一、脑出血血肿周围半影区的病理生理研究进展（论文文献综述）
李淼[1]（2021）在《眼针对CI/RI模型大鼠神经营养因子表达的影响》文中进行了进一步梳理目的:通过观测眼针疗法对脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia/reperfusion injury,CI/RI）模型大鼠脑内脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）、胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）等神经营养因子表达水平的影响,探讨眼针改善缺血性脑卒中的作用机制,并为眼针更广泛地应用于临床提供证据支持。材料与方法:本实验选用72只成年SPF级SD大鼠,雄雌各半。适应性喂养7d后采用随机数字表法将所有动物按照1:3的比例随机分为2组:假手术组18只,造模组54只。造模组大鼠以改良线栓法制备CI/RI模型,假手术组大鼠施以相同手术方式但不做实质性栓塞。模型制备后2组大鼠分别以Zea Longa5分制评分标准判定神经功能缺损情况;各随机抽取1只用TTC染色法判断梗死灶的有无。模型确立后,采用随机数字表法将造模组大鼠分为模型对照组、非经非穴组、眼针治疗组。其中假手术组及模型对照组不做处理,正常饲养至其他组别干预结束;眼针治疗组分别于再灌注3h后、再灌注12h后、再灌注24h后施以眼针斜刺“肝区”、“肾区”、“上焦区”、“下焦区”,平补平泻;非经非穴组于眼针穴区外侧约5mm的位置进行针刺,干预时机与眼针治疗组保持一致。干预结束后,观察各组大鼠一般情况并进行行为学评价及指标测定:以Zea Longa5分制评分法进行行为学检测;采用HE染色法观测大鼠脑组织病理形态学变化;免疫组织化学法检测大鼠缺血半影区BDNF、NGF、GDNF及bFGF表达情况;ELISA法测定大鼠缺血半影区BDNF、NGF、GDNF及bFGF蛋白含量;尼氏染色法观察神经元损伤情况并对阳性神经元进行计数。结果:1.造模后,神经功能缺损评分显示:与假手术组相比,造模组评分显着升高（P<0.01）,差异有统计学意义。2.造模后,TTC染色结果显示:与假手术组相比,造模组脑组织内出现白色团块,提示有梗死灶存在。3.干预后,行为学评分表明:与模型对照组对照相比,眼针治疗组评分显着降低（P<0.01）,非经非穴组无统计学差异（P>0.05）。4.干预后,HE染色结果显示:假手术组未见细胞水肿及变性;模型对照组细胞完整性被破坏,与假手术组形成鲜明对比;非经非穴组与模型对照组观察到的结果相近;眼针治疗组神经细胞轮廓较清晰,较造模后呈恢复趋势。5.干预后,免疫组织化学法结果显示:与假手术组对比,模型对照组缺血半影区BDNF、NGF、GDNF及bFGF的表达水平显着降低（P<0.01）;与模型对照组相比,非经非穴组的BDNF、NGF、GDNF及bFGF表达无明显变化,差异不具备统计学意义（P>0.05）;与模型对照组相比,眼针治疗组BDNF、NGF、GDNF及bFGF的表达水平表达显着升高（P<0.01）。6.干预后,ELISA结果显示:与假手术组对比,模型对照组缺血半影区BDNF、NGF、GDNF及bFGF的含量显着降低（P<0.01）;与模型对照组相比,非经非穴组BDNF、NGF、GDNF及bFGF的含量无明显变化,差异不具备统计学意义（P>0.05）;与模型对照组相比,眼针治疗组的BDNF、NGF、GDNF及bFGF含量显着升高（P<0.01）。7.干预后,尼氏染色结果显示:假手术组着色明显,富含大量的尼氏小体;与假手术组相比,模型对照组尼氏小体数量骤减,神经细胞大量丢失（P<0.01）;非经非穴组与模型对照组相比基本无差异,不具有统计学意义（P>0.05）;与模型对照组相比,眼针治疗组尼氏小体数量回升,阳性神经细胞数明显增多（P<0.01）。结论:1.眼针疗法可有效改善CI/RI模型大鼠肢体功能障碍,并于一定程度上缓解其脑组织损伤。2.眼针干预肝区、肾区、上焦区、下焦区能明显上调CI/RI模型大鼠缺血半影区BDNF、NGF、GDNF、bFGF等神经营养因子的表达水平。3.眼针疗法能有效改善CI/RI模型大鼠缺血半影区神经元功能并增加阳性神经元数目,可能与神经营养因子在为神经元提供营养,促进其增殖的同时,诱导血管新生以减少神经元的继发损伤,影响了神经元转归有关。
