一、山羊脊神经后根逆向吻合生长的超微结构（论文文献综述）
罗宇婷[1]（2020）在《三法三穴对坐骨神经损伤大鼠背根神经节cAMP-PKA信号通路表达的影响》文中指出[目的]为了研究以三法三穴为代表的推拿手法是否通过影响cAMP-PKA信号通路进而促进SNI大鼠的损伤恢复,本研究以大鼠坐骨神经损伤模型（Sciatic Nerve Injury,SNI）为例,通过利用行为学、组织形态学、分子生物学技术对大鼠坐骨神经损伤后的情况进行综合评价,观察SNI大鼠的感觉功能和神经损伤的修复情况,探究推拿的起效机制,为推拿治疗周围神经损伤提供科学依据。[方法]以SD大鼠作为实验动物,将SD雄性大鼠分为正常组、假手术组、模型组及三法三穴组。模型组及三法三穴组通过坐骨神经夹持建立SNI模型,三法三穴组选择殷门、承山、阳陵泉三穴并使用“按摩推拿手法模拟仪”操作点法、拨法、揉法进行干预,每穴每法各1min。运用光热耐痛阈实验来评价大鼠感觉功能（痛温觉）的恢复,运用坐骨神经功能指数评价大鼠神经功能和后肢精细动作恢复情况;运用HE染色、尼氏染色和免疫荧光技术观察坐骨神经及DRG神经元形态;运用分子生物学技术检测背根神经节（DRG）中cAMP、PKA、CREB的表达情况,通过定性定量的检测方法,结合行为学、形态学结果进行综合分析,评价推拿对SNI大鼠感觉功能及神经功能恢复的影响,阐释推拿促进周围神经损伤修复的机理。[结果]1.光热耐痛阈实验—推拿能促进SNI大鼠感觉功能（痛温觉）的恢复光热耐痛阈结果显示SNI大鼠左足（正常侧）的实验结果组间（正常组、假手术组、模型组及三法三穴组）比较无统计学差异,而右足（患侧）差异较明显。造模后7d,正常组与假手术组结果相比无明显差异,而模型组明显高于正常组与假手术组（P<0.05）,提示夹持损伤导致了坐骨神经损伤,神经纤维出现了连续性中断,痛觉传导功能受损。推拿20d后,三法三穴组SNI大鼠的舔舐足部时间明显较造模后7d时缩短,低于模型组（P<0.05）。2.坐骨神经功能指数（SFI）—推拿能改善SNI大鼠的后肢精细动作和受损神经恢复造模后7d,正常组与假手术组实验结果无明显差异,模型组SFI指数与假手术组相比有所降低（P<0.05）。此时可见坐骨神经损伤后大鼠患侧后肢出现无法受力及严重跛行的情况。干预20d后,模型组指数仍低于假手术组（P<0.05）,而三法三穴组指数高于模型组（P<0.05）。3.坐骨神经HE染色—推拿能改善SNI大鼠坐骨神经的结构正常组及假手术组坐骨神经神经纤维结构正常,纤维排列规则有序;模型组神经纤维局部区域排列凌乱松散,纤维丝断裂,神经纤维丝变细或减少;三法三穴组神经组织相较于模型组神经纤维排列规则有序,结构致密,组织结构大体趋向正常。4.尼氏染色—推拿能促进SNI大鼠坐骨神经和DRG形态恢复坐骨神经:正常组可见坐骨神经纤维整体有序,纤维横切面结构完整正常;假手术组中神经纤维细胞排列规则有序,结构致密;模型组中神经纤维横切面可见纤维排列疏松,结构紊乱,神经纤维丝断裂;三法三穴组中神经纤维排列规则有序,部分神经纤维丝结构较细,染色较浅。DRG:正常组中多数神经元细胞中尼氏颗粒清晰,数量丰富,神经元细胞结构正常;假手术组多数神经元细胞中尼氏颗粒清晰,数量丰富,神经元细胞结构正常;少量神经元胞体中尼氏小体崩解至完全溶解消失,胞浆淡染,细胞肿胀;模型组中尼氏体颗粒在所有神经元细胞中整体减少,尼氏染色淡染;较多神经元胞体中尼氏体崩解为细尘状颗粒,进而完全溶解消失;因尼氏体消失,胞浆着色浅,胞体肿胀,细胞由多极形状变为圆形;三法三穴组较模型组神经元细胞中尼氏颗粒清晰,数量丰富,神经元细胞结构正常;少量神经元胞体局部区域尼氏小体崩解至细尘状颗粒,并渐渐向外扩展,胞浆淡染,细胞肿胀。5.荧光染色—推拿能保护并促进SNI大鼠感觉神经元恢复正常组大鼠DRG中神经元大多呈圆形或三角形,核仁居中,染色清晰,形态饱满;假手术组神经元形态与正常组相似;模型组可见神经元数目减少,形态皱褶增多或破裂,有轻微水肿现象,直径增加,核仁部分出现偏移或消失现象;三法三穴组在干预后20d,神经元染色较为清晰,神经元数量较多,核仁大多居中,形态恢复较为饱满。6.Western-blotting—推拿能通过促进通路关键蛋白表达促进坐骨神经恢复6.1 DRG中cAMP表达情况造模后7d,正常组与假手术组cAMP表达量无明显差异;与正常组比较,模型组表达水平显着降低（P<0.05）;干预20d时,与模型组相比,三法三穴组cAMP表达水平呈明显升高趋势（P<0.05）,三法三穴组与模型组相比差异较大（P<0.05）。6.2 DRG中PKA表达情况造模后7d,正常组与假手术组PKA表达量无明显差异,与正常组比较,模型组PKA表达水平显着降低（P<0.05）;干预20d后,与模型组比较,三法三穴组PKA表达量升高明显（P<0.05）;差异较大。6.3 DRG中CREB表达情况造模后7d,正常组与假手术组CREB表达量无明显差异,与正常组相比,模型组表达量虽有所下降但差异不明显;干预20d后,与模型组相比,三法三穴组CREB表达量可以观察到有上升的表现,但无统计学差异。以上结果提示:推拿可以提高DRG中cAMP、PKA、CREB蛋白的表达,进而促进周围神经损伤的恢复。[结论]以三法三穴为代表的推拿手法可以提高DRG中cAMP、PKA、CREB的表达,通过影响cAMP-PKA通路中的三个关键蛋白,从而激活通路;同时也可改善SNI大鼠DRG中神经元的形态,恢复坐骨神经超微结构,加速SNI大鼠感觉功能和后肢精细动作的恢复,进而起到促进周围神经损伤后修复的作用。说明以三法三穴为代表的推拿治疗周围神经损伤的机制之一是激活cAMP-PKA信号通路。
邵帅[2]（2020）在《三法三穴对SNI大鼠施万细胞增殖和神经瘢痕形成的影响》文中研究说明[目的]为评价三法三穴对SNI大鼠坐骨神经SC增殖和神经瘢痕形成的影响而开展本实验,本实验从行为学、组织形态学与分子生物学三个层面,评价三法三穴干预能否通过调节TGF-β1/Smad2通路蛋白表达,影响SNI模型大鼠坐骨神经损伤点SC增殖及神经瘢痕的形成,促进SNI大鼠后肢运动功能的恢复。以期进一步揭示推拿促进坐骨神经损伤后修复的机理,完善推拿治疗周围神经损伤的理论基础,为推拿治疗周围神经损伤疾病提供科学证据。[方法]1 动物分组、造模和干预方法选取健康雄性SD大鼠78只,随机分为假手术组、模型组、三法三穴组,每组各26只。采用坐骨神经夹持损伤法制备SNI模型大鼠。三法三穴组从造模后第8天（d）开始,对大鼠殷门穴、承山穴、阳陵泉穴进行点法、拨法、揉法干预,每穴每手法1min。干预10d休息1d,共干预20次。2行为学检测方法每组每个时间点随机选取6只大鼠进行行为学观察。在造模后7d、14d、21d、28d,检测各组大鼠斜板试验角度。在造模后7d、28d,检测各组大鼠SFI。3组织形态学检测方法每组随机选取4只大鼠,在造模后28d时运用HE染色法,观察SNI大鼠坐骨神经损伤点SC细胞数目和神经瘢痕厚度及染色深度的变化。4蛋白定量检测方法每组每个时间点随机选取4只大鼠,运用免疫荧光标记法,观察造模后7d、28d时坐骨神经损伤点中S100、TGF-β1、Smad2及造模后28d时坐骨神经损伤点Ⅰ/Ⅲ型胶原和FN的表达变化。每组每个时间点随机选取6只大鼠,运用Western-blotting技术,检测坐骨神经损伤点在造模后7d、14d、28d三个时间点TGF-β1、Smad2、p-Smad2的表达变化。5统计方法使用Image J 1.48u软件分析免疫荧光和Western-blotting图像。使用SAS 8.0软件对数据进行统计分析。[结果]1三法三穴干预对SNI大鼠运动功能恢复的影响SFI结果:模型组与假手术组相比,造模后7d、28d,大鼠SFI显着降低（P<0.01）。三法三穴组与模型组相比,大鼠SFI显着升高（P<0.01）,且接近假手术组水平。斜板实验结果:模型组与假手术组相比,造模后7d、14d、21d、28d,大鼠斜板倾斜角度显着降低（均有P<0.05）。三法三穴组与模型组相比,造模后14d、21d,大鼠斜板倾斜角度有升高趋势（P>0.05）,造模后28d,斜板倾斜角度显着升高（P<0.05）。以上结果提示:三法三穴干预能够促进SNI大鼠后肢精细动作及后肢肌力的恢复,说明三法三穴干预能够促进SNI大鼠后肢运动功能的恢复。2三法三穴干预对SNI大鼠坐骨神经SC增殖的影响HE染色结果:假手术组神经纤维轴索及髓鞘完整、排列紧密,SC核嵌于鞘膜外。模型组神经纤维稀疏、散乱,鞘膜外SC核数量较假手术组减少。三法三穴组坐骨神经可见再生的神经纤维,并有很厚的髓鞘包绕、轴索清晰,鞘膜外SC核数量较模型组明显增多。S100免疫荧光染色结果:模型组与假手术组相比,造模后7d、28d,SNI大鼠坐骨神经损伤点SC标记物S100的平均光密度值明显降低（均有P<0.05）。三法三穴组与模型组相比,造模后28d,坐骨神经S100平均光密度值明显升高（P<0.05）。以上结果提示:三法三穴干预能够增加神经损伤后期SC的数目。3三法三穴干预对SNI大鼠坐骨神经瘢痕形成的影响HE染色结果:造模后28d,假手术组坐骨神经损伤点神经外膜结缔组织深染,模型组神经外膜结缔组织深染,三法三穴组神经外膜结缔组织染色较模型组明显变浅。Ⅰ/Ⅲ型胶原及FN免疫荧光染色结果:造模后28d,与假手术组相比,模型组SNI大鼠坐骨神经外膜Ⅰ/Ⅲ型胶原、FN表达均明显增多（均有P<0.05）。与模型组相比,三法三穴组SNI大鼠坐骨神经外膜Ⅰ/Ⅲ型胶原及FN表达均明显减少（均有P<0.05）。