一、抗变形链球菌卵黄抗体的研制（论文文献综述）
张凡庆[1]（2020）在《猪源抗猪腹泻重要病原体单链抗体及其保护作用研究》文中研究表明仔猪腹泻占新生仔猪总死亡率的50%以上,是对养猪业造成经济损失的重要疾病之一。目前临床常见的仔猪腹泻病原包括猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus,TGEV）和产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）。发病仔猪表现为腹泻、脱水、生长迟缓和最终死亡。PEDV和TGEV的预防措施是将疫苗免疫母猪,初生仔猪吸吮乳汁被动获得抗体。然而疫苗不能使所有母猪产生高水平乳源抗体,每头仔猪吮乳时间长短不同,很难保证仔猪都获得足够抗体抵抗病毒感染。ETEC的防控依靠抗生素,然而抗生素的大量使用容易导致ETEC产生耐药性。鉴于此,寻求有效对抗这些病原感染的新型免疫制剂显得极为重要。对于消化道病原感染,给动物口服特异性抗体或抗体衍生物是有效的防治方式。然而传统的抗体制剂存在均一性差、抗体来源与受治动物种属不同易产生免疫排斥等问题。随着生物技术的发展,基因工程抗体成为新型抗体制剂的研究热点,基因工程抗体中最具代表性的是单链抗体（single-chain fragment variable,scFv）。人类医学领域有关scFv治疗疾病的研究已很成熟,兽医领域的相关研究则刚刚开始,特别是猪源性scFv的研究以及scFv防治猪腹泻病原的感染鲜有报道,而这方面的研究对猪腹泻病原体新型防治策略的研发具有重要意义。基于此,本研究构建了猪源噬菌体-scFv库,筛选了抗猪源腹泻病原体（PEDV、TGEV和ETEC）scFv,并研究了scFv的生物学特性和保护作用。研究内容包括五个方面:1猪源性抗猪腹泻重要病原体scFv的获得为了获得抗猪腹泻重要病原体scFv序列,构建了猪源噬菌体-scFv库,库容量为5.5×107 cfu/m L(VH-Linker-VLκ)和7.2×107 cfu/mL（VH-Linker-VLλ）。从库中随机挑取12个克隆测序,证实构建的库来源于猪抗体序列,具有多样性。分别以PEDV、TGEV全病毒以及提纯的ETEC K88ac菌毛作为抗原,对构建的猪源噬菌体-scFv库进行筛选,获得了3株高亲和力的抗PEDV scFv（PZZ 21、PZZ 24和PZZ 35）、4株抗TGEV scFv（TZZ 14、TZZ 19、TZZ 43和TZZ 46）以及2株抗ETEC K88ac scFv（EZZ 3和EZZ 24）。将scFv序列进行原核表达及纯化,获得了具有活性的可溶性蛋白。这些猪源scFv应用于仔猪时避免了因抗体与受治动物种属不同而造成机体对抗体产生免疫排斥。2 scFv的生物学特性研究2.1抗PEDV和TGEV scFv的生物学特性研究为了研发抗PEDV和TGEV的新型scFv口服制剂,对针对PEDV和TGEV scFv的生物学特性进行研究。稳定性试验发现4℃保存时添加蛋白酶抑制剂延长了scFv的活性。亲和力试验证实这些scFv的亲和力均在107-108 M-1。分析scFv结合的病毒蛋白,发现PZZ 21、PZZ 24和PZZ 35均与PEDV S蛋白的S1亚基结合,TZZ 14、TZZ 19和TZZ 46与TGEV S蛋白结合,TZZ 43与TGEV N蛋白结合。病毒中和实验证实上述针对S蛋白的scFv具有抗病毒效果,而且将PZZ21、PZZ 24和PZZ 35联合使用的抗病毒效果好于单个scFv,TZZ 14、TZZ 19和TZZ 46也显示出协同作用。分析scFv影响PEDV感染细胞的阶段,发现PZZ21、PZZ 24和PZZ 35在病毒结合细胞时发挥抗病毒作用,而在入侵阶段无作用。2.2抗ETEC K88ac菌毛scFv的生物学特性研究ETEC K88ac菌毛介导细菌对肠上皮的黏附,是引起腹泻的先决条件。细胞黏附抑制实验证实抗ETEC K88ac的scFv EZZ 3和EZZ 24能抑制ETEC黏附IPEC-J2细胞,抑制率达51.9±2.7%和46.7±2.1%,EZZ 3和EZZ 24联合使用对细菌的黏附抑制率达62.6±1.5%。进一步建立了ETEC感染小鼠的腹泻模型,使用该模型分析了EZZ 3和EZZ 24对小鼠的保护作用。结果发现,与ETEC攻毒组相比,scFv处理组小鼠感染ETEC后仅表现轻度腹泻症状,肠道结构完整。此外scFv口服不会造成小鼠组织细胞损伤,不影响小鼠生长,具有安全性。3壳聚糖纳米scFv口服制剂的研制虽然上述研究证明抗PEDV和TGEV scFv在体外中和病毒感染,抗ETEC scFv对ETEC引起的小鼠腹泻具有保护作用,但仔猪消化道环境复杂,抗体口服后可能会受到胃部酸性环境和蛋白酶影响导致疗效降低。为了提高scFv在仔猪胃肠道稳定性,本研究以羧甲基壳聚糖为原料制备了p H响应性scFv纳米口服制剂（CMCS/CS-scFv）。通过优化投入比例和反应条件,得到的CMCS/CS-scFv粒径为292±21 nm,PDI为0.24±0.12。CMCS/CS-scFv纳米制剂眼观呈光泽的乳白色,透射电镜下呈现球形,大小均一。CMCS/CS-scFv能抵抗胃酸对scFv的破坏,其释放具有p H响应性,酸性环境下少量释放,碱性环境中快速释放。此外CMCS/CS-scFv对肠道细胞和仔猪没有毒性,具有安全性。本研究为开发scFv口服制剂的新剂型提供了科学依据。4纳米口服制剂CMCS/CS-scFv对仔猪病原性腹泻的保护作用研究为了验证CMCS/CS-scFv对仔猪腹泻的保护功能,首先比较了scFv和CMCS/CS-scFv对仔猪感染单一病原体的保护效果。PEDV的仔猪保护实验发现,CMCS/CS-PZZ（PZZ包括scFv PZZ 21、PZZ 24和PZZ 35）和PZZ灌服后对仔猪感染PEDV具有保护作用,而且CMCS/CS-PZZ处理后仔猪的腹泻指数显着低于口服PZZ（p<0.05）,显示出更好的保护效果。TGEV动物实验也证实CMCS/CS-TZZ（TZZ包括scFv TZZ 14、TZZ 19和TZZ 46）处理组对仔猪腹泻的保护效果好于TZZ处理组,粪便病毒载量显着低于TZZ处理组（p<0.05）。ETEC动物实验证实CMCS/CS-EZZ对仔猪感染ETEC提供保护,而且CMCS/CS-EZZ口服后保护效果好于EZZ。针对仔猪腹泻往往是多个病原混合感染,将CMCS/CS-scFv（包括PZZ、TZZ、EZZ）联合应用,发现CMCS/CS-scFv灌胃后粪便中病毒粒子和细菌数量显着低于攻毒组（p<0.05）,存活率高于攻毒组,说明CMCS/CS-scFv联合应用对病原混合感染具有保护效果,为临床大规模应用和制剂优化奠定了基础。5分泌表达scFv的乳酸乳球菌对仔猪病原性腹泻的保护作用研究scFv治疗仔猪腹泻时,其在肠道存留时间越长效果越好,为了使scFv在肠道持续释放,受乳酸菌活载体疫苗的启发,将抗猪腹泻病原体scFv与乳酸乳球菌（Lactococcus lactis,L.lactis）表达系统结合,构建了分泌表达scFv的重组L.lactis-scFv（scFv包括PZZ 21、TZZ 19和EZZ 3）。体外实验测定了重组L.lactis-scFv的酸碱耐受性,体内实验证实重组L.lactis-scFv靶向定殖在仔猪肠道黏膜并分泌scFv。细胞保护实验证实了分泌的抗病毒scFv对PEDV、TGEV的中和效果,抗K88ac scFv对ETEC黏附细胞的抑制作用。动物保护实验证实重组L.lactis-scFv口服后对仔猪感染腹泻病原产生保护作用,PEDV、TGEV或ETEC感染引起的腹泻症状减轻。本研究为治疗仔猪腹泻的新型scFv口服投递系统研发提供了科学依据。综上所述,本研究首先构建了猪源噬菌体-scFv库,从中筛选到具有活性的抗PEDV、TGEV和ETEC K88ac scFv;然后通过细胞实验分析了抗PEDV和TGEV scFv结合的病毒蛋白及中和病毒作用,细胞黏附抑制实验和小鼠保护实验证实了抗ETEC K88ac scFv防治腹泻的功能;进一步研制了抵抗胃部酸性环境和蛋白酶的纳米口服制剂CMCS/CS-scFv,增加了scFv口服稳定性;仔猪保护实验证实了scFv和CMCS/CS-scFv对PEDV、TGEV和ETEC引起的仔猪腹泻均具有保护作用,并且口服CMCS/CS-scFv具有比scFv更好的保护效果;将CMCS/CS-scFv联合应用,证实对仔猪腹泻病原混合感染提供保护;构建了分泌表达scFv的重组L.lactis-scFv,证实了重组L.lactis-scFv口服后对仔猪感染腹泻病原体具有良好的保护作用。本研究为仔猪腹泻病原的防治探索了新的途径,也为其它动物疫病的抗体制剂防治提供了有益借鉴。
