一、家蚕雄性品种引进试验及其应用前景分析（论文文献综述）
于茜[1]（2021）在《松毛虫赤眼蜂繁殖性状的遗传改良研究》文中认为松毛虫赤眼蜂Trichogramma dendrolimi是广泛应用于防治多种鳞翅目害虫卵的寄生性天敌。在松毛虫赤眼蜂中,Wolbachia可诱导其发生产雌孤雌生殖现象。产雌孤雌生殖的松毛虫赤眼蜂具有繁殖效率高,定殖能力强,生产成本低等诸多优势,因而对赤眼蜂的规模化繁育及田间应用具有重要意义。然而,产雌孤雌生殖品系的松毛虫赤眼蜂种群遗传多样性低,繁殖力等适合度指标存在退化风险。现有的两性生殖品系种群来源于自然种群,也未经过系统性人工选育,存在优势性状不明显,野外防治效果不稳定等劣势。因此,筛选具有优良性状的赤眼蜂品系,并对产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂进行遗传改良是提高生防效果的关键环节。与农作物、家养动物及经济昆虫的选育和改良工作相比,以赤眼蜂为代表的天敌昆虫的选育工作仍处于原始阶段。本研究以松毛虫赤眼蜂繁殖力性状的遗传改良为例,初步探索了松毛虫赤眼蜂两性生殖品系和产雌孤雌生殖品系的遗传改良方法。本文首先评价了不同地理种群的两性生殖品系松毛虫赤眼蜂和产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂的生物学性状。通过室内长期筛选,建立了高繁殖力两性生殖品系松毛虫赤眼蜂种群,并验证了繁殖力优势性状的稳定性和可遗传性。通过渐渗杂交方法对产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂繁殖力性状进行定向改良。研究结果将为松毛虫赤眼蜂生物学性状的遗传改良提供理论依据。全文结果如下:1.通过比较不同地理种群的两性生殖品系松毛虫赤眼蜂和产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂母代和子代的生物学指标发现:“辽中1号”种群（LZ1-W-,133.65±5.95）和红安种群（HA-W-,118.74±8.17）繁殖力均显着高于其余种群;LZ1-W-种群（12.71±0.71 d）、HA-W-种群（11.48±0.83 d）和彰武产雌孤雌生殖种群（ZW-W+,11.55±0.73 d）成虫寿命均显着高于其余种群;桓仁两性生殖种群（HR-W-,1.01±0.01头）单卵出蜂数最高,显着高于其余种群。两性生殖品系成虫个体大小均大于产雌孤雌生殖品系。朝阳种群（CY-W-,11.48±0.12 d）子代发育历期最长,显着长于其余种群;HR-W-种群（10.36±0.05 d）和HA-W-种群（10.30±0.05 d）子代发育历期均显着短于其余种群。结果表明,两性生殖品系松毛虫赤眼蜂总体上较优,其中LZ1-W-、HA-W-各适合度指标均较优;产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂中ZW-W+较优。2.将12个地理种群的两性生殖品系松毛虫赤眼蜂混合饲养,每代选取繁殖力指标为前20%的雌蜂繁育下一代,共进行10代汰选。全部雌蜂、淘汰种群雌蜂和选育种群雌蜂繁殖力均随汰选代数增加而显着上升。选取10代选育后雌蜂建立单雌系并连续饲养5代后,发现随代数增加,雌蜂繁殖力（χ2=8.75,P=0.068）、单卵出蜂数（χ2=1.22,P=0.88）、雌蜂比（χ2=3.13,P=0.54）和个体大小（χ2=3.49,P=0.48）均保持稳定,但雌蜂寿命受代数显着影响（χ2=58.29,P<0.001）。F1代和F5代雌蜂寿命均显着高于其余世代。3.通过测定12个地理种群松毛虫赤眼蜂繁殖力发现,通辽种群（TL-W-,73.33±6.09）和CY-W-种群（82.38±5.23）繁殖力均显着低于除吉林白城种群（JB-W-,86.81±5.00）和吉林农大种群（JD-W-,91.11±5.41）以外的其余种群。TL-W-种群（0.76±0.02头）单卵出蜂数最低。低繁殖力种群（LF,χ2=5.73,P=0.33）和高繁殖力种群（HF,χ2=12.06,P=0.06）繁殖力指标符合正态性假定（LF种群偏斜度=-0.12,峰度=-0.77;HF种群偏斜度=0.83,峰度=1.17）,而两种群杂交F1代出现性状分离（χ2=29.71,P<0.001;种群偏斜度=0.74,峰度=-0.64;显性度系数D=0.0064,h=0.51）。4.通过渐渗杂交方法,利用两性生殖品系雄蜂逐代与产雌孤雌生殖品系的雌蜂杂交,将两性生殖品系的核基因定向渗入至产雌孤雌生殖品系雌蜂,逐代观测杂交子代雌蜂的繁殖力、寿命、羽化率和个体大小。雌蜂繁殖力受不同品系和世代间的交互作用显着影响（χ2=60.77,P<0.001）。渐渗杂交系F0代（70.66±3.61）和产雌孤雌生殖品系F0代（55.54±3.77;z=1.27,P=0.45）雌蜂间繁殖力无显着差异,但杂交F1代（156.10±5.36）、杂交F2代（189.89±6.42）和杂交F3（176.10±5.89）雌蜂繁殖力均分别显着高于产雌孤雌生殖品系F1代（55.51±5.11;z=10.53,P<0.001）、F2代（54.31±6.78;z=9.68,P<0.001）和F3代（88.00±5.96;z=9.19,P<0.001）。
钱荷英,张潇,叶夏裕,赵国栋,李刚,刘明珠,徐安英[2]（2020）在《中国家蚕种质资源与品种选育研究进展》文中认为中国作为世界养蚕业的发祥地和家蚕的起源与分化中心,养蚕历史悠久,蚕区分布辽阔,经过长期的人工选择和自然淘汰,家蚕品种分化复杂多样,因此蚕种质资源丰富。整理、汇总了中国蚕种质资源研究现状,目前,我国拥有蚕种质资源4 500多份,保存在27个省（市、区）的32家科研教学机构中,主要包括地方品种、改良种、国外引进品种、多化性品种、种质创新材料及基础材料、基因突变系统、测交系、近等基因系等几大类。这些种质资源最大限度地保存了我国蚕资源的遗传多样性,是家蚕遗传育种最主要的亲本来源,也是遗传工程、细胞工程等生物研究领域最重要的物质基础。我国家蚕品种选育也有着漫长的发展历程,中华人民共和国成立后的70年主要经历3个发展阶段,取得卓着成绩,1949—2010年合计育成家蚕新品种204个,包括春用品种和春秋兼用品种103个,夏秋用品种85个,特殊用途品种16个。中国多数蚕区因地制宜地推广上述品种,完成了4次家蚕品种的更新换代,今后家蚕新品种选育将呈现更加多样化的格局,满足蚕桑产业集约化、多元化发展的需求。
王晓兰[3]（2020）在《韭菜迟眼蕈蚊性别决定关键基因tra2的克隆及功能探索》文中研究表明韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga是我国特有的根蛆类害虫,尤喜食韭菜,分布广泛却又难以防治。目前韭菜迟眼蕈蚊的防治手段大多为化学防治,不科学用药不仅使昆虫的抗药性增加,而且极易导致人、畜中毒以及环境污染等问题。因此,寻找绿色、安全、环保的韭菜迟眼蕈蚊防治方法至关重要。在饲养中发现韭菜迟眼蕈蚊以产单一性别后代为主,产双性别后代较少,其性别决定机制及其应用价值引起我们的研究兴趣。本研究以韭菜迟眼蕈蚊为研究对象,对性别决定关键基因Botra2及其功能进行了初步研究,得到的主要结论如下:1、分离并鉴定了韭菜迟眼蕈蚊Botra2基因,得到了2个Botra2转录本且均为性别非特异性剪接。2、Botra2基因在整个韭菜迟眼蕈蚊的生长发育期（卵、幼虫、蛹、成虫）均有表达,蛹期和成虫期均有显着高表达,四龄幼虫到蛹期这一阶段表达量突增,且雌成虫中的表达量高于雄成虫。3、沉默了韭菜迟眼蕈蚊Botra2基因后,韭菜迟眼蕈蚊雌雄虫体内Botra2表达量均显着下调,且雌虫体内的Botra2得到了更好的抑制。4、对RNA干扰后的韭菜迟眼蕈蚊成虫进行内生殖器、外部形态测量以及雌虫产卵量、后代孵化率统计,发现其卵巢在形态上有一定程度缩短并且显示出一些缺陷特征,如比通常小,卵散乱、不规则等;雌虫体长和翅长有显着性的增长,相反,雄虫体长和翅长却显着性缩短,并且其外生殖器有一定程度的缩小;单雌产卵量和后代产卵率表现出显着降低。研究结果初步明确了韭菜迟眼蕈蚊Botra2基因的功能,并为害虫的绿色防控提供了研究基础。
王永峰[4]（2020）在《一种诱导的高蛋白血症无脊椎动物疾病模型及其病理影响研究》文中提出高蛋白血症是一种循环血液系统蛋白质含量异常升高的重大代谢疾病,临床多见于肝硬化、多发性骨髓瘤、血管肉瘤病、代谢性酸中毒、肾病,以及腹膜炎、慢性淋巴瘤、腹腔脓肿和线虫感染等疾病的并发症。由于临床很难区分高蛋白血症与原发疾病或感染对机体的影响,已有的报道仅限于对血液理化性质影响等基础数据收集,以及比较高蛋白血症与低蛋白血症、高血糖和高脂血症等常见代谢疾病的基础数据差异,缺乏对相关病理机制的研究。目前为止,还没有可靠的高蛋白血症疾病动物模型与建模方法,高蛋白血症的发病机制与临床治疗方法研究、治疗药物开发一直停滞不前。因此,亟需开发出可靠的高蛋白血症动物模型和建模方法。为此,本文在本研究室已有的研究基础上,利用中国特色的无脊椎模式动物家蚕,重建了高蛋白血症动物模型,调查了高血浆蛋白浓度（PPC）对血液代谢以及血液系统先天免疫的影响,评估了高PPC对代谢和解毒组织脂肪体的重塑发育的损害及影响机制,并进一步研究了高PPC对生殖毒性这一机体长期影响的调控机制。主要研究结果如下:（1）高蛋白血症疾病模型的重建基于研究室已有的工作基础,通过封堵家蚕成熟幼虫的吐丝孔,阻止丝腺中的丝蛋白质向体外分泌,进一步利用变态发育过程中丝腺的退化解离过程,使丝腺内的大量丝蛋白质快速释放到循环系统,导致血浆蛋白浓度（PPC）水平极速升高,并持续高于对照家蚕7倍以内,构建出致死率从0%至100%可控的不同程度的家蚕高蛋白血症疾病模型。高PPC导致家蚕变态发育过程中化蛹变态异常,重症模型最终全部死亡。血液生化检测结果表明,模型组家蚕的PPC逐渐升高,但血糖、血清甘油三酯和血清总胆固醇浓度无统计意义的显着变化。表明重建了无原发症影响、PPC水平可控的高蛋白血症家蚕模型（AM）。（2）高血浆蛋白浓度对血淋巴代谢的影响血淋巴代谢组学分析结果显示,高PPC引起显着变化的差异代谢物主要富集在氨基酸代谢通路,包括丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等。代谢通路整合分析发现,糖酵解途径、脂质代谢、TCA循环以及尿素循环等代谢途径也发生了显着的变化。