非CSE蛋白表达显着降低,且其降低主要发生在细胞滋养层而非合体滋养层。滋养层细胞系HTR8/SVneo以及JEG3均能合成H2S。并且,我们发现外源性给予H2S或内源性过表达CBS均能引起MMP2及VEGF的上调从而促进细胞的迁移和侵袭。体内实验,利用CBS敲基因鼠及药理学干预的方法发现,CBS缺乏或者抑制均能够引起孕12.5天的小鼠发生胚胎吸收现象。重要的是,上述流产小鼠给予外源性H2S供体治疗后,能有效改善其胚胎吸收现象。同时,♀CBA/J x♂ DBA/2自然流产小鼠模型也证实了H2S的挽救作用。另一方面,我们的实验结果证明CBS/H2S信号通过干扰滋养层细胞NF-κB炎症途径及人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin,HCG）及环氧合酶 2（cyclooxygenase-2,COX2）、前列腺素 2（prostaglandin E2,PGE2）等细胞因子的释放发挥免疫调节作用,影响母胎界面辅助型T细胞1型（Type 1 Thelper,TH1）与辅助型 T细胞 2 型（Type 2 Thelper,TH2）细胞因子的比率。上述这些细胞因子的代谢紊乱能够导致RSA的发生,CBS衍生的H2S对于维持免疫稳态是至关重要的。体外研究发现,CBS抑制或者缺乏引起吸收胚胎蜕膜组织中TH2型细胞因子（IL-4、IL-6）水平显着降低,而TH1型细胞因子（IFN-γ、TNF-α）增高或者没有发生改变,导致TH1/TH2增高。另外,低剂量外源性H2S供体以及CBS过表达均能引起HTR8/SVneo细胞HCG的改变,然而吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）及胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin,TSLP）没有明显差异。在对CBS过表达或敲低后的HTR8细胞进行RNA-seq差异分析后发现:CBS/H2S靶向NF-κB信号通路;白细胞介素-1受体1（IL-1R1）,前列腺素合酶2（PTGS2/COX2）富集于NF-κB信号通路以及炎症有关的过程。并且,CBS/H2S影响IL-1R1、COX2水平及PGE2的分泌,CBS过表达能够下调IL-1R1、COX2及PGE2。经Western验证,NF-κB炎症信号通路中关键蛋白P-IKB以及P-P65,在CBS过表达时均明显下调,P65没有改变。总之,H2S信号在维持早孕中起着重要作用,我们认为其可能是通过干扰滋养层细胞入侵以及调控母胎界面的免疫耐受从而影响TH1/TH2平衡实现的。第一部分H2S通过干扰滋养细胞入侵影响早孕及其作用机制研究研究目的1、H2S信号系统在母胎界面的表达特征2、H2S信号异常能否引起异常妊娠3、H2S信号如何影响滋养细胞的迁移及侵袭研究方法1、Western blot技术,确定人绒毛滋养细胞CBS和CSE蛋白表达。通过免疫组化确认绒毛及蜕膜中CBS、CSE的表达特征。2、H2S合成与释放技术,确定人滋养细胞能够生成H2S。3、通过病毒转染技术,过表达或敲低人滋养细胞HTR8/SVneo CBS。Transwell技术用于H2S信号系统对人滋养细胞迁移及侵袭能力的影响。Western blot方法,进一步检测H2S信号系统对人滋养细胞中MMP2、VEGF表达的影响。4、通过CBS敲除小鼠模型以及药物干预内源性H2S产生,检测CBS缺失及H2S产生障碍对小鼠胚胎吸收的影响,并且进一步确认给予外源性H2S供体治疗后是否可以改善流产小鼠的胚胎吸收现象。研究结果1、妊娠早期的胎盘绒毛组织中均有CBS、CSE蛋白表达,相较于门诊正常流产的孕妇,URSA患者的绒毛中CBS降低,而CSE变化不明显。并且URSA组绒毛中CBS降低主要发生在细胞滋养层,而非合体滋养层。2、在HTR8/SVneo和JEG3两种细胞系中均检测到了 CBS和CSE蛋白,且能够产生内源性H2S。CBS抑制剂氨基氧乙酸（AOAA）和CSE抑制剂DL-炔丙基甘氨酸（PAG）能减少H2S的合成。3、多种浓度外源性的H2S供体硫氢化钠（NaHS）或合成前体L-半胱氨酸（L-Cys）,均能够增强人滋养细胞迁移及侵袭,并且迁移及侵袭能力的改变对供体浓度具有依赖性。同样,内源性CBS也能增加HTR8/SVneo细胞迁移和侵袭。4、H2S供体能够促进人滋养细胞MMP2、VEGF的表达,且对供体浓度具有一定的依赖性。CBS的过表达可引起MMP2和VEGF蛋白表达上调,而CBS的下调则相反。5、CBS敲除小鼠显示出明显的胚胎吸收现象,同样H2S生物合成酶抑制剂AOAA或PAG也可诱发怀孕小鼠出现胚胎吸收。重要的是,使用H2S缓释供体GYY4137或NaHS的治疗可挽救AOAA处理或CBS缺失引起的小鼠胚胎丢失。研究结论1、URSA患者妊娠早期绒毛组织中CBS表达降低,且主要发生在其细胞的滋养层。2、CBS/H2S促进人滋养细胞迁移和侵袭。3、CBS/H2S促进人滋养细胞MMP2、VEGF的表达。4、CBS敲除及药理学阻断H2S合成均能导致明显的小鼠胚胎吸收现象,给予H2S供体能够有效改善。第二部分H2S通过调控母胎界面TH1/TH2平衡影响早孕及其作用机制研究研究目的1、H2S信号对自然流产小鼠模型的影响2、发生胚胎吸收的蜕膜中细胞因子的变化3、H2S信号是否介导绒毛滋养细胞免疫介质的合成及释放4、滋养细胞CBS/H2S靶向作用的信号通路研究方法1、RT-qPCR以及ELISA技术,检测CBS敲除或药物抑制是否影响吸收胚胎蜕膜中TH1及TH2相关细胞因子的表达。2、ELISA技术,检测HCG、TSLP、IDO以及PGE2的改变。3、RNA-seq技术,明确CBS/H2S靶向作用的信号通路。4、RT-qPCR方法,验证H2S供体及上调或下调CBS对滋养细胞白细胞介素-1受体1（IL-1R1）及环氧合酶2（COX2）表达的改变。5、Western blot方法,检测NF-κB通路参与炎症反应的关键蛋白。研究结果1、H2S供体GYY4137和NaHS能够挽救自然流产小鼠的胚胎吸收并促进蜕膜中TGF-β的表达。2、给予AOAA或PAG处理,吸收胚胎蜕膜中的TH2型细胞因子（IL-4及IL-6）表达下降,而TH1型细胞因子（IFN-γ、TNF-α）则不会显着改变。与此一致,CBS缺失也会致使TH2减少以及TH1不变或增多。3、低剂量的H2S能够抑制人滋养细胞的HCG分泌,而对TSLP及IDO影响不大。CBS过表达也能够降低人滋养细胞HCG水平,而CBS敲低则相反。4、RNA-seq差异分析发现CBS/H2S靶向NF-κB信号传导途径。利用Western blot进一步证实了 CBS过表达可以下调NF-κB信号通路和炎症反应相关生物学过程的IL-1R1、COX2及PGE2水平,而CBS下调则相反;CBS过表达能够下调NF-κB通路中关键炎性蛋白P-P65以及P-IKB的水平。研究结论1、H2S能够改善胚胎的吸收现象。2、CBS/H2S代谢紊乱引起的胚胎吸收有可能与蜕膜中Th1/Th2失衡相关。3、H2S可能通过影响母胎界面HCG、PGE2等的释放维持孕期免疫耐受。4、CBS/H2S靶向作用于NF-κB信号通路。