胡瑞鸿[2]（2020）在《抗H株小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与质量评估》文中进行了进一步梳理小鹅瘟（Gosling plague,GP）又称为鹅细小病毒病,是由鹅细小病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病,是危害养鹅业的主要传染病。近年来,根据遗传进化分析,小鹅瘟病毒（Gosling plague virus,GPV）的毒力有增强趋势,给该病的防治带来更大的挑战。目前GP的特异性防治主要依赖接种卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk,IgY）进行被动免疫,对GP强毒感染具有明显的防治效果。由于IgY具有价格低廉、防治效果好等优点,已被广大养鹅户接受和采用。但目前使用的IgY多为粗制抗体,缺乏统一的生产、检验标准,琼扩抗体效价高低不等,故研制一种纯度及效价高,防治效果好,有统一生产标准的GPV IgY势在必行。本研究从黑龙江省某地饲养的雏鹅群中,采集疑似GP病死鹅的病料,进行GPV的分离鉴定,利用分离获得的GPV研制抗GP的IgY,并对其质量进行评价,具体研究内容和方法如下:（1）GPV的分离鉴定用氯仿提取法从疑似GP病死鹅的肝、脾组织中分离病毒,接种3日龄雏鹅和12日龄鹅胚进行病毒分离;分离的病毒经特异性检验（琼脂扩散试验（AGP）和鹅胚中和试验）、超微结构观察、毒力测定、理化特性（热敏感试验、乙醚敏感试验、氯仿敏感试验、胰蛋白酶敏感试验、耐酸性试验）检验、纯净性试验、核酸检测、VP3基因序列鉴定及基因进化树分析,进行综合鉴定。（2）GPV IgY的研制将分离鉴定获得的GPV（命名为H株）,经鹅胚逐级传代至F10,F10代进行1000倍稀释,接种12日龄鹅胚,收获鹅胚液作为GPV灭活疫苗抗原,抗原无菌检验和毒力检测合格后,进行浓缩及灭活,通过接种12日龄鹅胚进行灭活检验;灭活检验合格后进行GPV灭活疫苗的配制及乳化,获得GPV灭活疫苗,对其进行物理性状、无菌检验及安全性检验;将检验合格的GPV灭活疫苗按经典免疫程序免疫产蛋鸡,当高免鸡蛋卵黄液的GPV IgY琼扩抗体效价≥1:64时,对其进行除脂、提取和灭活,制备出抗H株GPV IgY。（3）抗H株GPV IgY的质量评价通过监测GPV IgY的琼扩抗体效价对GPV IgY的理化特性（温度、酸碱度、胃蛋白酶的作用时间、冻融次数）进行评价;通过GPV IgY单次单剂量、重复单剂量和单次大剂量皮下注射3日龄雏鹅及小白鼠的安全性试验,观察雏鹅和小白鼠的健康状况,局部及全身反应情况对GPV IgY的安全性进行评价;通过不同琼扩抗体效价和不同剂量的GPV IgY对GPV强毒攻毒24 h雏鹅的治疗试验、对GPV感染不同时长和不同日龄雏鹅的治疗试验,依据雏鹅治愈率,对GPV IgY治疗效果进行评价;用不同琼扩抗体效价和不同免疫剂量的GPV IgY对雏鹅皮下接种,24 h后用GPV强毒攻毒,依据雏鹅保护率进行预防效果评价;同类产品免疫3日龄雏鹅,依据雏鹅保护率与治愈率,评价GPV IgY与同类产品的差异。通过物理性状、无菌检验、支原体检验、GPV IgY琼扩抗体效价监测及对雏鹅攻毒保护率监测,确定GPV IgY的储存温度和时间。试验结果表明:（1）GPV的分离鉴定结果分离的病毒接种雏鹅,呈现与GP一致的临床症状和病理剖检变化;接种鹅胚,可在鹅胚中增殖,且为非血凝性感染病毒;AGP显示,从雏鹅和鹅胚分离的病毒液与GP阳性血清之间出现沉淀线;鹅胚中和试验证明,病毒液能被GP阳性血清中和,中和后的病毒液接种鹅胚不引起死亡;电镜下观察,H株病毒粒子具有典型的细小病毒特征;H株鹅胚和雏鹅传代培养F6～F10代,毒价最高且稳定,病毒的ELD50和LD50分别大于10-5.0/0.2 m L和10-4.0/0.2m L;以分离到的H毒株分别接种3日龄、10日龄、20日龄雏鹅,其致病性随雏鹅日龄增大而减弱;分离的病毒在56℃3 h保持其感染性,能够抵抗乙醚、氯仿、胰蛋白酶和酸性条件（p H3.0）的作用;分离的病毒液细菌、支原体和外源病毒检查均为阴性,证明H株病毒纯净;PCR核酸检测病毒约在500 bp处出现特异性DNA条带,DNA大小与GPV相符;上述结果表明,分离的病毒符合GP生物学特性,该病毒为GPV（命名为H株）。以PCR扩增出的VP3基因,与参考毒株的VP3基因序列对比,核苷酸的同源性在95.9%～99.1%之间,氨基酸同源性为97.9%～99.6%之间;基因进化树分析表明,H株与在黑龙江省分离的SP、ZZ、ZD、DQ、JX等毒株亲缘关系较与GD（广东）、YG（扬州）等毒株近。（2）GPV IgY的制备结果GPV H株灭活疫苗抗原无菌检验呈阴性、鹅胚液ELD50为10-5.22/0.2 m L、灭活检验鹅胚全部健活。GPV灭活疫苗的物理性状、无菌检验、安全检验均合格。用该GPV灭活疫苗免疫产蛋鸡,收集AGP≥1:64高免鸡蛋的卵黄液。高免卵黄液经酸化水1:8稀释、p H5.2、4℃作用15 h、1900 g离心20 min条件下除脂;酸化水-1.5%辛酸-33%硫酸铵提取;终浓度0.05%甲醛溶液经20～25℃灭活24 h,对GPV IgY的琼扩抗体效价、蛋白浓度及蛋白纯度均无显着影响,确定上述除脂、提取和灭活条件为最佳工艺。（3）GPV IgY的质量评价结果上述制备的抗H株GPV IgY在60℃以下作用2 h,GPV IgY琼扩抗体效价与对照比不降低,当温度达到70℃以上,琼扩抗体效价显着降低,当温度达到75℃作用30 min时,琼扩抗体效价呈阴性;p H范围在4.0～11.0时,GPV IgY琼扩抗体效价与对照比差异不显着,p H值为3.0和12.0时,GPV IgY琼扩抗体效价显着低于对照组;当胃蛋白酶作用6 h,琼扩抗体效价无变化,作用8 h以上显着降低;GPV IgY经5次反复冻融,琼扩抗体效价与对照比无显着差异;GPV IgY免疫雏鹅和小白鼠均未出现任何注射局部和全身不良反应,精神状态良好,采食正常;GPV IgY对雏鹅治疗效果表明,琼扩抗体效价越高、注射剂量越大,雏鹅治愈率越高;病毒感染雏鹅的时间越长、雏鹅日龄越大,雏鹅治愈率越低;GPV IgY对雏鹅预防效果表明,同一注射剂量,琼扩抗体效价越高,雏鹅保护率越高,同一琼扩抗体效价,注射剂量增加,雏鹅保护率增高;GPV IgY免疫雏鹅后12 h～10 d,对雏鹅保护率高达88.00%以上,可有效抵抗病毒感染。差异对比试验表明,研制的GPV IgY的雏鹅保护率与治愈率均高于同类产品。（4）GPV IgY的储存条件2～8℃储存24个月,GPV IgY的物理性状、纯净性、琼扩抗体效价稳定,对雏鹅感染GPV的保护率达88.00%以上。（5）GPV IgY推荐使用剂量和方法对已感染GPV的雏鹅,选择GPV IgY琼扩抗体效价为1:16以上,1.0 m L/只;对未感染雏鹅进行紧急预防免疫,0.5 m L/只,皮下注射,对GPV感染的治愈率和保护率均达80.00%。
刘蕊[3]（2019）在《禽心包积液-肝炎综合征IgY脂质体的制备及其雏鸡保护试验》文中研究说明腺病毒属中的家禽腺病毒分为众多的血清型,其中Ⅰ群的血清4型（Fowl Adenovirus Serotype 4,FAV-4）引发一种新流行的呈现急性死亡且全群传染的禽类疾病:心包积液-肝炎综合征（Hydropericardium-hepatitis Syndrome,HHS）。临床症状表现为35周龄的家禽突然出现死亡,尤其多发于肉鸡品种,大体眼观病变可见出血性肝炎和心包积液,鉴于无明显的临床症状,预判该病就十分困难。安卡拉地区首先爆发HHS,随后,中国于2015年开始在多省市爆发且广泛流行,本实验室于2016年7月首次分离鉴定出天津地区FAV-4毒株TJ1607,随后选用1日龄雏鸡,利用TJ1607毒株构建了疾病模型。总结前人的经验,本试验制备了以纯化TJ1607毒株为抗原的弗氏佐剂灭活疫苗,继疫苗质量检验合格后,多次免疫高产蛋鸡,制备精制高免TJ1607 IgY和精制高免TJ1607 IgY脂质体,随后进行了IgY抗体的雏鸡保护试验,显示出一定的防治效果,同时建立了检测血清中TJ1607抗体的间接ELISA方法,具体试验内容如下:1.TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗的制备。以增殖和纯化的TJ1607毒株为抗原,以弗氏佐剂为油乳剂,制备TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗。疫苗经检验,滴水试验未见分散;无菌检验未见细菌生长;离心试验未见分层;动物试验显示接种健康雏鸡后无不良反应,综上表明所制备的疫苗可用于后续的试验研究。2.TJ1607 IgY抗体的制备。选用高产蛋鸡,将TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗对其进行多次接种,第三次接种后的第17天抗体效价达到1:128且持续不变,此时收集鸡蛋,获得高效价的TJ1607卵黄抗体。对提纯条件进行优化,选用水稀释法、辛酸-硫酸铵沉淀法结合透析技术纯化TJ1607高免卵黄抗体,纯化后的IgY抗体效价不变但纯度更高,利用脂质体对其进行包裹,制备精制高免TJ1607 IgY和精制高免TJ1607 IgY脂质体。3.TJ1607血清抗体间接ELISA检测方法的建立。以纯化的TJ1607为抗原包被酶标板,TJ1607血清抗体为一抗,兔抗鸡辣根过氧化物酶为二抗,棋盘法筛选抗原、一抗及二抗的最佳稀释倍数,绘制阳性血清抗体浓度与OD值的标准曲线,计算拟合程度,重复性试验检验建立的检测方法。结果显示,TJ1607抗原的最佳包被浓度为350μg/mL,TJ1607血清抗体的最佳稀释度为1:3000,HRP-IgG（兔抗鸡）的最佳稀释度为1:2000;阳性血清抗体浓度与OD值线性关系良好,线性方程为y=21.751x-3.5781,R2=0.9993;重复性试验显示板内变异系数为1.68%4.88%,板间变异系数为4.03%9.85%,可用于后续血清样品的检测。4.TJ1607 IgY的雏鸡保护试验。攻毒雏鸡保护试验结果表明精制高免TJ1607 IgY对天津地区HHS的治愈率为85%,预防保护率为100%,可有效的防治天津地区HHS的流行。抗体消长动态试验结果表明精制高免TJ1607 IgY与粗制高免TJ1607 IgY相比,吸收较好且产生抗体迅速,达到峰值时间较快,但缓释效果不如粗制IgY,可应用于紧急情况下的防疫和免疫时的多次接种。IgY抗体口服试验结果表明精制高免TJ1607 IgY原液口服无效,制备成精制高免TJ1607 IgY脂质体后,可用于口服免疫。