任思颖[2]（2020）在《miR-18a靶向调控RUNX1影响大鼠脑出血后血脑屏障通透性的分子机制研究》文中研究说明目的:微小RNA（mi RNA）与脑水肿的形成密切相关,但其机制尚不清楚。本研究旨在探讨脑出血后mi R-18a是否通过靶向结合RUNX1导致血脑屏障（Blood-brain Barrier,BBB）紧密连接相关蛋白Occludin和ZO-1表达减少从而导致BBB通透性增高进而形成脑水肿的分子机制。方法:1.细胞实验:体外培养脑微血管内皮细胞（Brain Microvascular Endothelial Cell,BMVEC）与星形胶质细胞（Astrocyte,AC）,采用VIII因子及神经胶质原纤维酸性蛋白（Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP）相关抗原免疫荧光分别鉴定BMVEC和AC表达,建立BMVEC与AC共培养的体外BBB细胞模型,分为八组:（1）模型组（model）:BBB细胞模型建立好后加入20U/m L凝血酶培养24h构建体外脑出血BBB细胞模型;（2）过表达对照组:按照MOI=1:10（Multiplicity of Infection,MOI,即感染复数,指感染时病毒与细胞数量的比值）的比例加入mi R-18a过表达对照的腺病毒（空载体）;（3）mi R-18a过表达组（mi R-18a）:按照MOI=1:10的比例加入过表达mi R-18a的腺病毒（可以计算成细胞数量的10倍的病毒）;（4）干扰对照组:按照MOI=1:10的比例加入mi R-18a干扰对照的腺病毒（空载体）;（5）mi R-18a干扰组（sh-mi R-18a）:按照MOI=1:10的比例加入干扰mi R-18a的腺病毒;（6）正常对照组:按照MOI=1:10的比例加入RUNX1过表达对照的腺病毒（空载体）;（7）mi R-18a和RUNX1同时过表达组（mi R-18a+RUNX1）:按照MOI=1:10的比例分别加入过表达mi R-18a及过表达RUNX1的腺病毒;（8）mi R-18a和RUNX1同时干扰组（sh-mi R-18a+sh-RUNX1）:按照MOI=1:10的比例分别加入干扰mi R-18a及干扰RUNX1的腺病毒。通过腺病毒转染技术调控mi R-18a和RUNX1表达,应用跨内皮细胞电阻值（Transendothelial Electric Resistance,TEER）和荧光素钠（Fluorescein Sodium,Na-Flu）通透性实验评估体外脑出血BBB细胞模型的通透性,q RT-PCR及Western Blot检测mi R-18a、RUNX1、Occludin和ZO-1m RNA相对含量及蛋白水平的表达,采用双荧光素酶报告基因实验验证mi R-18a与RUNX1的靶向结合。2.动物实验:建立SD大鼠脑出血模型,分为六组:（1）假手术组（sham组,模拟大鼠脑出血的造模过程,不注血,作为对照组）;（2）脑出血模型组（model组,大鼠基底节区注入自体非抗凝动脉血50μL制备脑出血模型）;（3）mi R-18a过表达组（mi R-18a组,脑出血模型大鼠血肿周围4个点位置各注入过表达mi R-18a的腺病毒1μL）;（4）mi R-18a干扰组（sh-mi R-18a组,脑出血模型大鼠血肿周围4个点位置各注入干扰mi R-18a的腺病毒1μL）;（5）mi R-18a过表达+RUNX1过表达组（脑出血模型大鼠血肿周围4个点位置各注入过表达mi R-18a及过表达RUNX1的腺病毒2μL,注射前等体积混合病毒）;（6）mi R-18a干扰+RUNX1干扰组（sh-mi R-18a+sh-RUNX1组,脑出血模型大鼠血肿周围4个点位置各注入干扰mi R-18a及干扰RUNX1的腺病毒2μL,注射前等体积混合病毒）,以上六组大鼠每组又分为3d、5d、7 d三个亚组,每组10只大鼠,n=30。通过腺病毒转染技术调控mi R-18a和RUNX1表达,q RT-PCR及Western Blot检测血肿周围脑组织mi R-18a、RUNX1、Occludin和ZO-1m RNA相对含量及蛋白水平的表达,免疫荧光染色观察血肿周围脑组织RUNX1、Occludin和ZO-1蛋白的表达,同时观察大鼠神经功能评分、BBB通透性及脑组织水含量变化,应用染色质免疫共沉淀（Ch IP）技术检测RUNX1与Occludin和ZO-1基因启动子区域的结合情况。结果:1.细胞实验:（1）通过VIII因子及GFAP相关抗原免疫荧光成功鉴定BMVEC与AC;（2）与模型组（model）比较,过表达mi R-18a导致体外脑出血BBB细胞模型TEER值降低、Na-Flu的比例增高,提示BBB通透性增高,组间差异有统计学意义（P<0.05）,干扰mi R-18a则导致TEER值增高、Na-Flu的比例下降,表明BBB通透性降低,组间差异有统计学意义（P<0.05）;（3）q RT-PCR及Western Blot均表明,与model组比较,过表达mi R-18a导致RUNX1、Occludin和ZO-1m RNA相对含量及蛋白水平下降,组间差异有统计学意义（P<0.05）,干扰mi R-18a则导致上述三种蛋白表达增加,组间差异有统计学意义（P<0.05）;（4）双荧光素酶报告基因实验表明,mi R-18a+RUNX1野生型质粒组相对荧光素酶活性较阴性对照+RUNX1野生型质粒组明显降低（P<0.05）,表明mi R-18a能够与RUNX1m RNA 3′UTR结合,有效抑制野生型质粒荧光素酶活性,而mi R-18a+RUNX1突变型质粒组相对荧光素酶活性与阴性对照+RUNX1突变型质粒组比较无统计学意义（P>0.05）,说明对RUNX1预测靶位点进行突变后,mi R-18a即无法与RUNX1突变型质粒结合,对荧光素酶活性无影响,表明mi R-18a同RUNX1具有靶向结合作用,RUNX1是mi R-18a的靶基因。