其中氨基酸代谢出现整体上调的现象,多种重要的氨基酸,如色氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺等都显着升高。糖代谢也出现了上调,但脂质代谢和TCA循环出现了下调的现象,尿素循环产生的尿素含量也显着降低。显示高PPC促进了氨基酸代谢,但却降低了机体整体的代谢水平。（3）高血浆蛋白浓度影响家蚕血液系统先天免疫代谢和解毒组织脂肪体的转录组学免疫分析结果显示,GO分析和KEGG分析发现高PPC导致了参与先天免疫应答的抗菌肽（AMPs）,及其调控NF-κB信号途径相关的基因转录水平发生了显着变化。进一步血浆抗菌活性实验结果表明,高PPC提高了血淋巴对E.coli的抗菌活性,但却抑制了对S.aureus的抗菌活性。高PPC诱导血细胞和脂肪体中6种类型的AMPs基因m RNA水平显着上调,其中血细胞中的defensin基因m RNA水平在建模处理后192 h比CK组升高了2300倍。而AMPs的上调表达,则是受到NF-κB信号中Toll途径和Imd途径的调控。高PPC导致血淋巴中循环血细胞的类型出现显着变化,其中承担免疫功能的颗粒细胞在血细胞总数中的比例升高了1倍左右。高PPC还通过抑制酚氧化酶原PPO1、PPO2的m RNA表达,进而抑制了PO活性,降低血淋巴的黑化免疫作用。（4）高血浆蛋白浓度影响代谢组织脂肪体的重塑发育以代谢和解毒组织脂肪体（FB）为对象,以幼虫化蛹变态过程脂肪体形态和功能重塑发育为靶标的调查结果显示,高PPC阻碍了FB的重塑再生发育过程,重塑过程延迟了48 h以上。致病机制研究结果显示,高PPC通过减弱内分泌激素的作用,减弱FB组织的细胞自噬和凋亡作用,阻止变态发育期FB重塑再生;同时高PPC诱发了FB组织氧化应激压力增大、氨基酸转化功能紊乱。建模处理后补充内分泌蜕皮激素的活性物质20-羟基蜕皮酮,能够有效拯救高PPC诱导的FB组织受阻的重塑再生过程,并且蜕皮激素作用信号途径相关基因Bm Ec R和Bm E74A、组织解离相关酶基因Bm Cat B和细胞自噬凋亡信号途径相关基因Bm Atg6、Bm Atg8和Bm Dronc的m RNA水平均有一定程度的恢复（5）高血浆蛋白浓度对生殖发育的影响高PPC对家蚕具有深远意义的生殖发育的影响的调查结果显示,高PPC显着降低了雌性家蚕产卵的数量和质量。进一步研究表明,高PPC抑制了雄性精巢和雌性卵巢的发育,包括生殖腺系数降低、发育延迟。同时,生精囊体外培养实验结果表明,雄性生殖腺经历过高蛋白血淋巴环境后,即使脱离了高PPC环境,高PPC对后期生精囊的发育依然有显着不良影响,并对家蚕生殖腺具有毒性累积和毒性滞后效应。致病机制研究结果显示,高PPC抑制了FB中卵黄蛋白原（Vg）的合成,并通过降低20-羟基蜕皮酮受体Ec R和E74信号作用途径,阻碍了Vg的转运;同时高PPC诱导了雌性卵巢组织的细胞自噬和凋亡作用,降低了Vg受体Vg R的表达,阻碍了卵黄蛋白的吸收,进而影响了卵巢的发育。
王玉梅[5]（2020）在《耐高温家蚕的制备及转基因家蚕的安全性评价》文中研究表明家蚕（Bombyx mori）是一种具有重要经济价值的泌丝昆虫,属于变温动物,最适生长温度为25℃。在养蚕业中,低温引起家蚕生长缓慢,高温导致蚕病的发生,降低蚕茧产量及茧丝质量。本实验室前期研究发现,Bmhsp19.9在高温和低温处理后的家蚕中都被诱导上调表达,推测其可能有助于家蚕对极端温度的耐受性。本研究制备了增量表达Bmhsp19.9的转基因家蚕并对其极端温度耐受能力进行了检测,进而评估了转基因家蚕的安全性,包括基因漂移风险和毒理学试验。主要获得以下的研究结果:1.增量表达Bmhsp19.9提高转基因家蚕对极端温度的耐受性温度胁迫会破坏生物细胞中的蛋白质稳态,小热激蛋白（s Hsps）在维持蛋白质稳态和保护细胞免受各种不利条件的影响中发挥着至关重要的作用。本研究首先通过RT-PCR和q PCR分析了Bmhsp19.9的表达模式;然后克隆了Bmhsp19.9的启动子hsp19.9P1和hsp19.9P2,q PCR和western blot结果显示,序列较长的启动子hsp19.9P1的活性比hsp19.9P2更高。增量表达Bmhsp19.9保护了Bm E细胞在高温胁迫下的活力;进而构建了由hsp19.9P1介导的Bmhsp19.9转基因增量表达载体pb-H19.9,通过显微注射P50家蚕胚胎获得了两个转基因品系H19.9A和H19.9B。q PCR和western blot显示转基因家蚕中Bmhsp19.9的表达量高于对照;与非转基因对照P50相比,在35℃高温处理49 h后,转基因品系的死亡率降低40%左右;当P50和H19.9A在13℃条件下饲养时,H19.9A的生长速率更快,其存活率和存活幼虫体重显着高于P50。这些结果表明,增量表达Bmhsp19.9提高了转基因家蚕对极端温度的耐受性。2.评估转基因DNA从家蚕转移到肉鸡的潜在可能性为了评估转基因DNA从家蚕转移到其他生物的潜在可能性,将100只孵化1天的雄性肉鸡平均分为4个组（T1-T4）。T1-T3组分别饲喂插入了增强型绿色荧光蛋白（EGFP）DNA的转基因家蚕P3+5UI、插入了超氧化物歧化酶（SOR）DNA的转基因家蚕A4SOR和正常家蚕DZ,每只鸡每天饲喂一头家蚕幼虫,连续饲喂3周;T4为正常饮食对照。在第22日龄时,从每个处理组中随机挑选二十只鸡处死,收集血液进行血清生化检查,结果表明T4和T1-T3之间的血清参数没有明显差异。提取十二指肠、空肠、回肠、肝脏、肾脏和空肠消化物的DNA,利用EGFP、SOR、家蚕看家基因TIF-4A和鸡卵清蛋白基因OV特异引物进行PCR扩增,未在鸡的消化物和组织中检测到转基因DNA或家蚕TIF-4A。进一步增加转基因家蚕的添食数量和频率,在肉鸡中也观察到了相同的结果。这些结果表明来自家蚕的转基因DNA在鸡的消化道中被降解且没有转移到其他组织中。3.转基因家蚕的28天经口毒性试验将Sprague-Dawley大鼠分为4组（T1-T4）。T1-T3组分别饲喂耐高温转基因家蚕H19.9A、耐高温转基因家蚕A4SOR以及非转基因家蚕P50。以3.0 g/kg/day的剂量给每只大鼠经口饲喂干蚕蛹,连续饲喂28天。T4为正常饮食对照组。每周对各组大鼠进行体重的称量以及饲料消耗量的检测,在28天后收集血液进行血液生理和血清生化的检测,并解剖大鼠的主要器官进行称重,计算脏器指数;同时,对大鼠的主要脏器进行组织切片观察。结果显示,在雌鼠的各组之间以及雄鼠的各组之间每周平均体重无显着差异。雄鼠的各组之间每周饲料消耗量无显着差异;雌鼠中,在第二周T1显着低于T4,但与T3无差异,因此差异与饲喂转基因蚕蛹处理无关。在所测的16项大鼠血液指标中:雌鼠的MPV、HGB、HCT在各组之间有差异,雄鼠的HCT在各组之间有差异;在所测的12项大鼠血清生化指标中:雌鼠的ALT、AST、TRIG在各组之间有差异,雄鼠的CHOL、P在各组之间有差异,但由于在转基因蚕蛹组中这些指标没有同时与两个对照组都存在差异,这些差异均与饲喂转基因蚕蛹处理无关。在脏器指数结果中,雌鼠的肝脏、肾上腺、子宫在各组之间有差异,雄鼠的肾上腺、睾丸在各组之间有差异,但由于在转基因蚕蛹组中这些指标没有同时与两个对照组都存在差异,这些差异与饲喂转基因蚕蛹处理无关。组织病理学检查结果中,各组大鼠的脏器组织结构未见明显差异,未发现由转基因蚕蛹处理所导致的大鼠脏器组织病理学改变。在28天经口毒性试验中,没有发现转基因蚕蛹对大鼠生长发育不利的影响,表明转基因家蚕在毒理学上与正常家蚕没有区别。
马月[6]（2020）在《近红外、拉曼光谱快速无损检测技术在蚕桑产品中的应用》文中指出蚕桑业是我国的特色优势产业,推动蚕桑产业的大力发展,对于提高农村劳动力就业率,增加国家财政收入,扩大出口外汇以及国家经济建设具有重要意义。近年来,近红外和拉曼光谱无损检测技术飞速发展,由于其具有样品无需预处理、检测速度快、绿色无污染、实时在线分析等优势,已在多个领域用于研究分析。本论文基于近红外光谱技术,提出了快速高效的蚕蛹雌雄判别分选方法、蚕蛹含油量测定方法以及桑叶营养物质检测方法,采用便携式近红外和拉曼光谱仪测定蚕蛹油的过氧化值,并且利用拉曼光谱技术鉴别蚕蛹油掺假。试验结果如下:（1）基于近红外光谱技术建立雌雄蚕蛹判别分选模型。采用自制的雌雄蚕蛹自动分选系统,采集8个蚕蛹品种的近红外光谱,分别建立主成分分析（Principal Component Analysis,PCA）、线性判别式分析（Linear Discriminant Analysis,LDA）和偏最小二乘法判别分析（Partial least squares discrimination analysis,PLSDA）模型,其中,PLSDA模型鉴别效果最优,鉴别准确率在97.5%以上。（2）利用近红外光谱分析技术进行蚕蛹含油量测定。蚕蛹粉近红外光谱由两种便携式光谱仪DLP NIRscan Nano和Micro NIR 1700采集,组合间隔偏最小二乘法（Synergy interval partial least squares,Si PLS）和随机蛙跳算法（Random Frog,RF）用于波长优选,基于偏最小二乘算法（Partial Least Square Method,PLS）建立蚕蛹含油量模型。对于DLP NIRscan Nano光谱仪,采集的蚕蛹粉近红外光谱利用Si PLS进行波长变量筛选的建模结果最优,校正集均方根误差（Root mean square error of calibration set,RMSEC）和决定系数（Coefficient of determination for calibration,RC2）分别为1.535%和0.843,交叉验证均方根误差（Root mean square error of cross-validation set,RMSECV）和决定系数(Coefficient of determination for cross-validation,R2CV)分别为1.775%和0.791,预测集均方根误差（Root mean square error of prediction set,RMSEP）和决定系数（Coefficient of determination for calibration validation,RP2）分别为1.682%和0.779,相对分析误差（Ratio of performance to standard deviate,RPD）和预测相对范围（Ratio of the range to the RMSEP,RER）分别为2.164和9.281。