张忠宝,孙礼进,曾波,陈咏梅,张智,李再新[4]（2019）在《变形链球菌gtf S、gbp B基因的串联表达及其卵黄抗体的制备》文中研究指明目的:串联表达变形链球菌毒力基因gtfS、gbpB的重组融合蛋白,将其作为免疫抗原制备特异性卵黄抗体,并研究该卵黄抗体的免疫活性。方法:以变形链球菌标准菌株UA159的基因组为模板,通过PCR方法扩增gtfS的CAT区和gbpB的SYI区,以SOE-PCR方法将其串联成基因片段CAT-SYI。在限制性内切酶EcoRⅠ-HF和XhoⅠ及T4 DNA连接酶的作用下构建重组质粒pET32a-CAT-SYI,转化表达菌株E. coli BL21,用1 mmol/L IPTG诱导表达后超声破碎重组菌,将提取纯化的重组融合蛋白免疫产蛋鸡并从鸡蛋中提取卵黄抗体,利用ELISA、Western blot和斑点杂交分析该抗体的特异性和免疫活性。结果:经PCR、SOE-PCR成功扩增出约750 bp的串联基因CAT-SYI,SDS-PAGE检测结果表明其表达产物约50 kD,与目的蛋白大小符合。ELISA间接法测得卵黄抗体的效价可达1∶100 000以上,Western blot鉴定结果显示IgY的特异性,在相对分子量约为35 kD和70 kD处出现相应的条带,斑点杂交检测结果显示特异性卵黄抗体具有识别变形链球菌的能力。结论:制备的特异性卵黄抗体具有良好的抗变形链球菌免疫活性,为免疫防龋奠定了基础。
周莉莉[5]（2019）在《抗变异链球菌卵黄抗体对变异链球菌抑制作用的研究》文中指出目的变异链球菌（Streptococcus mutans,S.mutans）是龋病的主要病原体之一,卵黄抗体（immunoglobulin of yolk,IgY）是禽类经特异性抗原刺激,由B淋巴细胞产生,并移至卵黄中的抗体,制备并纯化抗变异链球菌卵黄抗体（抗S.mutans-IgY）,测定不同浓度S.mutans-IgY对变异链球菌的OD值、胞外多糖、葡糖基转移酶活性、生物膜形成及活性的影响。研究抗S.mutans-IgY的的抑菌机制,为卵黄抗体防龋特性提供更有利的理论依据。抗S.mutans-IgY作为稳定、安全、无耐药性等特点的新型药物,为临床防治龋病提供新的思路。方法将甲醛灭活的S.mutans免疫150日龄白航蛋鸡4次,每次间隔10d,取鸡蛋用两步硫酸铵沉淀法提取IgY,ELISA检测免疫后效价变化,采用BCA法测提纯后的抗S.mutans-IgY浓度。在不同浓度卵黄抗体中培养变异链球菌,分别于培养0h、3 h、6h、9h、12h、15h、18h、21h、24h、27h时,利用紫外分光光度计,选取630 nm波长并测定各时间段的细菌OD值,并绘制生长抑制曲线图。蒽酮法测定水不溶性及水溶性胞外多糖、Neson-Somogyi法测定GTF酶活性,采用扫描电镜观察牙菌斑生物膜形态;XTT还原比色法研究IgY对生物膜总量的影响;采用激光共聚焦显微镜（CLSM）观察牙菌斑生物膜厚度以及死菌和活菌的构成比的变化。所有的实验数据均采用SPSS 16.0统计软件进行分析。结果ELISA检测抗S.mutans-IgY的效价为1:256000,并保持40d,BCA法测得提纯后IgY,经换算1g卵黄经两步硫铵沉淀纯化后可得总IgY约13mg。随着IgY浓度的增加,24 h细菌OD值呈下降趋势,4 mg/L和8 mg/LIgY组生长曲线平缓且低伏。IgY对S.mutans合成水不溶性胞外多糖的能力较对照组有明显抑制,且差异有统计学意义;IgY作用后S.mutans还原糖、酶活力均降低,且差异有统计学意义;扫描电镜观察24h后的牙菌斑生物膜,细菌之间的交联紧密,密集交联成网状结构;XTT法结果显示IgY对S.mutans生物膜抑制率为17.02%74.13%;CLSM观察到随着药液浓度增加,绿色的活菌、团块结构减少,生物膜厚度明显减少。结论抗S.mutans-IgY能够有效地抑制变异链球菌的生长、致龋毒力因子及菌斑生物膜的活性,一定浓度IgY能够抑制S.mutans的增殖,具有抗龋作用。
阳元娥[6]（2016）在《抗甲型流感病毒卵黄抗体的制备、活性评价及其应用研究》文中认为由于甲型流感病毒变异快、抗甲流病毒的化学药物毒副作用大,易产生耐药性,同时有效疫苗的制备难度很大,因此寻找一种安全、简便、高效的甲型流感防治药物成为目前具有挑战性的研究课题。卵黄抗体（Egg yolk immunoglobulin, IgY）具有来源广、特异性好、安全无残留、性能稳定及价格合理等优点,在病毒性疾病的预防、治疗和诊断方面具有广阔的应用前景。本课题采用灭活甲型流感病毒为抗原免疫产蛋鸡,制备特异性IgY,对IgY的体内外抗病毒活性及其在甲型流感病毒检测中的应用进行研究,为特异性IgY在甲型流感的预防、治疗及检测方面的应用提供理论依据。研究内容分为四部分：1抗甲型流感病毒卵黄抗体的制备1.1以灭活甲型H1N1流感病毒A/广东/732/2009（H1N1）pdm09和A/加利福尼亚州/7/2009（H1N1）pdm09毒株及季节性甲型流感病毒A/广东/622/2009（H1 N1）和A/广东/749/2009（H3N2）毒株为抗原分别免疫蛋鸡获得特异性IgY。采用PEG沉淀法得到IgY纯度95.80%,回收率93.01%。1.2经ELISA检测,不同抗原免疫产生的抗体效价随时间的变化趋势基本一致,1 mg/mL的IgY的最高效价达3200,最高效价在卵黄中可持续6周,高效价抗体（>2500）在卵黄中可持续10周以上。2抗甲型H1N1流感病毒卵黄抗体的体外活性评价主要对抗甲型H1N1流感病毒A／广东/732/09（H1N1）pdm09 IgY的抗病毒活性进行了分子水平和细胞水平上的评价。2.1琼脂扩散和荧光免疫实验,结果表明IgY能与病毒颗粒结合并使其产生沉淀；Western Blot分析和HI实验,结果显示IgY能与病毒表面的主要膜蛋白神经氨酸酶（NA）、血凝素（HA）、核蛋白（NP）及基质蛋白（M）发生特异性结合,能有效抑制病毒对红细胞的凝集作用,1.0mg/mL的IgY能完全抑制红细胞凝集的最高稀释倍数为128。2.2空斑减数试验,结果说明IgY能有效中和病毒,直接抑制病毒对宿主细胞的吸附,IC50< 2.0 μg/mL;能有效阻止病毒吸附于细胞；能抑制细胞内病毒的复制增殖；体外抗病毒作用明显、稳定。3抗甲型H1N1流感病毒卵黄抗体的小鼠体内抗病毒活性研究3.1 IgY对A/广东/732/2009（H1N1）pdm09感染小鼠的死亡保护作用将BALB/C小鼠随机分为15组,正常组,模型组,磷酸奥司他韦治疗组,抗A/广东/732/09 （H1N1）pdm09 IgY预防组（含大、中、小剂量3组）、治疗组（含大、中、小剂量3组）和预防-治疗组（含大、中、小剂量3组）,阴性IgY中剂量预防组、治疗组和预防-治疗组。以5LD50的流感病毒液每只50.0gL滴鼻感染小鼠造模,正常组以生理盐水滴鼻对照。预防组在感染前2h给药1次；治疗组自感染后2h开始给药,每天1次,持续给药4天；预防-治疗组感染前2h给药1次,其他给药同治疗组。自造模当日起连续观察2周,计算各组存活率及体重保持率。结果显示：①模型组和阴性IgY各组的存活率都为10%。特异性IgY各组存活率≥90%,与模型相比较有极显着性差异,P<0.001。②模型组和阴性IgY各组的小鼠体重均先下降,后缓慢上升,显着低于正常组。特异性IgY各组体重明显高于模型组。特异性IgY中剂量治疗组的体重变化和存活率与磷酸奥司他韦治疗组无差异。3.2 IgY对A／广东/732/09 （H1N1）pdm09感染小鼠肺损伤及病毒增殖的影响将BALB/C小鼠随机分为6组,正常组,模型组,磷酸奥司他韦治疗组,抗A/广东/732/09 （H1N1）pdm09 IgY中剂量预防组、治疗组和预防-治疗组。分别在感染后第3天和第6天随机处死小鼠,摘取肺脏。计算肺指数与肺指数抑制率,应用RT-PCR测定感染小鼠肺组织病毒载量,HA实验测定感染小鼠肺组织病毒滴度,HE染色光镜观察感染小鼠肺部组织的病理学变化。结果显示：①各个时间点,模型组与IgY各组的肺指数均有上升趋势,但IgY各组肺指数明显低于模型组。感染后第3天,IgY各组与模型组相比有显着性差异,P<0.05；感染后第6天,IgY各组与模型组相比较有极显着性差异,P<0.01。②各个时间点,模型组小鼠肺组织病毒载量和病毒滴度都明显高于IgY各组。IgY预防-治疗组与模型组相比较,具有极显着差异,P<0.001；其他各组与模型组相比较,均具有极显着性差异,P<0.01。③在病理组织切片中,IgY各组的肺组织结构基本完整,坏死与浸润级别低。4甲型H1N1流感病毒表面增强拉曼光谱免疫分析方法的建立与应用以柠檬酸三钠为还原剂成功制备金溶胶；用4,4’-联吡啶作为拉曼标记分子对金溶胶进行标记制备标记金溶胶；用IgY与标记金溶胶结合制备标记免疫金溶胶；标记免疫金溶胶与标记金溶胶的SERS图谱相一致。采用硅烷化、醛基化的方法在凹形载玻片上进行IgY的组装,制备固相抗体。优化实验步骤,建立表面增强拉曼光谱标记免疫分析检测甲型H1N1流感病毒的方法,对甲型H1N1流感病毒进行检测,病毒滴度在0.2 TCID50到2000 TCID50范围内,4,4’-联吡啶的SERS信号和抗原浓度呈线性关系,线性方程是Y=2348.4 X-1525.8,相关系数为0.9998。