2.动物实验:（1）成功建立SD大鼠脑出血模型;（2）q RT-PCR及Western Blot均表明,与模型组（model）比较,过表达mi R-18a导致RUNX1、Occludin和ZO-1m RNA相对含量及蛋白水平下降,干扰mi R-18a则导致上述三种蛋白表达增加,组间差异有统计学意义（P<0.05）;（3）免疫荧光染色表明,与model组比较,过表达mi R-18a导致血肿周围脑组织RUNX1、Occludin和ZO-1蛋白表达减少,干扰mi R-18a则导致上述三种蛋白表达增加,组间差异有统计学意义（P<0.05）;（4）大鼠神经功能评分在3d组达到峰值,5d组略有下降,7d组评分最低。与model组比较,过表达mi R-18a导致大鼠神经功能评分增加,干扰mi R-18a导致神经功能评分降低,表明干扰mi R-18a大鼠神经功能有改善,组间差异有统计学意义（P<0.05）;（5）BBB通透性,与model组比较,过表达mi R-18a导致BBB通透性增高,干扰mi R-18a则导致BBB通透性降低,组间差异有统计学意义（P<0.05）;（6）血肿周围脑组织含水量,与model组比较,过表达mi R-18a导致脑含水量增高,反之则减少,组间差异有统计学意义（P<0.05）;（7）Ch IP-q PCR实验结果表明,与model组比较,过表达mi R-18a抑制了RUNX1与Occulin和ZO-1启动子的结合,干扰mi R-18a促进RUNX1与Occulin和ZO-1启动子的结合,组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.在脑出血模型大鼠血肿周围脑组织中,mi R-18a与RUNX1的表达呈相反趋势,mi R-18a增高,RUNX1降低;2.mi R-18a能够与RUNX1m RNA的3′UTR结合,RUNX1是mi R-18a的靶基因,Occludin和ZO-1是RUNX1调控的目的蛋白,mi R-18a通过调控RUNX1表达从而抑制Occludin和ZO-1蛋白的表达,增加BBB的通透性,加重脑水肿;3.特异性阻断mi R-18a/RUNX1通路后,Occludin和ZO-1表达水平升高,BBB通透性降低,脑水肿程度降低,脑出血大鼠神经功能得到改善;4.在脑出血后第3d、5d、7d天不同时点,mi R-18a、RUNX1、Occludin以及ZO-1的表达不同,BBB的破坏以及脑水肿的严重程度不同,脑出血后3d组BBB通透性达到高峰。
吴芳芳[3]（2019）在《环状RNA TLK1调控缺血性脑卒中神经损伤及其机制研究》文中研究表明研究背景缺血性脑卒中是常见的神经系统疾病,是导致永久性残疾的主要原因。临床治疗,如溶栓治疗,往往受到狭窄治疗时间窗的限制,并且长期疗效不佳。脑缺血后神经元损伤的程度是决定预后的主要因素,因此,拯救受损神经元的治疗选择十分必要。然而,据报道迄今只有少数治疗药物可以缓解卒中后的神经功能缺损,因而迫切需要寻找能够降低神经元损伤的新型治疗方法。环状RNA（circular RNA,circRNA）是新近发现的内源性非编码RNA,其特征在于由反向剪接产生的共价闭合的连续环。许多circRNA在大脑中高表达,尽管其生理功能尚未完全确定,但研究发现circRNA参与神经发育以及多种神经系统疾病。本课题组前期研究发现,circHECTD1通过调节星形胶质细胞活化加重缺血性脑损伤;此外,过表达circDLGAP4改善了卒中后血脑屏障的完整性。然而,circRNA在缺血性脑卒中相关神经元损伤中的潜在作用仍然未知。本课题组前期circRNA表达谱芯片结果发现,circTLK1在缺血皮层组织中表达上调;但circTLK1是否参与调控缺血性脑损伤,特别是神经元损伤,尚未确定。因此,本研究首先探讨circTLK1在成年小鼠短暂性大脑中动脉闭塞（transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO）再灌注后对神经损伤的调控作用,其次探讨circTLK1调控缺血性神经元损伤的分子机制,进一步基于临床急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke,AIS）患者血样分析circTLK1表达变化,探讨circTLK1作为脑缺血神经损伤的生物标志的潜力,为阐明circRNA在脑缺血损伤中的功能提供新的理论支持,有助于深入理解缺血性脑卒中病理生理的调控机制,为今后寻找基于circRNA的缺血性脑卒中生物标志物和治疗靶点奠定基础。