一、可溶性HLA-G1上调活化的同种反应性T细胞表达FasL促进其凋亡（论文文献综述）
王方迪,侯瑞霞,李俊琴,李新华[1]（2021）在《间充质干细胞对T细胞免疫调节机制的研究进展》文中研究表明间充质干细胞（MSCs）是一种具有自我更新及多向分化潜能的成体干细胞,具有免疫调节、调控细胞生长和修复损伤等功能。T淋巴细胞是免疫细胞中功能最复杂的一类细胞,其主要功能是介导细胞免疫。MSCs的免疫抑制作用主要体现在对T淋巴细胞的抑制作用上。目前在MSCs对T淋巴细胞的免疫调节的机制方面虽然有一定的认识,但仍不明确。本文就MSCs对T淋巴细胞的免疫调节机制的研究进展进行综述。
毛鑫[2]（2021）在《人羊膜间充质干细胞抑制同种异体小鼠心脏移植免疫排斥损伤作用microRNA表达初步探究》文中提出目的:本研究旨在探讨人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs）有减轻小鼠心脏移植免疫排斥损伤作用的基础上,采用RNA-seq技术对其进行micro RNA转录组研究。初步挖掘hAMSCs在减轻排斥损伤方面的潜在机制。为hAMSCs的应用提供理论基础,也为其在减轻心脏移植免疫损伤方面的应用提供新的认识。方法:1.运用显微外科技术进行模型构建。分为同系移植组（A组）,异系移植组（B组）,异系移植干细胞干预组（C组）,干细胞（2.5×105个细胞/次/0.4毫升）于术后第1天、第4天经尾静脉注入。2.观察小鼠存活时间及状态,通过取B、C组供体心脏做HE染色观察心肌病理改变。3.评估模型成功后,于术后第7天取小鼠供心组织,收集RNA样本测序。通过RNA-seq、生物信息技术分析得到差异表达显着的micro RNA。4.应用mi Randa行靶基因预测后,用R的cluster Profiler进行富集分析。5.通过阅读相关文献,测序数据富集结果分析以及在GEO数据库相关测序分析结果中通过韦恩（venn）取得交集的方式,筛选出差异显着的micro RNA进行q RT-PCR验证。结果:1.造模及干预后观察小鼠状态良好,干细胞干预组小鼠存活时间较单纯异系移植组延长（P<0.05）;2.通过HE染色发现单纯异系移植组心肌组织中单核细胞、中性粒细胞侵入肌细胞的周界,肌细胞被浸润细胞包围。心肌纤维扭曲断裂。心肌纤维形态不规则,肌纤维水肿,且连续性消失。干细胞干预组心肌间单核细胞、中性粒细胞浸润明显减少,亦可见心肌纤维损伤断裂和结构变形,但程度较轻。3.通过测序分析得出AB组间、AC组间、BC组间差异性表达micro RNA分别为:1324、1323和1340个,其中显着差异的分别有:213、211、82个。4.通过靶基因预测发现的重要micro RNA包括:mi R-1247-5P、mi R-106b-3p、mi R-127-5p。GO富集分析结果显示,靶基因主要富集包括:蛋白结合、激酶活性、转录调控、磷酸化等方面。KEGG通路富集在多个通路中,主要涉及:Rap1信号通路、MAPK信号通路、Wnt信号通路、c AMP信号通路等。5.筛选出差异表达显着的micro RNA为:（1）.同、异系移植组间（AB组间）差异表达micro RNA:mi R-199a-3p;mi R-34b-3p;mi R-434-3p;（2）.三组间差异表达micro RNA:mi R-451a;mi R-494-3p;mi R-136-3p。通过q RT-PCR验证发现这些micro RNA与转录组测序得到的结果趋势基本相同。结论:1.初步表明了hAMSCs具有减轻同种异体小鼠心脏移植免疫排斥损伤作用。2.通过RNA-seq、生物信息技术分析及q RT-PCR验证,初步确认mi R-451a、mi R-494-3p、mi R-136-3p的表达可能与hAMSCs减轻同种异体小鼠心脏移植免疫排斥损伤的作用存在密切关系。
王方迪[3]（2021）在《银屑病患者血清通过诱导miR-155抑制间充质干细胞的免疫调节功能》文中进行了进一步梳理研究背景:银屑病是一种常见的炎症性皮肤病,其慢性病程及反复发作严重影响了患者的身心健康和生活质量。作为自身免疫性疾病,该病的发病原理尚不清楚,目前被认为是一种以T细胞为主介导,多种免疫细胞共同参与的疾病。间充质干细胞（MSCs）通过发挥免疫调节功能参与多种自身免疫性疾病,已广泛用于细胞治疗,研究发现MSCs可以通过分泌IL-10、PGE2、IDO等抗炎因子影响免疫细胞的功能。此外,MSCs还可以通过诱导血管内皮生长因子（VEGF）等的表达促进血管生成,因此我们考虑MSCs可能参与银屑病的发病过程。研究发现miR-155能通过调节下游靶基因的表达参与细胞发育、自身免疫性疾病及肿瘤发生发展等病理生理过程,且近期有研究证实用炎症因子刺激MSCs后可显着诱导miR-155的产生,同时刺激后的MSCs对T细胞增殖的抑制作用降低,且发现这一过程由TAB2（TAK1-binding protein 2）诱导。同样前期本实验室也发现银屑病患者的皮肤间充质干细胞（DMSCs）的miR-155表达上调,其下游靶基因TAB2下调,且DMSCs表达的多种免疫调节相关因子、趋化因子及炎症因子异常,进而对T细胞增殖的抑制作用减弱。基于以上研究,我们推测:银屑病患者皮损处异常表达的炎症因子通过诱导DMSCs的miR-155高表达靶向抑制TAB2或其他靶基因的表达,降低DMSCs的免疫调节因子的表达水平,从而抑制DMSCs的免疫抑制功能,即对PBMCs增殖及炎症因子分泌的抑制作用减弱。为证实这一推测,我们拟用银屑病患者血清及PBMCs刺激正常DMSCs,检测刺激后DMSCs的miR-155及其靶基因（TAB2、SOCS-1、SMAD2）的表达水平,免疫调节相关因子IL-10、PGE2、TLR4的表达水平,及刺激后DMSCs对PBMCs增殖及细胞因子表达的抑制作用。方法:1.分离培养正常的DMSCs,待细胞传至三代并融合至70%时弃原培养基,将含50%人血清（银屑病患者及正常人）的DMEM/F12培养基加入细胞中,培养24小时收获细胞;将外周血分离出的PBMCs（银屑病患者及正常人）与70%融合的三代DMSCs直接共培养24小时,以10 ng/ml TNF-α+10 ng/ml IL-1β处理的正常DMSCs作为阳性对照,未处理的正常DMSCs为阴性对照;2.各组DMSCs的miR-155表达用qRT-PCR检测,且miR-155的靶基因TAB2、SOCS-1、SMAD2及免疫调节相关因子IL-10、PGE2、TLR4的表达水平用qRT-PCR及Western Blot检测;3.用Transwell小室共培养PBMCs及处理后的DMSCs,DMSCs以2×105个细胞/孔种于上室,50μg/m L植物血凝素活化的PBMCs以1×106个细胞/孔种于下室,本部分实验分为5组:a.正常DMSCs组:n DMSCs（未处理的DMSCs）+PBMCs;b.正常血清组:HS-DMSCs（正常血清处理后的DMSCs）+PBMCs;c.银屑病血清组:PS-DMSCs（银屑病血清处理后的DMSCs）+PBMCs;d.炎症因子组:Cy-DMSCs（TNF-α+IL-1β）+PBMCs;e.对照组:PBMCs单独培养。四组均用0.4μm的12孔Transwell板共培养,37℃培养72小时;4.共培养后各组PBMCs细胞的增殖用CCK-8法检测,PBMCs表达的炎症因子IL-8,IL-17A,IL-23用qRT-PCR检测。结果:1.显微镜下观察,DMSCs基本为梭形、贴壁的成纤维细胞形态且互相连接,培养14天左右,细胞约90%融合,梭形排列,呈漩涡状。血清及PBMCs加入细胞后,细胞生长速度加快,形态未发生明显变化,银屑病组与正常组无差别。2.DMSCs经血清及PBMCs处理后,qRT-PCR及Western Blot结果显示,PS-DMSCs与HS-DMSCs相比,miR-155的表达水平显着升高（27.19±2.40 vs.3.51±1.19,P<0.001）,TAB2的mRNA（0.28±0.04 vs.0.72±0.20,P<0.01）及蛋白（P<0.001）水平均表达降低,PGE2、TLR4和IL-10的mRNA表达水平及蛋白水平也显着下调（P<0.05）,Cy-DMSCs与PS-DMSCs的结果一致。而银屑病PBMCs与正常PBMCs处理的DMSCs的基因表达均无显着差别（P>0.05）。3.不同处理后的DMSCs与PBMCs用Transwell小室共培养72小时后,CCK-8结果显示HS-DMSCs与n DMSCs均可明显抑制PBMCs的增殖（与单独培养的PBMCs相比P<0.001）。相反,PS-DMSCs及Cy-DMSCs对PBMCs增殖的抑制能力减弱（与正常血清组相比P<0.001）,并且qRT-PCR结果显示这两组（PS-DMSCs及Cy-DMSCs）的PBMCs分泌的炎症因子IL-8,IL-17A,IL-23表达上调（与HS-DMSCs相比P<0.05）。结论:1.银屑病患者血清刺激DMSCs后通过诱导miR-155的高表达,抑制了免疫调节因子PGE2、IL-10、TLR4的表达;2.miR-155通过抑制靶基因TAB2的表达调节DMSCs的基因水平;3.银屑病患者血清刺激后的DMSCs对PBMCs增殖及炎症因子表达的抑制作用降低;4.炎症因子TNF-α+IL-1β对DMSCs的作用与银屑病患者血清一致。