罗鑫龙,陈健芬,孙晓青,江千舟[7]（2011）在《IgY作用机理及其在牙膏中的应用研究》文中指出抗龋齿免疫球蛋白（Immunoglobulin Yolk,简称IgY）,是用变形链球菌等致龋菌抗原免疫产蛋母鸡,母鸡自身免疫应答产生的抗体转移至蛋黄中,通过凝胶层析等技术对蛋黄分离抽提制得抗体。本文系统地研究了抗龋齿IgY以及加入牙膏中对抗变形链球菌和远缘链球菌的作用机理。通过体外黏附电镜、人工菌斑扫描电镜发现,抗龋齿IgY和IgY牙膏在体外能够溶解细菌最外层的黏性物质,降低其黏附能力,改变菌斑的结构状态,减少菌斑的形成。通过3个月的儿童体内防龋效果评估、2年的成人和儿童体内临床试验证实:IgY牙膏对成人龋病和儿童乳牙龋病具有显着的预防作用。
杜洪桥,严家新[8]（2011）在《鸡卵黄抗体IgY在临床医学中的应用》文中研究表明卵黄抗体又称卵黄免疫球蛋白（IgY）,是一种7s免疫球蛋白。与哺乳动物IgG略有不同,在母鸡血清中选择性地转移到卵黄,是卵黄中唯一的免疫球蛋白。由于IgY具有化学性质稳定、产量高、成本低以及动物种系发生学距离的优势,使得IgY在制备多克隆抗体、免疫检测诊断、人类和动物疾病的预防治疗方面均得到了广泛的应用。
许银平[9]（2011）在《抗猪圆环病毒2型卵黄抗体的研制及效果的研究》文中进行了进一步梳理本研究制备了抗猪圆环病毒2型特异性卵黄抗体,研究了抗体体外和小鼠体内抑制病毒增殖的能力。主要研究内容如下：1.抗猪圆环病毒2型特异性卵黄抗体的制备选取32只22周龄健康产蛋鸡,随机分为4组,每组8只,每只为一个重复。对照组注射生理盐水,试验组1：用灭活的PCV2与弗氏佐剂乳化后逐次增加剂量免疫蛋鸡；试验组2：用灭活的PCV2与弗氏佐剂乳化后保持相同剂量免疫蛋鸡；试验组3：用PCV2免疫蛋鸡；共免疫五次。用ELISA和胶体金两种方法检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体水平,水稀释-硫酸铵一次盐析-二次盐析-透析-浓缩提取IgY, BCA法检测每一次提取后所获得的蛋白浓度,SDS-PAGE检测各步骤提取后IgY纯度。结果表明：各试验组蛋鸡的血清抗体水平始终高于卵黄抗体水平,试验组1所获得的抗体效价最高,最高效价可达到1：640,并且持续时间较长,持续时间可达8周以上；通过水稀释-硫酸铵一次盐析-二次盐析-透析-浓缩各步骤提取,每10 ml卵黄液最终可获得卵黄抗体51.67 mg；经SDS-PAGE检测,杂带较少,抗体纯度较高o2.抗猪圆环病毒卵黄抗体的体内外中和试验IgY的最大无毒作用浓度的研究：在96孔细胞培养板中,将卵黄抗体倍比稀释成不同浓度,加入长成良好的细胞,用倒置显微镜观察细胞病变情况；IgY体外中和试验：将卵黄抗体倍比稀释成不同浓度,与200 TCID50的PCV2体外中和1 h后加入长成良好的细胞,培养48 h后收集细胞,提取病毒DNA,通过实时荧光定量PCR测定病毒的拷贝数；IgY体内中和试验：选取30只8周龄SPF级BALB/c小鼠,分为3组,阴性对照组：腹腔注射生理盐水,0.5 ml/只；试验组：IgY与PCV2（107TCID50/ml）中和一个小时后腹腔注射,0.5 ml/只；阳性对照组：腹腔注射PCV2（107TCID50/ml）,0.5 ml/只,于7 d、14 d采集血液和组织,检测小鼠体内病毒复制情况和血清抗体水平。IgY细胞毒性试验结果表明：IgY不引起细胞产生CPE,但会促进细胞的生长,产生细胞堆积,并且随着IgY浓度的降低,堆积现象逐渐减少,当IgY浓度为0.9 mg/ml时,堆积现象消失；IgY体外中和试验表明：当IgY的浓度为225μg/ml时,阳性对照组和试验组细胞中PCV2的拷贝数存在显着差异,处理组IgY抑制了病毒的复制,并且随着IgY浓度的增加,病毒的拷贝数逐渐降低；IgY体内中和试验结果表明：当IgY浓度为100 mg/ml时,IgY能够明显抑制小鼠组织中PCV2的增殖。
苏娟[10]（2011）在《抗A族乙型溶血性链球菌卵黄抗体的制备及生物活性检测》文中指出乙型溶血性链球菌为链球菌感染中的主要致病菌,可根据其细胞壁中特异性抗原（多糖体）的不同,分为A～H、K～T共18个族；又根据其表面蛋白质M、K、T、S抗原的不同,将各族细菌分为若干个血清型。对人类有致病力者90%为A族（Group Aβ-streptococcus hemolyticus）,具有致病性强的特点,常引起人类和动物的多种疾病如皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。目前,A族乙型溶血性链球菌（Group Aβ-streptococcus hemolyticus）引发疾病多采用大环内酯类抗生素和β-内酰胺类抗生素进行治疗,但是在当前耐药菌不断增加的情况下,A族乙型溶血性链球菌的药物敏感性越来越得到关注,使得寻找一种安全、高效的抗生素替代品成为一个亟待解决的问题。特异性卵黄免疫球蛋白（Egg yolk immunoglobulin, IgY）可治疗由细菌或病毒引起的疾病,具有安全无残留、不产生抗药性、服用简便等优点,是一种具有广阔应用前景的抗生素替代品。本研究以用超声波破碎法制备的可溶性的A族乙型溶血性链球菌（Group Aβ-streptococcus hemolyticus）为抗原,免疫产卵母鸡获得特异性IgY; IgY经分离、纯化后,考马斯亮蓝G-250法测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度。间接ELISA测定抗体的效价。并用琼脂扩散,体外抑菌,免疫荧光等实验对特异性IgY在体外对A族乙型溶血性链球菌的生物活性进行了研究。结果显示提取的抗体含量平均10.8±0.87 mg/蛋,抗体纯度达92.5%。ELISA测定抗A族乙型溶血性链球菌鸡卵黄抗体的效价,于初免后40天左右达到最高值1：5120,并可持续30天。抗体在温度低于75℃、pH4-9具有良好的稳定性,抗体在pH为2和3时经过胃蛋白酶处理短时间内迅速失活,-20℃为其适宜贮藏温度,且反复冻融不影响其活性。免疫荧光结果显示,特异性IgY与A族乙型溶血性链球菌有较强的结合作用。体外抑菌实验结果显示当抗体浓度大于10 mg/mL,特异性IgY能显着抑制抗A族乙型溶血性链球菌的生长,随着抗体浓度的增加抑菌效果越明显,最低抑菌浓度为25 mg/mL。研究结果表明,实验得到的抗A族乙型溶血性链球菌IgY,产量、纯度、效价和特异性高,稳定性好,在体外能够特异性地与抗A族乙型溶血性链球菌结合。为特异性IgY在A族乙型溶血性链球菌引起的疾病的防治应用研究奠定了基础。
二、抗变形链球菌卵黄抗体的研制（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、抗变形链球菌卵黄抗体的研制（论文提纲范文）
（1）猪源抗猪腹泻重要病原体单链抗体及其保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 仔猪腹泻的防治研究进展 |
| 1.1 PEDV的防治研究进展 |
| 1.2 TGEV的防治研究进展 |
| 1.3 ETEC的防治研究进展 |
| 2 scFv及噬菌体展示技术 |
| 2.1 抗体简介 |
| 2.2 scFv的分子结构 |
| 2.3 scFv的表达 |
| 2.4 scFv的筛选方法 |
| 2.5 scFv的应用 |
| 3 壳聚糖纳米制剂药物口服递送系统概述 |
| 3.1 口服治疗与纳米技术 |
| 3.2 壳聚糖 |
| 3.3 壳聚糖的改性 |
| 3.4 壳聚糖纳米药物载体制备方法 |
| 3.5 壳聚糖纳米制剂在生物医学领域的应用 |
| 4 乳酸菌作为口服递送载体的研究进展 |
| 4.1 LAB |
| 4.2 LAB载体系统 |
| 4.3 NICE表达系统 |
| 4.4 LAB的表达形式 |
| 4.5 LAB表达系统的应用 |
| 5 研究目的与意义 |
| 第二章 猪源噬菌体-scFv库的构建和抗猪腹泻重要病原体scFv的筛选鉴定 |
| 1 材料 |