谢雅贞[2]（2020）在《基于蛋白质组学技术探讨安子合剂治疗ACA阳性流产的Tim-3调控机制及临床疗效》文中研究指明目的:本课题通过Label-Free蛋白质组学技术筛选安子合剂干预后ACA阳性流产小鼠胎盘差异表达蛋白,观察安子合剂对ACA阳性流产小鼠胎盘差异蛋白Tim-3表达、血清Th1/Th2比值以及ACA 阳性流产患者血清差异蛋白Tim-3表达和Th1/Th2比值的影响,从Tim-3调节Th1/Th2平衡的角度,探讨安子合剂的安胎作用机制及临床疗效。方法:1.观察安子合剂对模型小鼠胚胎丢失率及胎盘ACA和TNF-α含量影响:将雌性BALB/c小鼠随机分为5组:空白对照组、模型组、安子合剂低剂量组、安子合剂高剂量组、阿司匹林组,每组10只。除空白对照组外,其余各组小鼠通过腹腔注射β2-糖蛋白Ⅰ（β2GPI）建立ACA 阳性流产模型。从妊娠第1天起,安子合剂低剂量组、安子合剂高剂量组和阿司匹林组灌胃药物,空白对照组和模型组等体积蒸馏水灌胃,每天1次,连续14天。妊娠第8天取外周血,采用酶联免疫法（ELISA）检测血清ACA和TNF-α含量。妊娠第15天处死小鼠,测量胎鼠、胎盘重量,计算胚胎丢失率,ELISA法检测血清、胎盘ACA和TNF-α含量。2.筛选及分析安子合剂对胎盘差异蛋白表达影响:基于Label-Free蛋白质组学技术,将雌性BALB/c小鼠随机分为3组:空白对照组、模型组、安子合剂组（37.7mg/g·d,相当于成人剂量）,每组10只。采用Label-Free蛋白质组学方法筛选各组小鼠胎盘组织中的差异蛋白,进行GO、KEGG功能富集分析和互作网络分析等。应用Western blot验证与RSA发生发展有关的差异蛋白。分析安子合剂干预后ACA 阳性流产小鼠胎盘差异蛋白的表达。3.观察安子合剂通过小鼠胎盘Tim-3对Th1/Th2平衡的影响:将雌性BALB/c小鼠随机分为5组:空白对照组、模型组、安子合剂低剂量组、安子合剂高剂量组、阿司匹林组,每组10只。模型建立及给药按方法1进行。妊娠第15天处死小鼠,取胎盘、外周血。采用Western blot方法检测胎盘Tim-3表达量;流式细胞术检测血清Th1、Th2细胞数,计算Th1/Th2比值;采用ELISA检测血清Th1细胞因子（IL-2、IFN-γ）和Th2细胞因子（IL-6、IL-10）含量分析安子合剂干预ACA阳性流产小鼠通过Tim-3影响Th1/Th2平衡的机制。4.观察安子合剂的临床疗效及通过Tim-3影响Th1/Th2平衡的作用机制:收集2018年1月至2019年12月至江苏省中医院就诊的ACA 阳性患者60例,随机分为治疗组和对照组,每组各30例。治疗组予安子合剂口服,125ml/次,每日2次;对照组给予阿司匹林口服,100mg,1次/日。连续给药4周为一个疗程。观察两组患者治疗前后临床症状改善情况、血清ACA抗体的变化以及Tim-3及Th1（IL-2、IFN-γ）、Th2（IL-6、IL-10）细胞含量、Th1/Th2比值变化分析安子合剂通过影响Tim-3降低Th1/Th2比值的疗效机制。结果:1.安子合剂通过降低ACA和TNF-α含量减少小鼠胚胎丢失率:与模型组相比,安子合剂低剂量组、安子合剂高剂量组均能减少血清和胎盘中ACA滴度和TNF-α含量（P<0.05或P<0.01）;显着升高胎鼠、胎盘重量（P<0.05）,显着降低胚胎丢失率（P<0.05）。2.安子合剂对小鼠胎盘组织差异蛋白的影响:安子合剂干预后,在ACA 阳性小鼠胎盘组织中共鉴定出49个差异蛋白,其中39个差异蛋白显着上调,10个显着下调。生物信息学分析发现这些差异蛋白主要定位于细胞核,参与核酸结合,与细胞周期进程和脂质生物合成过程相关,其中10个蛋白存在相互作用;Western blot结果表明,与空白对照组比较,这些差异蛋白均在模型组胎盘中表达上升（P<0.05）,安子合剂干预后这些蛋白表达均有所下降（P<0.05）,其中差异蛋白Tim-3下降最为明显,为模型组的1/4。3.安子合剂对降低小鼠胎盘Tim-3和Th1/Th2比值的影响:与模型组相比,安子合剂低剂量组、安子合剂高剂量组均能显着降低Tim-3表达,减少Th1细胞数、增加Th2细胞数、降低Th1/Th2比值（P<0.05或P<0.01）;安子合剂低剂量组在降低Tim-3表达、减少Th1细胞数、增加Th2细胞数、降低Th1/Th2比值方面,效果显着优于阿司匹林组（P<0.05或 P<0.01）。4.安子合剂临床疗效及通过Tim-3对Th1/Th2平衡的影响:安子合剂治疗后不仅能有效改善患者的临床症状,治疗组中医证候疗效和综合疗效均明显优于对照组（P<0.05）,而且能有效降低血清ACA水平,有效降低Tim-3水平,有效减少Th1细胞数、增加Th2细胞数、降低Th1/Th2比值,降低Th1（IL-2、IFN-γ）细胞因子、升高Th2（IL-6、IL-10）细胞因子,治疗组各项指标均明显优于阿司匹林对照组（P<0.05）。结论:临床试验表明,安子合剂治疗ACA 阳性流产患者,临床疗效显着,不仅能明显改善患者临床症状,还能有效降低患者血清ACA水平,并通过抑制血清Tim-3水平来降低Th1/Th2比值;动物实验表明,安子合剂的安胎作用机制可能与药物影响ACA 阳性流产小鼠胎盘组织中大量差异蛋白表达（39个差异蛋白上升,10个差异蛋白下降）,抑制胎盘Tim-3水平,降低血清和胎盘中ACA和TNF-α含量,减少血清Th1细胞数、增加Th2细胞数、降低Th1/Th2的比值,维持母胎界面Th1/Th2的免疫平衡,达到避免妊娠丢失的目的密切相关。
刘会会[3]（2020）在《脾肾亏虚证复发性流产患者及RSA小鼠外周血Treg细胞、相关细胞因子表达及中药干预实验研究》文中提出1目的通过检测复发性流产患者及RSA小鼠模型外周血CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例及IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17、IL-23细胞因子的水平,分析Th1/Th2、Th17/Treg细胞在RSA发病机制中的意义;探讨补肾安胎冲剂对RSA小鼠免疫调控的作用机理,为补肾健脾中药临床干预复发性流产提供理论支持。2方法搜集2019年01月至2019年12月于安徽中医药大学第一附属医院妇科及生殖中心门诊及住院治疗的脾肾亏虚证复发性流产患者20例作为研究组;同一时期正常早期妊娠患者20例作为对照组。酶联免疫吸附（ELISA）法检测患者外周血IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17、IL-23因子的表达;流式细胞术检测患者外周血CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例。实验采用CBA/J×DBA/2的Clark经典反复流产模型小鼠30只,随机分为复发性流产模型组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组各10只;采用CBA/J×BALB/c妊娠小鼠10只作为正常妊娠组。从小鼠被检测出妊娠的第1天起,予以灌胃处理:正常妊娠与模型组给予蒸馏水灌胃;中药高、低剂量组,分别为23.4g/kg.d、11.7g/kg.d,蒸馏水稀释灌胃,连续给药15天。小鼠末次给药24h后,予以处死,取出子宫,剖视观察胚胎发育情况,计算流产率及胚胎丢失率;酶联免疫吸附法检测小鼠外周血IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17、IL-23因子的表达;流式细胞术检测小鼠外周血CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例。3结果3.1临床研究结果3.1.1两组患者一般情况比较两组患者年龄、孕周相比差异无统计学意义（P>0.05）。3.1.2 IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α在两组患者外周血中的表达与对照组比较,研究组患者外周血IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α水平显着升高,差异有显着统计学意义（P<0.01）。3.1.3 IL-4、IL-5、IL-10在两组患者外周血中的表达与对照组比较,研究组患者外周血IL-4水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;IL-5、IL-10水平显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）。3.1.4 IL-6、IL-17、IL-23在两组患者外周血中的表达与对照组比较,IL-6水平在研究组患者外周血中明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;IL-17、IL-23水平显着升高,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。