宫文静[4]（2021）在《ILT4调控非小细胞肺癌血管生成的作用和机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景在所有恶性肿瘤中,肺癌的发病率和死亡率均位居首位。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是肺癌最主要的类型,占全部肺癌的80-85%。NSCLC起病隐匿,多数患者就诊时已处于疾病中晚期。近年来随着手术、化疗、放疗、靶向治疗及免疫治疗等多种治疗手段的发展,NSCLC的预后有了很大改善,但其整体5年生存率仍仅有20%,而复发和转移是NSCLC治疗失败的最主要因素。众所周知,肿瘤的生长和转移依赖新生血管的形成来提供能量及转移路径,因此抗血管生成治疗成为NSCLC整体治疗重要组成部分。目前临床中抗肿瘤血管生成的治疗策略主要包括:针对VEGF/VEGFR通路的大分子单克隆抗体、多靶点小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）类药物和血管内皮抑制素等。但由于肿瘤微环境中促血管生成旁路信号的激活、抗体结合力降低等原因,导致现有的抗血管生成药物的临床获益普遍较为短暂;此外,多靶点抗血管生成药物因其作用机制复杂,毒性反应较重,也在某种程度上限制了其临床应用。因此,探索NSCLC血管生成的分子机制,寻找新的有效治疗靶点,开发更具特异性的高效低毒的抗血管生成药物,是克服肿瘤血行转移、提高临床获益的重要研究方向,对提高NSCLC的治疗水平、改善患者预后具有重要意义。免疫球蛋白样转录子（immunoglobulin-like transcripts,ILTs）,也被称为白细胞免疫球蛋白样受体（leukocyte immunoglobulin-like receptors,LIR or LILR）,或单核细胞/巨噬细胞免疫球蛋白样受体（monocyte/macrophage immunoglobulin-like receptors,MIR）。根据胞内基序的作用不同分别将ILTs（LILRs）分为激活性受体LILRA（白细胞免疫球蛋白样受体亚型A,leucocyte immunoglobulin-like receptor subfamily A）和抑制性受体 LILRB（白细胞免疫球蛋白样受体亚型 B,leucocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B）。激活性受体LILRA包括LILRA1-LILRA6这6种受体;而抑制性受体LILRB包括LILRB1-5这5种受体。ILT4又被称为LILRB2、LIR2,单核细胞/巨噬细胞免疫球蛋白样受体10（monocyte/macrophage immunoglobulin-like 10,MIR-10）或 CD85d,是经典的免疫抑制性受体。作为I型跨膜蛋白,ILT4与不同的配体结合,通过胞内3个酪氨酸激酶抑制基序（immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs,ITIMs）传递抑制信号至胞内。ILT4起初发现主要表达于髓系细胞包括树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和血小板。最近研究显示它也表达于活化的CD4+T细胞中。ILT4通过抑制树突状细胞的成熟和抗原提呈、诱导巨噬细胞和髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）M2 样极化、抑制中性粒细胞的吞噬功能、促进CD4+Th2分化等方式,诱导免疫抑制的微环境。除免疫细胞外,近年来研究发现ILT4在乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、原发性肝癌和非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤细胞也高表达,通过多种机制促进肿瘤细胞的增殖和侵袭,诱导M2样肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）募集及T细胞老化和免疫浸润。课题组前期通过基因芯片发现ILT4可以上调血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGF-A）和基质金属蛋白酶 9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）这两种促血管生成因子的表达。VEGF-A是血管内皮细胞强有力的促细胞分裂剂,是调控血管生成的经典因子;MMP9也被证实能够促进血管基底膜的分解,诱导内皮细胞迁移,促进新生血管形成。因此我们推测ILT4可能与调控肿瘤新生血管密切相关。由于目前国内外针对ILT4在肿瘤新生血管形成方面的研究尚属空白,考虑到目前NSCLC抗血管生成治疗的局限性,以及我们课题组前期基因芯片的发现,本研究拟从组织水平、细胞水平以及大数据分析进行一系列研究检测ILT4对NSCLC血管生成的作用,并通过体外和体内干预性研究对可能的分子机制进行进一步的探索。该研究结果可能会为ILT4在NSCLC抗血管生成方面的研究带来新的突破。研究目的1.通过免疫组化、qPCR和Western blot检测NSCLC组织和细胞株中ILT4的表达,结合生存随访和GEO（Gene Expression Omnibus）数据库的生存信息,明确ILT4在NSCLC中的表达及预后意义;2.通过检测NSCLC组织中微血管密度（microvascular density,MVD）以及体外研究通过上调和沉默ILT4表达检测ILT4对血管内皮细胞迁移和小管生成的影响,结合数据库分析,明确ILT4对血管生成的作用;3.通过转染过表达、敲低ILT4,检测ILT4调控的促血管生成因子的变化、信号通路蛋白的变化及应用相应的促血管生成因子中和抗体、信号通路抑制剂进行干预,探究ILT4调控血管生成的分子机制;4.利用ILT4过表达/敲除肺癌细胞系建立裸鼠体内移植瘤模型,进一步体内验证ILT4对血管生成的影响及可能的分子机制。研究方法1.通过qPCR和Western blot方法检测NSCLC细胞和正常支气管上皮细胞中ILT4表达,明确ILT4在NSCLC细胞和正常支气管上皮细胞表达的差异,并筛选出内源性低表达ILT4的细胞系H1650、A549和内源性高表达ILT4的细胞系H1299、H1975。2.通过免疫组织化学方法检测ILT4在NSCLC组织和癌旁组织表达的差异,分析ILT4的表达与NSCLC临床病理指标的相关性;随访病人的生存状况,应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析ILT4对NSCLC患者总生存的影响;同时结合Kaplan-Meier Plotter在线生存分析系统,分析ILT4表达对肺癌患者预后的影响。3.应用免疫组化的方法检测NSCLC组织中ILT4表达与肿瘤微血管密度相关蛋白的表达情况,同时结合 GEPIA（gene expression profiling interactive analysis）数据库,统计分析ILT4与微血管密度的相关性,ILT4/CD34共表达与临床病理参数的相关性。4.采用转染技术,将携带ILT4过表达载体的慢病毒转染内源性ILT4低表达的H1650、A549细胞株,上调H1650、A549细胞中的ILT4的表达,空载体作为对照;将携带ILT4短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）慢病毒转染内源性ILT4过表达的H1975、H1299细胞株,以下调ILT4的表达,空载体作为对照。收集该细胞培养基作为条件培养基,用于培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelia cells,HUVECs）。应用 qPCR 和 Western blot实验方法验证转染效果。采用Transwell细胞迁移实验和HUVECs小管形成实验检测ILT4过表达及敲除对血管内皮细胞迁移能力和小管形成能力的影响。5.通过基因芯片技术发现ILT4上调后可引起促血管生成因子VEGF-A和MMP9表达的上调。细胞水平上,通过转染技术上调和下调NSCLC细胞ILT4的表达,利用qPCR和Western blot技术验证ILT4对VEGF-A和MMP9表达的调节作用;组织水平上,通过将NSCLC组织连续切片应用免疫组化验证ILT4与VEGF-A、MMP9在组织中表达的相关性。6.采用转染技术,将内源性低表达ILT4的细胞系H1650和A549过表达ILT4,采用VEGF-A中和抗体或MMP9中和抗体进行干预,收集条件培养基,应用Transwell细胞迁移实验和HUVECs小管形成实验观察条件培养基对血管内皮细胞迁移能力和成管能力的影响。7.结合基因微阵列筛选出ILT4调控的信号通路,采用转染技术过表达和沉默NSCLC细胞ILT4的表达,利用Western blot技术检测ILT4对促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路中关键蛋白及其磷酸化水平的影响,包括pERK、ERK、pp38、p38、pJNK和JNK。