第一章circTLK1在缺血性脑卒中神经损伤中的作用目的:探讨circTLK1在成年小鼠短暂性大脑中动脉闭塞后神经损伤中的作用,研究circTLK1在氧糖剥夺诱导的神经元损伤中的作用,为circRNA在缺血性脑卒中相关神经元损伤中的调控作用提供新的实验证据。方法:（1）在整体水平,利用干扰慢病毒、神经元特异性干扰腺相关病毒等工具,在小鼠tMCAO再灌注模型后,通过改良神经功能缺损评分、圆筒试验、粘附-移除试验等行为学检测方法进行脑缺血后小鼠神经功能评估;通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色、磁共振成像、免疫组化染色等方法测定脑缺血后小鼠脑梗死体积或脑萎缩体积;运用高尔基染色技术观察脑缺血后小鼠皮层梗死周围区的神经元的树突形态学以及树突棘数目;运用免疫印迹检测皮层组织凋亡相关蛋白或突触相关蛋白的表达变化。（2）在离体细胞水平,利用原位杂交技术观察circTLK1的细胞定位;利用原代皮层神经元制备氧糖剥夺/再灌注（Oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）模型,结合干扰慢病毒、细胞活力检测、免疫荧光染色等方法评估神经元损伤、神经元树突和树突棘形态学以及轴突长度;运用免疫印迹检测原代神经元的凋亡相关蛋白或突触相关蛋白的表达变化。结果:（1）circTLK1在tMCAO小鼠缺血皮层和血浆中表达升高;（2）敲低circTLK1表达可减少tMCAO小鼠的脑梗死体积;（3）敲低circTLK1可改善tMCAO小鼠的神经功能缺损和长期功能预后;（4）脑缺血后下调脑内circTLK1可显着改善tMCAO小鼠神经功能缺损和躯体感觉功能障碍;（5）神经元特异性干扰circTLK1可改善tMCAO小鼠的神经功能缺损,减少脑萎缩体积;（6）在离体水平,敲低circTLK1可改善OGD/R诱导的神经元细胞活力降低,减少凋亡蛋白表达;（7）在离体水平,敲低circTLK1可改善OGD/R诱导的突触相关蛋白表达降低,增加OGD/R后神经元树突总长度和树突复杂性,增加神经元轴突长度和树突棘密度。结论:circTLK1与小鼠脑缺血后的神经损伤有关,并且参与调控氧糖剥夺再灌注引起的神经元损伤。第二章circ TLK1调控缺血性脑卒中神经损伤的机制研究目的:研究circTLK1调控缺血性脑卒中神经元损伤的分子机制。方法:（1）结合生物信息学分析软件预测以及课题组前期mRNA芯片数据,筛选出能够同时与circ TLK1和靶基因2,3,7,8-四氯二苯并-对-二恶英-诱导性聚（ADP-核糖）聚合酶（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin（TCDD）-inducible poly（ADP-ribose）polymerase,TIPARP）相互作用的mi RNAs;利用亲和分析实验、荧光素酶报告基因实验和q PCR实验等技术,验证mi RNA与circ TLK1的相互作用,以及mi RNA与TIPARP的相互结合。（2）在整体水平,利用神经元特异性干扰腺相关病毒下调TIPARP在脑内表达水平,通过改良神经功能缺损评分、圆筒试验、粘附-移除试验等行为学检测方法进行脑缺血后小鼠神经功能评估;通过磁共振成像测定脑缺血后小鼠脑梗死体积和脑萎缩体积;运用免疫印迹检测皮层组织的凋亡相关蛋白或突触相关蛋白的表达变化。（3）利用转录组测序技术分析TIPARP参与调控缺血性脑卒中神经损伤的潜在机制。结果:（1）circ TLK1通过与mi R-335-3p结合调节下游靶蛋白TIPARP;（2）circ TLK1/mi R-335-3p轴通过下游靶蛋白TIPARP加重神经元损伤;（3）神经元特异性敲低TIPARP可改善t MCAO小鼠神经功能缺损和躯体感觉功能障碍,减少脑萎缩体积,减少凋亡蛋白表达,改善脑缺血诱导的突触相关蛋白表达降低;（4）转录组测序分析结果发现,t MCAO复灌后24小时,在t MCAO+AAV-SYN-sh RNA-TIPARP组和t MCAO+AAV-SYN-sh RNACon组之间的存在516个差异基因;通过生物信息学分析发现这些差异表达基因在参与细胞过程、信号传导途径和神经系统相关的通路中富集;（5）t MCAO复灌后28天的转录组测序分析结果发现,t MCAO+AAV-SYN-sh RNA-TIPARP组和t MCAO+AAV-SYNsh RNA-Con组之间存在192个显着差异表达基因;通过生物信息学分析发现显着差异表达基因富集在参与神经病学、信号传导途径和免疫学调节的生物学过程中富集。