对于Micro NIR 1700光谱仪采集的蚕蛹粉近红外光谱,采用RF进行波长优选,所建立的模型校正集,交叉验证和预测集的均方根误差分别为1.512%,1.700%和1.697%,决定系数分别为0.846,0.808和0.780,RPD为2.144,RER为9.199。试验结果表明,采用DLP NIRscan Nano光谱仪采集的蚕蛹粉近红外光谱建立的蚕蛹含油量的回归模型预测精度高于Micro NIR 1700光谱仪。（3）基于近红外和拉曼光谱技术建立蚕蛹油过氧化值测定模型。采集蚕蛹油近红外和拉曼光谱,建立过氧化值PLS回归模型,比较了竞争性自适应重加权算法（Competitive Adaptive Reweighted Sampling,CARS）、遗传算法（Genetic Algorithms,GA）和Random Frog三种算法提取的特征波长的建模效果。其中,CARS算法优化的蚕蛹油近红外光谱建模效果最优,模型的RMSEC和RC2分别为0.759 mmol/kg和0.923,RMSECV和R2CV分别为0.984 mmol/kg和0.875,RMSEP和RP2分别为0.950mmol/kg和0.867。GA算法优选的蚕蛹油拉曼光谱建模效果最优,模型的RMSEC、RMSECV和RMSEP分别为0.931 mmol/kg、0.983 mmol/kg、0.965 mmol/kg,RC2、R2CV和RP2分别为0.879、0.868、0.869。（4）基于拉曼光谱技术建立蚕蛹油掺假判别模型。采用PCA、LDA和簇类独立软模式（Soft Independent Modeling of Class Analogy,SIMCA）对蚕蛹油掺假进行定性分析。其中,PCA分析校正集和预测集蚕蛹油掺假的鉴别正确率分别为96.43%和92.86%;LDA模型校正集和预测集的鉴别正确率分别为100%和96.43%;SIMCA模型中校正集样本全部分类正确,预测集中蚕蛹油和食用油的识别率均为100%,拒绝率分别为100%和94.74%。采用PLS对蚕蛹油掺假进行定量分析,模型校正集、交叉验证和预测集的均方根误差分别为3.360%,4.525%和4.023%,决定系数分别为0.994,0.989和0.992。（5）基于近红外光谱技术建立桑叶含水量、粗蛋白和可溶性糖检测模型。从原始近红外光谱中提取特征波长变量,建立的桑叶含水量、粗蛋白和可溶性糖含量预测模型的RMSEP分别为1.185%、0.608%和2.361%,RP2分别为0.914,0.924和0.714,其中,含水量和粗蛋白含量模型预测性能较高,可溶性糖含量的预测能力略低。综上所述,采用近红外光谱技术可以建立蚕蛹雌雄判别、蚕蛹含油量、蚕蛹油过氧化值以及桑叶含水量、粗蛋白和可溶性糖检测模型,采用拉曼光谱技术可以建立高精度的蚕蛹油过氧化值和蚕蛹油掺假鉴别模型,表明了近红外和拉曼光谱技术在蚕桑行业实际生产中应用的可行性。
李小卫[7]（2020）在《基于基因组编辑和转基因技术的美国白蛾种群遗传调控研究》文中研究表明美国白蛾（Hyphantria cunea）是重要的国际检疫害虫,对我国农林业经济和生态系统造成极大的威胁。目前,针对美国白蛾的防治主要以化学农药防治方法为主。虽然这些努力在一定程度上阶段性地控制了害虫的种群密度,但是长时间使用会对环境、生态以及养蚕业和养蜂业等造成巨大的影响。因此,对美国白蛾的防治亟需环境友好和物种特异的新方法。昆虫种群遗传调控是理想的新一代生物防治方法,而对于美国白蛾遗传调控的研究几乎处于空白状态。因此,本研究旨在通过CRISPR/Cas9基因敲除系统,和piggy Bac介导的转基因技术建立高效的美国白蛾种群遗传调控品系,以期更好地进行美国白蛾的防治。研究主要取得了以下结果:1. 建立了美国白蛾胚胎显微注射平台和CRISPR/Cas9介导的基因敲除技术体系。参照家蚕胚胎显微注射方法,建立了孵化率稳定的美国白蛾胚胎显微注射平台。通过该显微注射平台,建立了高效的美国白蛾CRISPR/Cas9基因敲除系统,获得了表型明确且稳定的Hcyellow基因的敲除突变体。通过该基因的突变,证明了美国白蛾胚胎显微注射平台和CRISPR/Cas9基因敲除系统的有效性。2. 建立了piggy Bac介导的美国白蛾转基因遗传转化体系。鉴于后续种群遗传调控靶基因的功能研究和筛选,确立了先鉴定Hcu6和Hcnos启动子的工作。在显微注射平台的基础上,以Hcyellow基因为靶基因,通过Bm N体外细胞实验和体内直接注射质粒实验,筛选出了一个高活性的Hcu62启动子。进一步通过显微注射和荧光筛选,成功获得了表型更加明显和稳定的Hcu62驱动的转基因Hcyellow RNAi突变体品系Ysh2。这是美国白蛾转基因技术体系的首次建立,为其遗传调控研究提供了重要的技术支撑。3. 建立了CRISPR/Cas9介导的美国白蛾Hcdsx可遗传不育突变体。在Hcdsx基因敲除的功能研究中,通过克隆和表达分析,确立了Hcdsx的性别偏好性表达特性。通过外显子特异性的靶向敲除获得了类似于家蚕的共同区、雌性和雄性特异性三种Hcdsx敲除突变体。研究发现,在突变体中出现了很多性二态性征相关的突变表型,包括内生殖腺、蛹期生殖孔、成虫外生殖器、体节、体型、触角和下游基因。在dsxe3和dsxe5性别特异性突变体中,一些表型较dsxe1突变体严重,发生了不完全性反转现象。因此,导致了Hcdsx性别特异性突变体无法完成正常的交配、产卵和受精等生殖相关行为,造成性别特异性不育表型。在对dsxe3突变体的深入研究中发现,该雌性特异性不育表型可通过雄性突变体与野生型雌性交配遗传到下一代,在美国白蛾的遗传调控中展现出了潜在的应用价值。4. 确立了美国白蛾Hcmasc基因参与雌雄两性的性别决定和剂量补偿通路。在Hcmasc基因的功能研究中,通过不同位点的敲除实验,获得了Hcmasce4和Hcmasc C两种突变体。在Hcmasce4突变体中,只有雄性个体产生了突变表型,并通过Bm N细胞过表达实验确定了其雄性化的保守位点,4号外显子中两个保守的半胱氨酸Cys-249和Cys-252。而在HcmascC突变体中,雌性和雄性个体的外部生殖器缺陷和性别比例失调,说明该基因确实参与雌雄两性的性别决定通路和剂量补偿通路。此外,piggy Bac介导的Hcmasc1转基因过表达导致MC1突变体致死,进一步地说明该基因可能通过破坏剂量补偿通路影响个体生长发育。5. 建立了piggy Bac介导的美国白蛾转基因Hcser2 RNAi雄性不育突变体。在Hcser2基因的功能研究中,CRISPR/Cas9介导的敲除突变体和piggy Bac介导的转基因RNAi突变体表明,突变Hcser2基因可以诱导雄性特异性不育。更重要的是,转基因突变体的交配行为不受影响,并且该不育表型可通过雌性突变体遗传杂交传递到后代中去,对美国白蛾的遗传防治具有重要意义。综上所述,建立了稳定的美国白蛾胚胎显微注射平台、高效的CRISPR/Cas9基因敲除技术体系和piggy Bac介导的转基因技术体系。在此基础上,筛选出了美国白蛾种群遗传调控靶基因Hcdsx和Hcser2,并且建立了CRISPR/Cas9介导的Hcdsx基因可遗传突变体和piggy Bac介导的转基因Hcser2 RNAi品系,对美国白蛾的种群遗传调控奠定了坚实的理论基础。
徐霞[8]（2020）在《家蚕丝氨酸蛋白酶Ser2和Osp参与生殖调控的研究》文中指出昆虫是地球上种类最多、数量最大的动物类群,而且具有惊人的繁殖能力。昆虫生殖腺（Gonads）作为重要的内生殖器,分泌蛋白种类繁多且功能多样,不仅影响雄性昆虫的生殖能力,也影响雌性昆虫的生理过程和生殖行为。鳞翅目是昆虫纲中仅次于鞘翅目的第二大目,其中家蚕（Bombyx mori）由于其良好的研究背景以及重要的经济意义而成为鳞翅目模式昆虫。以家蚕为对象来研究生殖腺分泌蛋白对交配繁殖的作用,有助于了解昆虫的生活过程及进化途径,相关研究结果不仅能应用于益虫利用,还能推广至害虫的遗传防治。本论文围绕家蚕生殖腺的转录组及其生殖腺特异性表达基因的功能开展研究,利用转基因CRISPR/Cas9技术分别构建雄性不育和雌性不育的家蚕突变品系,主要研究内容和结果如下:1.家蚕生殖腺的转录组研究家蚕的生殖腺包括精巢（Testis,TE）、卵巢（Ovary,OV）和副性腺（Accessory gland,AG）,针对雌雄两性不同又分为雄性副性腺（Male accessory gland,MAG）和雌性副性腺（Female accessory gland,FAG）,而生殖腺内含多种与交配繁殖相关的分泌蛋白。本研究选取家蚕未交配成虫期的精巢、卵巢、雄性副性腺和雌性副性腺四个组织,分别进行了转录组测序（RNA-seq）。检测结果表明,精巢中表达的基因有9385个,卵巢中表达的基因有4552个,雄性副性腺中表达的基因有4054个,雌性副性腺中表达的基因有8205个,四个组织中都表达的基因有2923个;基因功能及代谢通路具有多样性,并以不同的方式精准调控生殖进程。2.家蚕Ser2基因突变体构建与精子功能调控研究Serine protease 2（Ser2）基因编码的蛋白是丝氨酸蛋白酶家族的一员,也是昆虫精液蛋白的重要成份且在进化上相对保守。利用CRISPR/Cas9技术敲除家蚕Ser2基因,发现Ser2基因突变导致家蚕雄性不育但雌性正常,且雄性不育表型可稳定遗传给后代。对精子束和精子进行染色,结果表明突变体中精子束和精子的形态与对照组相比并无显着性差异。对家蚕成虫交配5 h后产下的卵进行染色,对照组中可观察到在产卵0 h的精核和卵核,以及产卵5 h和10 h的卵裂现象;与突变体雄性交配后,染色结果中只能观察到卵核并没有卵裂现象。这些结果证明突变体精子形态正常但不能顺利入卵完成受精过程而导致雄性不育。3.家蚕Osp基因突变体构建与卵子发生调控研究Ovarian serine protease（Osp）基因编码的蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族中的一员,对卵子发生的调控至关重要且在进化上高度保守。利用CRISPR/Cas9技术敲除家蚕Osp基因,发现Osp基因突变导致家蚕雌性不育但雄性正常,且雌性不育表型可稳定遗传给后代。对家蚕游走期卵巢进行观察,与对照组相比,突变体卵巢形态发生改变且输卵管不规则。通过解剖未交配家蚕雌性成虫,发现与对照组相比,突变体输卵管收缩并变短且输卵管中卵子发育异常,最终致使雌性不育。综上所述,本论文针对家蚕生殖腺分泌蛋白对交配繁殖的调控作用进行研究,并利用CRISPR/Cas9技术探究家蚕雄性和雌性特异性表达基因的功能;从突变体表型入手,解析Ser2基因和Osp基因在家蚕生殖调控中的重要作用,探寻突变对昆虫竞争力、吸引力以及生长发育无影响但导致雄性不育或雌性不育的关键基因,可为构建新型不育昆虫提供潜在靶标,并为害虫生物防治提供新策略。