8.将内源性低表达ILT4的细胞系H1650和A549过表达ILT4后,加入ERK抑制剂、p38抑制剂进行干预,分别阻断ERK信号通路,p38信号通路,应用Western blot方法检测通路抑制后VEGF-A和MMP9的表达情况,采用Transwell细胞迁移实验和小管形成实验观察ERK信号通路在ILT4调控血管生成方面的作用。9.通过慢病毒感染建立稳定ILT4过表达的NSCLC细胞株A549 LV-ILT4和对照组细胞株A549 LV-NC;建立稳定干扰ILT4的NSCLC细胞株H1299 LV-shILT4和对照组细胞株H1299 LV-shNC,选择BALB/c Nude裸鼠皮下注射上述细胞,体内实验观察ILT4对NSCLC细胞体内成瘤能力的影响;利用免疫组化的方法检测移植瘤组织中微血管密度,同时检测促血管生成因子VEGF-A、MMP9和信号通路ERK和pERK蛋白表达,进一步验证ILT4对血管生成能力的影响。研究结果1.ILT4在NSCLC细胞系和NSCLC肿瘤组织中高表达qPCR和Western blot检测显示ILT4在NSCLC细胞中的表达高于正常支气管上皮细胞。内源性低表达ILT4的细胞系为H1650和A549,内源性高表达ILT4的细胞系为H1299和H1975。免疫组化显示ILT4在NSCLC肿瘤组织中的表达高于肿瘤周围正常组织,ILT4在肿瘤组织的阳性表达率为:57.7%（52/90）,在周围正常组织中的阳性率为4.4%（4/90）。2.ILT4表达与NSCLC患者临床病理指标及患者预后的相关性ILT4在NSCLC肿瘤组织中的表达与较晚的TNM分期（III期-IV期,p=0.0104）,淋巴结转移（p=0.001）成正相关。随访90例NSCLC患者生存,Kaplan-Meier生存分析显示ILT4高表达患者的OS低于ILT4低表达患者OS（p=0.0419）。利用Kaplan-Meier Plotter在线生存分析系统分析ILT4对肺癌患者预后的影响,采用包含ILT4基因特定序列的探针进行测探,探针207697xat信息显示ILT4高表达组患者总生存OS（p=0.056）及中位至疾病进展时间FP均低于ILT4低表达组（p=0.022）。3.ILT4表达水平与NSCLC瘤内微血管密度的相关性,ILT4/CD34共表达与临床病理指标的相关性目前尚没有ILT4在NSCLC血管生成方面的研究,我们探索性的分析了ILT4表达水平与NSCLC肿瘤组织中的微血管密度的相关性。采用临床常用的CD34阳性的细胞表达情况代表微血管密度。GEPIA数据库分析提示,ILT4与CD34表达呈正相关;组织标本免疫组化结果提示ILT4高表达组的微血管密度显着高于ILT4低表达组的微血管密度（p=0.0058）。同时ILT4+/CD34+共表达患者,较ILT4-/CD34-组患者,有更高的淋巴结转移率（p=0.0466）,共表达组腺癌的患者比例明显增高（p=0.0 12）。4.ILT4促进HUVECs细胞迁移能力和HUVECs小管形成能力Transwell细胞迁移实验证实过表达ILT4的H1650和A549的条件培养基促进HUVECs细胞迁移,并提高其成管能力;ILT4下调的H1975和H1299的条件培养基抑制HUVECs的细胞迁移,减弱其成管能力。5.ILT4可以上调NSCLC中促血管生成因子VEGF-A和MMP9的表达基因芯片检测提示肿瘤细胞ILT4过表达可引起VEGF-A和MMP9基因表达上调。在细胞水平上,通过qPCR和Western blot结果提示过表达ILT4后的NSCLC细胞系VEGF-A和MMP9的RNA水平和蛋白水平均明显升高;下调ILT4表达后的NSCLC细胞系VEGF-A和MMP9的RNA水平和蛋白水平均显着下降;组织水平上,在病理连续切片中通过免疫组化提示ILT4高表达组织中VEGF-A、MMP9的蛋白表达水平偏高。6.ILT4通过调控NSCLC细胞的VEGF-A、MMP9表达参与血管内皮细胞迁移和HUVECs小管形成内源性低表达ILT4的H1650和A549细胞系过表达ILT4后,加入VEGF-A中和抗体或MMP9中和抗体进行干预,收集条件培养基,培养HUVECs,结果示阻断VEGF-A、MMP9表达后,HUVECs细胞迁移能力明显降低;HUVECs的小管形成能力明显下降。7.ILT4可以激活NSCLC细胞ERK、p38信号通路基因微阵列分析提示上调ILT4后可引起MAPK信号通路中多种基因的表达。MAPK信号通路主要包括ERK通路,JNK通路和p38信号通路。Western blot实验提示H1650和A549细胞过表达ILT4后,肿瘤细胞的pERK、pp38水平升高,H1975和H1299细胞下调ILT4表达后,pERK,pp38蛋白表达水平均明显降低。8.ILT4通过激活ERK信号通路促进VEGF-A、MMP9表达将内源性低表达ILT4的H1650、A549细胞过表达ILT4后,加入ERK抑制剂U0126和p38通路抑制剂SB 203580（20μM）进行干预,培养48小时,收集条件培养基,Western blot提示加入ERK抑制剂U0126后ILT4过表达上调的VEGF-A、MMP9表达被显着逆转,加入p38通路抑制剂对VEGF-A、MMP9表达无影响。9.ILT4通过ERK信号通路调控血管内皮迁移和HUVECs的小管形成Transwell迁移实验和HUVECs小管形成实验证实抑制ERK信号通路后,ILT4上调的血管内皮细胞迁移能力和成管能力均显着逆转。结果提示:ILT4通过ERK信号通路诱导VEGF-A、MMP9表达并调控血管内皮细胞迁移和HUVECs的小管形成。10.ILT4促进NSCLC细胞体内成瘤及血管生成通过裸鼠皮下注射稳定过表达ILT4的NSCLC细胞株A549 LV-ILT4,和注射稳定干扰ILT4表达的细胞株H1299 LV-shILT4,建立裸鼠移植瘤模型,结果提示ILT4过表达组,NSCLC肿瘤生长速度显着快于对照组,ILT4过表达组的肿瘤体积和重量明显大于对照组;干扰ILT4表达组,肿瘤生长速度显着慢于对照组,ILT4干扰组的肿瘤体积和重量明显小于对照组。通过建立裸鼠移植瘤模型,造模4周后,分离肿瘤组织行免疫组化,结果提示ILT4过表达组,肿瘤微血管密度显着高于对照组,VEGF-A和MMP9表达高于对照组,pERK明显高于对照组,ERK表达无明显改变;干扰ILT4表达后,肿瘤微血管密度显着低于对照组,VEGF-A和MMP9表达低于对照组,pERK明显低于对照组,ERK表达无明显改变。体内实验进一步支持ILT4具有促进NSCLC血管生成的潜力。结论1.ILT4在NSCLC组织中及多个NSCLC细胞株中高表达,与更晚的病理分期、淋巴结转移及临床不良预后明显相关,可作为预后预测因子。体内体外实验证实ILT4可促进NSCLC血管生成。2.体外实验证实了 ILT4通过激活ERK信号通路上调VEGF-A、MMP9的表达并促进NSCLC血管内皮细胞迁移和小管形成,体内实验进一步验证了 ILT4对NSCLC血管生成的作用及潜在机制。
毛鑫,余丽梅,王峰[5]（2021）在《间充质干细胞在心脏移植免疫耐受诱导中的重要作用》文中提出背景:心脏移植是终末期心脏疾病的重要治疗方式,移植后的维持离不开免疫抑制药物的使用。鉴于免疫抑制药物的不良反应较大,甚至可能对宿主生活质量产生巨大影响,人们开始探寻新的诱导移植耐受的方法,来尽量规避免疫抑制药物的使用。间充质干细胞的免疫调节特性受到了研究人员的关注,并开展了大量的相关研究。目的:总结并探讨间充质干细胞的免疫调节特点和心脏移植免疫耐受诱导方面的问题,以及它们之间的关系。方法:检索PubMed数据库中相关文献,时间不限。检索词包括"stem cell; mesenchymal stem cells;MSC;MSCs;heart transplantation;cardiac allograft;heart allograft;immune tolerance;tolerance;immunological rejection"。筛选排除重复研究,对相关研究文献进行整理总结并综述。结果与结论:一方面,间充质干细胞对免疫系统各细胞有着不同的作用;另一方面,间充质干细胞调控或直接产生的众多生物活性因子构成了复杂的网络,创造了一个利于免疫调节的微环境。间充质干细胞在心脏移植中的应用多局限在动物实验,且结果都相对乐观。研究人员对心脏移植免疫耐受诱导的探究,有助于人们对该领域的进一步了解,并给相关临床工作更多的启示。
