Ras癌基因和nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响

一、Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响（论文文献综述）

费丹^[1]（2014）在《特异性抗体介导的蜂毒肽对骨肉瘤的抑制作用》文中指出表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）对于多种细胞具有促进增殖和营养作用。EGFR在多种肿瘤细胞内高表达，说明其与这些肿瘤的发生、发展等变化有关。另外，大量研究表明EGFR信号系统与肿瘤的发生和肿瘤耐药性关系密切，并且EGFR的异常变化也是骨肉瘤的显着特点。蜂毒（Beevenom, BV）做为免疫相关疾病治疗制剂已广泛应用，特别是在肿瘤治疗领域其作用十分显着。研究发现，肾癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌以及白血病细胞均可成为BV主要成分蜂毒肽（Melittin）的靶标。Melittin激活PLA2从而发挥细胞毒作用已被公认为BV抗肿瘤的主要作用机制。Melittin通过激活Caspase酶和基质金属蛋白酶，诱导多种肿瘤细胞发生凋亡，从而实现其抗肿瘤作用。现已证明，将Melittin与激素受体、特异性抗体等多种具有导向作用的物质融合表达，可以有效治疗多种肿瘤。本研究将Melittin通过柔性肽与抗EGFRscFv连接，并由大肠杆菌进行表达，制备了融合蛋白antiEGFR/MEL。对表达条件进行了优化，并进行了复性和初步纯化。利用表达的融合蛋白，针对人骨肉瘤细胞进行了体内、外抑瘤实验研究。研究结果表明，含有EGFR单链抗体的重组蛋白antiEGFR/MEL可与OS732细胞有效结合，并定位于OS732细胞膜表面。antiEGFR/MEL能够有效抑制OS732细胞的生长，但对正常细胞L02无明显作用。另外，antiEGFR/MEL抑制OS732细胞生长的现象，呈现明显的时间效应和剂量效应趋势。本研究还利用BALB/c小鼠结合小鼠骨肉瘤细胞S180，建立了实体肉瘤细胞模型，并开展了体内抑瘤实验研究。研究结果表明，antiEGFR/MEL可以抑制S180实体肿瘤生长、延长动物模型生存期、延长动物模型肿瘤倍增时间和肿瘤生长延迟时间。以上结果说明，antiEGFR/MEL具有应用于骨肉瘤生物治疗研究的潜质。

雍彦礼,王金环,孙凤,孙伟正^[2]（2013）在《补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞PI-3K和PLD表达的影响》文中指出目的探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血（CAA）患者骨髓单个核细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI-3K）和磷脂酶D（PLD）表达的影响及其作用机制。方法采用蛋白质印迹（Western-blot）方法检测CAA患者和正常人骨髓单个核细胞内PI-3K和PLD表达水平。结果疗前CAA患者骨髓单个核细胞的PI-3K和PLD表达水平均低于正常组（P均<0.05）,疗后PI-3K和PLD表达水平有所上升,与疗前相比具均有显着性差异（P均<0.05）。结论①CAA患者PI-3K和PLD的低表达异常可能影响了骨髓的造血功能;②补髓生血颗粒通过调节PI-3K和PLD介导的异常信号转导通路,抑制骨髓造血干/祖细胞的过度凋亡,进而促进造血干/祖细胞的增殖和分化,改善造血微环境,以恢复骨髓的造血功能。

雍彦礼,孙伟正^[3]（2010）在《补髓生血颗粒对慢性再障患者骨髓单个核细胞磷脂酶D表达的影响》文中认为目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再障患者（CAA）骨髓单个核细胞中磷脂酶D（PLD）表达的影响及其作用机制。方法:采用蛋白质印迹（Western-blot）方法检测CAA患者和正常人骨髓单个核细胞内PLD表达水平。结果:疗前CAA患者骨髓单个核细胞的PLD表达水平低于正常组（均P<0.05）,疗后PLD表达水平有所上升,与疗前相比具有显着性差异（P<0.05）。结论:CAA患者骨髓单个核细胞内PLD呈低水平表达,可能参与了CAA的发病机制过程;补髓生血颗粒通过调节PLD介导的异常信号转导通路,改善造血微环境,抑制骨髓造血干/祖细胞的过度凋亡,进而调控骨髓造血,促进造血干/祖细胞的增殖和分化,以达到治疗CAA的目的 。