孙丹[9]（2020）在《CRISPR/Cas9介导的小菜蛾对Bt Cry1Ac毒素抗性的分子机制研究》文中提出苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）是土壤中广泛存在的一种革兰氏阳性细菌,在代谢过程中能够产生可生物降解的杀虫晶体蛋白,具有对昆虫致病性。小菜蛾（Plutella xylostella）是一种全球性分布的农业害虫。其中,以钙粘蛋白（CAD）、碱性磷酸酶（ALP）、氨肽酶N（APN）、以及ABC转运蛋白（ABCC2,ABCC3）为代表的中肠受体基因表达量的改变或突变与昆虫对Bt Cry毒素的高水平抗性相关。CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术被应用到很多有机体中进行遗传修饰或改造。近几年来,该技术也被应用到节肢动物中,本文首先对CRISPR/Cas9在昆虫以及非昆虫节肢动物中的应用进行了系统性的总结,并且阐述了CRISPR/Cas技术的应用前景。随后,运用CRISPR/Cas9技术分别敲除小菜蛾敏感种群中肠PxABCC2、PxABCC3、PxAPN1和PxAPN3a基因,建立的4个纯合突变种群ABCC2KO、ABCC3KO、APN1KO和APN3aKO均对Bt Cry1Ac原毒素产生高水平的抗性。我们的研究结果为PxABCC2、PxABCC3、PxAPN1和PxAPN3a蛋白作为小菜蛾中肠受体提供了确凿的体内功能验证,为其他受体基因的发掘提供了良好的平台,同时也为新的害虫防治策略的开发提供思路。主要研究内容如下:（1）CRISPR/Cas系统在节肢动物中的发展现状及应用前景规律成簇的间隔短回文序列（CRISPR）及CRISPR相关联的基因Cas9共同组成了一个有价值的基因编辑系统,可以对不同的生物有机体进行精确的遗传改造。在本文中,我们对CRISPR/Cas9技术在昆虫及其他非昆虫的节肢动物中的应用进行了系统性的归纳与总结,对于该技术在节肢动物中的发展现状提供了一个综合且公正的视角。（2）小菜蛾CRISPR/Cas9基因编辑体系的构建利用Cas-Designer软件分别设计小菜蛾中肠PxABCC2及PxABCC3基因的sgRNA靶标序列,并搜索小菜蛾基因组数据库、Gen Bank数据库以及利用Cas-OFFinder软件进行脱靶效应检测。随后,对小菜蛾敏感种群（DBM1Ac-S）的卵进行显微注射,经过一系列种系转化和突变筛选策略,成功构建了小菜蛾PxABCC2及PxABCC3基因的纯合突变种群,分别命名为ABCC2KO和ABCC3KO。（3）ABCC2KO和ABCC3KO种群的毒力生物测定与染色体遗传互补分析采用叶片浸渍法,对基因敲除种群ABCC2KO和ABCC3KO的幼虫进行生物学测定分析,数据结果表明,与敏感种群（DBM1Ac-S）相比,ABCC2KO和ABCC3KO种群对Bt Cry1Ac原毒素分别产生了724和413倍的抗性。随后,通过基因编辑种群（ABCC2KO和ABCC3KO）分别与小菜蛾敏感（DBM1Ac-S）和近等基因系抗性（NIL-R）种群进行两两种群染色体遗传互补杂交,并利用诊断剂量的Cry1Ac毒素处理这四个种群及其F1代幼虫,明确基因敲除种群对Cry1Ac毒素的抗性遗传模式。（4）ABCC2KO和ABCC3KO种群中肠BBMV蛋白与Bt Cry1Ac毒素的结合分析分别提取小菜蛾敏感种群（DBM1Ac-S）、两个基因敲除种群（ABCC2KO和ABCC3KO）和近等基因系抗性种群（NIL-R）的中肠BBMV蛋白,运用Western Blot技术分析活化的Cry1Ac毒素与各种群BBMV蛋白的结合情况,实验结果表明,敏感种群的BBMV蛋白可以与Cry1Ac毒素结合,抗性种群的BBMV基本不与Cry1Ac毒素结合,而基因敲除种群ABCC2KO和ABCC3KO的BBMV蛋白与Cry1Ac毒素的结合能力显着下降。这表明敲除小菜蛾PxABCC2及PxABCC3基因会导致Cry1Ac毒素的结合降低,从而使得小菜蛾对Cry1Ac毒素产生高水平抗性。（5）小菜蛾不同中肠APN基因的体外异源表达通过比较小菜蛾Bt敏抗种群四龄幼虫的中肠转录组数据,发现所有Bt抗性种群的PxAPN1和PxAPN3a基因表达量均显着降低,而PxAPN5和PxAPN6基因的表达量则显着升高。为了确定这4个APN基因在Bt毒素作用机制中的作用,分别将PxAPN1、PxAPN3a、PxAPN5和PxAPN6基因与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）在草地贪夜蛾细胞（Sf9）中进行融合表达,并通过Western Blot技术验证其表达情况。免疫荧光定位检测结果表明,这4个PxAPN蛋白均定位于细胞表面,但是只有PxAPN1和PxAPN3a蛋白可以结合Cry1Ac毒素,可以明确PxAPN1和PxAPN3a是Bt Cry1Ac毒素的功能受体。（6）CRISPR/Cas9介导的小菜蛾PxAPN1和PxAPN3a基因的敲除分别设计小菜蛾PxAPN1和PxAPN3a基因的特异性sgRNA序列,并与Cas9蛋白混合,利用实验室成熟的小菜蛾CRISPR/Cas9显微操控平台,对小菜蛾敏感种群（DBM1Ac-S）的卵进行显微注射。采用优化的种系转化和突变筛选策略,成功构建了PxAPN1和PxAPN3a基因的纯合突变种群,分别命名为APN1KO和APN3aKO。随后的生物学测定结果显示,APN1KO和APN3aKO种群的幼虫对Cry1Ac原毒素的抗性水平分别为463和346倍,证明了PxAPN1和PxAPN3a蛋白作为Cry1Ac毒素的功能性受体,参与了小菜蛾对Bt Cry1Ac毒素的高水平抗性。
王永强,祝新荣,何克荣,夏建国,孟智启[10]（2016）在《雄蚕品种选育及产业化应用20年的回顾与展望》文中研究表明雄蚕具有强健好养、饲料效率高、出丝率高、茧丝品质优等特点,选育雄蚕品种实现专养雄蚕是提高茧丝品质和综合效益最为有效的途径。本文综述了从俄罗斯科学院引进家蚕性连锁平衡致死系20年来,我国在家蚕性连锁平衡致死系转育改良方法研究、家蚕性别控制种质资源库构建、实用化雄蚕品种选育、雄蚕品种繁育配套技术开发及雄蚕品种产业化应用等方面取得的主要成果,分析了专养雄蚕产业化过程中存在的问题,提出了进一步加强雄蚕种、茧、丝绸及产品的一体化建设,打造雄蚕丝高端产品与品牌,提高全产业链综合效益的建议。
二、家蚕雄性品种引进试验及其应用前景分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、家蚕雄性品种引进试验及其应用前景分析（论文提纲范文）
（1）松毛虫赤眼蜂繁殖性状的遗传改良研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 赤眼蜂与害虫生物防治 |
| 1.1.1 赤眼蜂概述 |
| 1.1.2 赤眼蜂生产、应用及研究概述 |
| 1.2 Wolbachia诱导赤眼蜂产雌孤雌生殖 |
| 1.2.1 Wolbachia对赤眼蜂适合度的影响 |
| 1.2.2 Wolbachia诱导赤眼蜂产雌孤雌生殖潜在优势 |
| 1.3 赤眼蜂品种选育研究进展 |
| 1.4 经济动植物遗传改良方法研究进展 |
| 1.4.1 作物及家养动物的选育 |
| 1.4.2 主要遗传改良方法 |
| 1.4.3 天敌昆虫的遗传改良 |
| 1.5 目的与意义 |
| 第二章 松毛虫赤眼蜂产雌孤雌生殖品系和两性生殖品系生物学性状评价 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 供试虫源 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 母代蜂适合度 |
| 2.1.4 子代蜂适合度 |
| 2.1.5 数据分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 母代蜂适合度 |
| 2.2.2 子代蜂适合度 |
| 2.3 小结与讨论 |
| 第三章 两性生殖品系松毛虫赤眼蜂繁殖力性状室内汰选及稳定性评价 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 供试虫源 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 两性生殖品系松毛虫赤眼蜂奠基种群的建立 |
| 3.1.4 高繁殖力两性生殖品系松毛虫赤眼蜂的室内汰选 |
| 3.1.5 高繁殖力两性生殖品系松毛虫赤眼蜂稳定性评价 |
| 3.1.6 数据分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 高繁殖力两性生殖品系松毛虫赤眼蜂的室内汰选 |
| 3.2.2 高繁殖力两性生殖品系松毛虫赤眼蜂稳定性评价 |
| 3.3 小结与讨论 |
| 第四章 高繁殖力松毛虫赤眼蜂数量性状的遗传特征 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 供试虫源 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.1.3 两性生殖品系松毛虫赤眼蜂种群的适合度评价 |
| 4.1.4 高、低繁殖力两性生殖品系松毛虫赤眼蜂的杂交和回交 |
| 4.1.5 数据分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 低繁殖力两性生殖品系松毛虫赤眼蜂种群的筛选 |
| 4.2.2 高、低繁殖力两性生殖品系松毛虫赤眼蜂的杂交和回交 |
| 4.3 小结与讨论 |
| 第五章 产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂繁殖力性状的遗传改良 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 供试虫源 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂稳定性评估 |