马腾霄[6]（2019）在《白介素17干扰骨髓间充质干细胞免疫抑制作用的实验研究》文中研究说明研究背景目前皮肤移植仍然是救治大面积深度烧伤、严重创伤的关键措施之一,对于大面积深度烧伤的患者来说,能否尽早地封闭创面关系到其预后。尽早封闭创面可以减少创面渗出和体液、营养物质的流失,降低感染发生的几率,缩短治疗时间以及减轻患者的痛苦及经济压力,提高病患的存活率及其以后的生活质量。封闭皮肤缺损创面的最好方法是自体皮肤移植,但是大面积烧伤或创伤常常会造成患者自身皮肤来源严重缺乏,无法满足烧伤所致大面积皮肤缺损的需要,这也是导致重度烧伤患者残疾或死亡的最重要因素。异种或同种异体皮肤移植虽然可以暂时解决创面的短期覆盖问题,但是由于皮肤是抗原性最强的组织之一,机体对移植物具有强烈的免疫排斥反应,致使皮肤移植后存活时间较短。异种或同种异体皮肤移植后机体对移植物的排斥反应在治疗效果方面是消极的。免疫抑制剂用于治疗器官移植排斥反应,可明显延长移植物存活时间,但是免疫抑制剂具有显着的副作用,长期使用免疫抑制剂可导致器官损伤,降低机体的抗感染和抗肿瘤能力,导致急性感染甚至癌症,所以免疫抑制剂的应用受到限制。另外,大面积烧伤的患者常伴有全身感染,这种情况下免疫抑制剂也是慎重应用的。因此,如何在不应用免疫抑制剂的前提下延长异种或异体皮的存活时间是目前比较棘手的问题。在这种情况下,诱导免疫耐受便显得尤为重要,移植耐受性是同种异体移植物在没有应用免疫抑制剂的情况下移植物保持稳定功能而未被受体排斥,但对第三方的免疫反应保持完整。对于大面积烧伤患者,如果在不应用免疫抑制剂的前提下采用异种或同种异体皮肤封闭其创面而不发生免疫排斥反应,达到免疫耐受的状态,不仅能够尽早使创面愈合,减轻其经济压力,还能减少瘢痕挛缩所造成的畸形,提高患者的生活质量。因此如何诱导这种免疫耐受是组织器官移植研究道路上亟需解决的问题。目前间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSCs）是医学研究的一大热点。MSCs是一群中胚层来源的具有多向分化潜能和自我更新能力的成体干细胞,在组织再生和修复医学中有着十分广阔的应用前景。MSCs可以从成体多种组织,如脂肪、骨髓、滑膜、牙髓、胎盘、羊水、脐带血、胎肺、胎肝甚至经血中分离获得,其分离方法简便,体外扩增迅速、方便,且不涉及伦理问题,这使得MSCs成为细胞治疗首选的种子细胞。另外MSCs已被广泛证实具有免疫调节作用,虽然机制尚不明确,但由于其具有明确的免疫抑制和诱导免疫耐受的作用,促使众多学者将MSCs应用于诱导同种异体移植免疫耐受的研究当中,并显示MSCs在治疗自身免疫性疾病及器官移植领域具有巨大的潜能。2002年,B artholomew A等研究发现单纯输注异基因甚至第三方的MSCs可以延长狒狒的皮肤移植物存活时间,为解决异种或异体皮肤移植排斥提供了新的选项。之后,Lee SM等人研究显示:条件培养基或脂肪间充质干细胞（adipose derived mesenchymal stem cell,ADSCs）输注与对照组相比可明显延长同种异体移植皮肤的存活时间,并指出ADSCs及其分泌的细胞因子具有诱导免疫耐受的可能性。大量关于预处理的MSCs用以提高其在免疫抑制作用和诱导免疫耐受能力的研究实验正在如火如荼的开展着。相关研究表明,MSCs结合基因转染、药物或细胞因子处理的方法可能提高其诱导免疫耐受的能力。例如,Bian L等实验结果显示肝细胞生长因子转染的MSCs可明显延长大鼠同种异体移植皮肤的存活时间。Zhang Y等实验证实与未处理的MSCs相比,Stro-1（+）MSCs可以大大延长大鼠皮肤移植物的存活时间。白介素17（interleukin-17,IL-17）主要由Th17细胞分泌产生,另外还可产生于NKT（natural killer T）细胞和中性粒细胞等固有免疫细胞,其不仅在免疫活化中起到重要作用,而且还参与了肿瘤、感染免疫以及免疫性疾病的进程,如自身免疫性肝炎等。IL-17还具有诱导细胞分化,促进多种细胞因子和趋化因子的释放,招募中性粒细胞的作用,在炎症疾病中,其水平在组织和血清中会明显增高,因此被认为是最强有力的炎症细胞因子之一。但是有意思的是最近多项研究发现IL-17可增强MSCs的免疫抑制作用,而非促进炎症的发生、逆转MSCs的免疫抑制作用。本实验拟通过将IL-17预处理的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）注射至同种异体皮肤移植模型小鼠体内,探讨IL-17增强BMSCs诱导异体皮肤移植免疫耐受能力并延长同种异体皮肤存活时间的可行性。研究目的通过白介素17对骨髓间充质干细胞抑制淋巴细胞增殖作用影响的体外实验以及白介素17对骨髓间充质干细胞诱导同种异体皮肤移植免疫耐受影响的动物实验,检验并证实BMSCs是否具有诱导免疫耐受,延长受体小鼠移植皮肤存活时间的作用,探讨IL-17可否增强BMSCs诱导免疫耐受并延长同种异体皮肤移植的皮肤存活时间,通过该实验初步探索IL-17增强BMSCs免疫抑制作用而达到诱导免疫耐受的机制。研究方法1.BMSCs的分离,培养和鉴定脊椎脱臼法处死Balb/c小鼠,分离双侧股骨、胫骨和肱骨,体外通过冲洗股骨、胫骨和肱骨骨髓腔,从中分离骨髓细胞,过滤细胞悬浮液后,离心,吸弃上清液,用所配制的低糖DMEM完全培养液重悬后在5%CO2、37℃、饱和湿度的培养箱中培养。通过其多向诱导分化的能力和表面标志性抗原检测来鉴定BMSCs:BMSCs常规培养,待细胞达90%融合时,分别进行成骨、成软骨和成脂培养,成骨、成软骨和成脂诱导及相应对照组分别以茜素红S、阿利辛蓝及油红O染料进行着色鉴定。BMSCs进行体外培养,当细胞达到80%融合时消化,离心弃上清,磷酸盐缓冲液（phosphatic buffer solution,PBS）洗涤2遍后重悬制成5×105个细胞/ml的细胞悬液,分装至样品管中,分别加入抗小鼠单克隆抗体Anti-CD31-FITC,Anti-CD117-FITC 及Anti-CD29-FITC,Anti-CD44-FITC,放置于4℃冰箱,避光孵育30分钟;离心、洗涤,流式上机检测。2.IL-17对BMSCs的预处理取BMSCs 2×105个接种于25cm2培养瓶中,24小时后更换培养基,将IL-17加入培养基中（终浓度为50ng/ml）。每天观察处理后的BMSCs的形态及生长趋势。5天后去除培养基,胰酶消化收集IL-17预处理的BMSCs（BMSCs pretreated with IL-17,BMSCs-17）用于实验。3.淋巴细胞增殖抑制实验胰酶消化收集BMSCs、BMSCs-17,10%FBS的DMEM低糖完全培养基重悬,计数,将之调节并获取不同的细胞浓度的BMSCs、BMSCs-17,各取100微升与100微升的刀豆蛋白A（concanavalinA,ConA）刺激后的脾淋巴细胞在96孔板中共培养,用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况。4.BMSCs 的CM-Dil 标记CM-Dil用质量浓度为100%的DMSO溶解制成1.0m g/mL工作液并过滤。取第4-8代融合度为90%的BMSCs,在25cm2培养瓶中加人5 μg/mL CM-Dil溶液（由5μL工作液溶于1 mL PBS制得）2～3 mL。37℃,5%CO2孵育处理5min,4℃下孵育20min;吸弃CM-DiI溶液,加入10%FBS低糖DMEM完全培养基继续培养,观察其生长状态及传代后荧光标记情况。5.异体皮肤移植模型的建立麻醉BALB/C小鼠,俯卧位固定小鼠四肢,在供体背部获得全层皮肤,并修剪成大小为1.5×1.5 cm2全厚皮片置于生理盐水纱布中备用。在受体C57BL/6J小鼠麻醉后俯卧位固定四肢,在其背部人为形成1.5×1.5 cm2的皮肤缺损区,将BALB/C小鼠全厚皮片植于C57BL/6J小鼠背部创面上,留长线备打包,创面依次油纱,棉球覆盖,打包固定,单笼饲养。6.细胞输注与实验分组体外扩增培养BALB/C小鼠BMSCs,取第4-8代生长状态良好的细胞进行实验。实验组用IL-17预处理的BALB/C小鼠BMSCs。于术前一天自C57BL/6J尾静脉注射BALB/C小鼠BMSCs后进行异体皮肤移植。移植后5天打开包堆观察移植皮肤成活情况及体内免疫状态的变化。将C57BL/6J小鼠随机分为3组:①实验分组如下:A组尾静脉注射PBS,异体皮肤移植;B组尾静脉注射MSCs,异体皮肤移植;C组尾静脉注射BMSCs-17,异体皮肤移植。7.BMSCs的CM-DiI示踪将CM-Dil标记后的BMSCs以及BMSCs-17沿C57BL/6J小鼠尾静脉注入体内后行异体皮肤移植,于术后第7天切取移植物行冰冻切片,冷丙酮固定,抗荧光衰减封片剂封片后,荧光显微镜下观察BMSCs去向。8.移植皮肤的外观及组织学观察于术后第5天打开包堆后开始观察C57BL/6J小鼠移植皮肤的外观,并同时记录各组各只小鼠移植皮肤的存活时间。皮肤如果有90%结痂则定义为坏死,如果移植皮肤完全发黑、变硬并脱落定义为排斥;于术后第7天取C57BL/6J小鼠移植皮肤行HE染色光镜下观片。9.受体小鼠脾脏调节性T细胞的检测移植术后第7天取受体C57BL/6J小鼠脾脏制备单细胞悬液,用小鼠Regulatory T Cell试剂盒按其说明书步骤检测术后受体C57BL/6J小鼠调节T细胞（T regulation cells,Treg cells）细胞的含量。10.受体C57BL/6J小鼠细胞因子（IL-10、IFN-γ、TGF-β）的检测应用摘眼球法在术后第7天采取受体C57BL/6J小鼠静脉血,室温静置10-20min,2000-3000rpm离心20min,仔细收集上清,置于-20℃保存。按照IL-10、IFN-γ、TGF-βELISA试剂盒说明书的步骤检测小鼠IL-10、IFN-γ、TGF-β含量。结果1.BMSCs贴壁生长,呈梭形,极性排列,旋涡状。BMSCs具有多向分化的潜能,可以在特定的分化培养基中分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞;BMSCs高表达表面抗原CD29（99.24%）和CD44（99.67%）,而不表达造血干细胞表面特异性抗原CD31（0.35%）和CD117（0.27%）。