结论:circ TLK1/mi R-335-3p/TIPARP轴参与脑缺血性损伤,特别是神经元损伤。上调的circ TLK1与mi R-335-3p结合并充当内源性mi R-335-3p海绵,抑制mi R-335-3p活性以增加mi R-335-3p靶基因TIPARP的表达,导致神经元损伤,进而导致神经功能缺陷。第三章circTLK1在急性缺血性脑卒中患者血浆中表达上调目的:研究circ TLK1在急性缺血性脑卒中患者血浆中的表达变化。方法:（1）对71名（男性59名,女性12名）AIS患者和71名性别年龄匹配的健康对照者的血浆样本通过实时q PCR检测circ TLK1表达水平。（2）根据缺血性脑卒中病因学分型标准,将AIS患者分为:大动脉粥样硬化性卒中（large-artery arteriosclerosis,LA）,小动脉闭塞性卒中或腔隙性卒中（small-artery occlusion,SA）以及心源性脑栓塞三个亚型,分析各亚型患者血浆的circ TLK1表达水平变化。（3）根据影像学检查资料,将AIS患者按照梗死部位分为:皮层梗死、皮层下梗死和幕下梗死三类,分析各类患者血浆的circ TLK1表达水平变化。（4）通过接收者操作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线和ROC曲线下的面积（area under curve,AUC）评估血浆circ TLK1水平的诊断价值。Pearson相关性检验用于评估circ TLK1和LA患者的脑梗死体积之间的相关性。结果:（1）circ TLK1在AIS患者血浆中表达上调;（2）LA和SA患者的血浆circ TLK1水平较对照组显着升高;（3）皮层梗死和皮层下梗死的AIS患者的血浆circ TLK1水平显着增加,但幕下脑梗死患者的血浆circ TLK1水平没有显着改变;（4）通过ROC曲线分析,发现血浆circ TLK1的AUC为0.868,灵敏度为0.789,特异性为0.915;（5）进一步回归分析显示,AIS患者的脑梗死体积越大,血浆circ TLK1表达越高（r=0.7197,p=0.0017）。结论:circ TLK1在急性缺血性脑卒中患者的血浆中表达上调,血浆circ TLK1水平与LA患者脑梗死体积相关。
赵宇琳[4]（2019）在《高压氧结合常规康复对脑卒中肢体运动功能障碍影响的临床观察》文中提出目的:观察高压氧结合常规康复对脑卒中肢体运动功能障碍恢复的影响。方法:课题纳入桂林市人民医院康复科收治住院的108例脑卒中运动障碍患者作为研究对象。观察组54例,采用高压氧+常规康复治疗,1次/日,5次/周,2周/1疗程,2疗程;对照组54例,采用常压吸氧+常规康复治疗,1次/日,5次/周,2周/1疗程,2疗程。采用简化Fugl-Meyer运动功能评分法及改良ADL（日常生活能力量表）评分法（Barthel指数法）,统计治疗总有效率,对以上显示结果进行分析,探讨高压氧结合常规康复疗法对脑卒中运动障碍患者肢体运动功能和日常生活能力的具体作用以及应用价值。结果:1.两组患者治疗1疗程后、2疗程后的ADL评分均显着高于治疗前（P<0.05）,而治疗2疗程后的ADL评分又均显着高于治疗1疗程后（P<0.05）;治疗1疗程后、2疗程后观察组患者的ADL评分均显着高于对照组（P<0.05）。2.两组患者治疗1疗程后、2疗程后的上肢、下肢Fugl-Meyer运动功能评分均显着高于治疗前（P<0.05）,而治疗2疗程后的上肢、下肢Fugl-Meyer运动功能评分又均显着高于治疗1疗程后（P<0.05）;治疗1疗程后、2疗程后观察组患者的上肢、下肢Fugl-Meyer运动功能评分均显着高于对照组（P<0.05）。3.两组患者治疗1疗程后、2疗程后的NIHSS评分均显着低于治疗前（P<0.05）,而治疗2疗程后的NIHSS评分又均显着低于治疗1疗程后（P<0.05）;治疗1疗程后、2疗程后观察组患者的NIHSS评分均显着低于对照组（P<0.05）。4.两组患者治疗1疗程后、2疗程后的MMSE评分均显着高于治疗前（P<0.05）,而治疗2疗程后的MMSE评分又均显着高于治疗1疗程后（P<0.05）;治疗1疗程后、2疗程后观察组患者的MMSE评分均显着高于对照组（P<0.05）。5.两组患者治疗1疗程后、2疗程后的躯体功能、精神健康、社会功能、生理职能、身体疼痛、情感职能、总体健康、活力评分均显着高于治疗前（P<0.05）,而治疗2疗程后的躯体功能、精神健康、社会功能、生理职能、身体疼痛、情感职能、总体健康、活力评分又均显着高于治疗1疗程后（P<0.05）;治疗1疗程后、2疗程后观察组患者的躯体功能、精神健康、社会功能、生理职能、身体疼痛、情感职能、总体健康、活力评分均显着高于对照组（P<0.05）。6.观察组患者中痊愈35例,有效16例,治疗的总有效率为98.08%（51/52）;对照组患者中痊愈28例,有效14例,治疗的总有效率为82.35%（42/51）。观察组51例患者治疗总有效率明显优于对照组,对比差异有统计学意义（P<0.05）。结论:高压氧结合康复治疗可有效改善患者的ADL（日常生活）能力,促进运动功能的恢复,使患者的生活质量得到明显提高,是预防和减轻致残的关键。具有推广和借鉴价值。