3.1.5 CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例在两组患者外周血中的表达与对照组比较,研究组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.2实验研究结果3.2.1各组小鼠流产率、胚胎丢失率情况与正常妊娠组比较,模型组小鼠流产率、胚胎丢失率显着升高,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药高剂量组小鼠流产率、胚胎丢失率显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）;中药低剂量组小鼠流产率、胚胎丢失率明显低于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）;与中药低剂量组相比,中药高剂量组小鼠流产率、胚胎丢失率显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）。3.2.2 IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α在各组小鼠外周血中的表达与正常妊娠组比较,模型组小鼠外周血中IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α水平显着升高,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药高剂量组小鼠外周血中IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α水平显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药低剂量组小鼠外周血中TNF-α显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）,IL-2、IL-12水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）,IFN-γ水平降低,但差异无统计学意义（P>0.05）;与中药低剂量组比较,中药高剂量组小鼠外周血中IL-2、IFN-γ、TNF-α水平显着降低,差异具有显着统计学意义（P<0.01）,IL-12水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.2.3 IL-4、IL-5、IL-10在各组小鼠外周血中的表达与正常妊娠组比较,模型组小鼠外周血中IL-4、IL-5、IL-10水平显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药高剂量组小鼠外周血中IL-4、IL-5、IL-10水平显着升高,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药低剂量组小鼠外周血中IL-4水平明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,IL-5、IL-10水平升高,但差异无统计学意义（P>0.05）;与中药低剂量组比较,中药高剂量组小鼠外周血中IL-4、IL-5、IL-10水平显着升高,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。3.2.4 IL-6、IL-17、IL-23在各组小鼠外周血中的表达与正常妊娠组比较,模型组小鼠外周血中IL-6、IL-17、IL-23水平显着升高,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药高剂量组小鼠外周血中IL-6、IL-17、IL-23水平显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药低剂量组小鼠外周血中IL-6、IL-17水平显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）,IL-23水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与中药低剂量组相比,中药高剂量组小鼠外周血中IL-6、IL-17、IL-23水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.2.5 CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例在各组小鼠外周血中的表达与正常妊娠组比较,模型组小鼠外周血中CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药高剂量组小鼠外周血中CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例显着升高,差异有显着统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药低剂量组RSA小鼠外周血中CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例升高,但差异无统计学意义（P>0.05）;与中药低剂量组比较,中药高剂量组小鼠外周血中CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。4结论4.1 Th1细胞分泌的IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-12细胞因子水平在RSA患者及小鼠外周血中显着升高;Th2细胞分泌的IL-4、IL-5、IL-10细胞因子水平在RSA患者及小鼠外周血中显着降低;Th1/Th2失衡,Th1型细胞因子分泌增多,向Th1型偏移,提示Th1/Th2失衡与复发性流产密切相关。4.2 Th17细胞相关细胞因子IL-6、IL-17、IL-23水平在RSA患者及小鼠外周血中显着升高,CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例则显着降低,说明RSA在发病过程中,具有促炎作用的Th17型细胞因子水平上升,同时具有免疫抑制作用的Treg细胞减少,Th17/Treg平衡向Th17细胞偏移,下调母体对胎儿的免疫抑制,引起免疫平衡失调,导致流产。4.3补肾安胎冲剂能显着降低复发性流产小鼠模型的胚胎丢失率及流产率。4.4补肾安胎冲剂可抑制RSA小鼠外周血中Th1型细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α及Th17相关细胞因子IL-6、IL-17、IL-23分泌,上调RSA小鼠外周血中Th2型细胞因子IL-4、IL-5、IL-10水平及CD4+CD25+Foxp3+/CD4+、CD4+Foxp3+细胞比例,高剂量疗效更佳。4.5补肾安胎冲剂对母胎免疫耐受调节的可能机制4.5.1补肾安胎冲剂可抑制复发性流产小鼠Th1型细胞因子分泌,促进Th2型细胞因子分泌,纠正Th1/Th2平衡偏移,降低母胎免疫排斥,维持妊娠,有效降低了复发性流产小鼠的流产率及胚胎丢失率。4.5.2补肾安胎冲剂可促进Treg细胞的分化,下调Th17相关细胞因子水平,从而逆转Th17/Treg失衡,诱导母胎免疫耐受,有效降低了复发性流产小鼠的流产率及胚胎丢失率,治疗RSA。