以上结果提示:三法三穴干预能够抑制SNI大鼠坐骨神经Ⅰ/Ⅲ型胶原及FN分泌,从而抑制神经外膜瘢痕形成。4三法三穴干预对TGF-β1/Smad2通路蛋白表达的影响免疫荧光染色结果:TGF-β1表达部位与S100高度重合,且在模型组、三法三穴组坐骨神经外膜也出现高表达,Smad2表达在DAPI表达位置附近。模型组与假手术组相比,造模后7d,SNI大鼠损伤侧坐骨神经TGF-β1的表达量明显升高（P<0.05）,造模后28d,SNI大鼠损伤侧坐骨神经TGF-β1的表达量未见明显差异（P>0.05）。三法三穴组与模型组相比,造模后28d,SNI大鼠损伤侧坐骨神经TGF-β1的表达量未见明显差异（P>0.05）。模型组与假手术组相比,造模后7d、28d,SNI大鼠损伤侧坐骨神经Smad2的表达量明显升高（均有P<0.05）,三法三穴组与模型组相比,造模后28d,SNI大鼠损伤侧坐骨神经Smad2的表达量无明显差异（P>0.05）。Western-blotting结果:模型组与假手术组相比,造模后7d、14d,SNI大鼠损伤侧坐骨神经TGF-β1、Smad2、p-Smad2的表达量明显升高（均有P<0.05）,造模后28d,SNI大鼠损伤侧坐骨神经TGF-β1、Smad2、p-Smad2的表达量无明显差异（P>0.05）。三法三穴组与模型组相比,造模后14d,坐骨神经TGF-β1、Smad2、p-Smad2的表达量出现下调趋势（P>0.05）,造模后28d,SNI大鼠损伤侧坐骨神经TGF-β1、Smad2、p-Smad2的表达量无明显差异（P>0.05）。以上结果提示:坐骨神经损伤后,TGF-β1主要在SC和损伤神经外膜中表达,Smad2在细胞核周围表达。三法三穴干预在周围神经损伤早期对TGF-β1/Smad2通路蛋白有轻微的下调作用,可能与神经瘢痕形成有关。[结论]三法三穴干预能够增加损伤后期SNI大鼠坐骨神经SC的数目。三法三穴干预能够通过轻微下调TGF-β1/Smad2通路蛋白表达,抑制SNI大鼠坐骨神经瘢痕的形成,以促进SNI大鼠运动功能恢复。
杨超[3]（2018）在《三法三穴调节细胞自噬促进SNI大鼠运动功能恢复的机理研究》文中研究指明[目的]基于行为学、形态学、组织细胞学与分子生物学的综合评价,探究三法三穴推拿干预是否可以调控SNI大鼠脊髓至外周运动通路细胞自噬进程,并以脊髓腹角为切入点,从Akt-mTOR通路及AMPK-mTOR通路的角度,深入研究三法三穴调节运动神经元细胞自噬的分子途径,进一步理清推拿促进周围神经损伤运动功能恢复的内在机制。[方法]对坐骨神经损伤模型（SciaticNerve Injury,SNI）大鼠进行定性定量的三法三穴推拿干预,从超微形态学、组织细胞学及分子生物学三个层面阐述推拿调节细胞自噬促进SNI大鼠运动功能恢复的潜在机理:1.以坐骨神经功能指数验证疗效,采用透射电镜观察并分析脊髓至外周运动通路自噬体的生成和组织超微结构的变化,探寻三法三穴促进SNI大鼠后肢精细动作恢复的超微形态学依据;2.以腓肠肌湿重评价肌肉萎缩情况,通过分子生物学方法,检测自噬相关蛋白LC3及p62表达变化,分析三法三穴调节细胞自噬减缓失神经肌肉萎缩的内在规律;3.以斜板试验评价后肢肌力的变化,采用鞘内注射自噬诱导剂雷帕霉素为阳性药物对照,以双重免疫荧光标记法检测脊髓腹角LC3与NeuN共表达情况,并以分子生物学方法检测p-mTOR、p-Akt及p-AMPK等细胞自噬上游关键因子的表达,以期进一步分析三法三穴是否可以调节脊髓运动神经元细胞自噬及其潜在分子机制。[结果]1.三法三穴调节SNI大鼠脊髓至外周运动通路自噬体的形成促进组织超微结构的恢复1.1.行为学结果坐骨神经功能指数:干预第0次,与假手术组比较,模型组大鼠SFI显着降低（P<0.01）。干预第10次,与模型组比较,三法三穴组大鼠SFI结果升高（P<0.05）。干预第15次及第20次,与模型组比较,三法三穴组SFI结果显着升高（P<0.01）。1.2.脊髓腹角电镜结果造模后28天,电镜下模型组可见运动神经元核仁固缩明显,核膜凹凸不平,染色质深染聚集于核膜附近,胞质内可见自噬体及溶酶体。三法三穴组脊髓腹角神经元核仁、核膜改变较模型组轻,细胞质内自噬体及自噬溶酶体较模型组明显增加（P<0.05,P<0.01）。1.3.坐骨神经损伤点电镜结果造模后28天,电镜下模型组可见神经纤维髓鞘重度崩脱、扭曲,轴索严重萎缩甚至消失;轴索内线粒体呈现空泡状。三法三穴组可见大部分神经纤维髓鞘保留较完整,轴索无肿胀或萎缩,轴索内自噬溶酶体较模型组增加（P<0.05）。1.4.腓肠肌电镜结果造模后28天,电镜下模型组可见肌丝排列紊乱横纹消失,卫星细胞胞核极不规整,见大量空泡状线粒体。电镜下三法三穴组肌丝排列较整齐,横纹出现;可见清晰Z线及M线;卫星细胞细胞核较模型组规整,腓肠肌肌束间隙自噬体及自噬溶酶体较模型组增多（P<0.01,P<0.05）。2.三法三穴调控坐骨神经损伤点及腓肠肌细胞自噬促进SNI大鼠运动功能恢复2.1.行为学结果腓肠肌湿重:干预第0次,与假手术组比较,模型组大鼠腓肠肌湿重显着降低（P<0.01）。干预第20次,与模型组比较,三法三穴组大鼠腓肠肌湿重明显升高（P<0.01）。2.2.坐骨神经损伤点细胞自噬标记蛋白LC3、p62表达变化干预第0次,与假手术组比较,模型组大鼠坐骨神经损伤点LC3表达上调（P<0.05）。干预第20次,模型组大鼠坐骨神经损伤点LC3表达与假手术组无显着差异（P>0.05）;与模型组比较,三法三穴组LC3表达上调（P<0.05）。干预第0次,与假手术组比较,模型组大鼠坐骨神经损伤点p62表达上调（P<0.01）。干预第20次,模型组较假手术组坐骨神经损伤点p62仍显着增高（P<0.01）;与模型组比较,三法三穴组大鼠坐骨神经损伤点p62表达显着降低（P<0.05）。2.3.腓肠肌细胞自噬标记蛋白LC3、p62表达变化干预第0次,与假手术组比较,模型组大鼠腓肠肌中LC3表达显着上调（P<0.01）。干预第20次,与假手术组相比,模型组大鼠LC3表达仍较高（P<0.05）;三法三穴组LC3表达与模型组相比无差异（P>0.05）。干预第0次,与假手术组比较,模型组大鼠腓肠肌中p62表达显着上调（P<0.01）。干预第20次,与假手术组相比,模型组大鼠腓肠肌中p62仍趋于较高水平（P<0.01）;与模型组比较,三法三穴组p62表达降低（P<0.05）。3.三法三穴调控脊髓腹角神经元细胞自噬促进SNI大鼠运动功能恢复3.1.行为学结果斜板试验:干预第0次,与假手术组比较,模型组斜板试验角度显着降低（P<0.01）。干预第4次,与溶剂组比较,雷帕霉素组斜板角度升高（P<0.05）。干预第6次至第20次,与溶剂组比较,雷帕霉素组斜板角度显着升高（P<0.01）。干预第6次,三法三穴组斜板角度升高（P<0.05）。干预第10次至第20次,与模型组比较,三法三穴组斜板角度显着升高（P<0.01）。3.2.脊髓腹角LC3/NeuN双重免疫荧光标记结果干预第0次,与假手术组相比,模型组脊髓腹角LC3/NeuN共表达量增加（P<0.05）。干预第20次,与假手术组比较,模型组脊髓腹角LC3/NeuN共表达量仍处于上调状态（P<0.05）;与溶剂组相比,雷帕霉素组LC3表达显着增高（P<0.01）;与模型组比较,三法三穴组LC3表达也较高（P<0.05）,但与雷帕霉素组仍存差异（P<0.05）。3.3.脊髓腹角自噬体降解标记蛋白p62表达变化干预第0次,与假手术组相比,模型组脊髓腹角p62表达显着增加（P<0.01）。干预第20次,与假手术组相比,模型组p62表达仍然处于上调阶段（P<0.01）;与溶剂组相比,雷帕霉素组p62表达显着下降（P<0.01）;与模型组比较,三法三穴组p62表达下降（P<0.05）,但与雷帕霉素组仍有显着差距（P<0.01）。3.4.脊髓腹角细胞自噬上游mTOR-ULK信号通路关键因子表达结果干预第0次,与假手术组相比,模型组p-mTOR与p-ULK表达增高（P<0.01）。干预第20次,与假手术组相比,模型组p-mTOR与p-ULK仍处于上调状态（P<0.01）;溶剂组与模型组无显着差异（P>0.05）;与溶剂组比较,雷帕霉素组p-mTOR显着降低（P<0.01）,p-ULK显着上升（P<0.01）;与模型组比较,三法三穴组p-mTOR降低（P<0.05）,p-ULK上调（P<0.05）,但与雷帕霉素组仍存差异（P<0.01）。3.5.脊髓腹角mTOR通路上游AMPK表达结果干预第0次,与假手术组比较,模型组脊髓腹角p-AMPK表达无显着差异（P>0.05）。干预第20次,与假手术组比较,模型组脊髓腹角pAMPK表达同样无显着性差异（P>0.05）;溶剂组、雷帕霉素组与模型组无显着性差异（P>0.05）;与模型组比较,三法三穴组脊髓腹角p-AMPK表达增加（P<0.05）。3.6.脊髓腹角mTOR通路上游Akt表达结果干预第0次,,与假手术组相比,模型组p-Akt表达增高（P<0.05）。干预第20次,与假手术组相比,模型组p-Akt表达仍处于上调状态（P<0.01）;溶剂组与模型组无统计学差异（P>0.05）;与溶剂组相比,雷帕霉素组p-Akt表达显着下调（P<0.05）;与模型组相比,三法三穴组无显着性差异（P>0.05）。[结论]1.三法三穴干预可以促进SNI大鼠脊髓腹角至外周运动通路自噬体的生成,保护运动神经元、轴索及肌纤维超微结构的稳定,促进SNI大鼠后肢精细动作的恢复;2.三法三穴干预可以加速SNI大鼠神经损伤点与腓肠肌细胞自噬进程,使损伤点与失神经肌肉细胞加快清除与再利用坏死的细胞器,减缓肌肉的萎缩;3.三法三穴干预可以促进SNI大鼠后肢肌力的恢复,其潜在机制是促进脊髓腹角神经元细胞自噬,三法三穴对细胞自噬的调节是通过AMPK-mTOR信号通路完成的,而不是依靠Akt-mTOR信号通路实现的。