| 1.1 质粒、细胞和菌株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 猪抗体水平检测 |
| 2.2 外周血淋巴细胞的分离 |
| 2.3 cDNA的合成 |
| 2.4 猪源scFv基因的扩增 |
| 2.5 猪源噬菌体-scFv库的构建 |
| 2.6 猪源噬菌体-scFv库的鉴定 |
| 2.7 PEDV和 TGEV全病毒抗原的制备 |
| 2.8 ETEC菌毛抗原的提取 |
| 2.9 M13KO7 辅助噬菌体的扩增 |
| 2.10 猪源噬菌体-scFv的富集筛选 |
| 2.11 噬菌体ELISA |
| 2.12 重组scFv蛋白的表达及纯化 |
| 2.13 免疫印迹 |
| 3 结果 |
| 3.1 猪抗体水平检测 |
| 3.2 scFv的获得 |
| 3.3 猪源噬菌体-scFv库的构建和鉴定 |
| 3.4 病毒的浓缩纯化 |
| 3.5 ETEC K88ac菌毛的纯化 |
| 3.6 猪源噬菌体-scFv的筛选鉴定 |
| 3.7 噬菌体ELISA鉴定 |
| 3.8 scFv的序列分析与纯化 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第三章 抗猪腹泻重要病原体scFv的生物学功能研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 质粒、细胞和毒株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 抗PEDV和 TGEV scFv的特性分析 |
| 2.2 真核表达质粒的构建 |
| 2.3 细胞转染 |
| 2.4 间接免疫荧光 |
| 2.5 细胞样品处理 |
| 2.6 病毒滴度的测定 |
| 2.7 scFv中和实验 |
| 2.8 scFv对 PEDV入侵Vero细胞的影响 |
| 2.9 抗K88ac菌毛多克隆抗体的制备 |
| 2.10 黏附实验和黏附抑制实验 |
| 2.11 IPEC-J2 细胞的细胞因子测定 |
| 2.12 ETEC感染小鼠腹泻模型的建立 |
| 2.13 抗k88ac scFv对感染ETEC小鼠的保护作用研究 |
| 2.14 小鼠细胞因子水平的检测 |
| 2.15 小鼠肠道病理切片制作及HE染色 |
| 2.16 小鼠肠道病理形态的定量分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 scFv的特异性实验 |
| 3.2 scFv的稳定性分析 |
| 3.3 scFv的亲和力分析 |
| 3.4 scFv的抗原结合位点分析 |
| 3.5 scFv的细胞毒性实验 |
| 3.6 scFv与病毒蛋白的结合 |
| 3.7 scFv的抗病毒作用分析 |
| 3.8 scFv对 PEDV入侵Vero细胞的影响 |
| 3.9 多克隆抗体ELISA效价检测 |
| 3.10 scFv对 ETEC黏附细胞的抑制作用分析 |
| 3.11 scFv对 ETEC诱导细胞因子表达的影响 |
| 3.12 小鼠腹泻模型的建立 |
| 3.13 scFv对小鼠腹泻的保护作用研究 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第四章 壳聚糖纳米口服scFv制剂及其生物学特性研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞和实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 CMCS纳米制剂的制备 |
| 2.2 表征分析 |
| 2.3 纳米制剂的包封率及载药量的测定 |
| 2.4 scFv在纳米制剂中的完整性 |
| 2.5 纳米制剂在模拟胃酸环境中的稳定性 |
| 2.6 scFv释放实验 |
| 2.7 纳米制剂的生物安全性实验 |
| 3 结果 |
| 3.1 CMCS的制备 |
| 3.2 纳米制剂的表征 |
| 3.3 载药率与包封率 |
| 3.4 scFv在纳米材料中的完整性 |
| 3.5 scFv在模拟胃酸环境中的稳定性 |
| 3.6 scFv的释放实验 |
| 3.7 纳米制剂的生物安全性 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第五章 scFv纳米口服制剂CMCS/CS-scFv对仔猪腹泻的保护作用研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 菌株和实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 scFv的纯化制备 |
| 2.2 CMCS/CS-scFv和 scFv的口服鉴定 |
| 2.3 CMCS/CS-PZZ对仔猪感染PEDV的保护作用研究 |
| 2.4 CMCS/CS-TZZ对仔猪感染TGEV的保护作用研究 |
| 2.5 CMCS/CS-EZZ对仔猪感染ETEC的保护作用研究 |
| 2.6 scFv纳米制剂联合使用对仔猪感染腹泻病原的保护作用研究 |
| 3 结果 |
| 3.1 口服CMCS/CS-scFv和 scFv在肠道的分布 |
| 3.2 CMCS/CS-PZZ对仔猪感染PEDV的保护作用 |
| 3.3 CMCS/CS-TZZ对仔猪感染TGEV的保护作用 |
| 3.4 CMCS/CS-EZZ对仔猪感染ETEC的保护作用 |
| 3.5 纳米口服制剂CMCS/CS-scFv对腹泻病原体混合感染的保护作用 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第六章 分泌表达scFv的乳酸乳球菌制备及其保护功能研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 菌株、细胞和实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 分泌表达scFv 的重组L.lactis-scFv 的构建 |
| 2.2 L.lactis电转化感受态细胞制备 |
| 2.3 L.lactis的电转化 |
| 2.4 重组L.lactis-scFv对模拟胃肠道环境的耐受性及生长曲线 |
| 2.5 重组L.lactis-scFv对 IPEC-J2 细胞的黏附 |
| 2.6 重组L.lactis-scFv对仔猪肠道的黏附 |
| 2.7 重组L.lactis-scFv的诱导表达 |
| 2.8 重组L.lactis-scFv分泌scFv的生物学功能分析 |
| 2.9 重组L.lactis-scFv分泌scFv的动物保护功能分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 scFv分泌表达载体的构建 |
| 3.2 重组L.lactis-scFv的生长特性 |
| 3.3 重组L.lactis-scFv的黏附特性 |
| 3.4 重组L.lactis-scFv分泌scFv的生物学功能鉴定 |
| 3.5 重组L.lactis-scFv的动物保护作用鉴定 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 常用溶液的配制 |
| 附录二 补充图 |
| 附录三 补充表 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 授权的发明专利 |
（2）抗H株小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与质量评估（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 小鹅瘟病毒研究现状 |
| 1.1.1 小鹅瘟病毒及小鹅瘟病简介 |
| 1.1.2 小鹅瘟病毒的鉴定方法 |
| 1.2 小鹅瘟生物制剂研究进展 |
| 1.2.1 小鹅瘟病毒活疫苗 |
| 1.2.2 小鹅瘟病毒灭活疫苗 |
| 1.2.3 小鹅瘟病毒基因疫苗 |
| 1.2.4 小鹅瘟病毒重组活载体疫苗 |
| 1.2.5 小鹅瘟抗血清 |
| 1.2.6 小鹅瘟病毒卵黄抗体 |
| 1.3 卵黄抗体的研究进展 |
| 1.3.1 卵黄抗体的结构特点 |
| 1.3.2 卵黄抗体的提取方法 |
| 1.3.3 卵黄抗体的灭活方法 |
| 1.3.4 卵黄抗体应用 |
| 1.3.5 卵黄抗体的优势与展望 |
| 1.4 研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与设备 |
| 2.2 主要材料和试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 研究技术路线图 |
| 2.3.2 小鹅瘟病毒分离培养 |
| 2.3.3 小鹅瘟病毒的鉴定 |
| 2.3.4 小鹅瘟病毒灭活疫苗的制备及检验 |
| 2.3.5 小鹅瘟病毒卵黄抗体的制备 |
| 2.3.6 小鹅瘟病毒卵黄抗体质量评价 |
| 2.3.7 小鹅瘟病毒卵黄抗体储存条件的确定 |