2.在体外实验中,BMSCs能够显着抑制T淋巴细胞增殖（经ConA刺激增殖）,而不受主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）的限制,另外,这种抑制作用随着BMSCs细胞浓度的增加而增强。3.各检测及观察指标结果如下:（1）移植皮片的存活时间对照组为11.8±0.834天,BMSCs组为15.8±0.783天,BMSCs-17组存活时间明显延长至19.2±1.012天。BMSCs-17组的存活时间明显长于对照组（P<0.001）和 BMSCs 组（P<0.01）。（2）移植物外观及HE染色术后第12天移植皮肤的外观:对照组约2/3的移植皮肤发黑坏死,部分结痂,BMSCs组移植皮肤大部分存活良好,仅少量出现发黑、坏死,BMSCs-17组移植皮肤成活良好,无发黑、坏死,甚至毛发正常生长。HE染色显示,对照组有大量炎性细胞浸润、脱落和无血管生成,BMSCs组有少量炎性细胞浸润和血管生成,BMSCs-17组炎性细胞浸润少,血管生成多。（3）BMSCs示踪IL-17预处理后,更多的BMSCs定植于移植物,经IL-17处理后BMSCs向植皮区归巢的数量增加。（4）受体Treg亚群比例皮肤移植术后第7天,对照组Treg亚群比例明显低于其他两组（P<0.001）,BMSCs-17组Treg亚群比例明显高于其他两组（P<0.001）。（5）受体血清中细胞因子含量:对照组TGF-β、IL-10明显低于其他两组（p<0.001）,BMSCs-17 组 TGF-β、IL-10 均显着高于 BMSCs 组（p<0.001）;对照组 IFN-γ明显高于 BMSCs 组和 BMSCs-17 组（p<0.001）,BMSCs-17 组 IFN-y明显低于BMSCs组（p<0.001）。结论1.BMSCs贴壁生长,具有多向分化的潜能,可以在特定的分化培养基中分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞,并特异性表达相关表面抗原。2.通过脾淋巴细胞增殖抑制实验说明IL-17显着增强了BMSCs对淋巴细胞增殖的抑制作用。3.IL-17通过增强BMSCs免疫抑制的作用以及其归巢能力,来诱导受体免疫耐受,最终达到减轻移植后免疫排斥反应,延长移植组织或器官存活时间的结果。意义皮肤作为全身免疫原性最强的器官之一,如果能解决皮肤移植免疫耐受的问题或者延长异体移植皮肤的存活时间,那这种方法理论上也可以应用到别的器官移植中,减轻甚至消除免疫排斥反应,达到稳定的免疫耐受状态,这对于器官移植来说具有深远的意义。因此我们将“IL-17可以增强BMSCs的免疫抑制作用”的理论应用到同种异体皮肤移植的模型中来探讨IL-17是否能够增强BMSCs免疫抑制作用而达到诱导免疫耐受,继而延长移植皮肤的存活时间。不足之处本实验对“IL-17增强BMSCs的免疫抑制作用”的更深层次的作用机制仍需进一步实验探明,相信该机制对临床采用IL-17联合BMSCs治疗自身免疫性疾病及器官移植排异等会有较好的治疗价值,未来我们将持续对这些机制进行研究。
刘茂兰,史明霞[7]（2019）在《间充质干细胞治疗急性移植物抗宿主病机制及应用进展》文中指出急性移植物抗宿主病（aGVHD）是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后发生的严重且可能威胁生命的并发症,是移植失败的主要因素。尽管临床上已采用糖皮质激素及免疫抑制剂进行相关治疗,但治疗期间仍伴随着耐药、感染以及移植物抗肿瘤效应（GVL）的减弱等,最终导致患者治疗不耐受或者肿瘤的复发。间充质干细胞（MSC）具有低免疫原性且可通过负免疫调控明显改善aGVHD患者的临床症状并延长其生存期,已成为aGVHD的有效治疗手段之一。本文就MSC治疗aGVHD的免疫调节相关作用机制进展及临床应用进行综述。
杨锦涛[8]（2019）在《滤泡辅助T细胞及单核/巨噬细胞来源的外泌体在肾移植术后抗体介导的排斥反应中的作用及机制研究》文中认为目的与意义:抗体介导的排斥反应是移植肾失功的关键因素,目前对于其免疫分子机制认识尚不充分,临床上对于ABMR的治疗仍停留在非特异性抑制或清除产生抗体的细胞或阻断已产生的抗体作用层面,靶向性差。滤泡辅助T细胞是一类促进B细胞成熟、形成抗体的CD4细胞。外泌体是一种小囊泡,由细胞装配和释放,参与譬如细胞迁移、抗原提呈、免疫应答、肿瘤侵袭等许多生物学过程。Tfh来源外泌体与B细胞分化以及与ABMR相关性尚无报道。肾移植术后,供者肾小球内皮细胞最先接触到受者免疫细胞,研究两者之间外泌体的传递对于研究移植排斥至关重要。移植肾进入体内后将立即激活受体的先天性免疫,大量的单核/巨噬细胞归巢和并浸润到移植物中。单核/巨噬细胞表面配体能作用于内皮细胞上受体,发挥粘附、促炎功能,因此其可作为一个有效模型,研究肾移植后免疫细胞同供体组织细胞之间外泌体传递。本课题在前期对Tfh细胞在ABMR中的作用机制研究的基础上,进一步研究其分泌的外泌体在ABMR的作用,检测CRAD患者循环CD4+CXCR5+外泌体,分析其与ABMR的相关性。并进一步分离Tfh细胞体外培养后获取Tfh细胞来源的外泌体,将其在SEB刺激下与B细胞共培养,分析其对B细胞增殖与分化的影响。不仅为阐明Tfh细胞辅助B细胞增殖和分化的机制提供了新的视角,而且为ABMR的预防和监测提供了新的途径。并且以Netrin-1作为一种分子模型来讨论神经分子对单核/巨噬细胞和肾小球内皮细胞信息交流的影响,为理解器官同种异体移植后神经、免疫和血管之间的相互作用和联系外泌体的传递提供新的见解。CD4+CXCR5+外泌体与肾移植术后ABMR的相关性研究方法:1、研究对象选择:选取在解放军总医院第八医学中心就诊的肾移植术后慢性移植肾失功（CRAD）患者作为研究对象,并选择同时期术后肾功正常患者做为对照组。2、标本的采集:入组的研究对象于清晨空腹收集液标本,ABMR组患者标本均为临床确诊ABMR针对治疗前及时收集血清标本。3、研究对象分组:依据2013年ABMR的Banff标准分两组,包括ABMR及非ABMR组。4、外泌体分离方法:利用聚合物沉淀法提取。5、鉴定外泌体:TEM鉴定外泌体形状和大小;NTA技术鉴定粒径和浓度;Western鉴定分子标志。6、流式检测:使用包被抗CD63抗体磁珠结合外泌体,应用流式细胞术检测CD4、CXCR5等表面标志:使用Invitrogen公司的Exosome-Human CD63分离/检测试剂,使外泌体和磁珠结合,应用流式检测CD4、CXCR5、CTLA-4、HLA-G,比较ABMR组患者与非ABMR组患者之间CD4+CXCR5+外泌体的差异,分析其与ABMR的相关性。7、收集临床资料:性别、年龄、肾移植术后的时间等和化验指标。8、数值数据记录为平均值土标准差（x±s）。应用SPSS 19.0对数据进行分析计算。使用双侧Wilcoxon秩和检验来比较临床资料。Spearman等级测试相关性和配对t检验比较实验数据。P<0.05设定为具备统计学差异。结果:1、外泌体的基本特点:TEM显示,分离的外泌体呈茶盘型/半球形,具有凹面,粒径50-100nm;NTA结果显示囊泡粒径约100nm;Western Blot检测外泌体蛋白表达;CD9、CD81及TSG101这三种标志蛋白在血清分离出的囊泡中均有表达。2、流式细胞仪比较各组受者血清分离的外泌体及其亚型的差异:CRAD组病例血清和移植肾功能正常病例血清CD4+CXCR5+外泌体比例无明显差异。在CRAD组中,CD4+CXCR5+CXCR3-外泌体的比例高于对照组。CRAD患者进一步分为ABMR组和非ABMR组,组间CD4+CXCR5+外泌体比例无显着差异,而ABMR组CD4+CXCR5+CXCR3-外泌体比例显着高于非ABMR组。3、流式检测Tfh细胞来源外泌体上HLA-G和CTLA-4水平:与对照组相比,CRAD组中HLA-G和CTLA-4的CD4+CXCR5+外泌体表达没有明显变化。CRAD患者中,ABMR组中CD4+CXCR5+外泌体上CTLA-4水平显着低于非ABMR组,但HLA-G水平差异不明显。结论:肾移植术后ABMR患者血清中CD4+CXCR5+CXCR3-外泌体增加,提示其和ABMR有关。ABMR患者血CD4+CXCR5+外泌体表面CTLA-4水平明显降低。ABMR患者外周血Tfh来源外泌体对B细胞的影响方法:1、研究对象及分组:同第一部分。2、标本的采集:获取外周血,保存抗凝管中。3、分离PBMC:淋巴细胞分离液获取PBMC。4、分选滤泡辅助T细胞:磁珠法先阴性分选标本CD4细胞;再阳性分选CD4+CXCR5+Tfh。5、培养滤泡辅助T细胞:将Tfh加入含10%去除外泌体胎牛血清RPMI1640培养基48h。6、分离Tfh细胞来源的外泌体:利用聚合物沉淀法提取。7、流式细胞术检测外泌体中HLA-G和CTLA-4的表达。8、外泌体示踪实验:使用PKH67进行染色,然后加至B细胞培养,验证其是否被吞噬。9、将外泌体加入耗尽Tfh细胞的淋巴细胞培养基共培养48h,流式细胞术测量其中B细胞（CD3-CD19+细胞）和浆细胞（CD3-CD19-CD38+细胞）的比例。并用ELISA检测Ig浓度。