梁茜子[4]（2016）在《乳腺癌神经新生的生物学特点及分子调控机制》文中提出【目的】利用乳腺癌大鼠模型,研究乳腺癌组织中神经新生（Neurogenesis）种类、分布特点及来源,揭示其生物学特点;研究神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）和血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）对乳腺癌组织中神经新生的调控作用并探讨胞外信号调节激酶（Extracellular signal-regulated kinase,ERK）在其中的介导作用,揭示其分子调控机制。【方法】向7周龄SD大鼠（200±20g）腹腔内注射致癌剂MNU（50mg/kg,隔月一次,共两次）构建乳腺癌动物模型,利用苏木素-伊红染色明确;利用免疫组织化学、免疫荧光和免疫印迹方法检测大鼠乳腺癌组织中不同神经标志物,包括蛋白基因产物（Protein gene product,PGP）9.5、降钙素基因相关肽（Calcitonin gene related peptide,CGRP）,囊泡单胺转运体（Vesicular monoamine transporter 2,VMAT2）的表达变化及分布特点,利用示踪剂羰化青（1,1’-K-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylin-docarbocyanine perchlorate,DiI）逆向标记,观察乳腺癌组织中神经新生的来源;利用药理学和免疫印迹方法观察阻断NGF/VEGF受体对乳腺癌组织中PGP9.5和磷酸化ERK表达的影响。【结果】SD大鼠腹腔内注射致癌剂MNU后3-4个月,40%左右大鼠的胸腹部可见新生肿块,HE染色明确为乳腺癌;免疫组织化学以及免疫荧光组织化学结果显示PGP9.5、CGRP、VMAT2在乳腺癌组织中表达,且主要分布在肿瘤间质中。免疫印迹结果显示随着肿瘤的生长,PGP9.5蛋白的表达水平逐渐增加。注射神经示踪剂DiI后,通过荧光显微镜,可在乳腺癌组织及相应DRG观察到DiI标记的神经纤维和神经元。免疫印迹结果显示,腹腔注射VEGF受体抑制剂（SU5416）、抗VEGF受体2抗体（a-VEGFR2）和NGF受体抑制剂（AG879）均可明显降低乳腺癌组织中PGP 9.5的蛋白表达（SU5416:P<0.001;AG879:P<0.01;a-VEGFR2:P<0.001）,同时明显升高乳腺癌组织中磷酸化ERK的蛋白表达（SU5416:P<0.05;AG879:P<0.01;a-VEGFR2:P<0.001）。【结论】大鼠乳腺癌组织中确实存在神经新生,主要分布在肿瘤间质中,其中有与疼痛传导有关的感觉传入神经和交感传出神经;肿瘤组织中感觉神经可能来源于脊髓背根神经节;乳腺癌组织中神经新生的数目与其病变进展有关;NGF和VEGF均参与乳腺癌组织中神经新生的调控,其作用可能与细胞内信号通路ERK有关。
于振海[5]（2014）在《骨髓神经组织定向干细胞源性感觉神经元移植修复周围神经感觉缺损》文中研究表明临床患者常见的腰部及下肢放射性痛多由腰椎间盘突出症、腰椎管狭窄、腰骶椎不稳定等原因造成的脊神经根受压所致，严重者可以造成患肢的运动功能丧失。椎板开窗、髓核摘除、神经根减压等手术治疗，虽然可以使患者的运动功能及疼痛症状得到缓解，但患肢的麻木等感觉功能障碍却难以恢复，这成为长期困扰临床医生的棘手问题。神经损伤后感觉功能受损的主要表现是患者的痛觉、温度觉障碍以及继发性的感觉性共济运动失调。此外，感觉神经元构成神经系统反射弧的传入路径，因此还可能造成各种生理性的反射功能丧失等严重后果。如阴部神经的感觉功能缺损，可造成肛门反射异常而引起大便失禁；盆内脏神经的感觉功能缺损，可造成病人膀胱反射消失而引起尿潴留等一系列临床症状。可见，神经损伤后，修复患者的感觉功能，是提高神经修复效果、改善患者生活质量，必须重视的问题。通过再生医学移植神经干细胞修复神经损伤是公认的有效方法和手段，但目前注意点主要集中在损伤神经的运动功能恢复方面，对感觉功能的恢复缺乏重视。本课题拟通过成体干细胞源性感觉神经元移植，探讨修复感觉缺损的可能性及机制。通过再生医学移植神经干细胞的方法修复周围感觉神经缺损，首先必须解决移植细胞的种类、来源，和诱导分化为感觉神经元细胞的问题。骨髓神经组织定向干细胞（neural tissue committed stem cells，NTCSCs），是骨髓间充质干细胞的一种亚型，或组分，可以自然分化为神经元细胞。NTCSCs可来源于自体、无伦理学争议、避免了免疫排斥反应，并且取材容易，活性好，易于诱导分化，应是较为理想的移植用种子细胞来源。我们实验室前期成功分离、培养了NTCSCs，并诱导分化为神经元样细胞，用于修复周围神经缺损，取得了初步研究成果，但，由于该干细胞存在一定争议，应用研究较少涉及。Kondo T等通过Forskolin（腺苷酸环化酶激活剂）和成纤维细胞生长因子-2（fibroblast growth factor-2，FGF2）预诱导，再经音猥因子（sonic hedgehog，SHH）和维甲酸（retinoic acid，RA）的联合诱导，可以将C57小鼠的骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）诱导分化为特异性表达VGluT1（Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体）、calretinin（钙结合蛋白）、P2X3（ATP调控的一种离子通道受体）等谷氨酸能感觉神经元特异性标志蛋白的细胞，且可以在脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）存在的微环境中长期存活。这为我们通过骨髓NTCSCs获得大量稳定的可移植用的感觉神经元提供了借鉴依据。通过移植感觉神经元的方法修复周围神经感觉缺损，还需要找到适宜的周围神经感觉缺损的动物模型。脊神经节内聚集着假单极感觉性神经元，这种感觉神经元负责接收来自躯体和四肢的感觉信息，并进一步传递至中枢神经。背根神经节神经元是一种终末分化神经细胞，一旦死亡，不能再生，从而造成肢体的感觉功能出现异常。Helgren等采用腹腔注射过量吡哆醇的方法导致神经纤维轴索变性及背根神经节神经元的坏死。后续研究证明，通过注射过量吡哆醇制作感觉神经病动物模型的方法简单、操作性强、重复性好，是目前神经科学领域研究感觉神经病的常用模型。综上所述，本课题拟在成功制备背根神经节病变大鼠动物模型基础上，研究同种异体骨髓NTCSCs源性感觉神经元样细胞移植，修复感觉神经缺损的效果与机制，探讨成体干细胞源性感觉神经元移植，修复感觉神经缺损的可行性，为临床治疗周围神经感觉缺损提供理论和实验依据。第一部分骨髓NTCSCs源性感觉神经元的分离、培养、诱导分化及鉴定研究目的：获取移植应用所需的骨髓NTCSCs源性感觉神经元细胞。材料和方法：从成年SD大鼠骨髓组织中分离获得单个核细胞，采用先贴壁培养筛选、后无血清神经干细胞培养液悬浮培养的方式，分离、扩增出单克隆生长的NTCSCs；对得到的NTCSCs进行鉴定；扩增得到的NTCSCs采用SHH和RA等联合诱导的方法使其向感觉神经元方向分化；对得到的骨髓NTCSCs源性感觉神经元进行鉴定。结果：SD大鼠骨髓组织中的单个核细胞采用单细胞克隆、无血清悬浮培养得到大量的神经球；神经球细胞表达神经干细胞特异蛋白Nestin和组织定向干细胞特异蛋白CXCR4，同时具有MSCs表型特征：CD29（97.81%）、CD44（91.31%）、CD90（93.85%）、CD105（95.08%）、CD34（3.78%）、CD45（1.59%）；超微结构显示多个核仁、丰富的线粒体、常染色质较多等干细胞特征。神经球细胞经SHH和RA联合诱导后表现神经元样细胞外形特征，并且表达NeuN、MAP-2、β-tublinⅢ、GluR-4等蛋白；Gria4、Gria3、Calb2、Pou4f1、Tau、NeuN、MAP-2、Tubulin Ⅲ、NF、GFAP、Neurogenin2等基因表达上调，Nestin、Ret、GATA3等基因表达下调；Tau、MAP-2、NF、NSE、NeuN、Gria4等蛋白表达量增加，Nestin蛋白表达降低。结论：骨髓组织中存在NTCSCs，可以分离，并能通过细胞球悬浮培养的方法得到大量扩增；NTCSCs在SHH和RA的联合诱导作用下可以分化为具有谷氨酸能特征的感觉神经元样细胞。第二部分周围神经感觉缺损动物模型的建立研究目的：建立周围神经感觉缺损动物模型。材料和方法：成年雌性SD大鼠，体重180-220g，采用早晚两次，连续8天，腹腔注射800mg/kg/d吡哆醇盐酸盐，进行周围神经感觉缺损动物模型的制作。通过动物功能行为学、神经电生理学、受损背根神经节及坐骨神经的组织形态学观察与计量等实验方法，对得到的动物模型进行综合性评价。