路鸿艳[4]（2019）在《ATA+不孕妇女CD4+T细胞及相关因子的表达及其对IVF-ET治疗结局影响的研究》文中进行了进一步梳理研究目的探究甲状腺功能正常甲状腺自身抗体阳性（ATA+）患者不同时间点（取卵日、移植第5天、移植第14天）外周血中CD4+T细胞（Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞）及其相应的细胞因子（IFN-γ、IL-4、IL-17A和TGF-β1）和特征性转录因子（T-betmRNA、GATA-3mRNA、RORγtmRNA和FoxP3mRNA）的表达及其对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗结局的影响,进一步探究ATA对IVF-ET治疗产生不良结局的免疫学机制。研究方法1.第一部分回顾性分析ATA+患者对体外受精-胚胎移植及冻融胚胎移植妊娠结局的影响。2.第二部分前瞻性的选取2016年06月至2016年09月在青岛大学附属烟台毓璜顶医院生殖医学科就诊接受新鲜周期IVF治疗甲状腺功能正常的患者共80例（80个周期）,其中行胚胎移植的ATA+患者28例（28个周期）,甲状腺自身抗体阴性（ATA-）患者32例（32个周期）。3.取卵日、移植第5天、移植第14天抽取甲状腺功能正常ATA+患者和ATA-患者的外周血。4.采用流式细胞术（FCM）检测两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中CD4+T细胞即Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞的比例。5.采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中CD4+T细胞相应的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和TGF-β1的浓度。6.采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中CD4+T细胞特征性的转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA、RORγtmRNA和FoxP3mRNA的表达量。7.研究两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞的比例及其相应的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和TGF-β1的浓度、特征性转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA、RORγtmRNA和FoxP3mRNA的表达量以及其对IVF-ET治疗结局的影响。8.研究两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中Th1/Th2和Th17/Treg比值及其相应的细胞因子IFN-γ/IL-4和IL-17A/TGF-β1比值、特征性转录因子T-betmRNA/GATA-3mRNA和RORγtmRNA/FoxP3mRNA比值以及其对IVF-ET治疗结局的影响。9.分别对ATA+组患者和ATA-组患者不同时间点外周血中CD4+T细胞及其相应的细胞因子和特征性转录因子含量的变化以及其对IVF-ET治疗结局的影响进行研究。结果1.第一部分回顾性的研究显示IVF中ATA+患者TG-Ab和TPO-Ab的滴度明显增高,IVF优胚率、IVF移植优胚数、ICSI优胚数、ICSI移植胚胎数均明显降低（P<0.05）。ATA+患者TG-Ab和TPO-Ab的滴度与IVF受精率呈负相关性。在FET中ATA+患者早期流产率明显增高（P<0.05）。2.第二部分前瞻性的研究显示IVF-ET的患者超促排卵中HCG日大卵泡数、获卵数、移植优胚数的比较,在ATA+组显着少于ATA-组（P<0.05）。两组患者妊娠结局的比较显示生化妊娠流产率在ATA+组明显高于ATA-组（P<0.05）。ATA+患者中妊娠组的优胚数、优胚率、囊胚率、移植优胚数明显多于非妊娠组（P<0.05）。3.两组患者外周血中CD4+T细胞所占比例的研究,结果显示取卵日外周血中Th1细胞的比例在ATA+组明显高于ATA-组;移植第14天外周血中Th2细胞的比例在ATA+组显着低于ATA-组;ATA+患者在不同时间点外周血中Th17细胞的比例均明显增高,而Treg细胞的比例均明显降低（P<0.05）。ATA+患者中妊娠组Th17细胞的比例在不同时间点外周血中均显着低于非妊娠组（P<0.05）。4.两组患者Th1和Th2细胞、Th17和Treg细胞之间平衡关系的研究,结果显示ATA+患者不同时间点外周血中Th1/Th2和Th17/Treg比值均显着增高（P<0.05）,不同时间点外周血中Th1和Th2细胞、Th17和Treg细胞之间的平衡均被打破。ATA+患者中妊娠组Th17/Treg比值在不同时间点外周血中均明显低于非妊娠组（P<0.05）。5.分别对ATA+组患者和ATA-组患者不同时间点外周血中CD4+T细胞比例的变化进行研究,结果显示ATA+组患者Th1细胞在移植第5天外周血中的比例明显高于移植第14天外周血中的比例（P<0.05）,而ATA-组患者Th1细胞在移植第5天外周血中的比例高于移植第14天外周血中的比例（P>0.05）。6.两组患者外周血中CD4+T细胞相应的细胞因子浓度的研究,结果显示取卵日外周血中IFN-γ的浓度在ATA+组明显高于ATA-组;移植第14天外周血中IL-4的浓度在ATA+组显着低于ATA-组;ATA+患者在不同时间点外周血中IL-17A的浓度均明显增高,而TGF-β1的浓度均明显降低（P<0.05）。ATA+患者中妊娠组IL-17A的浓度在不同时间点外周血中均显着低于非妊娠组（P<0.05）。7.两组患者外周血中CD4+T细胞相应的细胞因子比值的研究,结果显示ATA+患者不同时间点外周血中IFN-γ/IL-4和IL-17A/TGF-β1比值均明显增高（P<0.05）。ATA+患者中妊娠组IL-17A/TGF-β1比值在不同时间点外周血中均明显低于非妊娠组（P<0.05）。8.分别对ATA+组患者和ATA-组患者不同时间点外周血中CD4+T细胞相应的细胞因子浓度的变化进行研究,ATA+组患者取卵日外周血中IFN-γ的浓度高于移植第5天外周血中的浓度（P>0.05）,而ATA-组患者取卵日外周血中IFN-γ的浓度明显低于移植第5天外周血中的浓度（P<0.05）。ATA+组患者移植第14天外周血中IL-4的浓度高于移植第5天外周血中的浓度（P>0.05）,而ATA-组患者移植第14天外周血中IL-4的浓度显着高于移植第5天外周血中的浓度（P<0.05）。9.两组患者外周血中CD4+T细胞相应的特征性转录因子表达量的研究,取卵日外周血中T-betmRNA的表达量在ATA+组明显高于ATA-组;移植第14天外周血中GATA-3mRNA的表达量在ATA+组显着低于ATA-组;ATA+患者在不同时间点外周血中RORγtmRNA的表达量均明显增高,而FoxP3mRNA的表达量均明显降低（P<0.05）。ATA+患者中妊娠组RORγtmRNA的表达量在不同时间点外周血中均显着低于非妊娠组（P<0.05）。10.两组患者外周血中CD4+T细胞相应的特征性转录因子比值的研究,结果显示ATA+患者不同时间点外周血中T-betmRNA/GATA-3mRNA和RORγtmRNA/FoxP3mRNA比值均显着增高（P<0.05）。ATA+患者中妊娠组RORγtmRNA/FoxP3mRNA比值在不同时间点外周血中均明显低于非妊娠组（P<0.05）。11.分别对ATA+组患者和ATA-组患者不同时间点外周血中CD4+T细胞相应的特征性转录因子表达量的变化进行研究,ATA+组患者移植第14天外周血中T-betmRNA的表达量明显高于取卵日外周血中的表达量（P<0.05）,而ATA-组患者移植第14天外周血中T-betmRNA的表达量低于取卵日外周血中的表达量（P>0.05）。ATA+组患者移植第14天外周血中RORγtmRNA的表达量明显高于取卵日外周血中的表达量（P<0.05）,而ATA-组患者移植第14天外周血中RORγtmRNA的表达量高于取卵日外周血中的表达量（P>0.05）。结论1.ATA+患者取卵日外周血中Th1细胞及其相应的细胞因子IFN-γ和转录因子T-betmRNA的含量均显着增高,可能是导致IVF-ET中获卵数少、优胚数少的原因之一。2.ATA+患者移植第14天外周血中Th2细胞及其相应的细胞因子IL-4和转录因子GATA-3mRNA的含量均明显降低,可能是导致IVF-ET中生化妊娠流产率增高的原因之一。3.ATA+患者不同时间点外周血中Th17细胞及其相应的细胞因子IL-17A和转录因子RORγtmRNA的含量均显着增高;而Treg细胞及其相应的细胞因子TGF-β1和转录因子FoxP3mRNA的含量均明显降低,可能是导致IVF-ET不良治疗结局的原因之一。4.ATA+患者不同时间点外周血中Th1/Th2和Th17/Treg比值均明显增高,即Th1和Th2细胞、Th17和Treg细胞之间的平衡均被打破,可能是ATA+患者导致IVF-ET治疗不良妊娠结局的免疫学机制之一。