结果:1、在ABMR组患者中,Tfh细胞来源的外泌体上的CTLA-4表达降低,但HLA-G与非ABMR组无差异;2、Tfh细胞来源的外泌体可以被B细胞吞噬;3、ABMR患者Tfh来源外泌体刺激B细胞分化、扩增,相对于非ABMR组,B细胞和浆细胞的比例分别增加87.52%和110.2%;4、ABMR患者中Tfh来源外泌体刺激IgG和IgA产生,但对IgM产生没有显着影响。结论:1、Tfh来源外泌体可以被B细胞吞噬;2、ABMR患者Tfh来源外泌体促进B细胞分化、增殖,并且能够增加IgG、IgA抗体生成;3、ABMR组患者Tfh细胞来源的外泌体上的CTLA-4表达降低,但HLA-G的表达与非ABMR组无差异,推测外泌体可能是CTLA-4发挥免疫抑制效应的重要载体。单核细胞/巨噬细胞通过外泌体靶向递送HLA-G至内皮细胞方法:1、获取志愿者PBMC,分选单核/巨噬细胞;2、与丝裂霉素C处理过的肾小球内皮细胞以及来自相同志愿者的淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养（MLC）;3、更换培养基继续培养单核/巨噬细胞,分组加入Netrin-1及外泌体抑制剂GW4869,流式细胞术检测单核/巨噬细胞的表型及HLA-G蛋白的表达;4、MLC48小时后,从单核/巨噬细胞中除去刺激因子,然后将细胞加入到室的上部,并且预先在室的下部放进肾小球内皮细胞。培养48h后获取下部内皮细胞;5、流式检测内皮细胞表面HLA-G及其受体、黏附分子水平;6、聚合物沉淀法试剂盒分离单核/巨噬细胞来源的外泌体,示踪实验检测是否被内皮细胞吞噬;7、外泌体同内皮细胞共培养,流式检测HLA-G蛋白水平。结果:Netrin-1促进了单核/巨噬细胞的表型转化和HLA-G的表达,神经突起导向因子Netrin-1刺激的单核/巨噬细胞通过外泌体的递送促进内皮细胞中HLA-G及其受体的表达,单核/巨噬细胞在Netrin-1刺激后外泌体HLA-G表达的显着增强;使用抗体密封外泌体上的HLA-G,可以显着抑制Netrin-1组中内皮细胞的HLA-G的表达。神经突起导向因子Netrin-1促进单核/巨噬细胞来源外泌体HLA-G靶向递送至内皮细胞。Netrin-1刺激的单核/巨噬细胞抑制内皮细胞中促炎分子表达。结论:1、MLC诱导单核/巨噬细胞向M1极化,增强其HLA-G表达,神经突起导向因子Netrin-1能部分逆转这种极化,进一步促进单核/巨噬细胞的HLA-G表达;2、单核/巨噬细胞通过外泌体靶向递送HLA-G至进内皮细胞,神经突起导向因子Netrin-1能促进这种传递方式。
彭一帆[9]（2019）在《Galectin-1诱导耐受性树突状细胞联合凋亡淋巴细胞延长大鼠移植肝术后生存的研究》文中研究说明第一部分 Galectin-1诱导大鼠耐受性树突状细胞与凋亡淋巴细胞诱导耐受性免疫微环境的研究[目的]:树突状细胞是重要的免疫调节细胞。耐受性树突状细胞因其免疫抑制能力被用于多种自身免疫疾病的治疗。同时,耐受性树突状细胞预输注也被用于缓解移植术后排斥,延长移植受者术后生存。移植术后排斥的基本免疫学机制包括抗原提呈直接途径与间接途径。耐受性树突状细胞与凋亡淋巴细胞（apoptotic lymphocyte,AL）均为有效的移植术后耐受诱导细胞,且分别通过抑制抗原提呈直接途径与间接途径发挥免疫耐受诱导作用。Galectin-1是重要的免疫调节分子并可诱导耐受性树突状细胞（DCgal-1）。本研究通过联合DCgal-1与AL进行联合回输,诱导耐受性免疫微环境,以求获得比单独回输更好的耐受微环境诱导效果。[方法]:以重组Galectin-1蛋白诱导Dark Agouti（DA）大鼠骨髓来源树突状细胞为DCgal-1。以ultraviolet irradiation（UV）诱导DA大鼠脾脏来源淋巴细胞为AL。体外检测DCgal-1与AL的免疫学表型与功能。并将耐受细胞回输Lewis大鼠,以混合淋巴细胞反应实验检测针对DA大鼠来源抗原的耐受微环境诱导效果。[结果]:DCgal-1低表达炎症分子主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）Ⅱ,CD80,CD86 并高表达 interleukin（IL）-10。DCgal-1 与UV诱导凋亡淋巴细胞在体外显着抑制混合淋巴细胞反应。DCgal-1与凋亡淋巴细胞联合回输显着降低Lewis大鼠受体CD8+T淋巴细胞增殖能力。[结论]:DCgal-1与UV诱导凋亡淋巴细胞联合回输是有效的免疫耐受微环境诱导方案。第二部分 DCgal-1联合凋亡淋巴细胞延长大鼠肝移植术后生存的研究[目的]:肝移植是治疗终末期肝病的最有效方法。肝移植术后免疫抑制剂的使用在延长肝移植受者术后生存的同时,也与肝移植术后原病复发,感染等并发症相关。诱导移植免疫耐受将实现移植受者在不服用免疫抑制剂的情况下长期存活,具有重大的临床意义。而目前耐受性树突状细胞回输虽能延长受者术后生存,但仍有很大改进空间。我们在第一部分中发现galectin-1诱导的耐受性树突状细胞（DCgal-1）联合 ultraviolet irradiation（UV）诱导的凋亡淋巴细胞（apoptotic lymphocyte,AL）可以在体内诱导针对供体抗原的免疫耐受,其效果优于单种耐受细胞单独回输,在这一部份,我们将其应用于大鼠模型肝脏移植排斥的预防,探究其作用。[方法]:构建大鼠Dark Agouti（DA）-Lewis肝移植排斥模型。以供体来源DCgal-1联合AL在移植术前七日行受体回输。通过生存曲线,肝功能,病理学,T细胞平衡变化及炎症因子表达变化阐述DCgl-1联合AL在预防肝移植排斥中的作用。除此之外,我们还研究了 DCgal-1和AL联合回输后长期生存受体在术后100天时的特征。[结果]:单独DCgal-1或AL输注显着延长受体大鼠移植术后生存,而联合DCgal-1和AL回输显示出比单独DCgal-1或AL输注更好的肝脏排斥抑制效果。该过程与控制同种异体反应性效应T细胞（IFN-y+T细胞）和提升受体大鼠体内肝脾调节性T细胞（Treg）比例有关。研究中,DCgal-1-AL治疗使超过30%的受者大鼠达到长期生存,在术后无需使用任何免疫抑制药物。此外,DCgal-1-AL输注在移植术后第七日显着抑制促炎因子表达。而术后长期生存受体肝脏转化生长因子-βl/2显着升高,这可能与维持移植物生存相关。[结论]:DCgal-1与AL联合回输是有效的肝移植排斥预防方案。
李成林[10]（2015）在《人诱导多能干细胞来源的间充质干细胞调控小鼠免疫反应的机制研究》文中指出背景:间充质干细胞是具有自我更新能力和分化能力的组织细胞前体细胞,能够分化为一系列的间质细胞,包括成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞和内皮细胞等。细胞治疗是再生医学发展的一个重要分支。越来越多的研究发现,间充质干细胞能够修复组织损伤,达到一定治疗效果。因此,间充质干细胞被视为天然组织工程材料的重要种子细胞,具有广阔的应用前景。此外,间充质干细胞具有负性免疫调节能力。在体外共培养条件下,间充质干细胞能够抑制免疫细胞功能,包括抑制T细胞反应,抑制树突状细胞的成熟和抗原提成,抑制B细胞激活和增殖,降低自然杀伤（natural killer,NK）细胞的增殖和毒性,促进调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）生成等。但是由于间充质干细胞在体内比例很小,获取难度较大,体内间充质干细胞的数量不能满足临床治疗的需求。多能诱导干细胞是体细胞经过重编程技术得来的细胞,在功能上类似于胚胎干细胞。多能诱导干细胞分化成的间充质干细胞可能弥补间充质干细胞供应不足这一缺陷。研究报道,诱导多能干细胞分化成的间充质干细胞（induced pluripotent stem cell derived mesenchymal stem cell,iPS-MSC）在体外也能够抑制 NK 细胞的毒性,并且iPS-MSC和胚胎干细胞来源的间充质干细胞（enbryonic stem cell derived mesenchymal stem cell,ES-MSC）比骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs）在拮抗NK细胞的激活上具有更好的效果。CD4+T细胞能够分化为一系列的细胞亚群保护机体免受病原体伤害,包括辅助性T细胞1（T helper1）和辅助性T细胞2（T helper 2）。研究发现,在体外共培养体系中,间充质干细胞能够抑制Th1细胞的伽马干扰素（IFN-γ）分泌,促进Th2细胞的白细胞介素4（interleokin4,IL-4）释放。但是,由于缺乏一个有效的实验动物模型,目前对间充质干细胞在体内的免疫调节能力和机制还知之甚少。capspase在T细胞内稳态和T细胞介导的免疫反应方面发挥了关键的作用。抑制caspase8的活性伴随着T细胞存活的减少。因此caspase可能在间充质干细胞抑制T细胞免疫应答这一过程中发挥了一定的作用。研究内容和方法:1)实验动物模型构建。本课题借鉴了胰岛移植模型,构建了小鼠肾被膜下细胞移植模型,共分四组:a)空白对照组,移植等体积的PBS,对小鼠造成相同的手术创伤;b)内皮细胞（HUVEC）移植组,内皮细胞是细胞免疫排斥的首要靶点,在本课题中作为阳性对照;c)iPS-MSC移植组,处理方法与b组一致;d)内皮细胞和间充质干细胞联合移植组（Co-grafts）（HUVEC:iPS-MSC=1:1）,移植的总细胞数和b、c组一致,但是内皮细胞和间充质干细胞各自减半后混合。