| 5.1.4 产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂繁殖力性状的遗传改良 |
| 5.1.5 数据分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 产雌孤雌生殖品系松毛虫赤眼蜂繁殖力性状的遗传改良 |
| 5.3 小结与讨论 |
| 第六章 结论与讨论 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）中国家蚕种质资源与品种选育研究进展（论文提纲范文）
| 1 中国家蚕种质资源研究 |
| 1.1 新中国成立之前的蚕种质资源研究 |
| 1.2 中华人民共和国成立之后蚕种质资源研究 |
| 1.2.1 中国农业科学院蚕业研究所蚕种质资源研究 |
| 1.2.2 浙江省蚕种质资源研究 |
| 1.2.3 西南大学蚕种质资源研究 |
| 2 我国家蚕实用品种选育概况及主要发展阶段 |
| 2.1 引进品种和地方品种的分离、选拔及利用阶段(1949—1980) |
| 2.2 品种自主创新,加快培育经济性状优良蚕品种并应用于生产阶段(1981—1995) |
| 2.3 育成蚕品种适合省力化、多样化需要的阶段(1996—2019年) |
| 2.4 国家蚕品种鉴定、审定工作步入法制化、规范化道路 |
| 3 一些经典家蚕实用品种 |
| 3.1 优质高产多丝量春用品种“菁松×皓月” |
| 3.2 耐氟夏秋用品种秋丰×白玉 |
| 3.3 夏秋用蚕品种两广2号(932·芙蓉×7532·湘晖) |
| 3.4 雄蚕品种“秋·华×平30” |
| 3.5 抗血液型脓病品种华康系列品种(华康1号、华康2号、华康3号) |
| 4 小结与展望 |
（3）韭菜迟眼蕈蚊性别决定关键基因tra2的克隆及功能探索（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 韭菜迟眼蕈蚊研究现状 |
| 1.1.1 韭菜迟眼蕈蚊的形态特征及生活习性 |
| 1.1.1.1 韭菜迟眼蕈蚊的形态特征 |
| 1.1.1.2 韭菜迟眼蕈蚊的生活习性 |
| 1.1.2 韭菜迟眼蕈蚊的发生规律及年生活史 |
| 1.1.3 韭菜迟眼蕈蚊的分布、寄主及危害 |
| 1.1.4 韭菜迟眼蕈蚊防治现状 |
| 1.1.5 韭菜迟眼蕈蚊的生殖对策及染色体消除 |
| 1.2 昆虫性别决定机制的研究现状 |
| 1.2.1 双翅目昆虫的性别决定机制 |
| 1.2.2 膜翅目昆虫的性别决定机制 |
| 1.2.3 鳞翅目昆虫的性别决定机制 |
| 1.2.4 鞘翅目昆虫的性别决定机制 |
| 1.2.5 韭菜迟眼蕈蚊性别决定的研究现状 |
| 1.3 tra2基因的结构及功能 |
| 1.3.1 tra2基因的结构 |
| 1.3.2 tra2基因的功能 |
| 1.4 RNAi技术的应用现状 |
| 1.4.1 RNAi技术概述 |
| 1.4.1.1 RNAi技术在昆虫功能基因研究中的应用 |
| 1.4.1.2 RNAi与抗虫害 |
| 1.4.2 昆虫RNAi的导入方法 |
| 1.4.2.1 喂食工程菌HT115 表达的dsRNA |
| 1.4.2.2 直接喂食dsRNA |
| 1.4.2.3 显微注射dsRNA |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂及仪器 |
| 2.2 供试材料 |
| 2.2.1 虫源 |
| 2.2.2 饲养条件 |
| 2.2.3 饲养方法 |
| 2.3 韭菜迟眼蕈蚊Botra2基因的克隆及分析 |
| 2.3.1 总RNA提取 |
| 2.3.2 RNA质量检测 |
| 2.3.3 cDNA合成 |
| 2.3.4 引物设计 |
| 2.3.5 PCR扩增反应 |
| 2.3.6 PCR产物回收纯化 |
| 2.3.7 目的基因连接转化 |
| 2.3.8 单克隆及菌液PCR检测 |
| 2.4 RACE扩增3’末端序列 |
| 2.5 BoTRA2蛋白比对与系统发育树构建 |
| 2.5.1 蛋白序列比对 |
| 2.5.2 系统发育树构建 |
| 2.6 Botra2基因不同发育时期表达谱 |
| 2.7 dsRNA合成及RNAi显微注射 |
| 2.7.1 dsRNA合成 |
| 2.7.2 显微注射试验 |
| 2.8 荧光定量PCR沉默效果检测 |
| 2.9 数据分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 Botra2同源基因的分离与鉴定 |
| 3.2 Botra2基因剪接体检测 |
| 3.3 BoTRA2蛋白序列比对及系统发育分析 |
| 3.4 Botra2基因在韭菜迟眼蕈蚊不同发育阶段的表达谱 |
| 3.5 沉默后韭菜迟眼蕈蚊Botra2抑制效率检测 |
| 3.6 RNAi试验后韭菜迟眼蕈蚊分配情况 |
| 3.7 沉默Botra2基因对成虫内生殖器以及外部形态的影响 |
| 3.7.1 沉默Botra2基因对成虫外部形态的影响 |
| 3.7.2 沉默Botra2基因对成虫内生殖器的影响 |
| 3.8 沉默Botra2基因对雌虫产卵量、后代孵化率的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 韭菜迟眼蕈蚊Botra2基因剪接体分析 |
| 4.2 韭菜迟眼蕈蚊TRA2蛋白系统发育分析 |
| 4.3 韭菜迟眼蕈蚊Botra2基因时间表达分析 |
| 4.4 韭菜迟眼蕈蚊Botra2基因可能行使的功能 |
| 4.5 RNAi技术与SIT |
| 5 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）一种诱导的高蛋白血症无脊椎动物疾病模型及其病理影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 代谢性疾病 |
| 1.1.1 常见的代谢性疾病 |
| 1.1.2 血液蛋白质/氨基酸代谢疾病 |
| 1.1.3 代谢性疾病对免疫的影响 |
| 1.1.4 代谢疾病对生殖发育的影响 |
| 1.1.5 代谢组学在代谢性疾病的应用 |
| 1.2 代谢疾病模型 |
| 1.2.1 疾病动物模型 |
| 1.2.2 实验动物替代 |
| 1.3 模式动物家蚕医学实验动物替代研究进展 |
| 1.3.1 家蚕作为实验动物替代的优势和特色 |
| 1.3.2 家蚕药物毒理模型 |
| 1.3.3 家蚕代谢疾病模型 |
| 2 论文研究思路 |
| 2.1 研究目的与意义 |
| 2.2 研究内容与方法 |
| 2.3 研究技术路线 |
| 第二章 高蛋白血症家蚕疾病模型的重建 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 高血浆蛋白浓度家蚕建模方法 |
| 1.3 20-羟基蜕皮酮(20E)拯救实验 |
| 1.4 家蚕变态发育和生命力调查 |
| 1.5 血浆蛋白浓度(PPC)的测定 |
| 1.6 血液生化指标测定 |
| 1.7 数据分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三章 高血浆蛋白浓度对血淋巴代谢组的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 样本准备 |
| 1.3 GC-MS/LC-MS测定 |
| 1.4 色谱-质谱条件 |
| 2 结果 |
| 2.1 建模处理后48H高蛋白血症对家蚕血淋巴代谢影响 |
| 2.2 建模处理后96H高蛋白血症对家蚕血淋巴代谢影响 |
| 2.3 高蛋白血症模型家蚕血淋巴差异代谢物KEGG通路分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 高蛋白血症模型家蚕血淋巴整体代谢途径变化 |
| 3.2 血浆蛋白浓度升高对家蚕有毒害作用 |
| 第四章 高血浆蛋白浓度对血液系统先天免疫的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 家蚕脂肪体和血淋巴的提取 |
| 1.3 家蚕脂肪体/血淋巴总RNA的提取 |
| 1.4 RNA反转录 |
| 1.5 基因表达分析 |
| 1.6 酚氧化酶活测定及黑化调查 |
| 1.7 血细胞吞噬作用实验 |
| 1.8 抗菌活性实验 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 高PPC影响家蚕先天免疫相关基因的表达 |
| 2.2 高PPC影响血淋巴的抗菌活性 |
| 2.3. 抗菌肽(AMPs)的表达受NF-κB信号调控 |
| 2.4 高PPC诱导家蚕血细胞吞噬作用变化 |
| 2.5 高PPC影响家蚕血淋巴的黑化作用 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 高PPC通过NF-κB信号途径调控家蚕先天免疫 |
| 3.2 高PPC抑制家蚕黑化作用 |
| 第五章 高血浆蛋白浓度对脂肪体重塑的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 脂肪体解离与重塑的形态观察 |
| 1.3 免疫组织化学 |
| 1.4 基因表达分析 |
| 1.5 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 高蛋白血症阻碍家蚕脂肪体重塑 |
| 2.2 外源性20E对高蛋白血症诱导的脂肪体重塑受阻的影响 |
| 2.3 外源20E对高蛋白血症家蚕脂肪体重塑相关基因转录水平的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 脂肪体重塑受抑制 |
| 3.2 内分泌激素拯救有效 |
| 4 结论 |
| 第六章 高血浆蛋白浓度对生殖发育的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 生殖调查 |
| 1.3 性腺发育的调查 |
| 1.4 精子发育调查 |
| 1.5 蛋白质免疫印迹(WESTERN BLOTTING) |
| 1.6 荧光定量PCR |
| 1.7 活性氧(ROS)染色 |
| 1.8 HE染色 |
| 1.9 TUNEL染色和MDC染色 |