| 2.4 试验数据分析及统计 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 小鹅瘟病毒分离培养 |
| 3.1.1 小鹅瘟病毒在雏鹅分离培养结果 |
| 3.1.2 小鹅瘟病毒在鹅胚分离培养结果 |
| 3.2 小鹅瘟病毒鉴定 |
| 3.2.1 小鹅瘟病毒特异性试验结果 |
| 3.2.2 小鹅瘟病毒粒子超微结构观察结果 |
| 3.2.3 小鹅瘟病毒毒力测定 |
| 3.2.4 小鹅瘟病毒理化特性 |
| 3.2.5 小鹅瘟病毒的纯净性试验结果 |
| 3.2.6 小鹅瘟病毒核酸检测结果 |
| 3.2.7 小鹅瘟病毒VP3基因序列鉴定 |
| 3.3 小鹅瘟病毒灭活疫苗抗原的制备及成品检验 |
| 3.3.1 小鹅瘟病毒H株灭活疫苗制备抗原用病毒的检验 |
| 3.3.2 小鹅瘟病毒H株灭活疫苗检验 |
| 3.4 小鹅瘟病毒卵黄抗体的制备 |
| 3.4.1 产蛋鸡选择结果 |
| 3.4.2 高免鸡蛋的琼扩抗体效价监测结果 |
| 3.4.3 小鹅瘟病毒卵黄抗体除脂条件的确定 |
| 3.4.4 小鹅瘟病毒卵黄抗体提取方法的确定 |
| 3.4.5 小鹅瘟病毒卵黄抗体外源性病毒灭活方法确定 |
| 3.5 小鹅瘟病毒卵黄抗体的质量评价 |
| 3.5.1 小鹅瘟病毒卵黄抗体的理化特性 |
| 3.5.2 小鹅瘟病毒卵黄抗体的安全性评价 |
| 3.5.3 小鹅瘟病毒卵黄抗体对人工感染雏鹅的治疗效果评价 |
| 3.5.4 小鹅瘟病毒卵黄抗体对雏鹅注射后攻毒的预防效果评价 |
| 3.5.5 小鹅瘟病毒卵黄抗体与试验选用的同类产品差异试验 |
| 3.6 小鹅瘟病毒卵黄抗体储存条件的确定 |
| 3.6.1 储存温度及时间对小鹅瘟病毒卵黄抗体物理性状的影响 |
| 3.6.2 储存温度及时间对小鹅瘟病毒卵黄抗体纯净性的影响 |
| 3.6.3 储存温度及时间对小鹅瘟病毒卵黄抗体琼扩抗体效价的影响 |
| 3.6.4 储存温度及时间对雏鹅攻毒预防效果的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 小鹅瘟病毒的分离鉴定及生物学特性分析 |
| 4.2 小鹅瘟病毒H株VP3基因序列分析 |
| 4.3 影响HA与HI效果的因素分析 |
| 4.4 小鹅瘟病毒灭活疫苗的制备 |
| 4.5 鸡群的选择管理与高免蛋黄收集 |
| 4.6 小鹅瘟病毒卵黄抗体除脂条件的确定及主要影响因素分析 |
| 4.7 最优小鹅瘟病毒卵黄抗体提取方法确定及分析 |
| 4.7.1 辛酸终浓度对小鹅瘟病毒卵黄抗体的影响 |
| 4.7.2 小鹅瘟病毒卵黄抗体提取方法的对比分析及验证 |
| 4.7.3 小鹅瘟病毒卵黄抗体的琼扩抗体效价与蛋白浓度的相关性分析 |
| 4.8 小鹅瘟病毒卵黄抗体灭活条件的确定 |
| 4.9 小鹅瘟病毒卵黄抗体的质量评价 |
| 4.9.1 小鹅瘟病毒卵黄抗体安全性评价 |
| 4.9.2 小鹅瘟病毒卵黄抗体治疗效果评价 |
| 4.9.3 小鹅瘟病毒卵黄抗体的预防效果评价 |
| 4.9.4 小鹅瘟病毒卵黄抗体试验选用的同类产品差异 |
| 4.10 储存条件的确定 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 作者简历 |
（3）禽心包积液-肝炎综合征IgY脂质体的制备及其雏鸡保护试验（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1 本试验的目的和意义 |
| 2 禽心包积液-肝炎综合征(HHS)的基本概述 |
| 2.1 病原体的生物学特性 |
| 2.2 流行病学 |
| 2.3 致病性 |
| 2.4 诊断技术 |
| 3 禽心包积液-肝炎综合征(HHS)的防治 |
| 3.1 油乳剂灭活疫苗 |
| 3.2 基因工程疫苗 |
| 3.3 DNA重组疫苗 |
| 3.4 防治措施 |
| 4 卵黄抗体概述 |
| 4.1 IgY的产生 |
| 4.2 IgY的特性 |
| 4.3 IgY的优势 |
| 4.4 IgY的应用 |
| 5 脂质体概述 |
| 5.1 脂质体的发现 |
| 5.2 脂质体的特性 |
| 5.3 脂质体的分类 |
| 5.4 脂质体的制备 |
| 5.5 脂质体的应用 |
| 第二章 TJ1607 毒株的纯化与免疫疫苗的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 TJ1607 毒株PCR鉴定结果 |
| 2.2 TJ1607 纯化毒株ELD_(50)测定结果 |
| 2.3 剂型检验结果 |
| 2.4 无菌检验结果 |
| 2.5 稳定性检验结果 |
| 2.6 安全性检验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 天津地区HHS的发病原因 |
| 3.2 TJ1607 毒株的增殖 |
| 3.3 TJ1607 毒株的纯化 |
| 3.4 疫苗佐剂 |
| 4 小结 |
| 第三章 精制高免卵黄抗体与IgY脂质体的制备 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 免疫前抗体检测结果 |
| 2.2 免疫后抗体检测结果 |
| 2.3 卵黄免疫球蛋白的检测结果 |
| 2.4 卵黄免疫球蛋白提纯前后的检测结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 TJ1607 IgY脂质体的制备 |
| 3.2 TJ1607 IgY的提纯 |
| 3.3 SDS-PAGE配置 |
| 4 小结 |
| 第四章 TJ1607 血清抗体间接ELISA方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 TJ1607 最佳包被抗原和最佳一抗稀释度的选择结果 |
| 2.2 最佳二抗工作浓度的选择结果 |
| 2.3 重复性试验结果 |
| 2.4 标准曲线的绘制结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 ELISA试验中酶标板的选择 |
| 3.2 ELISA试验中抗原的选择 |
| 3.3 ELISA试验中误差的分析 |
| 4 小结 |
| 第五章 TJ1607 卵黄抗体液的动物保护试验 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 精制TJ1607 卵黄抗体液攻毒动物保护试验结果 |
| 2.2 TJ1607 卵黄抗体液被动抗体动态消长试验结果 |
| 2.3 TJ1607 卵黄抗体液口服试验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 IgY对抗体水平的影响 |
| 3.2 IgY脂质体的优势 |
| 3.3 综合防治措施 |
| 4 小结 |
| 第六章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（4）变形链球菌gtf S、gbp B基因的串联表达及其卵黄抗体的制备（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌种与载体 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 菌种培养与基因组提取 |
| 1.2.2 引物设计与合成 |
| 1.2.3 基因片段的TD-PCR扩增 |
| 1.2.4 串联基因CAT-SYI的SOE-PCR扩增 |
| 1.2.5 重组质粒的构建与鉴定 |
| 1.2.6 重组菌的诱导表达及鉴定 |
| 1.2.7 重组融合蛋白的纯化 |
| 1.2.8 融合蛋白IgY的制备 |
| 1.2.9 融合蛋白IgY的ELISA检测 |
| 1.2.1 0 融合蛋白IgY的Western blot鉴定 |
| 1.2.1 1 斑点杂交 |
| 2 结果 |
| 2.1 目的基因的PCR扩增 |
| 2.2 重组菌的诱导表达 |
| 2.3 重组融合蛋白的纯化 |
| 2.4 融合蛋白IgY的SDS-PAGE鉴定结果 |
| 2.5 融合蛋白IgY的效价 |
| 2.6 融合蛋白IgY的特异性 |
| 2.7 斑点杂交结果 |
| 3 讨论 |
（5）抗变异链球菌卵黄抗体对变异链球菌抑制作用的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要材料与设备 |
| 2.2 变异链球菌的培养、鉴定与保存 |
| 2.3 特异性IgY制备与提纯 |
| 2.4 IgY对变异链球菌的生长与毒力因素影响 |
| 2.5 对变异链球菌形成生物膜的影响 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 S.mutans菌的培养鉴定 |
| 3.2 IgY的浓度与效价检测结果 |
| 3.3 IgY抑制S.mutans菌生长与毒力因子结果 |