2)组织病理检测。移植一周后利用HE染色技术和激光共聚焦技术分别检测受体移植部位免疫细胞浸润情况和移植细胞的存活情况。3)T细胞亚群检测。通过流式细胞术检测受体小鼠脾脏内T细胞整体比例变化,以及Th1、Th2和Treg细胞整体比例变化;将T细胞分离纯化与体外内皮细胞和间充质干细胞共培养,检测T细胞群体比例改变。4)PCR技术和ELISA技术检测脾脏组织炎性因子改变。5)淋巴细胞增殖检测。分离受体小鼠脾脏细胞进行体外培养,利用BrdU和MTT技术检测脾细胞的增殖能力;将分离纯化的T细胞在体外与内皮细胞、干细胞共培养,BrdU检测T细胞的增殖能力;将T细胞培养在内皮细胞和间充质干细胞的培养上清中,检测T细胞的增殖能力;6)抗体芯片检测。利用抗体芯片技术检测内皮细胞和间充质干细胞的代谢组学,并进行Go oncology分析。7)受体小鼠脾脏信号通路检测。利用western blot技术检测受体小鼠脾脏组织半胱天冬酶（caspase）信号通路的改变,并利用信号通路抑制剂验·证该信号通路参与免疫应答的可能性。结果:与HUVEC移植组相比较,1)间充质干细胞组移植组显着地抑制了炎症细胞浸润,并且在肾被膜下可以更好地存活;2)间充质干细胞移植减少了脾脏内T细胞亚群比例,减少了 Th1、Th2细胞亚群比例,增加调节性T细胞的数量;3)体外共培养结果显示,间充质干细胞抑制T细胞群体内Th1、Th2的比例;4)间充质干细胞抑制了体内脾细胞的增殖;间充质干细胞及其培养上清抑制了体外T细胞的增殖5)间充质干细胞移植降低了脾细胞内和血清中细胞因子IL-2、IL-4的表达,促进抑制性细胞因子IL-10、TGF-β的表达。6)抗体芯片检测显示间充质干细胞高表达和分泌276种可溶性因子,包括IL-10、TGF-β、TSG-6等已报道的免疫调节因子。Go oncology分析显示其中137种富集在免疫系统进程（immune system process）,51种富集在细胞因子产生（cytokineproduction）,参与了淋巴细胞调控。7)信号通路检测显示,间充质干细胞移植减低了脾脏内caspase3,caspase8,PARP的活性。体外抑制caspase3和总的caspase活性能够抑制ConA诱导的T细胞增殖;体外TGF-β刺激抑制ConA诱导的脾细胞和T细胞增殖,抑制Th1和Th2亚群比例,失活caspase 3,激活caspase 8和PARP。结论:1)间充质干细胞移植能够抑制免疫细胞浸润;2)间充质干细胞移植抑制促炎性细胞因子表达和释放,促进抑炎性因子表达和释放;3)间充质干细胞移植能够通过旁分泌形式抑制辅助性T细胞群体比例,负性调控T细胞介导的免疫应答;4)间充质干细胞能够表达和分泌大量的可溶性因子调控免疫应答;5)间充质干细胞移植通过或部分通过失活caspase 3,caspase 8和PARP方式抑制小鼠脾脏免疫应答;6)体外TGF-β刺激能够抑制ConA诱导的脾细胞和T细胞增殖,抑制.Th1和Th2群体比例,失活caspase 3,但激活caspase 8和PARP。由此表明,间充质干细胞移植不完全通过分泌TGF-β调控小鼠脾脏免疫应答。
二、可溶性HLA-G1上调活化的同种反应性T细胞表达FasL促进其凋亡（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、可溶性HLA-G1上调活化的同种反应性T细胞表达FasL促进其凋亡（论文提纲范文）
（1）间充质干细胞对T细胞免疫调节机制的研究进展（论文提纲范文）
| 1 MSCs对T细胞的抑制作用 |
| 1.1 活化 |
| 1.2 增殖 |
| 1.3 分化及效应功能 |
| 2 调节机制 |
| 2.1 可溶性细胞因子 |
| 2.1.1 TGF-β1和HGF |
| 2.1.2 IDO |
| 2.1.3 PGE2 |
| 2.1.4 IL-10 |
| 2.1.5 NO |
| 2.2 细胞间接触 |
| 2.2.1 PD-1 |
| 2.2.2 HLA-G |
| 2.2.3 ICAM-Ⅰ和VCAM-Ⅰ |
| 2.3 胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs) |
| 3 小结与展望 |
（2）人羊膜间充质干细胞抑制同种异体小鼠心脏移植免疫排斥损伤作用microRNA表达初步探究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞在心脏移植免疫耐受诱导中的重要作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）银屑病患者血清通过诱导miR-155抑制间充质干细胞的免疫调节功能（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常见缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 标本来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 DMSCs的分离、培养及传代 |
| 1.4.2 血清采集、PBMCs分离及DMSCs细胞的培养 |
| 1.4.3 DMSCs中总RNA的提取、逆转录及实时荧光定量PCR |
| 1.4.4 蛋白质印迹法 |
| 1.4.5 用Transwell共培养PBMCs与 DMSCs |
| 1.4.6 用CCK-8 法检测PBMCs的增殖能力 |
| 1.4.7 实时荧光定量PCR检测PBMCs表达的炎症因子 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同因素处理后DMSCs形态学的观察 |
| 2.1.1 分离、培养出的正常DMSCs的形态观察 |
| 2.1.2 血清、PBMCs刺激后DMSCs的形态学观察 |
| 2.2 银屑病血清及PBMCs刺激后DMSCs的 miR-155 及其靶基因的表达情况 |
| 2.2.1 实时荧光定量PCR检测血清及PBMCs刺激后DMSCs的 miR-155 及其靶基因的mRNA表达水平 |
| 2.2.2 Western Blot检测血清组DMSCs的 miR-155 靶基因TAB_2的蛋白表达水平 |
| 2.3 银屑病血清及PBMCs刺激后DMSCs的免疫调节相关因子的表达情况 |
| 2.3.1 实时荧光定量PCR检测血清及PBMCs刺激后DMSCs免疫调节因子的mRNA表达水平 |
| 2.3.2 Western Blot检测血清组DMSCs的免疫调节因子的蛋白表达水平 |
| 2.4 银屑病血清刺激后DMSCs的免疫调节功能的变化 |
| 2.4.1 与刺激后DMSCs共培养后的PBMCs的细胞形态 |
| 2.4.2 血清刺激后DMSCs对 PBMCs增殖水平的影响 |
| 2.4.3 血清刺激后DMSCs对 PBMCs表达细胞因子水平的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 银屑病血清诱导了 DMSCs的 miR-155 高表达,并抑制了 TAB_2的表达 |
| 3.2 银屑病血清通过上调DMSCs的 miR-155 抑制了免疫调节因子的表达 |
| 3.3 银屑病血清刺激后DMSCs的免疫抑制功能降低 |
| 3.4 刺激后DMSCs的功能异常可能参与了银屑病的发病过程 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞对T细胞免疫调节机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）ILT4调控非小细胞肺癌血管生成的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 ILT4对非小细胞肺癌血管生成的作用和预后分析 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第二部分 ILT4调控非小细胞肺癌血管内皮细胞迁移和血管生成的机制研究 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第三部分体内验证ILT4通过诱导血管生成促进肿瘤进展 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述:ILT4和VEGF-A的研究现状与进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文Ⅰ |
| 外文论文Ⅱ |
（5）间充质干细胞在心脏移植免疫耐受诱导中的重要作用（论文提纲范文）
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 质量评估 |
| 2 结果Results |
| 2.1 间充质干细胞对免疫系统的影响 |
| 2.1.1 T细胞 |
| 2.1.2 树突状细胞 |
| 2.1.3 B细胞 |
| 2.1.4 巨噬细胞 |
| 2.1.5 微环境 |