结果：造模后动物步态蹒跚、平衡及稳定性较差；足底温度觉和痛觉敏感度降低；坐骨神经感觉潜伏期延长，传导速度降低；背根神经节的神经元萎缩、变性、坏死，神经纤维轴索变性，排列疏松紊乱，伴有髓鞘塌陷、扭曲等。结论：通过腹腔注射过量吡哆醇的方法可以制作周围神经感觉缺损动物模型。第三部分骨髓NTCSCs源性感觉神经元移植修复大鼠周围神经感觉缺损的作用与机制研究目的：探讨骨髓NTCSCs源性感觉神经元样细胞移植修复SD大鼠周围神经感觉缺损的作用与机制。材料和方法：采用显微注射的方法，将CM-Dil标记的骨髓NTCSCs源性感觉神经元细胞，移植进入吡哆醇诱导的感觉缺损模型动物的L4、L5背根神经节内。分别于移植术后第2周、4周、8周、12周对模型动物进行行为学观察；感觉功能评测；坐骨神经电生理学检测；坐骨神经及背根神经节形态学观察及计量学分析；荧光金（FG）逆行示踪等实验方法与手段，观测移植的感觉神经元对模型动物感觉功能的修复情况。结果：移植骨髓NTCSCs源性感觉神经元后，模型动物的一般姿势、动作步态随时间的延长出现明显好转的迹象；足底温度觉和痛觉敏感度逐渐恢复；坐骨神经有髓神经纤维计数明显增加，感觉潜伏期缩短、感觉神经传导速度增加，且与时间线性相关；免疫荧光染色CM-Dil标记的骨髓NTCSCs源性感觉神经元在DRG内迁移、定植，并表达NeuN和GluR-4蛋白；DRG内检测到FG标记的神经元细胞数量显着增多。结论：移植骨髓NTCSCs源性感觉神经元可以有效修复周围神经感觉缺损。
李登[6]（2014）在《神经营养素-3（NT-3）对大鼠坐骨神经离断后腰脊神经节损伤保护作用的实验研究》文中研究说明背景：神经营养素家族（neurotrophins，NTs）是一类重要的神经营养因子家族，具有重要的维持神经细胞存活和再生的作用，神经营养素-3（NT-3）是其第3个成员，具有广泛的神经营养活性。脊神经节为感觉神经节，内含许多假单极神经元胞体和平行排列的神经纤维束，主要参与肢体的感觉功能。腰脊神经节损伤的修复，是目前医学领域有待解决的难题。目的：本实验通过对大鼠坐骨神经离断来建立腰脊神经节损伤的模型，阐述实验性神经营养素-3（NT-3）在促进腰脊神经节损伤后神经功能恢复方面的作用，为临床治疗腰脊神经节损伤提供理论依据。方法：SD大鼠54只，雌雄不限，随机平均分为三组：假手术组、NT-3治疗组和对照组。假手术组仅仅显露坐骨神经；NT-3治疗组于梨状肌孔下10mm处将坐骨神经锐性离断后逐层缝合，每天皮下注射1ml神经营养素-3（NT-3）（10ug／m1）；对照组每天皮下注射与治疗组相同体积的生理盐水。术后对大鼠进行一般观察，于术后4周取大鼠腰脊神经节进行尼氏体染色、HE染色观察脊神经节神经元的病理形态学变化、局部炎症反应情况及Bcl-2、Bax表达阳性率，检测脊神经节神经细胞凋亡情况。结果：一般观察：大鼠坐骨神经离断后，术侧下肢均呈现足下垂畸形、跛行步态等运动功能障碍，随着时间的推进先后出现足趾红肿、散开、皮肤干燥、部分皮毛脱落、溃疡、自噬足趾、肌肉萎缩等失神经营养现象，NT-3治疗组上述现象较对照组略显轻微。NT-3治疗组见近端新生神经直径较对照组粗大。尼氏体染色：坐骨神经切断后，对照组尼氏体溶解消失，数量明显减少，脊神经节神经元着色明显变浅，胞体肿胀，轮廓欠清晰，神经细胞数量明显减少；而NT-3治疗组脊神经节神经细胞染色较假手术组轻度变淡，脊神经节神经元形态结构基本正常，数量减少不明显。HE染色观察：术后对照组脊神经节神经元数量减少、神经元细胞体呈现水肿、空泡样变性、尼氏体溶解神经元染色较淡、核固缩，并有典型细胞凋亡存在，NT-3治疗组脊神经节神经元细胞体水肿变性及凋亡程度较对照组减轻，神经元染色较深。Bcl-2、Bax免疫组化检测：免疫组化Bcl-2、Bax阳性染色为棕黄色，假手术组未见或仅见少量阳性细胞。对照组染色较深，Bcl-2、Bax阳性细胞数较假手术组明显增高（P<0.05），表明损伤严重。 NT-3治疗组Bcl-2、Bax阳性细胞表达数显着低于对照组（P<0.05），表明NT-3对神经节的保护作用明显。结论：坐骨神经离断可以引起腰脊神经节损伤，脊神经节神经元死亡方式主要为细胞凋亡；神经营养素3在维持脊神经节神经元存活、抑制细胞凋亡方面发挥着重要的神经营养性作用。
孙志华[7]（2013）在《鞘内间断注射不同浓度罗哌卡因在长时间对大鼠脊髓神经毒性影响及机制研究》文中指出目的：1.观察鞘内间断注射0.5%和1%罗哌卡因后28天对大鼠脊髓、神经根超微结构的影响及机制研究,探讨ERK信号通路、Akt信号通路是否参与了罗哌卡因的脊髓神经毒性；观察鞘内间断注射1%罗哌卡因+神经营养素-3（neurotrophin-3）后28天对大鼠脊髓、神经根超微结构的影响及机制,探讨neurotrophin-3（NT-3）是否能减轻和预防罗哌卡因的神经毒性作用。2.体外观察NT-3对于罗哌卡因细胞毒性的影响。为临床上连续腰麻更安全使用罗哌卡因提供理论依据。方法：1.改良Yaksh法鞘内置管成功的雄性SD大鼠144只,体重280-320g,月龄为1.5月。随机分为生理盐水组（NS组,n=36）,0.5%罗哌卡因组（M组,n=36）,1%罗哌卡因组（R组,n=36）,1%罗哌卡因+NT-3组（T组,n=36）。NS组大鼠鞘内注入0.9%生理盐水、M组大鼠鞘内注入0.5%罗哌卡因、而R组和T组大鼠鞘内注入1%罗哌卡因各0.12ml/kg,间隔1.5h给药一次,持续给药12h。其中T组同时再鞘内注入0.1mg/kg的NT-3。各组均观察1d、3d、5d.7d、28d。NS组记为"NS1组、NS3组、NS5组、NS7组、NS14组、NS28组”（n=6）。M组记为“M1组、M3组、M5组、M7组、M14组、M28组”（n=6）。R组记为"R1组、R3组、R5组、R7组、R14组、R28组”（n=6）。T组记为"T1组、T3组、T5组、T7组、T14组、T28组”（n=6）。分别检测给药前和各时间点处死前各组大鼠后肢机械刺激缩足反应阈值即机械痛阈和热潜伏缩爪阈值即热痛阈以及最后一次给药后运动功能评分来观察其行为学的变化；完成行为学检测后的各组大鼠,取脊髓腰膨大及相应节断行光镜和透射电镜观察,并进行病理学评分；Tunel法检测脊髓凋亡；免疫组化检测各组大鼠腰膨大脊髓ERK1（P44MAPK）、Akt及caspase-3蛋白的表达；Western-blot检测各组磷酸化ERK和磷酸化Akt蛋白表达及相对定量比情况。2.细胞实验：体外观察NT-3对于罗哌卡因细胞毒性的影响将PC12细胞分为三组：对照组（NS组）：不予任何处理,常规培养48小时；罗哌卡因组（R组）：15mM罗哌卡因干预48h；罗哌卡因+NT-3组（T组）：15mM罗哌卡因干预48h并同时给予NT-3100ng/ml处理48小时。检测干预后每组细胞计数；MTT方法测定细胞成活率的变化；台盼兰染色测定每组细胞活性；Western blot法检测各组细胞磷酸化ERK和磷酸化Akt蛋白表达及相对定量比情况。结果：1.NS组和M组各对应时间组相比,大鼠机械性触诱发痛阈和热刺激诱发痛阈无显着性差异。各组大鼠机械性触诱发痛阈与NS组和M组各对应时间组相比：R1、R3、R5组和T1、T3组大鼠机械触诱发痛闽升高（P<0.05）,其中以R1组升高最明显；与R组相对应时间组相比：T5组大鼠机械痛阈显着降低（P<0.05）。与NS组和M组各对应时间组相比：R1、R3、R5组和T1、T3组大鼠热刺激诱发痛阈升高（P<0.05）,其中以R1组升高最明显。与R组相对应时间组相比：T5组大鼠热刺激诱发痛阈显着降低（P<0.05）。2.电镜和光镜结果。电镜：R组给药后R1、R3、R5、R7、R14R28组电镜超微结构有不同程度的改变。R1组水肿明显,神经细胞呈固缩状,核碎裂,大多数空泡状,有凋亡小体出现,R3组神经细胞线粒体清晰,核皱缩,神经细胞局灶水肿,R5组部分神经细胞核皱缩,内质网轻度扩张,神经细胞有部分肿胀,R7组局灶水肿明显,部分线粒体结构模糊,内质网有轻度扩张,部分神经细胞有皱缩,R14组神经细胞肿胀、水肿,线粒体丢失,呈空泡状,内质网有轻度扩张,R28组郎飞氏结正常。而T组中的对应时间组：T1组胞核花边状,皱缩,有凋亡小体出现的趋势,线粒体结构完整,T3组神经细胞核圆,线粒体结构清晰,轻度水肿,T5组线粒体清晰,内质网有轻度扩张,核完整,轻度水肿,T7组神经细胞核轻度皱缩,部分线粒体空泡状,水肿部明显,T14组趋向正常,细胞核圆,线粒体嵴清晰,内质网结构正常,T28组形态正常。光镜：R1、R3、R5、R7组神经元数量较少,体积明显缩小,核明显固缩、深染。个别神经元坏死,部分胶质细胞有增生。R14及R28组神经元数量较多,部分有轴突,部分体积缩小,核固缩、深染。T1、T3、T5组神经元数量减少,体积缩小,核固缩、深染,T5组神经元数量比R5组多,有点状坏死。T7组部分神经元细胞形态正常,大部分可见长轴突,部分神经元体积缩小,核固缩、深染,胶质细胞增生。T14组部分神经元轴突消失,胞浆少,T28组神经元细胞数量比R28多,形态正常。R组和T组的各对应时间组的组织病理学评分在1d、3d、5d、7d,14d分别较NS组和M组各对应时间高,以R组最高（P<0.05）；与R组的各对应时间组比较, T组各对应时间点的T5、T7、T14组的组织病理学评分显着降低（P<0.05）。NS组和M组的电镜结果基本正常。3.TUNEL染色阳性细胞计数的结果：与NS组的同时间对应组比较,M组染色阳性细胞无显着性增多。