雍彦礼^[4]（2009）在《补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血及对信号转导相关酶PLD的影响》文中认为目的:观察补肾生血中药补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血（chronic aplastic anemia,CAA）的临床疗效及对造血粘附信号转导通路中磷脂酶D（phospholipase D,PLD）的影响。以探讨CAA发病的相关机制及补肾生血中药干预CAA的作用机理,为补肾生血法治疗CAA提供理论依据。方法:将60例CAA患者按随机数字表法分成两组,其中补髓生血颗粒（试验组）30例,再造生血片（对照组）30例进行疗效比较。采用蛋白印迹（Western blot）法测定CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞中PLD的表达水平。结果:1.补髓生血颗粒治疗CAA的临床疗效优于对照组（P＜0.05）,且肾阳虚型疗效优于肾阴虚型（P＜0.05） 2.CAA患者骨髓单个核细胞中PLD呈低表达水平,补髓生血颗粒可以提升其表达水平。结论:1.补髓生血颗粒治疗CAA的临床疗效优于再造生血片,且肾阳虚型疗效优于肾阴虚型。2.CAA患者PLD低表达异常可能影响了骨髓的造血功能。3.补髓生血颗粒通过调节PLD介导的异常信号转导通路,改善造血微环境,抑制骨髓造血干/祖细胞的过度凋亡,进而调控骨髓造血,促进造血干/祖细胞的增殖和分化,以达到治疗CAA的目的。

朱晓峰^[5]（2009）在《淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响》文中研究表明目的:淫羊藿素为补肾强骨中药淫羊藿的主要成分淫羊藿苷在动物体内代谢后脱去糖基的活性成分,可能是淫羊藿口服吸收后主要发挥药理活性的成分,对其研究更符合淫羊藿临床多口服给药的用药方式。目前其对成骨细胞作用机理的研究尚未见报道。本研究观察淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株增殖、分化的影响,以及观察它对与分化相关的雌激素受体信号通路、p38MAPK信号通路、BMPs/smads信号通路的影响,明确淫羊藿素作用于成骨细胞而影响骨代谢的具体靶点,对于评价淫羊藿治疗骨质疏松等骨代谢疾病的有效性提供细胞分子学依据。方法:1.MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株的培养及活性观察。2.运用MTT法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14的细胞毒性,确定实验用的药物剂量。3.应用WST-8细胞活力方法、BrdU流式细胞仪方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞增殖的影响。4.应用pNPP方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性的影响,运用双抗夹心ELISA方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,运用茜素红染色计数矿化结节的方法评价淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞矿化的影响。5.运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价ER受体信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。6.运用p38MAPK受体阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价p38MAPK信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。7.实时荧光PCR检测淫羊藿素对BMP-2、4、7mRNA的表达。运用BMPs受体阻断剂Noggin阻断BMPs/Smads信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞表达碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价BMPs/Smads信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。8.Western-blot检测ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,淫羊藿素对p38和Smad1/5/8的蛋白磷酸化情况,评价它们和ER受体信号的关系。结果:1.MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株,在具有分化条件的培养基中可以向成骨细胞分化。2.淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞毒性的检测发现,IC50浓度为100.154mol/L,10-5.93mol/L浓度以下则对细胞基本上无抑制作用,因此实验药物浓度选择10-8、10-7、10-6mol/L 0.01μM、0.1μM、1μM)为梯度浓度。3.WST-8和BrdU流式细胞仪检测发现,淫羊藿素0.01μM、0.1μM、1μM浓度组的MC3T3-ElSubclone14的细胞活力和细胞增殖指数与对照组比较,在统计学上无显着差异（P＞0.05）。4.在作用48或72小时后,淫羊藿素0.01μM、0.1μM、1μM浓度组MC3T3-ElSubclone14细胞的碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原和骨钙素与对照组比较,在统计学上有显着差异（P＜0.01或0.05）;淫羊藿素作用10天或14天后,各组的矿化结节计数和对照组比较,在统计学上有显着差异（P＜0.01）。5.运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）;运用p38MAPK受体阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）;运用BMPs受体阻断剂Noggin阻断BMPs/Smads信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）。6.淫羊藿素可以提高BMP-2mRNA的表达,并随着浓度的增高而增高,和对照组比较,在统计学上有明显差异（P＜0.01或0.05）,1μM浓度的淫羊藿素可以提高BMP-4mRNA的表达（P＜0.05）,但对BMP-7mRNA无作用（P＞0.01）。7.Western-blot检测发现运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,p38和Smad1/5/8的磷酸化明显减弱。结论:1.一定浓度（0.01μM、0.1μM、1μM）的ICT对MC3T3-ElSubclone14细胞增殖无明显促进作用。2.一定浓度（0.01μM、0.1μM、1μM）的ICT可以促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化,促进其矿化。3.ICT促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化和ER受体信号通路、p38MAPK信号通路、BMPs/Smads信号通路密切相关。4.在ICT促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的过程中,ER受体信号通路在p38MAPK信号通路和BMPs/Smads信号通路的上游。5.实验结果提示ICT在MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中所显示的主要作用可能和它的类雌激素样活性有关。