曹英肖[5]（2019）在《缺血性脑卒中相关miRNA和靶基因miR-424的分析研究》文中研究说明第一部分缺血性脑卒中相关差异miRNA和靶基因的筛选目的:本研究通过生物信息学方法对已发表缺血性脑卒中相关的mRNA和miRNA高通量数据进行整合分析,运用多种工具、算法分析和预测靶向miRNA-mRNA关系,然后用Cytoscape软件构建由miRNAs和mRNAs组成的生物信息调控网络,预测miRNA参与调控缺血性脑卒中的关键分子通路。方法:首先从GEO数据库（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）检索并下载源自缺血性脑卒中患者、利用二代测序技术获得的mRNA和miRNA表达数据,利用R软件进行分析,将miRNA表达数据进行总体归一化处理,分析其中的差异表达miRNA,基因本体数据库（Gene ontology,GO）分析分子功能、生物学过程和细胞组通过KEGG数据库,分析基因组序列、功能以及通路信息。采用miRNA靶基因预测工具数据库筛选差异表达的miRNA的靶基因。结果:通过对纳入的卒中患者相关的miRNA和mRNA原始数据进行分析,筛选差异表达的miRNA及mRNA。共筛选获得15个差异表达miRNA,其中显着下调的有10个,显着上调的有5个。共筛选得到差异表达基因1178个,其中显着下调的有550个,显着上调的有628个。用Cytoscape软件我们筛选的靶基因构成的网络图共有971个关系。结论:本部分初步筛选以上miRNA和关键靶基因与缺血性脑卒中患者的转移有关,为缺血性脑卒中发病的机理研究提供了一些候选靶点,后续将进一步实验确证分析结果,并在体外培养的缺血性脑卒中动物模型中深入研究其调控作用机理。为了更好的研究差异表达靶基因的功能,我们分别对11178个差异表达的基因分别进行GO功能注释和KEGG通路富集分析,共1026个基因显着富集到GO功能和KEGG通路,其中前15个显着富集的GO功能和KEGG通路。第二部分缺血性脑卒中候选miRNA的验证目的:我们应用荧光实时定量PCR方法对收集的缺血性脑卒中样本进行检测分析,以验证miRNA与靶基因的表达及靶向关系,从而对缺血性脑卒中的发病机理进行探究,寻找新的分子标志物和潜在的诊断或治疗靶标。方法:我们募集了80名患者（年龄65.1±8.4岁）,神经病学门诊部,并被诊断为缺血性脑卒中患者。对所有入选的研究对象进行一般情况采集,包括出生年月、性别和病史采集,其中病史采集包括高血压病、糖尿病等。测定生化指标。提取患者RNA提取,采用qRT-PCR方法检测基因的表达。结果:纳入分析的缺血性脑卒中患者和对照组都是80例,与正常组相比,脑卒中患者并发高血压、糖尿病的患者明显增高;抽烟和酒精的比例也高于对照组;生化指标SBP、DBP、血糖、TG、HDL、LDL指标明显比对照组健康程度差（P<0.05）。对筛选获得的差异表达miRNA和5个连接度最大的关键靶基因,采用qRT-PCR实验对采集的缺血性脑卒中血液中的部分miRNA和关键靶基因在的表达进行检测。结果显示,与正常组相比,缺血性脑卒中患者中的NOTCH1、PIP4K2B和DIP2B表达上调,而IGFBP5和hsa-miR-424表达下调。结论:本部分研究初步表明,以上miRNA和关键靶基因与缺血性脑卒中的发生相关,这为缺血性脑卒中发病的机理研究提供了一些候选靶点。第三部分miR-424参与缺血性脑卒中发展的分子机制研究目的:研究治疗缺血性脑卒中的药物的新靶点具有重要意义。在本研究中,我们探讨了miR-424在氧葡萄糖剥夺（OGD）中的神经保护作用,在PC-12细胞中引起的伤害。方法:PC-12细胞接受了OGD刺激来模拟缺血性损伤。通过与miR-424模拟、miR-424抑制剂、pEX-MKP-1或sh-MKP-1的短暂转染改变了miR-424和丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1（MKP-1）的表达方式。细胞计数基-8（CCK-8）试验、流式细胞学、定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测细胞存活能力、凋亡细胞和miR-424和MKP-1的表达。蛋白质表达的几个因素是由蛋白质印迹决定的。