与NS组和M组的同时间对应组比较T1、T3、T5组TUNEL染色阳性细胞增多（P<0.05）；R组的R1、R3、R5、R7组染色阳性细胞增多（P<0.05）。与R组同时间对应组比较T组的R1、R5、R7组染色阳性细胞显着减少（P<0.05）。4.免疫组化检测的Akt、ERK1、caspase-3Akt:R1、R3、R5组以及T1、T3组与NS和M组的对应时间组比较,脊髓灰质后角Akt阳性表达显着升高（P<0.05）；T3、T5、T8组与R组对应时间组比较,Akt阳性表达显着降低（P<0.05）。ERK1:R1、R3、R5R7、R14组以及T1、T3、T5、T7组与NS和M组的对应时间组比较,脊髓灰质神经元细胞的ERK1阳性表达显着升高（P<0.05）; T1T3、T5、T14组与R组对应时间组比较,ERK1阳性表达显着降低（P<0.05）。caspase-3:R1、R3、R5、R7、R14组以及T1、T3、T5、 T7组与NS和M组的相对应时间组比较,脊髓灰质后角caspase-3阳性表达显着升高（P<0.05）; T1、T3、T5、T14组与R组相对应时间组比较,caspase-3阳性表达显着降低（P<0.05）。与NS组的同时间对应组比较,M组免疫组化检测的Akt、ERK1、caspase-3无显着性差异。5.Western blot法测定脊髓腰膨大组织磷酸化ERK以及磷酸化Akt结果与NS组各对应时间组相比,M组脊髓腰膨大组织磷酸化ERK蛋白表达水平以及磷酸化Akt蛋白表达水平无显着性差异。与NS组各对应时间组相比：R1、R3、R5、R7、R14、R28组和T1、T3、T5、T7、T14组磷酸化Akt蛋白表达水平降低（P<0.05）,其中以R1、R3组水平降低最明显；与R组相对应时间的各组相比：T组与之相对应时间的T5、T7、T28组磷酸化Akt蛋白表达水平显着升高（P<0.05）。与NS组各对应时间组相比：R1、R3、R5、R7组和T1、T3、T5、T7组磷酸化ERK蛋白表达水平降低（P<0.05）,其中以R1、R3组降低最明显；与R组相对应时间的各组相比：T1、T3组磷酸化ERK蛋白表达水平显着升高（P<0.05）。6.体外细胞实验说明：与NS组比较,R组和T组的细胞计数和细胞存活率均减少、细胞活性降低（P<0.05）,而蛋白表达均降低（P<0.05）,与R组相比较,T组的细胞计数和细胞存活率、细胞活性均增高（P<0.05）,蛋白表达均升高（P<0.05）。结论：1.间断鞘内注射0.5%罗哌卡因12h的各组大鼠脊髓神经根超微结构、组织病理学在1-28天无改变。2.间断鞘内注射1%罗哌卡因12h的各组大鼠脊髓神经根超微结构、组织病理学在1-7天发生改变较重,产生的凋亡细胞较多。随着时间的延长,病理改变逐渐恢复,在28天时大部分恢复正常。3.间断鞘内注射1%罗哌卡因+NT-312h的各组大鼠脊髓神经根超微结构、组织病理学在1-7天发生改变轻微,产生的凋亡细胞少。随着时间的延长,病理改变逐渐恢复,在28天时完全恢复正常。4.Akt及ERK信号通路介导的细胞凋亡参与了罗哌卡因的神经毒性机制。5.NT-3的应用可能对罗哌卡因神经毒性有保护作用。图201副,表3个,参考文献135篇
赵忠全[8]（2012）在《感觉神经缺失对运动神经再生的影响》文中研究指明目的：本实验以选择性切断大鼠一侧脊神经后根（L4-L6）为处理因素，以制作同侧胫神经横断损伤并立即在显微镜下行神经外膜缝合术为基本方法，建立选择性大鼠感觉神经损伤的模型，进一步研究感觉神经缺失对运动神经损伤后再生的影响作用。方法：选用Wistar大鼠，38只，体重范围在：300g-450g，其中6只用来做预实验及解剖研究，剩余32只依照随机原则分为2组，实验组与对照组分别16只。分组：（1）对照组（A组），暴露右侧L4-L6脊神经后根+右胫神经切断后立即行神经外膜缝合；选择5%盐酸氯胺酮（100mg/kg）行大鼠腹腔麻醉，后取俯卧体位，以橡皮筋固定大鼠四肢，计数L3-S2椎体，并以此为中心做长约8cm后正中切口，显微镜下咬除右侧相应部分椎板及椎间关节，暴露右侧L4-L6神经根，后逐层缝合关闭创口。取大鼠右下肢股后外侧切口，右膝关节上方约1cm处显露胫神经，取胫神经全长1/2处以刀片横断，用11-0无创缝合线显微镜下缝合神经外膜，确保神经断端正确对合，冲洗缝合伤口。（2）实验组（B组），同样方法设计切口，仔细分离背部肌肉，暴露右侧L4-6脊神经后根，用显微剪刀在后根脊神经节节后部位进行切断处理，冲洗伤口后逐层缝合。有胫神经依照同样方法显露，切断后立即在显微镜下行神经外膜缝合术。实验组麻醉剂手术入路同对照组，暴露右侧L4-L6脊神经后根，手术显微镜视野下用显微器械于各自脊神经节后切断后根。其余步骤同对照组。术后12周，观察实验的各项指标，检测项目：（1）一般情况；（2）神经电生理检查；（3）腓肠肌湿重：得到各组肌肉湿重的精确数值，并计算腓肠肌湿重恢复率；（4）右侧胫神经的取材切片：应用HE染色法以及硝酸银染色法。实验中得到的所有数据均使用SPSS16.0统计软件进行分析。结果：（1）手术12周后，取材时观察两组各只大鼠的胫神经损伤均可再生；（2）大鼠一侧L4-L6后根切断在实验组和对照组均能满意的模拟选择性感觉神经损伤；（3）实验组大鼠的胫神经再生后运动功能的恢复比对照组的差，检查结果提示：实验组大鼠腓肠肌肌湿重恢复率低于对照组大鼠，但小腿三头肌萎缩程度高于对照组大鼠；对于NCV（胫神经神经传导速度）和CAMP（腓肠肌诱发动作电位波幅）两个指标，实验组大鼠明显低于对照组大鼠。所得三项数据均经过独立样本t检验分析，按照a=0.05水准，差异有统计学意义（P﹤0.01）结论：本实验的结果说明，感觉神经的缺失对运动神经损伤的再生存在影响；感觉神经缺失时，运动神经再生后产生的运动功能会降低；运动功能降低表现在实验组大鼠的患侧肢体运动协调性较差，胫神经的传导速度变慢，腓肠肌萎缩，腓肠肌肌电图的波幅下降，并出现损伤电位。
唐晓军[9]（2010）在《脊神经后根吻合轴突再生重建感觉传入通路的实验研究》文中进行了进一步梳理脊神经根包括前根（ventral root）和后根（dorsal root）,分别属于运动和感觉神经纤维,每条脊神经（spinal nerve）通过前根和后根与脊髓相连。后根上的脊神经节细胞（dorsal root ganglion, DRG）为假单极神经元,其发出内侧的中枢突支（central processes）和外侧的周围突支（peripheral processes）分别构成后根进入脊髓或与前根汇合形成脊神经分布至外周感受器或效应器。后根大部分轴突位于脊髓外,属于周围神经系统（peripheral nervous system, PNS）,表面髓鞘主要由Schwann细胞构成；少部分轴突走行于脊髓内,属于中枢神经系统（central nervous system, CNS）,其表面髓鞘由少突胶质细胞和星形胶质细胞包裹。外周感受器接受机械性或化学性刺激,转为神经冲动信号经外周神经进入DRG,继而经后根进入脊髓,产生感觉或实现对肌肉运动的调节。脊神经根纤维胶原含量少、可伸展性低,纤维之间呈平行排列,而外周神经纤维呈丛状排列,可伸展性高。此外,脊神经根缺乏神经外膜和神经束膜结构,仅存在神经内膜毛细血管内皮细胞形成的血-神经屏障；DRG细胞周围毛细血管网内皮细胞为缝隙样连接,血-神经屏障、神经束膜细胞成分的保护均不完善。DRG存在感觉、运动相互调控的物质基础和形态学依据,感觉传入可以影响肌肉的运动协调能力和运动幅度。后根受损除了因相应支配区域感觉兴奋传入通路中断出现感觉丧失,还由于运动反射弧的完整性破坏,会引起肌肉运动功能失常。随着社会经济的飞速发展,交通、建筑等行业出现的高冲击能量性事故导致截瘫、马尾神经、臂丛神经根性撕脱伤等引起的运动、感觉功能障碍治疗和康复是临床面临的巨大难题。肖传国等最早提出利用大鼠L4—L6前根吻合轴突再生重建“人工体神经—内脏神经反射弧”,侯春林等利用犬L6—S2前根吻合重建脊髓损伤弛缓性膀胱人工反射弧、并予一名患者行T11—S2前根经腓肠神经移植桥接吻合重建“腹壁反射—脊髓中枢—膀胱”人工反射弧均取得满意效果。然而,后根损伤再生及感觉功能恢复目前尚面临较大困难。哺乳动物后根损伤会引起后根进入脊髓部位（dorsal root entry zone, DREZ）胶质瘢痕增生、产生胶质界膜及各种炎性介质因子等,导致DRG后根轴突再生无法进入脊髓。针对这一难题,目前国内外主要的解决方式包括：应用胚胎干细胞或嗅鞘细胞等具备潜在分化能力的细胞移植；各种神经营养因子如睫状神经营养因子（CNTF）、酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）等的直接应用或修饰表达该基因的病毒载体联合应用；外周神经如肋间神经、腓神经等桥接吻合等。然而,以上治疗方法并不完全适用于人体。本课题拟探索一种新的后根吻合重建术式,通过Neuro-DiI及辣根过氧化物酶神经示踪,降钙素基因相关肽（CGRP）免疫组化染色及神经元存活率检测,结合光镜和透射电镜等综合评价轴突再生及手术效果,为后根再生重建感觉传入通路奠定组织学基础。实验一脊神经后根部分切断交叉吻合轴突再生的实验研究目的观察后根部分切断交叉吻合重建后轴突再生能力。方法SD大鼠随机分为实验组和假手术组,将右侧L4和L6后根各自等分为2束,随机选择其中一束切断,实验组两远断端行端—端吻合,假手术组不予吻合；所有动物左侧L4和L6后根保持完整作为正常对照侧。