| 2 结果 |
| 2.1 高蛋白血症影响了家蚕的生殖发育 |
| 2.2 高蛋白血症影响了雌性家蚕卵黄蛋白的合成与转运 |
| 2.3 高蛋白血症诱导家蚕性腺程序性死亡发生增加 |
| 3 讨论 |
| 3.1 高蛋白血症的生殖毒性表现出性别差异 |
| 3.2 高蛋白血症通过影响家蚕内分泌系统影响生殖发育 |
| 4 结论 |
| 第七章 综合结论 |
| 1 综合结论 |
| 2 论文创新点 |
| 3 后续研究展望与建议 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的科研项目及成果 |
| 资助项目 |
| 附录 |
| 致谢 |
（5）耐高温家蚕的制备及转基因家蚕的安全性评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 转基因技术及其应用 |
| 1.2.1 转基因技术 |
| 1.2.2 转基因技术的应用 |
| 1.3 转基因生物安全评价的研究进展 |
| 1.3.1 转基因生物的潜在风险 |
| 1.3.2 国内外转基因安全评价管理及相关法律、法规 |
| 1.3.3 转基因动物的生物安全评价 |
| 1.4 转基因家蚕的研究进展 |
| 1.4.1 基因功能研究 |
| 1.4.2 蚕丝的遗传改良 |
| 1.4.3 生物反应器开发 |
| 1.4.4 抗病育种 |
| 1.4.5 抗逆育种 |
| 1.5 家蚕小热激蛋白sHsp19.9的研究进展 |
| 第2章 引言 |
| 2.1 研究背景及意义 |
| 2.2 研究内容 |
| 第3章 增量表达Bmhsp19.9提高转基因家蚕对极端温度的耐受性 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 |
| 3.1.3 主要溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 Bmhsp19.9的表达模式分析 |
| 3.2.2 Bmhsp19.9的启动子活性检测 |
| 3.2.3 细胞活性分析 |
| 3.2.4 转基因家蚕的制备 |
| 3.2.5 转基因家蚕的分子检测 |
| 3.2.6 转基因家蚕对极端温度的耐受能力检测 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 Bmhsp19.9的表达模式分析 |
| 3.3.2 Bmhsp19.9的启动子活性检测 |
| 3.3.3 过表达Bmhsp19.9 保护了BmE细胞在高温胁迫下的活力 |
| 3.3.4 增量表达Bmhsp19.9的转基因家蚕制备 |
| 3.3.5 转基因家蚕的插入位点检测 |
| 3.3.6 转基因家蚕中Bmhsp19.9表达量检测 |
| 3.3.7 转基因家蚕对极端温度的耐受性更高 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 第4章 评估转基因DNA从家蚕转移到肉鸡的潜在可能性 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 |
| 4.1.3 主要溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 肉鸡饲养 |
| 4.2.2 肉鸡组织和消化物的采样 |
| 4.2.3 基因组DNA的提取和PCR分析 |
| 4.2.4 血清生化的检测 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 家蚕和肉鸡基因组中外源和内源基因的检测 |
| 4.3.2 摄食转基因家蚕后鸡组织和消化物的PCR分析 |
| 4.3.3 增加转基因家蚕的添食数量和频率后的PCR分析 |
| 4.3.4 血清生化指标分析 |
| 4.3.5 饲喂转基因家蚕后肉鸡的体重调查 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 第5章 转基因家蚕的28天经口毒性试验 |
| 5.1 实验材料与仪器 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 主要试剂及仪器 |
| 5.1.3 主要溶液配制 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 实验分组设计 |
| 5.2.2 大鼠的饲养条件 |
| 5.2.3 每周体重及饲料消耗量的检测 |
| 5.2.4 血液学及血清生化的检测 |
| 5.2.5 脏器指数的测定 |
| 5.2.6 组织病理学检查 |
| 5.2.7 统计分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 大鼠每周体重及饲料消耗量的检测 |
| 5.3.2 血液学及血清生化指标分析 |
| 5.3.3 大鼠的脏器指数测定 |
| 5.3.4 大鼠的组织病理学检查 |
| 5.4 小结与讨论 |
| 第6章 综合与讨论 |
| 6.1 增量表达Bmhsp19.9制备耐高温转基因家蚕品系 |
| 6.2 评估转基因DNA从家蚕转移到肉鸡的可能性 |
| 6.3 转基因家蚕的毒理学评价 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表的论文及参研课题 |
| 致谢 |
（6）近红外、拉曼光谱快速无损检测技术在蚕桑产品中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 选题的背景 |
| 1.2 近红外和拉曼光谱分析技术 |
| 1.2.1 近红外和拉曼光谱的基本原理 |
| 1.2.2 近红外和拉曼光谱的比较 |
| 1.3 蚕茧蛹雌雄鉴别分选研究现状 |
| 1.3.1 国外研究现状 |
| 1.3.2 国内研究现状 |
| 1.4 基于光谱技术的油脂品质检测研究现状 |
| 1.4.1 国外研究现状 |
| 1.4.2 国内研究现状 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 1.6 主要研究内容 |
| 第2章 基于近红外光谱技术的蚕蛹性别判别 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 供试蚕蛹 |
| 2.2.2 雌雄蚕蛹自动分选系统 |
| 2.2.3 近红外光谱采集 |
| 2.2.4 校正分析 |
| 2.2.5 软件 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 蚕蛹原始近红外光谱 |
| 2.3.2 PCA分析 |
| 2.3.3 LDA校正 |
| 2.3.4 PLSDA校正 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 基于近红外光谱技术的蚕蛹含油量分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试验材料与方法 |
| 3.2.1 试验材料与仪器 |
| 3.2.2 蚕蛹粉近红外光谱采集 |
| 3.2.3 蚕蛹含油量测定 |
| 3.2.4 校正集和预测集的定义 |
| 3.2.5 光谱预处理 |
| 3.2.6 模型的建立 |
| 3.2.7 特征波长提取 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 原始光谱特征 |
| 3.3.2 含油量测定结果 |
| 3.3.3 光谱预处理结果 |
| 3.3.4 建模结果分析 |
| 3.3.5 波长优选建模结果 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 基于近红外和拉曼光谱技术的蚕蛹油过氧化值分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 试验材料与方法 |
| 4.2.1 试验材料与仪器 |
| 4.2.2 蚕蛹油提取 |
| 4.2.3 过氧化值测定 |
| 4.2.4 原始光谱采集 |
| 4.2.5 校正集和预测集的定义 |
| 4.2.6 PLS模型的建立 |
| 4.2.7 波长优选 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 原始光谱特征 |
| 4.3.2 过氧化值测定结果 |
| 4.3.3 模型的建立与评价 |
| 4.3.4 波长优选建模分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 基于拉曼光谱技术的蚕蛹油掺假鉴别分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 试验材料与方法 |
| 5.2.1 试验材料与仪器 |
| 5.2.2 蚕蛹油提取 |
| 5.2.3 蚕蛹油掺假样品配比 |
| 5.2.4 蚕蛹油拉曼光谱采集 |
| 5.2.5 校正集和预测集的定义 |
| 5.2.6 光谱预处理 |
| 5.2.7 模型的建立 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 原始光谱特征 |
| 5.3.2 定性分析模型的评价 |
| 5.3.3 定量分析模型的评价 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 基于手持式近红外光谱仪定量分析桑叶营养物质 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料和方法 |
| 6.2.1 供试桑叶 |
| 6.2.2 近红外光谱采集 |
| 6.2.3 化学指标测定 |
| 6.2.4 光谱预处理 |
| 6.2.5 波长优选 |
| 6.2.6 PLS校正 |
| 6.2.7 未知样品验证 |
| 6.2.8 软件 |
| 6.3 结果和分析 |
| 6.3.1 光谱特性 |
| 6.3.2 化学指标测定结果 |
| 6.3.3 光谱预处理 |
| 6.3.4 波长优选 |
| 6.3.5 未知样品的验证 |