陈永安^[6]（2009）在《含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒转染人肝癌细胞HepG2后的作用机制研究》文中研究表明背景:肝癌是世界第五大癌症,全球每年50万～100万新发病例和近100万死亡病例,至今还未有特别有效的治疗方法,寻找更好的治疗方法成为肝癌治疗面临的重大问题,利用基因工程手段进行肝癌的基因治疗已成为目前人们普遍关注和研究的热点。蜂毒素体外抗肿瘤作用明显,而且作用发生迅速,但因具有溶血的副作用而限制了临床应用。由于肝癌细胞及肝细胞对腺病毒十分敏感,对AFP阳性肝癌,将蜂毒素基因置于AFP调控元件之下,以腺病毒为载体转染可以使肝癌细胞被选择性杀伤,从而避免了蜂毒素的直接溶血作用。基于以上想法,我科以往的研究已经成功构建了含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒（Ad-rAFP-Mel）及不含蜂毒素基因的重组腺病毒（Ad-rAFP）,体内外实验已证实Ad-rAFP-Mel对AFP阳性肝癌细胞确有非常明显的抑制或杀伤作用。我们的研究主要是在以往的工作基础上,明确Ad-rAFP-Mel转染HepG2细胞的作用模式,并探讨其相关分子机制,为进一步推向临床提供实验依据。目的:1.体外观察含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒作用于肝癌细胞株HepG2后细胞的生长状况和形态学变化。2.对含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒引起肝癌细胞死亡的相关机制进行探讨。3.为临床应用有毒中药有效成份以基因重组载体转染的方式进行中药生物治疗HCC提供科学的实验依据。方法:1.通过倒置显微镜下观察细胞生长情况、HE染色、Hoechst33258染色、透射电镜等手段观察含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒作用于肝癌细胞后细胞死亡情况、细胞器的结构变化等形态学变化。2.采用AnnexinV/PI凋亡试剂盒通过FCM分析检测含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒诱导细胞凋亡的情况。3.采用罗丹明123、PI双染色法,FCM检测线粒体膜电位。Fura-2染色,FCM检测细胞内Ca2+变化,探讨Ad-rAFP-Mel作用于肝癌细胞后对细胞生物膜的影响。4.基于对细胞凋亡诱导的确定性判断,采用Western blot方法检测含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒作用后细胞凋亡相关蛋白caspase家族的改变情况,观察对细胞凋亡相关蛋白的影响。结果:1.形态学观察结果显示随着病毒感染指数的增高和时间的延长,活细胞数量减少,HE染色显示坏死与凋亡并存,Hoechst33258染色显示确有凋亡存在,透射电镜证实rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒作用于肝癌细胞后是凋亡和坏死兼而有之。2.含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒感染复数在MOI=25以上能够显着诱导HepG2细胞的凋亡,凋亡率随时间及感染复数的增加而逐渐增加,呈时间剂量依赖性（8 h、12 h、24 h、72 h）。3.罗丹明123、PI双染色法, FCM检测细胞线粒体膜电位显示12 h开始,随着病毒感染指数的增高和时间的延长,线粒体膜电位逐渐降低,各Ad-rAFP-Mel转染组与空白对照组及Ad-rAFP转染组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。4. Fura-2染色FCM检测细胞内Ca2+浓度显示8 h开始,随着病毒感染指数的增高和时间的延长,细胞内钙离子的荧光强度逐渐增强,各Ad-rAFP-Mel转染组与空白对照组及Ad-rAFP转染组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。5.Western blot检测显示MOI=400浓度含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒作用8h细胞凋亡相关蛋白caspase9、3开始活化,24h内逐渐明显,72 h仍有活化, caspase12未见明显活化。结论: 1.含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒能够抑制HepG2细胞的生长,细胞死亡呈现坏死与凋亡兼有的特征。2.含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒能够使HepG2细胞线粒体膜电位下降,细胞内Ca2+浓度升高,其作用可能与影响细胞生物膜结构有关。3.含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒能够上调细胞凋亡相关蛋白caspase家族水平,诱导HepG2细胞的凋亡;含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒诱导的细胞凋亡与细胞凋亡相关蛋白caspase家族信号通路的活化增加有关。