术后3个月分别经L4和L6脊神经节注射Neuro-DiI进行神经示踪,脊髓降钙素基因相关肽（CGRP）免疫组化染色观察后根轴突在脊髓后角分布情况,神经纤维银染计算单位面积内后根轴突数量。结果实验组可见DiI标记神经纤维通过吻合口并到达对侧脊神经节。右侧L4节段脊髓后角CGRP阳性轴突终末分布密度在实验组与正常对照侧比较差异无统计学意义（P>0.05）,但假手术组显着低于实验组和正常对照侧（P<0.05）,差异有统计学意义。实验组单位面积内（mm2）轴突数量与假手术组比较差异有统计学意义（P<0.05）,与正常对照侧比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论后根部分切断交叉吻合后轴突能够再生通过吻合口,吻合口两侧脊神经节间存在建立互相产生信息传递的形态学基础。实验二脊神经后根横断吻合修复方法的实验研究目的探讨治疗后根损伤修复的更有效方法,为重建感觉传入通路奠定组织学基础。方法SD大鼠随机分为A、B、C三组,均将右侧L6后根尽量靠近脊髓端切断。另外,在A组右侧L4后根于脊神经节前3-5mm处切断,近断端与右侧L6后根远断端吻合；B组右侧L4后根于脊神经节后3mm处切断,近断端与右侧L6后根远断端吻合；C组手术操作同B组,但不吻合作为假手术组。所有动物左侧L4和L6后根保持完整作为正常对照侧。术后3个月经L6脊神经节注射Neuro-DiI进行神经示踪,脊髓CGRP免疫组化染色观察后根轴突在脊髓后角分布情况,形态学及电镜观察神经纤维数量及髓鞘厚度,综合评价手术及轴突再生效果。结果A组和B组均可见DiI示踪轴突再生通过吻合口,神经纤维数量和髓鞘厚度与正常对照侧相比差异无统计学意义（P>0.05）；C组神经纤维数量和髓鞘厚度均低于其它各组,差异有统计学意义（P<0.05）。A组后根轴突再生停止于DREZ,脊髓后角CGRP阳性纤维分布密度低于B组和正常对照侧,差异有统计学意义（P<0.05）；B组L4脊神经节可见DiI阳性标记神经元,后根CGRP阳性神经纤维通过DREZ进入脊髓后角,纤维分布密度与正常对照侧相比差异无统计学意义（P>0.05）。结论处于脊神经节前的后根损伤修复,轴突再生无法穿越DREZ区域,效果欠佳；处于脊神经节后的后根损伤修复,吻合口轴突再生,后根神经纤维与脊髓后角突触联系保持完整,存在感觉信息经传入纤维穿越DREZ至髓内第二级感觉神经元的形态学依据,是一种理想的修复感觉传导通路的方式。实验三脊神经前后根切断吻合轴突再生后的神经纤维追踪及脊髓前/后角和脊神经节神经元的变化目的脊神经前、后根吻合轴突再生后,进一步观察神经传导通路的建立及脊髓前、后角和脊神经节神经元的变化情况,探讨联合应用前、后根轴突再生重建运动、感觉传导的可行性。方法SD大鼠随机分为A、B、C三组,A组：行右侧L4前根近断端与右侧L6前根远断端吻合；再分别将右侧L4后根于脊神经节前3-5mm处切断、右侧L6后根尽量靠近脊髓端切断,L4后根近断端与L6后根远断端吻合。B组：行右侧L4前根近断端与右侧L6前根远断端吻合；再分别将右侧L4后根于脊神经节后3mm处切断、右侧L6后根尽量靠近脊髓端切断,L4后根近断端与L6后根远断端吻合；C组手术操作同B组,但前、后根均不吻合作为假手术组。所有动物左侧L4和L6前、后根不予处理作为正常对照侧。术后3个月分别经坐骨神经和L6脊神经节注射辣根过氧化物酶（HRP）神经示踪,尼氏体染色观察脊髓前、后角和脊神经节神经元形态变化。结果B组右侧L4脊髓节段前、后角及L4脊神经节内均发现HRP标记神经元,而A组仅右侧L4脊髓节段前角出现HRP标记细胞,脊髓后角未发现HRP标记细胞。A、B两组右侧L4脊髓节段前角运动神经元细胞存活率与正常对照侧比较差异无统计学意义（P>0.05）,但C组脊髓前角神经元数量显着减少,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。B组右侧L4脊髓节段后角神经元存活率与正常对照侧比较差异无统计学意义（P>0.05）,但A、C两组后角神经元存活率与正常对照侧比较差异有统计学意义（P<0.05）；A、B、C三组右侧L6脊神经节细胞存活率与正常对照侧比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论前根、脊神经节后的后根吻合重建,脊髓前角、后角神经元存活情况良好,再生神经纤维的传出、传入通路顺畅。脊神经节前的后根吻合修复出现脊髓后角神经元大量凋亡,脊神经节前或节后的后根损伤短时期内均不影响相应脊神经节神经元的存活。
陈为坚,李贵涛,罗狄鑫,齐勇,金勋杰,徐汪洋,张钊填[10]（2010）在《选择性脊神经后根切断术与切断并交叉吻合术治疗脑瘫患者疗效比较》文中指出目的观察并比较脑瘫患者实施选择性脊神经后根切断术（SPR）和神经根部分切断并逆行交叉吻合术（SPA）的疗效。方法广东省第二人民医院和解放军第88医院全军骨科中心自1998年1月至2008年1月共手术治疗96例脑瘫患者,其中47例患者行双侧L3～S1 SPR,49例患者行SPA。术后2周、1年测定患者下肢肌张力以及运动功能改善情况。结果术后2周行2种术式的患者肌张力、运动功能的改善差异均无统计学意义（P>0.05）;术后1年行2种术式的患者肌张力的改善差异无统计学意义（P>0.05）,但实施SPA患者运动功能改善优于SPR患者,差异有统计学意义（P<0.05）。结论实施SPA患者运动功能的改善较好,短期内治疗效果不明显,而长期随访疗效显着。
二、山羊脊神经后根逆向吻合生长的超微结构（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、山羊脊神经后根逆向吻合生长的超微结构（论文提纲范文）
（1）三法三穴对坐骨神经损伤大鼠背根神经节cAMP-PKA信号通路表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 影响周围神经损伤修复的因素 |
| 1. 年龄对修复的影响 |
| 2. 神经修复和重建的时机对修复的影响 |
| 3. 伤害类型和程度对修复的影响 |
| 4. 重建技术对修复的影响 |
| 5. 供体部位发病率对修复的影响 |
| 6. 神经类型对修复的影响 |
| 7. 轴突与靶神经正确联系对修复的影响 |
| 8. 患者自身的认知能力对修复的影响 |
| 综述二 周围神经损伤的治疗 |
| 1. 手术疗法 |
| 2. 低剂量激光疗法可以增强周围神经损伤后的再生过程 |
| 3. 针刺推拿治疗对周围神经损伤有较好效果 |
| 综述三 cAMP-PKA信号通路 |
| 1. 环腺苷酸(cyclicadenylic acid,cAMP) |
| 2. 蛋白激酶A (protein kinase A,PKA) |
| 3. cAMP应答元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB) |
| 4. cAMP-PKA信号通路与周围神经损伤的联系 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 实验一 以三法三穴为代表的推拿手法对SNI大鼠行为学的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 实验二以三法三穴为代表的推拿手法对SNI大鼠形态学的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 实验三 三法三穴对SNI大鼠cAMP、PKA、CREB蛋白表达的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 个人简历 |
（2）三法三穴对SNI大鼠施万细胞增殖和神经瘢痕形成的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 推拿治疗周围神经损伤的机理研究进展 |
| 1 推拿能够促进SNI大鼠损伤神经超微结构修复 |
| 2 推拿能够促进SNI大鼠运动功能的恢复 |
| 3 推拿能够促进SNI大鼠感觉功能的恢复 |
| 4 推拿对SNI大鼠干预的最佳刺激参数 |
| 参考文献 |
| 综述二 转化生长因子-β1对周围神经损伤后修复的研究进展 |
| 1 转化生长因子-β1蛋白概述 |
| 2 TGF-β1参与周围损伤后修复 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 实验一 三法三穴对SNI大鼠行为学及坐骨神经瘢痕和SC的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 三法三穴对SNI大鼠TGF-β1/Smad2通路蛋白的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附件 |
| 附件1 三法三穴干预后坐骨神经HE染色结果 |
| 附件2 坐骨神经S100在不同时间点的表达情况 |
| 附件3 三法三穴干预后坐骨神经Ⅰ/Ⅲ型胶原及FN的表达情况 |
| 附件4 三法三穴干预后坐骨神经TGF-β1的表达情况 |
| 附件5 三法三穴干预后坐骨神经Smad2的表达情况 |
| 附件6 三法三穴干预前后坐骨神经TGF-β1的表达变化 |