同时,对相关的荧光素酶活性测定进行了验证,以验证预测的目标关联。结果:OGD通过抑制细胞存活和诱导细胞凋亡,导致了PC-12细胞的损伤。通过增加细胞生存能力和减少细胞凋亡,对miR-424细胞的过度表达保护了PC-12细胞。MKP-1是miR-424的直接目标,它的表达式受到miR-424的负调控。通过抑制缺氧诱导因子1α(（HIF-1α）的表达,从而抑制了PI3K/AKT/mTOR途径,加强了对MKP-1的表达,从而加剧了OGD诱导细胞损伤。结论:miR-424通过对MKP-1表达的直接抑制,保护PC-12细胞免受OGD诱导损伤,因为MKP-1通过抑制HIF-1α和PI3K/AKT/mTOR途径的表达,促进了OGD诱导的细胞损伤。
张展展[6]（2019）在《高血压性脑出血患者血清BDNF、ET-1与神经功能缺失的相关性研究》文中研究表明目的:通过动态检测血清中内皮素1（Endothelin-1,ET-1）、脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）等生物标记物含量,探讨其含量变化与高血压性脑出血患者神经功能修复的相关性,为临床治疗提供新思路。方法:收集自2018年1月至2019年1月期间,河北医科大学第二医院神经外科收治的脑出血开颅手术患者共53例,并选取22名健康体检者为对照组。53例颅脑出血患者依据高血压性脑出血（Hypertensive Intracerebral Hemorrhage,HICH）临床诊断标准,分为高血压性脑出血组（41例）和单纯脑出血组（12例）,采用格拉斯哥昏迷评分对意识障碍进行评定。根据血肿量、格拉斯哥昏迷评分分别将高血压性脑出血组分为3个亚组（大量、中等大量、特大量组;轻、中、重度昏迷）。采用酶联免疫吸附测定法测定脑出血术前及术后第1d、7d血清中ET-1、BDNF的表达水平。通过分析ET-1、BDNF的统计学差异,阐述ET-1与BDNF之间的关系及其与HICH患者神经功能恢复的临床治疗。结果:脑出血组各时间点ET-1、BDNF均高于对照组。不同时期高血压脑出血组可见血清ET-1均高于单纯脑出血组表达,而BDNF相反;随着出血量增大,术前血清ET-1呈现高表达水平,而BDNF呈现低表达水平。患者术前血清ET-1表达水平与意识障碍程度呈负相关,而BDNF浓度与意识障碍呈正相关;术前血清ET-1与BDNF表达水平呈负相关。结论:通过分析ET-1、BDNF的表达水平,判断高血压性脑出血患者病情的轻重程度;血清ET-1表达水平可为患者判断预后提供依据,而BDNF含量对神经功能缺失修复需待进一步研究。
程琼[7]（2018）在《牛膝活性肽的分离鉴定及生物学作用研究》文中认为目的:损伤神经修复与功能重建是当今生物医学领域研究的热点,临床迫切需要开发具有促神经元生长及神经保护作用的新药。本实验室采用盐析技术从传统中药牛膝中提取得到牛膝多肽混合物（Achyranthes bidentata polypeptides,ABPP）,具有较好的促神经损伤修复及神经保护作用。本研究采用反相高效液相色谱和质谱联用技术,在活性指导下对ABPP进行逐级分离,得到牛膝活性肽单体,进行结构表征,并探讨其促神经生长和抗脑缺血损伤的生物学作用。方法:第一部分:牛膝活性肽的分离鉴定1、采用盐析法制备ABPP;采用C18反相色谱梯度分离ABPP;通过体外促神经元生长及神经元氧糖剥夺损伤模型,筛选ABPP中的活性组分。2、采用生物C18反相色谱结合Q-TOF质谱对筛选得到的活性组分进行分离鉴定;通过体外促神经元生长模型,筛选其中的单体牛膝活性肽,采用Edman降解和核磁共振技术对牛膝活性肽进行氨基酸序列和二级结构分析。第二部分:牛膝活性肽促神经元生长的作用1、采用体外培养的胎鼠海马神经元生长模型,通过实时细胞分析系统检测不同浓度（4ng/ml,20ng/ml,100ng/ml）牛膝活性肽对海马神经元生长指数的影响;通过免疫细胞化学染色观察牛膝活性肽对海马神经元生长锥表面积、丝状伪足长度、轴突长度、突起数目、分支数目、突触密度的影响;通过活细胞工作站观察牛膝活性肽对海马神经元突起生长速度的影响;通过Western blot检测牛膝活性肽对突触后致密蛋白表达的影响。2、采用体外培养的胎鼠海马神经元生长模型,在培养体系中加入牛膝活性肽,于不同时间点（0h,0.25h,1h,4h,12h）提取总RNA,进行转录组测序,通过生物信息学技术分析牛膝活性肽参与调控海马神经元生长的核心基因。第三部分:牛膝活性肽对脑缺血再灌注损伤的保护作用1、采用体外培养的胎鼠皮层神经元氧糖剥夺模型,通过CCK-8试剂盒检测不同浓度（8 ng/ml,40 ng/ml,200 ng/ml）牛膝活性肽对神经元活力的影响;通过DCFH-DA荧光探针检测牛膝活性肽对神经元活性氧含量的影响;通过JC-1荧光探针检测牛膝活性肽对神经元线粒体膜电位的影响;通过Hoechst染色观察牛膝活性肽对神经元凋亡小体的影响;通过Western blot分析牛膝活性肽对神经元凋亡相关蛋白表达的影响。