| 3.4 IgY对 S.mutans生物膜的抑制结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 变异链球菌的致龋毒力因素 |
| 4.2 牙菌斑生物膜 |
| 4.3 龋病的防治 |
| 4.4 IgY在龋病治疗中的应用 |
| 4.5 实验结果分析 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（6）抗甲型流感病毒卵黄抗体的制备、活性评价及其应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表（Abbreviations） |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 流感的危害及其流行病学 |
| 1.2 甲型流感病毒概述 |
| 1.2.1 流感病毒的分类和命名 |
| 1.2.2 甲型流感病毒的形态及基因组成 |
| 1.2.3 甲型流感病毒主要抗原及其特点 |
| 1.2.4 甲型流感病毒遗传变异规律 |
| 1.2.5 甲型流感病毒的增殖周期 |
| 1.2.6 甲型H1N1流感病毒 |
| 1.2.7 甲型流感病毒的检测 |
| 1.2.8 甲型流感病毒预防与治疗研究进展 |
| 1.3 卵黄抗体研究进展 |
| 1.3.1 IgY的结构特点及其生物学特性 |
| 1.3.2 IgY的稳定性研究 |
| 1.3.3 IgY的提取与分离纯化 |
| 1.3.4 IgY的应用 |
| 1.4 研究意义和主要工作 |
| 第二章 抗甲型流感病毒卵黄抗体的制备 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与试剂 |
| 2.3 实验仪器 |
| 2.4 实验动物 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 实验溶液配制 |
| 2.5.2 甲型H1N1流感病毒的培养与鉴定 |
| 2.5.3 抗原制备及动物免疫 |
| 2.5.4 IgY提取与纯化 |
| 2.5.5 SDS-PAGE |
| 2.5.6 IgY蛋白含量测定 |
| 2.5.7 抗体效价检测 |
| 2.5.8 IgY特异性检测 |
| 2.5.9 数据处理及统计分析 |
| 2.6 结果与分析 |
| 2.6.1 病毒的培养与鉴定 |
| 2.6.2 IgY产率 |
| 2.6.3 分离纯化各部分纯度分析 |
| 2.6.4 IgY蛋白含量测定 |
| 2.6.5 抗体效价随时间的变化 |
| 2.6.6 IgY特异性检测结果 |
| 2.7 讨论 |
| 2.7.1 IgY特点及其与血清抗体之间的关系 |
| 2.7.2 IgY的分离纯化 |
| 2.8 本章小结 |
| 第三章 抗甲型H1N1流感病毒卵黄抗体的活性评价 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 试剂与仪器 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 琼脂扩散试验 |
| 3.3.2 免疫荧光实验 |
| 3.3.3 免疫印迹试验 |
| 3.3.4 血凝抑制试验 |
| 3.3.5 抗H732 IgY对MDCK细胞毒性测定 |
| 3.3.6 抗H732 IgY体外细胞水平的抗病毒活性评价 |
| 3.3.7 抗H732 IgY稳定性试验 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 抗H732 IgY对病毒的免疫沉淀作用 |
| 3.4.2 抗H732 IgY免疫荧光检测 |
| 3.4.3 抗H732 IgY对病毒膜蛋白的特异性结合作用 |
| 3.4.4 抗H732 IgY的血凝抑制作用 |
| 3.4.5 对MDCK细胞最大无毒浓度 |
| 3.4.6 不同添加方式的空斑减数率 |
| 3.4.7 抗H732 IgY稳定性试验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 抗甲型H1N1流感病毒卵黄抗体小鼠体内的抗病毒活性研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 试剂与仪器 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 H732病毒感染BALB/C小鼠半数致死量测定(LD50) |
| 4.3.2 抗H732 IgY对H732感染小鼠的死亡保护作用 |
| 4.3.3 抗H732 IgY对H732感染小鼠肺损伤及病毒增殖的影响 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 H732病毒毒力的测定 |
| 4.4.2 抗H732 IgY对H732感染小鼠的死亡保护作用 |
| 4.4.3 抗H732 IgY对H732感染小鼠肺损伤及病毒增殖的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 甲型H1N1流感病毒表面增强拉曼光谱免疫分析方法的建立与应用 |
| 5.1 前言 |
| 5.1.1 拉曼光谱和表面增强拉曼光谱简介 |
| 5.1.2 表面增强拉曼光谱技术应用于标记免疫分析的原理 |
| 5.1.3 本章技术路线 |
| 5.2 试剂 |
| 5.3 仪器设备 |
| 5.4 实验方法 |
| 5.4.1 溶液的配制及保存 |
| 5.4.2 金溶胶的制备 |
| 5.4.3 4,4’-联吡啶标记免疫金溶胶的制备 |
| 5.4.4 用烷基化(APES)处理,醛基化(GA)修饰的固相基底的制备 |
| 5.4.5 基于H1N1流感病毒的“三明治”结构的组装及SERS检测 |
| 5.5 结果及分析 |
| 5.5.1 金溶胶溶液中金颗粒的电镜检测结果 |
| 5.5.2 紫外光谱表征金溶胶及标记金溶胶特性 |
| 5.5.3 SERS光谱表征4,4’-联吡啶标记量的影响 |
| 5.5.4 抗H732 IgY标记免疫金溶胶的SERS光谱 |
| 5.5.5 SERS标记免疫检测H732流感病毒 |
| 5.6 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文 |
| 致谢 |
（7）IgY作用机理及其在牙膏中的应用研究（论文提纲范文）
| 1 抗龋齿IgY制备 |
| 1.1 免疫防龋齿 |
| 1.2 抗龋齿免疫球蛋白 (IgY) (以下简称抗龋齿IgY或IgY) |
| 1.3 IgY的制备简介 |
| 1.4 IgY安全性评价 |
| 1.4.1 无致病: |
| 1.4.2无致敏性 |
| 1.4.3急性经口毒性测定 |
| 2 IgY牙膏安全性评价 |
| 3 IgY和IgY牙膏抗龋机理的研究 |
| 3.1 IgY和IgY牙膏对变形链球菌体外黏附的研究 |
| 3.1.1黏附试验方法 |
| 3.1.2黏附试验结果 |
| 3.2 IgY及IgY牙膏上清液对变形链球菌远缘链球菌粘附结构改变的研究 |
| 3.2.1 扫描电镜的前期准备 |
| 3.2.2扫描电镜结果 |
| 3.3 IgY及IgY牙膏上清液对人工菌斑的作用 |
| 3.3.1 人工菌斑及扫描电镜的前期准备 |
| 3.3.2 人工菌斑的电镜结果 |
| 4 IgY牙膏的医学临床研究 |
| 4.1 上海市口腔医学研究所对IgY牙膏防龋效果的评估 |
| 4.1.1 评估方法 |
| 4.1.2 评估结果 |
| 4.2 上海同济大学附属口腔医院对IgY牙膏的临床研究 |
| 4.2.1 临床试验方法 |
| 4.2.2 临床试验结果 |
| 5 结论与展望 |
（9）抗猪圆环病毒2型卵黄抗体的研制及效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 文献综述 |
| 1 圆环病毒的研究进展 |
| 1.1 病毒的理化性质 |
| 1.2 病毒的分类 |
| 1.3 PCV2相关疾病 |
| 1.3.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS) |
| 1.3.2 猪皮炎与肾炎综合征(PDNS) |
| 1.3.3 PCV2相关繁殖障碍 |
| 1.3.4 猪呼吸道疾病综合症(PRDC) |
| 1.3.5 增生性肠炎 |
| 1.4 PCV2的诊断技术 |
| 1.4.1 PCV2抗体的检测技术 |
| 1.4.2 PCV2抗原的检测技术 |
| 1.4.3 PCV2的基因组检测 |
| 1.5 PCV2相关疾病的防制 |
| 1.5.1 防止混合感染 |
| 1.5.2 加强饲养管理 |
| 1.5.3 加强免疫 |
| 1.6 PCV2感染动物模型的建立 |
| 1.6.1 PCV2单独感染动物模型的建立 |
| 1.6.2 PCV2混合感染动物模型的建立 |
| 1.6.3 PCV2感染小鼠模型的建立 |
| 2 IgY的研究进展 |