| 附件7 三法三穴干预前后坐骨神经Smad2的表达变化 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）三法三穴调节细胞自噬促进SNI大鼠运动功能恢复的机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 现代医学周围神经损伤病理及治疗方法研究进展 |
| 1. 周围神经的生理功能及解剖特点 |
| 2. 周围神经损伤程度分级及功能修复影响因素 |
| 3. 周围神经损伤后的病理变化 |
| 4. 周围神经损伤后运动功能修复时限 |
| 5. 周围神经损伤的现代医学治疗 |
| 6. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 推拿治疗原发性及继发性坐骨神经病变系统评价及meta分析 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1. 文献纳入与排除标准 |
| 1.2. 文献检索信息来源及检索方式 |
| 1.3. 文献筛选方法 |
| 1.4. 文献数据信息提取方法 |
| 1.5. 文献质量评价方法 |
| 1.6. 文献提取的数据分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1. 纳入文献的特征 |
| 2.2. 纳入文献的方法学质量 |
| 2.3. 纳入文献结局指标meta分析结果 |
| 2.4. 纳入文献的推拿治疗远期疗效分析 |
| 2.5. 纳入文献推拿安全性分析 |
| 2.6. 纳入文献异质性分析 |
| 2.7. 纳入文献倒漏斗图分析 |
| 3. 讨论 |
| 3.1. 推拿治疗原发性及继发性坐骨神经病变有效性及安全性探讨 |
| 3.2. 推拿治疗原发性及继发性坐骨神经病变选经取穴规律探讨 |
| 3.3. 推拿治疗原发性及继发性坐骨神经病变手法选择规律探讨 |
| 3.4. 推拿治疗原发性及继发性坐骨神经病变疗程分析 |
| 3.5. 本系统评价的局限性 |
| 3.6. 对今后研究的启发 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 中医外治法促进周围神经损伤后运动功能恢复的机理研究进展 |
| 1. 中医外治法可以调控神经营养因子表达 |
| 2. 中医外治法可以保护神经元骨架及髓鞘结构 |
| 3. 中医外治法可以修复受损神经元的轴浆运输机制 |
| 4. 中医外治法可以促进雪旺细胞的增殖 |
| 5. 中医外治法可以减缓失神经肌肉萎缩的程度 |
| 6. 中医外治法可以抑制神经元的凋亡 |
| 7. 中医外治法可以调控神经元细胞自噬 |
| 8. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述四 细胞自噬调节损伤后神经再生修复的研究进展 |
| 1. 细胞自噬对神经细胞的调控作用研究进展 |
| 1.1. 细胞自噬的生物学进程 |
| 1.2. 细胞自噬调控神经的再生与修复 |
| 2. 细胞自噬的实验检测方法研究进展 |
| 2.1. 透射电子显微镜观察组织中自噬体的形成与数量是重要手段 |
| 2.2. 分子生物学方法检测LC3及p62的表达是重要途径 |
| 3. 细胞自噬上游分子信号通路 |
| 3.1. mTOR-ULK1/2通路是调节细胞自噬的重要途径 |
| 3.2. PI3K-Akt通路激活可以通过促进mTOR磷酸化抑制细胞自噬 |
| 3.3. AMPK磷酸化可以通过抑制mTOR磷酸化激活细胞自噬 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 总体实验技术路线图 |
| 实验一 三法三穴对SNI大鼠脊髓腹角至外周通路超微结构的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 2.1. 行为学检测结果 |
| 2.2. 电镜观察情况 |
| 2.3. 自噬体计数结果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1. 三法三穴对SNI大鼠坐骨神经功能指数的影响 |
| 3.2. 三法三穴对SNI大鼠形态学影响研究背景 |
| 3.3. 三法三穴对SNI大鼠脊髓腹角神经元超微结构的影响 |
| 3.4. 三法三穴对SNI大鼠神经损伤点超微结构的影响 |
| 3.5. 三法三穴对SNI大鼠腓肠肌超微结构的影响 |
| 4. 小结 |
| 实验二 三法三穴对SNI大鼠坐骨神经损伤点及腓肠肌细胞自噬的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 2.1. 三法三穴对SNI大鼠腓肠肌湿重的影响 |
| 2.2. 三法三穴对SNI大鼠坐骨神经损伤点LC3、p62表达的影响 |
| 2.3. 三法三穴对SNI大鼠腓肠肌LC3、p62表达的影响 |
| 3. 讨论 |
| 3.1. 三法三穴干预对SNI大鼠腓肠肌湿重的影响 |
| 3.2. 三法三穴干预对神经损伤点及腓肠肌细胞自噬的影响 |
| 4. 小结 |
| 实验三 三法三穴对SNI大鼠运动神经元细胞自噬影响及其分子机制研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 2.1. 三法三穴对SNI大鼠后肢肌力的影响 |
| 2.2. 三法三穴对SNI大鼠脊髓腹角LC3/NeuN共表达的影响 |
| 2.3. 三法三穴对SNI大鼠脊髓腹角p62表达的影响 |
| 2.4. 三法三穴对SNI大鼠脊髓腹角p-mTOR及p-ULK表达的影响 |
| 2.5. 三法三穴对SNI大鼠脊髓腹角p-Akt表达的影响 |
| 2.6. 三法三穴对SNI大鼠脊髓腹角p-AMPK表达的影响 |
| 3. 讨论 |
| 3.1. 细胞自噬上游信号通路研究背景 |
| 3.2. 三法三穴及雷帕霉素对SNI大鼠后肢肌力的影响 |
| 3.3. 三法三穴及雷帕霉素对SNI大鼠对运动神经元细胞自噬的影响 |
| 3.4. 三法三穴及雷帕霉素对SNI大鼠mTOR-ULK通路的影响 |
| 3.5. 三法三穴及雷帕霉素对SNI大鼠mTOR上游Akt通路的影响 |
| 3.6. 三法三穴及雷帕霉素对SNI大鼠mTOR上游AMPK通路的影响 |
| 4. 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）乳腺癌神经新生的生物学特点及分子调控机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表(ABBREVIATION) |
| 绪论 |
| 第一章 建立SD大鼠乳腺癌模型 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 溶液配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 SD大鼠腹腔注射MNU |
| 1.2.2 SD大鼠腹部新生肿块取材 |
| 1.2.3 制作石蜡病理切片观察正常乳腺组织和肿块组织细胞形态 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 雌性SD大鼠胸腹部形成新生肿块 |
| 1.3.2 病理切片确证肿块为乳腺癌组织 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 研究乳腺癌组织中新生神经种类及分布特点 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.2.1 免疫组织化学实验试剂 |
| 2.1.2.2 免疫荧光组织化学实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.3.1 免疫组织化学实验仪器 |
| 2.1.3.2 免疫荧光组织化学实验仪器 |
| 2.1.4 溶液配制 |
| 2.1.4.1 免疫组织化学溶液配制 |
| 2.1.4.2 免疫荧光组织化学溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中PGP9.5 的表达 |
| 2.2.1.1 脱蜡 |
| 2.2.1.2 修复抗原 |
| 2.2.1.3 血清封闭 |
| 2.2.1.4 孵育一抗 |
| 2.2.1.5 孵育二抗 |
| 2.2.1.6 加入显色剂及复染 |
| 2.2.1.7 脱水及封片及光学显微镜下观察 |
| 2.2.2 用免疫荧光组织化学方法检测乳腺癌组织中PGP9.5、CGRP、VMAT2的表达及分布区域 |
| 2.2.2.1 对成功构建肿瘤模型的SD大鼠进行血液置换及4%PFA灌注固定 |
| 2.2.2.2 灌流后SD大鼠肿块取材固定脱水 |
| 2.2.2.3 脱水后肿块制备冰冻切片 |
| 2.2.2.4 免疫荧光组织化学检测 |
| 2.2.2.5 荧光显微镜下观察组织切片 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 免疫组织化学实验结果 |
| 2.3.2 免疫荧光组织化学实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 探究乳腺癌组织中神经生长发展变化 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 通过免疫印迹方法检测PGP9.5在不同生长阶段乳腺癌组织中的表达 |