黄俊生,刘晓洁[5]（2018）在《Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、BA在原因不明复发性流产中的价值研究》文中认为目的研究在原因不明复发性流产（URSA）中Th1/Th2型细胞因子、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、封闭抗体（BA）的价值。方法选取2014年1月至2018年1月在濮阳市妇幼保健院就诊的门诊患者,其中被明确诊断为URSA的142例患者作为观察组,选取未发生过自然流产的150例早期正常妊娠患者作为正常妊娠组,选取正常孕龄期150例未孕妇女作为正常未孕组。采用流式荧光法检测观察组免疫治疗前后、正常妊娠组和正常未孕组的患者Th1型细胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF-ɑ）、Th2型细胞因子（IL-4、IL-6、IL-10）水平和BA阳性率,采用酶联免疫吸附法检测M-CSF,并对检测结果进行统计分析。结果免疫治疗前,观察组IL-2、IFN-γ、TNF-ɑ水平高于正常妊娠组和正常未孕组,IL-4、IL-6、IL-10、M-CSF水平和BA阳性率低于正常妊娠组和正常未孕组,差异有统计学意义（P <0. 05）;正常妊娠组IL-2、IFN-γ、TNF-ɑ的水平低于正常未孕组,IL-4、IL-6、IL-10、M-CSF水平高于正常未孕组,差异有统计学意义（P <0. 05）;正常妊娠组和正常未孕组BA阳性率比较,差异无统计学意义（P> 0. 05）。免疫治疗后,观察组中可正常妊娠的患者IL-2、IFN-γ、TNF-ɑ的水平低于治疗前,IL-4、IL-6、IL-10、M-CSF水平和BA阳性率高于治疗前,差异有统计学意义（P <0. 05）;治疗后仍发生URSA的患者Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、BA水平与治疗前水平比较,差异无统计学意义（P> 0. 05）。结论 Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、BA与复发性流产（RSA）密切相关,通过联合检测Th1/Th2型细胞因子、M-CSF和BA的水平对URSA患者的诊断、治疗及预后具有重要的研究价值。
李丽[6]（2018）在《不明原因复发性流产与CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的关系研究》文中提出第一章不明原因复发性流产与CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2关系的临床研究目的:探讨临床上不明原因复发性流产与CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的关系方法:严格按照不明原因复发性流产的判定标准制定纳入排除标准,选择临床研究对象45例;同时选择正常妊娠孕妇作为对照组。收集研究对象的外周血,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞比例、采用ELISA法检测Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-2）与Th2细胞因子（IL-4、IL-10）的表达水平;采用RT-PCR方法检测Foxp3 m RNA在两组外周血中的表达量。结果:流式细胞术结果显示,对照组CD4+CD25+调节性T所占比例约为（7.95±1.13）%,流产组CD4+CD25+调节性T所占比例约为（4.06±1.53）%,组间具有显着性差异;ELISA检测结果显示,与对照组相比,流产组患者IFN-γ和IL-2水平显着性升高、IL-4和IL-10水平显着性降低;表现为对照组的IFN-γ/IL-4值为（0.41±0.15）,流产组为（0.89±0.21）,对照组的IL-2/IL-10比值（0.43±0.18）,流产组为（0.96±0.19）,两组比值均有显着性差异;对全部样本RT-PCR结果进行统计分析发现,与对照组相比,流产组的Foxp3表达水平显着降低,组间具有显着性差异。结论:URSA患者血液CD4+CD25+调节性T所占比例显着降低,Th1/Th2的比值升高,且Foxp3表达水平显着降低,这些均可能作为URSA患者的监控指标之一。第二章不明原因复发性流产应用主动免疫结合孕激素治疗的临床效果评价目的:探讨临床上,孕激素结合主动免疫治疗对URSA患者CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的影响方法:严格按照不明原因复发性流产的判定标准制定纳入排除标准,选择52例接受孕激素结合主动免疫治疗作为治疗组,45例作为流产组。治疗组患者经过主动免疫治疗,封闭抗体BA转阳后妊娠过程中给黄体酮治疗。流产组未经过上述任何治疗,直接进行入组。收集研究对象的外周血,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞比例,采用RT-PCR检测Foxp3的表达量,采用ELISA法检测Th1及Th2细胞因子的表达水平,化学发光法检测血清孕酮水平,同时患者随访统计妊娠结局。结果:流式细胞术结果显示,流产组CD4+CD25+调节性T所占比例约为（4.13±0.35）%,治疗组（7.09±0.90）%,组间具有显着性差异;与流产组相比,治疗组的Foxp3表达水平显着升高;ELISA检测结果显示,与流产组相比,治疗组患者IFN-γ和IL-2表达水平显着性降低,IL-4和IL-10表达水平显着性升高;经过孕激素结合主动免疫治疗后,患者血清孕酮水平明显高于对照组;治疗组妊娠成功率为86.54%,显着性高于流产组的66.67%;成功分娩率治疗组95.55%,显着性高于流产组的46.67%。结论:孕激素结合主动免疫治疗是治疗URSA的有效方法,其治疗机理可能与CD4+CD25+调节性T所占比例、Th1/Th2表达比值有关。第三章不明原因复发性流产小鼠模型CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的关系研究目的:探讨孕激素结合主动免疫治疗对不明原因复发性流产小鼠模型CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的影响。方法:选择CBA/JXDBA/2J小鼠、CBA/J×BALB/c小鼠模型。治疗组小鼠经过主动免疫治疗,妊娠过程中给黄体酮治疗;流产组未经过上述任何治疗。采用流式细胞仪、RT-PCR、Western blot及ELISA等生化方法检测各个指标;HE染色观察子宫内膜的组织学变化,免疫组化检测子宫中潜在靶点蛋白PGR和Foxp3的表达情况。结果:与对照组相比,流产组CD4+CD25+调节性T所占比例在脾脏内及外周血内显着降低、治疗组显着升高;Western blot结果显示,流产组的小鼠Foxp3蛋白表达显着性下降,治疗组小鼠的Foxp3蛋白表达显着性升高,接近于对照组小鼠,差异具有显着性;RT-PCR检测结果显示,流产组的小鼠Foxp3 m RNA显着性下降,治疗组小鼠的Foxp3 m RNA显着性升高;ELISA检测结果显示,治疗组小鼠IFN-γ和IL-2表达水平显着性降低,IL-4和IL-10表达水平显着性升高;HE染色结果显示,流产组的小鼠子宫内膜厚度降低,出现炎症细胞浸润,腺体数量减少;治疗组小鼠子宫内膜厚度有所增加,炎症细胞浸润减弱,腺体数量增加;免疫组化结果显示,流产组小鼠PGR蛋白表达水平显着性降低,治疗组小鼠子宫PGR蛋白表达量提高;对照组小鼠子宫表现出较强的Foxp3蛋白表达,流产组小鼠PGR蛋白表达水平显着性降低,治疗组小鼠子宫PGR蛋白表达量提高。结论:孕激素结合主动免疫治疗可显着改善URSA小鼠的免疫状态,可作为治疗小鼠URSA的有效方法,其治疗机理可能与孕激素蛋白受体PGR、Foxp3的表达调节炎症因子与T细胞有关。