| 2.1 IgY的形成 |
| 2.2 IgY的特点 |
| 2.2.1 IgY的结构及功能特性 |
| 2.2.2 卵黄抗体的稳定性 |
| 2.3 IgY的制备技术 |
| 2.3.1 IgY产生的免疫影响因素 |
| 2.3.2 IgY的制备 |
| 2.4 IgY在兽医、人类和免疫诊段学方面的应用 |
| 2.4.1 IgY在兽医方面的应用 |
| 2.4.2 卵黄抗体用于预防和治疗人类疾病的应用 |
| 2.4.3 IgY及免疫诊断学 |
| 3 本研究的目的、意义和主要内容 |
| 第一章 抗猪圆环病毒2型特异性卵黄抗体的制备及分离纯化 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器设备 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 试剂配制 |
| 2.3.1 饱和硫酸铵溶液 |
| 2.3.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂配制 |
| 2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂配制 |
| 2.4 试验动物及分组 |
| 3 试验方法 |
| 3.1 免疫原制备 |
| 3.2 蛋鸡的免疫 |
| 3.3 样品的采集 |
| 3.4 IgY的分离、提取、纯化 |
| 3.5 抗体效价的检测 |
| 3.6 抗原最佳包被浓度的确定 |
| 3.7 ELISA检测方法 |
| 3.8 各提取步骤卵黄抗体蛋白含量测定 |
| 3.9 SDS-PAGE检测IgY纯度 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 血清抗体方阵滴定结果 |
| 4.2 卵黄抗体方阵滴定结果 |
| 4.3 不同免疫方式对鸡血清抗体水平变化的影响 |
| 4.4 不同免疫方法对鸡卵黄抗体变化的影响 |
| 4.5 胶体金法检测血清抗体效价 |
| 4.6 胶体金法检测卵黄抗体效价 |
| 4.7 卵黄抗体纯度 |
| 5 讨论 |
| 5.1 不同免疫方法对抗体水平的影响 |
| 5.2 卵黄抗体的分离、提取、纯化 |
| 6 小结 |
| 第二章 猪圆环病毒2型卵黄抗体的体外中和试验 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 试验仪器 |
| 2.3 试验试剂 |
| 2.4 试验试剂的配制 |
| 2.5 试验动物 |
| 2.6 试验方法 |
| 2.6.1 卵黄抗体对细胞毒性的测定 |
| 2.6.2 病毒感染滴度的测定 |
| 2.6.3 抗猪圆环病毒2型卵黄抗体细胞体外中和试验 |
| 2.6.4 抗猪圆环病毒2型卵黄抗体小鼠体内中和试验 |
| 2.7 结果与分析 |
| 2.7.1 卵黄抗体对细胞的毒性试验 |
| 2.7.2 抗猪圆环病毒2型卵黄抗体体外中和试验 |
| 2.7.3 抗猪圆环病毒2型卵黄抗体小鼠体内中和试验 |
| 2.8 讨论 |
| 2.9 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）抗A族乙型溶血性链球菌卵黄抗体的制备及生物活性检测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 目录 |
| CONTENTS |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 A族乙型溶血性链球菌的概况 |
| 1.2.1 A族乙型溶血性链球菌的生物学特性 |
| 1.2.2 A族乙型溶血性链球菌的致病性 |
| 1.2.3 A族乙型溶血性链球菌耐药性研究 |
| 1.3 卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究进展 |
| 1.3.1 IgY的形成 |
| 1.3.2 IgY的结构 |
| 1.3.3 IgY的性质 |
| 1.3.4 IgY的分离纯化方法 |
| 1.3.5 IgY的作用机理 |
| 1.3.6 IgY的应用研究进展 |
| 1.4 本论文的研究意义和主要工作 |
| 第二章 抗A族乙型溶血性链球菌免疫球蛋白的制备 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 动物 |
| 2.2.2 抗原 |
| 2.2.3 药品与试剂 |
| 2.2.4 实验仪器 |
| 2.2.5 试验所需试剂的配制 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 菌种培养 |
| 2.3.2 抗原制备 |
| 2.3.3 免疫 |
| 2.3.4 卵黄抗体的提取和纯化 |
| 2.3.5 IgY含量和纯度的测定 |
| 2.3.6 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测特异性IgY抗体效价方法的建立 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 IgY的含量和纯度 |
| 2.4.2 包被条件比较 |
| 2.4.3 抗原最佳包被浓度 |
| 2.4.4 特异性试验 |
| 2.4.5 抗体效价检测 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 IgY生物活性研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 药品和试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 实验所需试剂的配制 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 IgY的热稳定性试验 |
| 3.3.2 IgY的贮藏稳定性试验 |
| 3.3.3 反复冻融对IgY稳定性的影响 |
| 3.3.4 pH对IgY的稳定性影响 |
| 3.3.5 胃蛋白酶对IgY稳定性影响 |
| 3.3.6 IgY对A族乙型溶血性链球菌的识别 |
| 3.3.7 IgY双向琼脂扩散试验 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 IgY的热稳定性 |
| 3.4.2 IgY的贮藏稳定性试验 |
| 3.4.3 反复冻融对IgY稳定性的影响 |
| 3.4.4 pH对IgY的稳定性影响 |
| 3.4.5 胃蛋白酶对IgY稳定性影响 |
| 3.4.6 IgY对A族乙型溶血性链球菌的识别 |
| 3.4.7 IgY双向琼脂扩散试验 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 特异性卵黄抗体体外抑菌试验 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 实验试剂配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 IgY抑菌能力 |
| 4.3.2 最小抑菌浓度 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 IgY抑菌能力 |
| 4.4.2 最小抑菌浓度 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、抗变形链球菌卵黄抗体的研制（论文参考文献）
- [1]猪源抗猪腹泻重要病原体单链抗体及其保护作用研究[D]. 张凡庆. 上海交通大学, 2020(01)
- [2]抗H株小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与质量评估[D]. 胡瑞鸿. 东北农业大学, 2020(07)
- [3]禽心包积液-肝炎综合征IgY脂质体的制备及其雏鸡保护试验[D]. 刘蕊. 天津农学院, 2019(07)
- [4]变形链球菌gtf S、gbp B基因的串联表达及其卵黄抗体的制备[J]. 张忠宝,孙礼进,曾波,陈咏梅,张智,李再新. 中国免疫学杂志, 2019(06)
- [5]抗变异链球菌卵黄抗体对变异链球菌抑制作用的研究[D]. 周莉莉. 安徽医科大学, 2019(09)
- [6]抗甲型流感病毒卵黄抗体的制备、活性评价及其应用研究[D]. 阳元娥. 广东工业大学, 2016(08)
- [7]IgY作用机理及其在牙膏中的应用研究[J]. 罗鑫龙,陈健芬,孙晓青,江千舟. 口腔护理用品工业, 2011(06)
- [8]鸡卵黄抗体IgY在临床医学中的应用[J]. 杜洪桥,严家新. 国际生物制品学杂志, 2011(06)
- [9]抗猪圆环病毒2型卵黄抗体的研制及效果的研究[D]. 许银平. 华中农业大学, 2011(05)
- [10]抗A族乙型溶血性链球菌卵黄抗体的制备及生物活性检测[D]. 苏娟. 广东工业大学, 2011(10)