王武康,刘飞,郭鹏,王秋雁^[7]（2004）在《Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响》文中研究表明目的 为研究ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对细胞膜磷脂酶D （PLD）活性的影响。方法 用ras癌基因和nm2 3抑癌基因构建的重组质粒 ,分别转染人肝癌细胞株 772 1,建立了高表达ras癌基因和nm2 3抑癌基因的H ras/772 1和nm2 3 H/772 1细胞株 ,测定 772 1、mock细胞 （空载体转染的 772 1细胞 ）、H ras/772 1和nm2 3 H/772 1四种细胞中 ,细胞膜PLD酶活性和PLD酶蛋白表达量。结果 在H ras/772 1细胞中 ,PLD酶活性比 772 1、mock细胞中PLD酶活性显着升高。nm2 3 H/772 1细胞中 ,酶活性却显着降低。但在两种细胞中 ,PLD酶蛋白的量未见显着变化。结论 ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对PLD酶活性的影响 ,可能主要是通过影响PLD酶活性的调节因素来实现的。

王武康,刘飞,郭鹏,王秋雁^[8]（2002）在《Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响》文中研究说明目的 :研究ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对细胞膜磷脂酶D（PLD）活性的影响。方法 :用ras癌基因和nm2 3抑癌基因构建的重组质粒 ,分别转染人肝癌细胞株 772 1,建立了高表达ras癌基因和nm2 3抑癌基因的H ras 772 1和nm2 3 H 772 1细胞株 ,测定 772 1、mock细胞 （空载体转染的 772 1细胞 ）、H ras 772 1和nm2 3 H 772 14种细胞中 ,细胞膜PLD酶活性和PLD酶蛋白表达量。结果 :在H ras 772 1细胞中 ,PLD酶活性比 772 1、mock细胞中PLD酶活性显着升高。nm2 3 H 772 1细胞中 ,酶活性却显着降低。但在二种细胞中 ,PLD酶蛋白的量未见显着变化。结论 :ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对PLD酶活性的影响 ,可能主要是通过影响PLD酶活性的调节因素来实现的。

二、Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响（论文提纲范文）

（1）特异性抗体介导的蜂毒肽对骨肉瘤的抑制作用（论文提纲范文）

（2）补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞PI-3K和PLD表达的影响（论文提纲范文）

（4）补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血及对信号转导相关酶PLD的影响（论文提纲范文）

（5）淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响（论文提纲范文）

（6）含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒转染人肝癌细胞HepG2后的作用机制研究（论文提纲范文）

（7）Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响（论文提纲范文）

（8）Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响（论文提纲范文）

四、Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响（论文参考文献）

• [1]特异性抗体介导的蜂毒肽对骨肉瘤的抑制作用[D]. 费丹. 吉林大学, 2014(09)
• [2]补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞PI-3K和PLD表达的影响[J]. 雍彦礼,王金环,孙凤,孙伟正. 时珍国医国药, 2013(09)
• [3]补髓生血颗粒对慢性再障患者骨髓单个核细胞磷脂酶D表达的影响[A]. 雍彦礼,孙伟正. 全国中西医结合血液学学术会议论文汇编, 2010
• [4]补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血及对信号转导相关酶PLD的影响[D]. 雍彦礼. 黑龙江中医药大学, 2009(11)
• [5]淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响[D]. 朱晓峰. 暨南大学, 2009(09)
• [6]含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒转染人肝癌细胞HepG2后的作用机制研究[D]. 陈永安. 第二军医大学, 2009(10)
• [7]Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响[J]. 王武康,刘飞,郭鹏,王秋雁. 肿瘤, 2004(01)
• [8]Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响[J]. 王武康,刘飞,郭鹏,王秋雁. 江苏大学学报(医学版), 2002(06)

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