黄山鹰,唐国玲,戴宇,刘庆芝,姚吉龙,都红蕾[7]（2017）在《反复自然流产患者外周血孕激素诱导阻断因子及Th1/Th2型细胞因子表达的研究》文中进行了进一步梳理目的探讨反复自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）患者血清中孕激素诱导阻断因子（PIBF）及Th1/Th2型细胞因子的异常表达及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法检测94例RSA患者血清中PIBF和Th1（IL-2、TNF-α、IFN-γ）/Th2（IL-10）型细胞因子水平,同时以72例正常未孕妇女及92例正常健康早孕妇女作为对照。结果3组研究对象外周血血清中各细胞因子的表达水平组间比较均有显着性差异,RSA组血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平显着高于正常健康早孕组,差异有统计学意义（P<0.05）,而PIBF、IL-10水平显着低于正常健康早孕组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 RSA患者血清中PIBF表达水平降低可导致反复自然流产,可作为预测反复自然流产的检测指标;Th1/Th2型细胞因子间平衡的改变与反复自然流产有关,而PIBF在调节Th1/Th2型细胞因子的平衡中起重要的作用。
彭莉,李霞[8]（2015）在《T淋巴细胞亚群在妊娠与复发性自然流产中作用及治疗研究进展》文中研究表明胚胎携带父方的MHC单元型,相对于母体犹如同种异体移植,母胎免疫耐受是妊娠建立与维持的前提,机体免疫系统在其中发挥着复杂而精细的调控作用。T淋巴细胞是机体免疫调节的主体,主要包括辅助性T淋巴细胞（Th cell）及调节性T淋巴细胞（Treg）,在抵御外界病原体感染、维持机体内环境稳定过程中发挥着重要作用。随着生殖免疫学研究的不断深入,已证实不同T淋巴细胞亚群在诱导
齐丹,侯莉莉,谈勇,吕珊珊[9]（2015）在《中药调控妊娠免疫耐受的研究进展》文中研究表明妊娠被认为是一个独特的半同种移植过程,正常妊娠有赖于母胎免疫关系的平衡,胚胎不被母体免疫系统排斥的实质是依赖于母胎之间的免疫耐受关系,这种特有的免疫耐受状态可能与局部内环境中细胞因子、黏附因子、自然杀伤细胞及调节性T细胞等动态平衡维系与相互作用密切相关[1]。妊娠是一个极其复杂而协调的生理过程,母一胎界面的免疫调节在妊娠免疫耐受中扮演着重要的角色,一旦这种免疫耐受格局被打破,将导致复发性流产(recurrent spontane-
徐澄,陆启滨[10]（2014）在《Th1/Th2细胞因子失衡致复发性流产的机制及治疗》文中研究指明复发性流产的发生机制错综复杂,近年来其与Th1/Th2细胞因子失衡的关系研究成为热点,Th1型细胞因子过度表达,对滋养层细胞产生细胞毒作用而形成免疫损伤,直接或间接影响胚胎着床及发育,而Th2型细胞因子维持母胎界面的免疫耐受作用受到抑制,致妊娠丢失,Th1/Th2型细胞因子平衡向Th1偏移与复发性流产密切相关。复发性流产的西医治疗主要有主动免疫治疗和被动免疫治疗,中医药治疗重视整体调理,辨证施治,可双向调节人体免疫功能,治疗的风险及不良反应少。
二、反复自然流产患者NO与Th1/Th2型细胞因子水平的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、反复自然流产患者NO与Th1/Th2型细胞因子水平的变化（论文提纲范文）
（1）H2S通过干扰滋养细胞入侵及调控母胎界面TH1/TH2平衡影响早孕的相关作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 H_2S通过干扰滋养细胞入侵影响早孕及其作用机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 H_2S通过调控TH1/TH2平衡影响早孕及其作用机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 英文论文全文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（2）基于蛋白质组学技术探讨安子合剂治疗ACA阳性流产的Tim-3调控机制及临床疗效（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 中医学对ACA阳性流产的认识 |
| 1.1 传统中医学对ACA阳性流产的认识 |
| 1.2 现代中医学对ACA阳性流产的认识 |
| 2. 西医学对ACA阳性流产的研究进展 |
| 2.1 ACA阳性流产的诊断及检测研究 |
| 2.2 ACA阳性流产的病理机制研究 |
| 2.3 ACA阳性流产的治疗研究 |
| 3. 复发性流产的蛋白质组学研究 |
| 3.1 蛋白质组学概念及技术 |
| 3.2 蛋白质组学技术与复发性流产 |
| 3.3 Tim-3与复发性流产疾病的研究进展 |
| 4. Th1、Th2与ACA阳性流产关系 |
| 4.1 Th1/Th2平衡与ACA阳性流产的关系 |
| 4.2 Th1细胞因子与ACA阳性流产的关系 |
| 4.3 Th2细胞因子与ACA阳性流产的关系 |
| 5. 安子合剂的前期研究基础 |
| 5.1 安子合剂的组方研究 |
| 5.2 安子合剂前期临床研究 |
| 5.3 安子合剂前期实验研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 安子合剂对ACA阳性流产小鼠胚胎丢失率及胎盘ACA和TNF-α含量的影响 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 饲料 |
| 2.3 用药 |
| 2.4 主要实验试剂及仪器 |
| 2.5 分组、造模及受孕标志 |
| 2.6 给药方法 |
| 2.7 主要指标检测方法 |
| 2.8 统计学分析方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 安子合剂对胎鼠、胎盘重量的影响 |
| 3.2 安子合剂对胚胎丢失率的影响 |
| 3.3 安子合剂对血清和胎盘ACA滴度的影响 |
| 3.4 安子合剂对血清和胎盘TNF-α浓度的影响 |
| 4. 结论 |
| 5. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于Label Free蛋白质组学筛选安子合剂干预ACA阳性流产小鼠胎盘组织差异蛋白 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 饲料 |
| 2.3 用药 |
| 2.4 主要实验试剂及仪器 |
| 2.5 分组、造模及受孕标志 |
| 2.6 给药方法 |
| 2.7 Label Free蛋白质组学分析 |
| 2.8 生物信息学分析 |
| 2.9 胎盘中差异蛋白表达检测 |
| 2.10 统计学分析方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 样品SDS-PAGE检测结果 |
| 3.2 数据质控 |
| 3.3 蛋白定量分析 |
| 3.4 蛋白差异分析 |
| 3.5 差异蛋白生物信息学分析 |
| 3.6 RSA相关差异蛋白的Western blot验证 |
| 4. 结论 |
| 5. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 安子合剂通过Tim-3调控ACA阳性流产小鼠母胎界面Th1/Th2平衡的作用机制研究 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 饲料 |
| 2.3 用药 |
| 2.4 主要试剂及仪器 |
| 2.5 分组、造模及受孕标志 |
| 2.6 给药方法 |