| 6.4 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（7）基于基因组编辑和转基因技术的美国白蛾种群遗传调控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 美国白蛾研究概况 |
| 1.1.1 概述 |
| 1.1.2 美国白蛾的入侵及其分布 |
| 1.1.3 美国白蛾的发生及其危害 |
| 1.1.4 美国白蛾防治 |
| 1.2 昆虫种群遗传调控的研究 |
| 1.2.1 概述 |
| 1.2.2 昆虫遗传转化操作体系 |
| 1.2.3 性别决定通路基因在昆虫种群遗传调控中的应用 |
| 1.2.4 性别特异性不育基因在昆虫种群遗传调控中的应用 |
| 1.3 研究目的与意义 |
| 1.4 主要研究内容 |
| 1.5 研究技术路线图 |
| 第二章 美国白蛾CRISPR/Cas9基因编辑系统和 piggyBac转基因技术体系建立 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 |
| 2.1.3 靶基因Hcyellow序列克隆和gRNA靶点序列确认 |
| 2.1.4 gRNA和Cas9 mRNA体外合成 |
| 2.1.5 美国白蛾胚胎显微注射 |
| 2.1.6 突变表型观察和基因组突变检测 |
| 2.1.7 Hcu6和Hcnos启动子克隆与鉴定 |
| 2.1.8 piggyBac介导的Hcyellow转基因RNAi突变体获得 |
| 2.1.9 生长指标统计 |
| 2.1.10 Inverse PCR |
| 2.1.11 数据统计 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 美国白蛾显微注射平台建立 |
| 2.2.2 美国白蛾CRISPR/Cas9 基因敲除系统建立 |
| 2.2.3 美国白蛾piggyBac转基因体系建立 |
| 2.3 小结 |
| 第三章 美国白蛾性别决定通路基因Hcdsx的功能研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 |
| 3.1.3 Hcdsx基因克隆和剪接体分析 |
| 3.1.4 Hcdsx基因的进化分析 |
| 3.1.5 gRNA和 Cas9 mRNA体外合成 |
| 3.1.6 美国白蛾胚胎显微注射 |
| 3.1.7 突变体表型及基因组突变分析 |
| 3.1.8 扫描电镜 |
| 3.1.9 石蜡切片观察 |
| 3.1.10 Hcdsx下游靶基因的表达分析 |
| 3.1.11 美国白蛾Hcdsx突变体不育表型分析 |
| 3.1.12 数据处理 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 Hcdsx剪接体鉴定和进化关系分析 |
| 3.2.2 Hcdsx表型观察及基因组突变分析 |
| 3.2.3 Hcdsx突变体其他性二态性征和生殖相关的表型观察 |
| 3.2.4 突变体Hcdsx基因剪接模式检测和下游基因表达分析 |
| 3.2.5 Hcdsx性别特异性不育表型可遗传分析 |
| 3.3 小结 |
| 第四章 美国白蛾性别决定通路基因Hcmasc的功能研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 主要试剂与仪器 |
| 4.1.3 Hcmasc基因鉴定以及表达分析 |
| 4.1.4 美国白蛾Hcmasc雄性化位点分析 |
| 4.1.5 HcmascC突变体获得 |
| 4.1.6 piggyBac介导的转基因过表达突变体表型分析 |
| 4.1.7 转基因突变体Hcmasc及相关假定剂量补偿基因表达分析 |
| 4.1.8 数据处理 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 Hcmasc基因克隆、剪接体鉴定和保守性分析 |
| 4.2.2 Hcmasc基因表达模式分析 |
| 4.2.3 Hcmasc基因4 号外显子上的半胱氨酸是其雄性化重要的功能位点 |
| 4.2.4 HcmascC共同区突变体表型分析 |
| 4.2.5 piggyBac介导的Hcmasc1 转基因过表达致死 |
| 4.3 小结 |
| 第五章 美国白蛾Hcser2雄性不育品系构建 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 主要试剂与仪器 |
| 5.1.3 Hcser2基因鉴定和表达分析 |
| 5.1.4 gRNA和 Cas9 mRNA体外合成 |
| 5.1.5 piggyBac介导的Hcser2 转基因RNAi质粒构建 |
| 5.1.6 美国白蛾胚胎显微注射 |
| 5.1.7 CRISPR/Cas9 介导的Hcser2 突变表型和靶位点突变检测 |
| 5.1.8 转基因Hcser2 RNAi突变体获得 |
| 5.1.9 Inverse PCR |
| 5.1.10 转基因Hcser2 RNAi突变体不育表型分析 |
| 5.1.11 数据处理 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 Hcser2克隆和保守位点分析 |
| 5.2.2 CRISPR/Cas9 介导的Hcser2 基因敲除突变体获得 |
| 5.2.3 转基因Hcser2 RNAi突变体获得 |
| 5.2.4 Hcser2 RNAi致雄性特异性不育表型且可遗传 |
| 5.3 小结 |
| 第六章 结论及讨论 |
| 6.1 讨论 |
| 6.1.1 美国白蛾性别决定通路的物种特异性 |
| 6.1.2 CRISPR/Cas9 介导的基因敲除在美国白蛾遗传防治中的潜在应用 |
| 6.1.3 piggy Bac介导的转基因突变体在美国白蛾遗传防治中的潜在应用 |
| 6.1.4 基因驱动系统是美国白蛾遗传防治的未来发展方向 |
| 6.2 结论 |
| 6.3 创新性 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（8）家蚕丝氨酸蛋白酶Ser2和Osp参与生殖调控的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.1.1 生殖能力强是昆虫保持经久不衰的基础 |
| 1.1.2 家蚕是探究昆虫生殖调控的理想模式动物 |
| 1.2 昆虫生殖腺及其分泌蛋白的研究进展 |
| 1.2.1 昆虫生殖腺的结构 |
| 1.2.2 昆虫生殖腺分泌蛋白的功能 |
| 1.3 昆虫生殖调控的研究进展 |
| 1.3.1 昆虫生殖调控的类型 |
| 1.3.2 昆虫生殖调控的应用 |
| 1.4 家蚕转录组学技术的研究进展 |
| 1.4.1 转录组学技术的发展 |
| 1.4.2 转录组学技术在家蚕中的应用 |
| 1.5 家蚕基因组编辑CRISPR/Cas9 技术的研究进展 |
| 1.5.1 基因组编辑技术的发展 |
| 1.5.2 CRISPR/Cas9 技术在家蚕中的应用 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 1.6.1 生殖腺分泌蛋白在昆虫交配繁殖调控中至关重要 |
| 1.6.2 家蚕作为理想模式昆虫其研究结果可推广至其它物种 |
| 1.6.3 生殖调控为昆虫经济性状改良及害虫生物防治提供新策略 |
| 1.7 本研究的主要内容 |
| 1.7.1 家蚕生殖腺的转录组研究 |
| 1.7.2 家蚕Ser2 基因突变体构建与精子功能调控研究 |
| 1.7.3 家蚕Osp基因突变体构建与卵子发生调控研究 |
| 1.8 本研究的技术路线 |
| 第二章 家蚕生殖腺的转录组研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 家蚕品系和饲养条件 |
| 2.2.2 家蚕组织解剖 |
| 2.2.3 家蚕组织总RNA样品制备 |
| 2.2.4 基因克隆及检测 |
| 2.2.5 转录组测序分析 |
| 2.2.6 性别特异性表达基因筛选 |
| 2.2.7 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 家蚕生殖腺组织结构 |
| 2.3.2 家蚕组织RNA质检和测序结果分析 |
| 2.3.3 家蚕精巢转录组数据分析 |
| 2.3.4 家蚕卵巢转录组数据分析 |
| 2.3.5 家蚕雄性副性腺转录组数据分析 |
| 2.3.6 家蚕雌性副性腺转录组数据分析 |
| 2.3.7 家蚕生殖腺共表达基因分析 |
| 2.3.8 家蚕性别特异性表达的候选基因 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 家蚕Ser2 基因突变体构建与精子功能调控研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 家蚕品系和饲养条件 |
| 3.2.2 Ser2 蛋白系统发育树构建和蛋白序列分析 |
| 3.2.3 家蚕组织解剖 |
| 3.2.4 基因克隆及表达谱分析 |
| 3.2.5 家蚕Ser2 基因突变体构建 |
| 3.2.6 家蚕Ser2 基因突变表型分析 |
| 3.2.7 转录组测序分析 |
| 3.2.8 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 Ser2 蛋白系统进化相对保守 |
| 3.3.2 CRISPR/Cas9 技术介导的家蚕Ser2 基因靶向突变 |
| 3.3.3 家蚕Ser2 基因突变导致雄性不育 |
| 3.3.4 家蚕Ser2 基因突变体成虫的交配行为 |
| 3.3.5 家蚕雄性Ser2 基因突变体的精子未能入卵受精 |
| 3.3.6 家蚕Ser2 基因突变体成虫的RNA-seq分析 |
| 3.3.7 CRISPR/Cas9 技术介导的家蚕Ser2 基因突变可稳定遗传 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 家蚕Osp基因突变体构建与卵子发生调控研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 家蚕品系和饲养条件 |
| 4.2.2 Osp蛋白系统发育树构建 |
| 4.2.3 家蚕组织解剖 |
| 4.2.4 基因克隆及表达谱分析 |