| 3.2.1.1 提取新鲜肿块组织裂解液 |
| 3.2.1.2 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定组织蛋白浓度 |
| 3.2.1.3 蛋白电泳及转膜及显影 |
| 3.2.2 统计学方法 |
| 3.3 免疫印迹实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 探索乳腺癌组织中新生神经的来源 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.1.4 溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 SD大鼠乳腺癌组织内注射神经元示踪剂DiI |
| 4.2.2 SD大鼠肿块取材及冰冻制片 |
| 4.2.3 急性分离SD大鼠DRG及冰冻制片 |
| 4.2.4 免疫荧光组织化学检测SD大鼠乳腺癌组织及DRG内DiI的分布情况 |
| 4.3 免疫荧光组织化学实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 VEGF/NGF对乳腺癌组织中PGP9.5及ERK表达的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 实验仪器 |
| 5.1.4 溶液配制 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 建立SD大鼠乳腺癌模型 |
| 5.2.2 SD大鼠分组给药及取材 |
| 5.2.3 免疫印迹方法检测不同组别乳腺癌组织中PGP9.5和ERK蛋白表达变化 |
| 5.2.4 统计学方法 |
| 5.3 免疫印迹实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 全文讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文目录 |
（5）骨髓神经组织定向干细胞源性感觉神经元移植修复周围神经感觉缺损（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 骨髓 NTCSCs 源性感觉神经元的分离、培养、诱导分化及鉴定 |
| 一、 前言 |
| 二、 材料和方法 |
| （一） 试剂和设备 |
| （二） NTCSCs 的分离、培养、扩增及鉴定 |
| （三） NTCSCs 源性感觉神经元的诱导分化、鉴定 |
| （四） NTCSCs 源性感觉神经元的标记 |
| 三、 结果 |
| （一） NTCSCs 的分离、培养、扩增 |
| （二） NTCSCs 的鉴定 |
| （三） NTCSCs 源性感觉神经元的诱导分化、鉴定 |
| （四） NTCSCs 源性感觉神经元的标记 |
| 四、 讨论 |
| （一） NTCSCs 的分离培养与鉴定 |
| （二） NTCSCs 源性感觉神经元的诱导分化与鉴定 |
| （三） NTCSCs 源性感觉神经元的 CM-Dil 标记 |
| 第二部分 周围神经感觉缺损动物模型的建立 |
| 一、 前言 |
| 二、 材料和方法 |
| （一） 试剂和设备 |
| （二） 感觉缺损动物模型的制作与鉴定 |
| 三、 结果 |
| （一） 模型动物行为学评价 |
| （二） 模型动物的感觉功能 |
| （三） 模型动物坐骨神经的电生理学评价 |
| （四） 背根神经节、坐骨神经的形态学观察与分析 |
| 四、 讨论 |
| 第三部分 骨髓 NTCSCs 源性感觉神经元移植修复大鼠周围神经感觉缺损的作用与机制 |
| 一、 前言 |
| 二、 材料和方法 |
| （一） 试剂和设备 |
| （二） 实验动物的分组及标记细胞的移植与检测 |
| （三） 动物行为学评价 |
| （四） 感觉功能测试 |
| （五） 坐骨神经的电生理学检测 |
| （六） 背根神经节、坐骨神经的再生结构重建的评价 |
| （七） 统计学分析 |
| 三、 结果 |
| （一） 动物行为学 |
| （二） 动物感觉功能评价 |
| （三） 坐骨神经的电生理学评价 |
| （四） 背根神经节、坐骨神经的再生结构重建的评价 |
| 四、 讨论 |
| （一） 神经再生的形态学观察 |
| （二） 神经再生的电生理学评价 |
| （三） 神经再生的行为学及感觉功能评价 |
| 全文小结 |
| 本课题的创新性 |
| 本课题进一步研究工作计划 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文 |
| 致谢 |
（6）神经营养素-3（NT-3）对大鼠坐骨神经离断后腰脊神经节损伤保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 背根神经节及其周围神经损伤机制及神经营养因子的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及在学期间发表论文 |
（7）鞘内间断注射不同浓度罗哌卡因在长时间对大鼠脊髓神经毒性影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 引言 |
| 第1节 鞘内注射0.5%、1%罗哌卡因和鞘内注射1%罗哌卡因+药物NT-3后28天对大鼠的行为学影响 |
| 1.1 动物模型的制作 |
| 1.2 实验动物分组 |
| 1.3 实验动物技术路线图 |
| 1.4 行为学观察 |
| 1.5 实验结果 |
| 1.6 讨论 |
| 附图 |
| 第二章 鞘内注射0.5%、1%罗哌卡因和鞘内注射1%罗哌卡因+NT-3后28天对大鼠脊髓神经根超微结的影响及机制研究 |
| 引言 |
| 2.1 研究对象和材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 标本收集 |
| 2.4 数据处理和统计学分析 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.6 讨论 |
| 第三章 神经营养素-3对罗哌卡因诱发PC12细胞毒性的影响 |
| 前言 |
| 3.1 主要试剂与仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间主要研究成果 |
| 致谢 |
（8）感觉神经缺失对运动神经再生的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 展望 |
| 结论 |
| 临床意义 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）脊神经后根吻合轴突再生重建感觉传入通路的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 实验一 脊神经后根部分切断交叉吻合轴突再生的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 脊神经后根横断吻合修复方法的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 脊神经前后根切断吻合轴突再生后的神经纤维追踪及脊髓前/后角和脊神经节神经元的变化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究总结 |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 硕士期间发表文章 |
| 致谢 |
四、山羊脊神经后根逆向吻合生长的超微结构（论文参考文献）
- [1]三法三穴对坐骨神经损伤大鼠背根神经节cAMP-PKA信号通路表达的影响[D]. 罗宇婷. 北京中医药大学, 2020(04)
- [2]三法三穴对SNI大鼠施万细胞增殖和神经瘢痕形成的影响[D]. 邵帅. 北京中医药大学, 2020(04)
- [3]三法三穴调节细胞自噬促进SNI大鼠运动功能恢复的机理研究[D]. 杨超. 北京中医药大学, 2018(08)
- [4]乳腺癌神经新生的生物学特点及分子调控机制[D]. 梁茜子. 上海交通大学, 2016
- [5]骨髓神经组织定向干细胞源性感觉神经元移植修复周围神经感觉缺损[D]. 于振海. 第二军医大学, 2014(04)
- [6]神经营养素-3（NT-3）对大鼠坐骨神经离断后腰脊神经节损伤保护作用的实验研究[D]. 李登. 郑州大学, 2014(02)
- [7]鞘内间断注射不同浓度罗哌卡因在长时间对大鼠脊髓神经毒性影响及机制研究[D]. 孙志华. 中南大学, 2013(02)
- [8]感觉神经缺失对运动神经再生的影响[D]. 赵忠全. 泰山医学院, 2012(07)
- [9]脊神经后根吻合轴突再生重建感觉传入通路的实验研究[D]. 唐晓军. 南华大学, 2010(05)
- [10]选择性脊神经后根切断术与切断并交叉吻合术治疗脑瘫患者疗效比较[J]. 陈为坚,李贵涛,罗狄鑫,齐勇,金勋杰,徐汪洋,张钊填. 中华神经医学杂志, 2010(03)