| 2.7 血清中IL-6、IL-10、IL-2及IFN-γELISA检测 |
| 2.8 血清中Th1/Th2细胞平衡检测 |
| 2.9 胎盘中Tim-3表达检测 |
| 2.10 统计学分析方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 安子合剂对胎盘Tim-3表达的影响 |
| 3.2 安子合剂对Th1/Th2细胞平衡的影响 |
| 3.3 安子合剂对血清中Th1细胞因子IL-2和IFN-γ水平的影响 |
| 3.4 安子合剂对血清中Th2细胞因子IL-6和IL-10水平的影响 |
| 4. 结论 |
| 5. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 临床研究 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 研究对象 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 病例选择标准 |
| 3. 研究方法 |
| 3.1 研究分组 |
| 3.2 治疗方案 |
| 3.3 观察指标 |
| 3.4 疗效评定标准 |
| 3.5 统计学分析方法 |
| 4. 研究结果 |
| 4.1 一般资料比较 |
| 4.2 治疗前后主要指标比较 |
| 4.3 安全性指标观察 |
| 5. 结论 |
| 6. 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 附录1.脾肾两虚、血热夹淤型ACA阳性RSA临床病例观察表 |
| 附录2. 脾肾两虚、血热夹瘀型ACA阳性RSA患者中医症状积分表 |
| 附录3. 缩略词表 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）脾肾亏虚证复发性流产患者及RSA小鼠外周血Treg细胞、相关细胞因子表达及中药干预实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 一 研究内容 |
| 临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方案 |
| 3 统计学方法 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学方法 |
| 二 研究结果 |
| 临床研究 |
| 1 两组患者一般情况比较 |
| 2 IL-2、 IL-12、 IFN-γ 、TNF-α在两组患者外周血中的表达 |
| 3 IL-4、IL-5、IL-10 在两组患者外周血中的表达 |
| 4 IL-6、IL-17、IL-23 在两组患者外周血中的表达 |
| 5 CD4~+CD25~+Foxp3~+/CD4~+、CD4~+Foxp3~+细胞比例在两组患者外周血中的表达 |
| 实验研究 |
| 1 各组小鼠流产率、胚胎丢失率情况 |
| 2 IL-2、 IL-12、 IFN-γ 、TNF-α在各组小鼠外周血中的表达 |
| 3 IL-4、IL-5、IL-10 在各组小鼠外周血中的表达 |
| 4 IL-6、IL-17、IL-23 在各组小鼠外周血中的表达 |
| 5 CD4~+CD25~+Foxp3~+/CD4~+、CD4~+Foxp3~+细胞比例在各组小鼠外周血中的表达 |
| 三 讨论 |
| 1 中医学对RSA病因病机认识 |
| 2 现代医学对RSA病因研究 |
| 3 Th1/Th2、Th17/Treg细胞及相关细胞因子与妊娠母胎免疫 |
| 4 Th1/Th2、Th17/Treg失衡与RSA |
| 5 补肾健脾法与Th1/Th2、Th17/Treg失衡所致RSA关系 |
| 6 补肾安胎冲剂免疫学理论研究 |
| 7 RSA患者外周血Treg细胞及相关细胞因子表达情况 |
| 8 补肾安胎冲剂对RSA小鼠的影响 |
| 四 结论 |
| 五 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 补肾健脾法治疗免疫型复发性流产的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（4）ATA+不孕妇女CD4+T细胞及相关因子的表达及其对IVF-ET治疗结局影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 ATA~+患者对体外受精-胚胎移植及冻融胚胎移植妊娠结局的影响 |
| 资料与方法 |
| 1 临床资料 |
| 2 分组情况 |
| 3 治疗方法 |
| 4 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 IVF中两组患者一般情况及卵巢刺激情况的比较 |
| 2 IVF-ET中两组患者妊娠结局的比较 |
| 3 IVF中 ATA~+组TG-Ab、TPO-Ab的滴度与IVF受精率、卵裂率、优胚率的相关性 |
| 4 IVF-ET中 ATA~+组中妊娠者与非妊娠者各参数的比较 |
| 5 FET中两组患者一般情况的比较 |
| 6 FET中两组患者移植情况及妊娠结局的比较 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 ATA~+不孕妇女CD4~+T细胞及相关因子的表达及其对IVF-ET治疗结局影响的研究 |
| 研究对象 |
| 1 资料收集 |
| 2 IVF 的方案 本研究采用以下两种卵巢刺激方案 |
| 3 取卵操作方法 |
| 4 IVF受精 |
| 5 胚胎质量的评价 |
| 6 胚胎移植(ET) |
| 7 黄体支持 |
| 8 确诊妊娠 |
| 材料和方法 |
| 试验方法流程图 |
| 1 流式细胞术(FCM) |
| 2 酶联免疫吸附法(ELISA) |
| 3 逆转录多聚酶链反应(RT-RCR) |
| 结果 |
| 1 IVF-ET中两组患者一般情况、卵巢刺激情况及妊娠结局的比较 |
| 2 IVF-ET中两组患者不同时间点外周血中Th1 细胞、Th2 细胞、Th17 细胞和Treg细胞的比例 |
| 3 IVF-ET中两组患者不同时间点外周血中Th1/Th2、Th17/Treg的比值 |
| 4 IVF-ET中两组组内不同时间点外周血中CD4~+T细胞比例的变化 |
| 5 IVF-ET中两组患者不同时间点外周血中IFN-γ、IL-4、IL-17A和 TGF-β1 的浓度 |
| 6 IVF-ET中两组患者不同时间点外周血中IFN-γ/IL-4、IL-17A/TGF-β1 的比值 |
| 7 IVF-ET中两组组内不同时间点外周血中细胞因子浓度的变化 |
| 8 IVF-ET中两组患者不同时间点外周血中T-betmRNA、GATA-3mRNA、RORγtmRNA和FoxP3mRNA的表达量 |
| 9 IV F- E T中两组患者不同时间点外周血中T-b e t m R N A/ G ATA-3 m R N A、RORγtmRNA/FoxP3mRNA的比值 |
| 10 IVF-ET中两组组内不同时间点外周血中转录因子表达量的变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（5）Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、BA在原因不明复发性流产中的价值研究（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 样本采集 |
| 1.2.2 仪器与试剂 |
| 1.2.3 治疗方法 |
| 1.2.4 检测方法 |
| 1.3 观察指标 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 Th1/Th2型细胞因子、M-CSF水平 |
| 2.2 BA阳性率 |
| 3 讨论 |
（6）不明原因复发性流产与CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的关系研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 绪论 |