| 4.2.5 家蚕Osp基因突变体构建 |
| 4.2.6 家蚕Osp基因突变表型分析 |
| 4.2.7 统计学分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 Osp蛋白系统进化高度保守 |
| 4.3.2 CRISPR/Cas9 技术介导的家蚕Osp基因靶向突变 |
| 4.3.3 家蚕Osp基因突变导致雌性不育 |
| 4.3.4 家蚕Osp基因突变体成虫的交配行为 |
| 4.3.5 家蚕雌性Osp基因突变体的卵巢和卵子发育异常 |
| 4.3.6 CRISPR/Cas9 技术介导的家蚕Osp基因突变可稳定遗传 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 研究总结 |
| 5.2 研究创新点 |
| 5.3 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 实验主要药品试剂 |
| 附录二 实验主要仪器 |
| 附录三 攻读博士学位期间发表的学术论文及参与的项目 |
| 致谢 |
（9）CRISPR/Cas9介导的小菜蛾对Bt Cry1Ac毒素抗性的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 小菜蛾研究概况 |
| 1.1.1 小菜蛾的形态特征和进化优势 |
| 1.1.2 小菜蛾的分布和为害状况 |
| 1.1.3 小菜蛾抗药性研究进展 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌Bt及其杀虫蛋白研究概况 |
| 1.2.1 Bt研究概况 |
| 1.2.2 Bt杀虫晶体蛋白的分类和结构特征 |
| 1.2.3 Bt杀虫晶体蛋白的作用机制 |
| 1.3 昆虫对Bt抗性的研究概况 |
| 1.3.1 昆虫对Bt抗性现状 |
| 1.3.2 鳞翅目昆虫对Bt的抗性机制 |
| 1.3.3 小菜蛾对Bt抗性的研究概况 |
| 1.4 CRISPR/Cas9技术的研究进展 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas9系统的由来 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas技术发展历程 |
| 1.4.3 基因编辑技术的应用 |
| 1.5 主要内容和意义 |
| 1.5.1 主要内容 |
| 1.5.2 本研究的意义 |
| 第2章 CRISPR/Cas系统在节肢动物中的发展现状及应用前景 |
| 2.1 基因编辑技术概述 |
| 2.1.1 基因编辑技术的发展历史 |
| 2.1.2 CRISPR/Cas9序列的组成和原理 |
| 2.1.3 CRISPR/Cas9基因编辑后的修复方式 |
| 2.1.4 不同基因编辑系统的比较 |
| 2.1.5 CRISPR/Cas9基因编辑系统的应用 |
| 2.2 CRISPR/Cas9系统在昆虫中的应用 |
| 2.2.1 CRISPR/Cas9系统在双翅目昆虫中的应用 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9系统在鳞翅目昆虫中的应用 |
| 2.2.3 CRISPR/Cas9系统在直翅目昆虫中的应用 |
| 2.2.4 CRISPR/Cas9系统在鞘翅目昆虫中的应用 |
| 2.2.5 CRISPR/Cas9系统在膜翅目昆虫中的应用 |
| 2.3 CRISPR/Cas9系统在非昆虫节肢动物中的应用 |
| 2.3.1 CRISPR/Cas9系统在蜱螨目昆虫中的应用 |
| 2.3.2 CRISPR/Cas9系统在十足目昆虫中的应用 |
| 2.3.3 CRISPR/Cas9系统在端足目昆虫中的应用 |
| 2.3.4 CRISPR/Cas9系统在枝角目昆虫中的应用 |
| 2.4 sgRNA的设计与脱靶效应 |
| 2.5 基因编辑技术的发展前景 |
| 2.6 本章小结与讨论 |
| 第3章 小菜蛾CRISPR/Cas9基因编辑体系的构建 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 小菜蛾种群 |
| 3.1.2 小菜蛾中肠PxABCC2与PxABCC3基因sgRNA靶标序列的设计 |
| 3.1.3 sgRNAs靶标序列的体外合成 |
| 3.1.4 Cas9蛋白 |
| 3.1.5 小菜蛾卵的收集和显微注射 |
| 3.1.6 PxABCC2与PxABCC3基因突变个体的无损检测 |
| 3.1.7 ABCC2KO和ABCC3KO纯合突变种群的构建 |
| 3.2 结果分析 |
| 3.2.1 小菜蛾CRISPR/Cas9基因编辑体系的构建 |
| 3.2.2 ABCC2KO和ABCC3KO纯合突变种群的构建 |
| 3.3 本章小结与讨论 |
| 第4章 ABCC2KO和ABCC3KO种群对Cry1Ac毒素的响应 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 供试小菜蛾种群 |
| 4.1.2 Bt毒素的制备 |
| 4.1.3 小菜蛾生物学测定分析 |
| 4.1.4 显性度分析 |
| 4.1.5 染色体遗传互补分析 |
| 4.1.6 小菜蛾中肠BBMV蛋白与Cry1Ac毒素的结合分析 |
| 4.2 结果分析 |
| 4.2.1 ABCC2KO和ABCC3KO种群对Cry1Ac毒素的敏感性 |
| 4.2.2 ABCC2KO和ABCC3KO种群对Cry1Ac抗性的遗传分析 |
| 4.2.3 基因编辑种群的BBMV蛋白与Cry1Ac毒素的结合分析 |
| 4.3 本章小结与讨论 |
| 第5章 小菜蛾APNs基因的体外异源表达分析 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 草地贪夜蛾Sf9昆虫细胞继代培养 |
| 5.1.2 小菜蛾APNs基因克隆及重组质粒构建 |
| 5.1.3 细胞转染及免疫荧光定位 |
| 5.1.4 APN重组蛋白与Cry1Ac毒素的体外结合分析 |
| 5.2 结果分析 |
| 5.2.1 PxAPNs基因的克隆及表达分析 |
| 5.2.2 受体功能分析 |
| 5.3 本章小结与讨论 |
| 第6章 小菜蛾中肠PxAPN1和PxAPN3a基因敲除及功能验证 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 小菜蛾种群 |
| 6.1.2 PxAPN1和PxAPN3a基因sgRNA靶标序列的设计与体外合成 |
| 6.1.3 Cas9蛋白的准备 |
| 6.1.4 小菜蛾卵的收集和显微注射 |
| 6.1.5 小菜蛾PxAPN1和PxAPN3a基因突变个体的无损检测 |
| 6.1.6 APN1KO和APN3aKO纯合突变种群的构建 |
| 6.1.7 APN1KO和APN3aKO种群生物学测定分析 |
| 6.1.8 显性度和染色体遗传互补分析 |
| 6.2 结果分析 |
| 6.2.1 APN1KO和APN3aKO纯合突变种群的构建 |
| 6.2.2 APN1KO和APN3aKO种群对Cry1Ac毒素的生物学测定分析 |
| 6.2.3 APN1KO和APN3aKO种群对Cry1Ac毒素抗性的遗传分析 |
| 6.3 本章小结与讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读学位期间所完成的论文 |
| 附录B 攻读学位期间参加的科研课题 |
| 致谢 |
（10）雄蚕品种选育及产业化应用20年的回顾与展望（论文提纲范文）
| 1 家蚕性连锁平衡致死系的转育改良方法研究 |
| 1. 1 性连锁平衡致死系的利用原理 |
| 1. 2 转育改良方法及其特点 |
| 2 家蚕性别控制种质资源库的构建 |
| 2. 1 性连锁平衡致死系种质资源 |
| 2. 2 限性系统种质资源 |
| 2. 3 雌蚕无性克隆种质资源 |
| 3 实用化雄蚕品种的选育 |
| 3. 1 中丝量雄蚕品种夏·华 × 平8 |
| 3. 2 中丝量雄蚕品种秋·华 × 平30 |
| 3. 3 中丝量雄蚕品种秋丰 × 平28 |
| 3. 4 中丝量雄蚕品种限7 × 平48 |
| 3. 5 多丝量雄蚕品种华菁 × 平72 |
| 3. 6 多丝量雄蚕品种鲁菁 × 华阳 |
| 3. 7 适合云南蚕区饲养的雄蚕品种云蚕7 × 红平2 |
| 3. 8 无性克隆系与平衡致死系杂交育成的雄蚕品种雌35 × 平28 |
| 4 雄蚕品种繁育技术研究 |
| 4. 1 低成本雄蚕杂交种繁育方法 |
| 4. 2 雄蚕种生产的系列技术标准制定 |
| 4. 3 CCD蚕卵自动分选机研制 |
| 5雄蚕品种的生产应用及雄蚕丝生产的产业化发展 |
| 5. 1 雄蚕品种的应用 |
| 5. 2 雄蚕丝产业化生产的展望 |
四、家蚕雄性品种引进试验及其应用前景分析（论文参考文献）
- [1]松毛虫赤眼蜂繁殖性状的遗传改良研究[D]. 于茜. 沈阳农业大学, 2021(05)
- [2]中国家蚕种质资源与品种选育研究进展[J]. 钱荷英,张潇,叶夏裕,赵国栋,李刚,刘明珠,徐安英. 江苏农业科学, 2020(24)
- [3]韭菜迟眼蕈蚊性别决定关键基因tra2的克隆及功能探索[D]. 王晓兰. 山东农业大学, 2020(01)
- [4]一种诱导的高蛋白血症无脊椎动物疾病模型及其病理影响研究[D]. 王永峰. 苏州大学, 2020
- [5]耐高温家蚕的制备及转基因家蚕的安全性评价[D]. 王玉梅. 西南大学, 2020(01)
- [6]近红外、拉曼光谱快速无损检测技术在蚕桑产品中的应用[D]. 马月. 江苏科技大学, 2020(03)
- [7]基于基因组编辑和转基因技术的美国白蛾种群遗传调控研究[D]. 李小卫. 西北农林科技大学, 2020(02)
- [8]家蚕丝氨酸蛋白酶Ser2和Osp参与生殖调控的研究[D]. 徐霞. 华东师范大学, 2020(08)
- [9]CRISPR/Cas9介导的小菜蛾对Bt Cry1Ac毒素抗性的分子机制研究[D]. 孙丹. 湖南大学, 2020(02)
- [10]雄蚕品种选育及产业化应用20年的回顾与展望[J]. 王永强,祝新荣,何克荣,夏建国,孟智启. 蚕业科学, 2016(02)