| 2.1.6 体外共培养及细胞毒性T细胞 |
| 2.1.7 旁分泌(胞外囊泡) |
| 2.2 间充质干细胞移植改善心脏移植预后 |
| 2.3 心脏移植免疫耐受诱导的探索 |
| 2.3.1 心脏移植免疫耐受与免疫细胞凋亡 |
| 2.3.2 心脏移植免疫耐受与T细胞 |
| 2.3.3 阻断激活信号 |
| 2.3.4 心脏移植免疫耐受与树突状细胞 |
| 2.3.5 嵌合现象的诱导 |
| 2.3.6 儿童ABO血型不合的心脏移植 |
| 2.3.7 其他 |
| 3 总结与展望Summary and prospects |
（6）白介素17干扰骨髓间充质干细胞免疫抑制作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 英文摘要 符号说明 前言 第一部分 |
| 骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定 一、材料和方法 二、结果 三、小结 四、讨论 第二部分 |
| 白介素17对骨髓间充质干细胞抑制淋巴细胞增殖作用影响的体外实验 一、材料和方法 二、结果 三、小结 四、讨论 第三部分 |
| 白介素17干扰骨髓间充质干细胞诱导同种异体皮肤移植免疫耐受作用的实验研究 一、材料和方法 二、结果 三、小结 四、讨论 结论 参考文献 综述 参考文献 致谢 攻读学位期间发表的学术论文 学位论文评阅及答辩表 外文论文一 外文论文二 |
（7）间充质干细胞治疗急性移植物抗宿主病机制及应用进展（论文提纲范文）
| 1 MSC的抗a GVHD的作用 |
| 2 MSC对DC的免疫调节作用 |
| 3 MSC对T细胞的免疫调节作用 |
| 4 MSC对NK细胞的免疫调节作用 |
| 5 MSC对B细胞的免疫调节作用 |
| 6 MSC对巨噬细胞的免疫调节作用 |
| 7 MSC治疗aGVHD的临床应用 |
| 8 结语 |
（8）滤泡辅助T细胞及单核/巨噬细胞来源的外泌体在肾移植术后抗体介导的排斥反应中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 CD4+CXCR5+外泌体与肾移植术后ABMR的相关性研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料及方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 ABMR患者外周血Tfh来源外泌体对B细胞的影响 |
| 一、前言 |
| 二、材料及方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 单核细胞/巨噬细胞通过外泌体靶向递送HLA-G至内皮细胞 |
| 一、前言 |
| 二、材料及方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 外泌体在免疫应答中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章 |
| 致谢 |
（9）Galectin-1诱导耐受性树突状细胞联合凋亡淋巴细胞延长大鼠移植肝术后生存的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文缩略词 |
| 第一部分 Galectin-1诱导大鼠耐受性树突状细胞与凋亡淋巴细胞诱导耐受性免疫微环境的研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 1.6 参考文献 |
| 第二部分 DC_(gal-1)联合凋亡淋巴细胞延长大鼠肝移植术后生存的研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 2.6 参考文献 |
| 综述 耐受性树突状细胞的特征,诱导及作用 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（10）人诱导多能干细胞来源的间充质干细胞调控小鼠免疫反应的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 干细胞 |
| 1.1.1 干细胞的种类 |
| 1.1.2 干细胞的应用 |
| 1.2 免疫应答 |
| 1.2.1 B细胞介导的免疫应答 |
| 1.2.2 T淋巴细胞介导的免疫应答 |
| 1.3 干细胞与免疫调控 |
| 1.3.1 MSCs的免疫原性 |
| 1.3.2 MSCs免疫调节作用 |
| 1.3.3 MSCs发挥免疫调节作用的机制 |
| 1.4 研究目的、内容和研究意义 |
| 1.4.1 研究目的 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 研究意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 细胞移植模型构建 |
| 2.2.3 淋巴细胞分离 |
| 2.2.4 细胞免疫学检测 |
| 2.2.5 细胞增殖检测 |
| 2.2.6 分子生物学检测 |
| 2.2.7 抗体芯片检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 第三章 结果与讨论 |
| 3.1 人IPS-MSCS抑制小鼠免疫排斥 |
| 3.1.1 人iPS-MSCs细胞的免疫表型鉴定 |
| 3.1.2 干细胞移植模型的建立 |
| 3.1.3 干细胞移植后免疫排斥水平的检测 |
| 3.1.4 干细胞移植后细胞存活检测 |
| 3.1.5 小结 |
| 3.2 干细胞移植抑制受体小鼠脾细胞免疫反应 |
| 3.2.1 干细胞移植抑制小鼠脾细胞增殖 |
| 3.2.2 干细胞移植抑制小鼠脾脏细胞中T细胞亚群 |
| 3.2.3 干细胞移植下调CD3~+T细胞数量,上调Foxp3调节性T细胞数量 |
| 3.2.4 干细胞移植调控小鼠脾脏中细胞因子mRNA水平表达和血清中细胞因子的表达 |
| 3.2.5 小结 |
| 3.3 干细胞通过旁分泌途径抑制小鼠T细胞激活 |
| 3.3.1 干细胞抑制小鼠T细胞增殖 |
| 3.3.2 干细胞抑制小鼠T细胞增殖不依赖于细胞间接触 |
| 3.3.3 干细胞下调小鼠T细胞亚群内Th1、Th2数量 |
| 3.3.4 小结 |
| 3.4 干细胞表达分泌大量免疫调控因子 |
| 3.4.1 干细胞表达分泌大量的可溶性因子 |
| 3.4.2 干细胞分泌蛋白部分结果验证 |
| 3.4.3 干细胞分泌蛋白的Go oncology分析 |
| 3.4.4 小结 |
| 3.5 干细胞移植调控小鼠脾脏内信号通路转导 |
| 3.5.1 干细胞表达分泌可溶性蛋白调控细胞周期和细胞死亡 |
| 3.5.2 干细胞移植调控小鼠脾脏细胞周期蛋白表达 |
| 3.5.3 干细胞移植调控小鼠脾脏细胞凋亡信号通路 |
| 3.5.4 凋亡信号通路与T细胞激活以及Th1、Th2之间的关系 |
| 3.5.5 小结 |
| 3.6 干细胞移植调控小鼠免疫反应不完全通过TGF-B细胞通路 |
| 3.6.1 TGF-β抑制conA诱导的T细胞增殖 |
| 3.6.2 TGF-β抑制conA诱导的Th1、Th2数量增加 |
| 3.6.3 TGF-β调控的周期蛋白和凋亡信号通路变化 |
| 3.6.4 小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一: 图表索引 |
| 附录二: 抗体芯片检测的276个差异表达蛋白 |
| 附录二: 缩略语及中英文对照 |
| 致谢 |
四、可溶性HLA-G1上调活化的同种反应性T细胞表达FasL促进其凋亡（论文参考文献）
- [1]间充质干细胞对T细胞免疫调节机制的研究进展[J]. 王方迪,侯瑞霞,李俊琴,李新华. 中国免疫学杂志, 2021
- [2]人羊膜间充质干细胞抑制同种异体小鼠心脏移植免疫排斥损伤作用microRNA表达初步探究[D]. 毛鑫. 遵义医科大学, 2021(01)
- [3]银屑病患者血清通过诱导miR-155抑制间充质干细胞的免疫调节功能[D]. 王方迪. 山西医科大学, 2021(01)
- [4]ILT4调控非小细胞肺癌血管生成的作用和机制研究[D]. 宫文静. 山东大学, 2021(11)
- [5]间充质干细胞在心脏移植免疫耐受诱导中的重要作用[J]. 毛鑫,余丽梅,王峰. 中国组织工程研究, 2021(13)
- [6]白介素17干扰骨髓间充质干细胞免疫抑制作用的实验研究[D]. 马腾霄. 山东大学, 2019(02)
- [7]间充质干细胞治疗急性移植物抗宿主病机制及应用进展[J]. 刘茂兰,史明霞. 实用医学杂志, 2019(11)
- [8]滤泡辅助T细胞及单核/巨噬细胞来源的外泌体在肾移植术后抗体介导的排斥反应中的作用及机制研究[D]. 杨锦涛. 中国人民解放军医学院, 2019(02)
- [9]Galectin-1诱导耐受性树突状细胞联合凋亡淋巴细胞延长大鼠移植肝术后生存的研究[D]. 彭一帆. 浙江大学, 2019(03)
- [10]人诱导多能干细胞来源的间充质干细胞调控小鼠免疫反应的机制研究[D]. 李成林. 厦门大学, 2015(01)