| 1. 自然流产及复发性流产 |
| 2. 流产发生的病因 |
| 2.1 自身免疫型 |
| 2.2 同种免疫型 |
| 3. 诊断及治疗 |
| 3.1 复发性流产的诊断 |
| 3.2 复发性流产的治疗 |
| 第一章 不明原因复发性流产与CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2 关系的临床研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 临床研究对象选择 |
| 2.2 一般临床指标检测 |
| 2.3 安全性检查 |
| 2.4 流式细胞术检测患者血CD4+CD25+调节性T细胞 |
| 2.5 RT-PCR检测外周血Foxp3 mRNA表达 |
| 2.6 ELISA法检测Th1 型细胞因子(IFN-γ、IL-2)、Th2(IL-4、IL-10)及Th1/Th2比值 |
| 2.7 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 一般临床指标检测 |
| 3.2 安全性检查结果 |
| 3.3 外周血CD4+CD25+调节性T细胞流式检测结果 |
| 3.4 RT-PCR检测外周血Foxp3 mRNA表达 |
| 3.5 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Th1/Th2 ELISA检测结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 不明原因复发性流产应用主动免疫结合孕激素治疗的临床效果评价 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 临床样本选择 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 流式细胞术检测患者血CD4+CD25+调节性T细胞 |
| 2.4 RT-PCR检测外周血Foxp3 mRNA表达 |
| 2.5 ELISA法检测Th1 型细胞因子(IFN-γ、IL-2)、Th2(IL-4、IL-10)及Th1/Th2比值 |
| 2.6 血清孕酮水平检测 |
| 2.7 妊娠结果分析 |
| 2.8 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.2 流式细胞术检测患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞结果 |
| 3.3 RT-PCR检测外周血Foxp3 mRNA表达 |
| 3.4 ELISA法检测Th1 型细胞因子(IFN-γ、IL-2)、Th2(IL-4、IL-10)及Th1/Th2比值结果 |
| 3.5 BA变化和血清孕酮水平检测结果 |
| 3.6 妊娠结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 不明原因复发性流产小鼠模型CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的关系研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶解的配置方法 |
| 1.4 动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组及孕鼠模型的建立 |
| 2.2 孕激素结合主动免疫治疗 |
| 2.3 胚胎吸收率计算 |
| 2.4 脾脏CD4+CD25+调节性T细胞流式细胞仪检测 |
| 2.5 外周血CD4+CD25+调节性T细胞流式细胞仪检测 |
| 2.6 检测CD4+CD25+T细胞中Foxp3 的表达 |
| 2.7 ELISA法检测外周血Th1 型细胞因子(IFN-γ、IL-2)、Th2(IL-4、IL-10)及Th1/Th2比值 |
| 2.8 HE染色 |
| 2.9 免疫组化检测子宫中PGR和 Foxp3 蛋白表达 |
| 2.10 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组小鼠体重 |
| 3.2 胚胎吸收率 |
| 3.3 脾脏CD4+CD25+调节性T细胞流式细胞仪检测结果 |
| 3.4 外周血CD4+CD25+调节性T细胞流式细胞仪检测结果 |
| 3.5 Foxp3 蛋白的Western blot检测结果 |
| 3.6 Foxp3 蛋白的RT-PCR检测结果 |
| 3.7 ELISA法检测IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Th1/Th2结果 |
| 3.8 子宫内膜的HE染色 |
| 3.9 免疫组化检测子宫中PGR蛋白表达 |
| 3.10 免疫组化检测子宫中Foxp3蛋白表达 |
| 4 讨论 |
| 全文结论 |
| 中英文缩略词表 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（7）反复自然流产患者外周血孕激素诱导阻断因子及Th1/Th2型细胞因子表达的研究（论文提纲范文）
| 1 资料和方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 PIBF与反复自然流产的关系 |
| 3.2 Th1/Th2型细胞因子与反复自然流产的关系 |
| 3.3 反复自然流产患者血清PIBF含量与Th1/Th2型细胞因子的关系 |
（8）T淋巴细胞亚群在妊娠与复发性自然流产中作用及治疗研究进展（论文提纲范文）
| 1 T淋巴细胞与正常妊娠 |
| 2 T淋巴细胞亚群失衡与RSA |
| 3调节T淋巴细胞亚群平衡治疗RSA研究进展 |
（10）Th1/Th2细胞因子失衡致复发性流产的机制及治疗（论文提纲范文）
| 1 Th1/Th2细胞因子失衡致复发性流产的机制 |
| 2 Th1/Th2细胞因子失衡致复发性流产的治疗 |
| 2.1 西医治疗 |
| 2.1.1 主动免疫治疗 |
| 2.1.2 被动免疫治疗 |
| 2.2 中医药治疗 |
| 2.2.1 实验研究 |
| 2.2.2 临床研究 |
| 3 结语 |
四、反复自然流产患者NO与Th1/Th2型细胞因子水平的变化（论文参考文献）
- [1]H2S通过干扰滋养细胞入侵及调控母胎界面TH1/TH2平衡影响早孕的相关作用机制研究[D]. 王班琴. 山东大学, 2021(11)
- [2]基于蛋白质组学技术探讨安子合剂治疗ACA阳性流产的Tim-3调控机制及临床疗效[D]. 谢雅贞. 南京中医药大学, 2020(08)
- [3]脾肾亏虚证复发性流产患者及RSA小鼠外周血Treg细胞、相关细胞因子表达及中药干预实验研究[D]. 刘会会. 安徽中医药大学, 2020(03)
- [4]ATA+不孕妇女CD4+T细胞及相关因子的表达及其对IVF-ET治疗结局影响的研究[D]. 路鸿艳. 青岛大学, 2019(07)
- [5]Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、BA在原因不明复发性流产中的价值研究[J]. 黄俊生,刘晓洁. 河南医学研究, 2018(22)
- [6]不明原因复发性流产与CD4+CD25+调节性T细胞表达及Th1、Th2的关系研究[D]. 李丽. 暨南大学, 2018(03)
- [7]反复自然流产患者外周血孕激素诱导阻断因子及Th1/Th2型细胞因子表达的研究[J]. 黄山鹰,唐国玲,戴宇,刘庆芝,姚吉龙,都红蕾. 黑龙江医学, 2017(12)
- [8]T淋巴细胞亚群在妊娠与复发性自然流产中作用及治疗研究进展[J]. 彭莉,李霞. 中国免疫学杂志, 2015(11)
- [9]中药调控妊娠免疫耐受的研究进展[J]. 齐丹,侯莉莉,谈勇,吕珊珊. 中国中西医结合杂志, 2015(09)
- [10]Th1/Th2细胞因子失衡致复发性流产的机制及治疗[J]. 徐澄,陆启滨. 长春中医药大学学报, 2014(05)