2、采用线栓法建立大鼠MCAO模型,通过TTC染色法观察不同剂量（0.1 mg/kg,0.5 mg/kg,1.0 mg/kg）牛膝活性肽对脑梗死体积的影响;通过黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定脑组织中SOD活力和MDA含量;通过尼氏染色观察牛膝活性肽对缺血半影区神经元完整性的影响;通过荧光右旋糖酐静脉灌注脑血管造影,观察牛膝活性肽对缺血半影区脑血管通畅率的影响;通过免疫组织化学染色,观察牛膝活性肽对脑血管内皮纤维蛋白和血小板沉积的影响,对多形核白细胞浸润的影响;通过荧光原位明胶酶谱法观察牛膝活性肽对脑缺血半影区基质金属蛋白酶活化的影响;通过Western blot检测牛膝活性肽对脑组织凋亡相关蛋白的影响;通过神经缺陷评分和水迷宫试验,观察牛膝活性肽对大鼠长期神经缺陷和学习记忆能力的影响。结果:第一部分:牛膝活性肽的分离鉴定1、通过C18反相色谱柱梯度分离ABPP,得到12个二级组分,体外活性筛选实验发现,其中第11个组分（按各二级组分出峰顺序,以英文字母排序,将其称作ABPPk）具有显着的促神经元生长和抗氧糖剥夺损伤的生物学作用（中国发明专利:201310108655.6）。2、通过生物C18反相色谱结合Q-TOF质谱,进一步分离ABPPk,得到2个单体肽,分别称之为ABPPk1和ABPPk2,通过体外细胞实验,确认其中的ABPPk2具有促神经元生长活性。采用Edman降解法测定ABPPk2的氨基酸序列为CXXXXXXCIPGXXXXCCXXVCVPIVTXXXXXXY,逐步衍生和核磁共振分析显示,其二级结构为3对二硫键形成的反向平行折叠结构。（鉴于发明专利尚未申报,故暂未列出一、二级结构,其中部分氨基酸序列用X代替）第二部分:牛膝活性肽促神经元生长的作用1、ABPPk2能显着促进海马神经元的生长,并可显着增加海马神经元突起生长锥面积和丝状伪足长度、突起长度和突起数目、突起分支数目、突触密度,并上调突触后致密蛋白的表达;明显加快海马神经元突起生长速度。2、海马神经元转录组测序及生物信息学分析结果显示,ABPPk2可显着上调转录因子、神经发生和神经元分化相关基因;通过WGCNA-GO分析得到13个核心基因 Satb2、Tmem2、Dlx1、Trim66、RGD1563615、Ctse、Rpap1、Ano1、Lhx8、Lgi1、Lrfn5、Ppp1r1b及Vax1;对其中一个核心基因Lhx8的表达进行验证,结果与芯片结果基本一致。第三部分:牛膝活性肽对脑缺血再灌注损伤的保护作用1、体外研究结果显示,ABPPk2能显着减轻氧糖剥夺诱导的神经元活力的下降,减少氧糖剥夺诱导的神经元活性氧产生,减轻氧糖剥夺诱导的神经元线粒体膜电位下降,有效抑制氧糖剥夺损伤诱导的神经元凋亡,明显抑制促凋亡蛋白Bax和Cleaved caspase 3的表达,促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并减少线粒体Cytochrome C和AIF的释放。2、体内研究结果显示,ABPPk2能明显缩小脑梗死体积,降低脑组织中MDA含量,维持SOD的活力,有效维持缺血半影区神经元的完整性,明显改善缺血半影区的血管通畅率,显着减少血管内皮纤维蛋白和血小板沉积,减轻脑实质多形核白细胞浸润,显着抑制缺血半影区基质金属蛋白酶的活化,有效抑制细胞凋亡,抑制促凋亡蛋白Bax、Cleaved caspase 3的表达,促进抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x1的表达,能明显改善MCAO大鼠长期神经功能缺陷和学习记忆能力。结论:1、本研究从牛膝中分离得到具有促神经元生长和神经保护作用的单体牛膝活性肽 ABPPk2,其精确分子量为 3416.46 Da,氨基酸序列为CXXXXXXCIPGXXXXCCXXVCVPIVTXXXXXXY,其肽链通过 3 对二硫键形成反向平行折叠的二级结构。2、牛膝活性肽ABPPk2具有促海马神经元生长作用,此作用可能与其调控神经元转录因子、神经发生和神经元分化等相关基因的表达相关。3、牛膝活性肽ABPPk2对氧糖剥夺诱导的皮层神经元损伤及大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。
李娟[8]（2018）在《地龙素对缺血性脑卒中神经保护作用及机制的研究》文中研究指明目的:对中药地龙治疗缺血性脑卒中进行系统评价/Mata分析,为地龙素治疗缺血性脑血管病提供理论及实验依据。研究地龙素制备工艺,确定地龙素质量控制标准,探讨地龙素对缺血性脑卒中小鼠及体外培养的神经细胞（PC12细胞）的神经保护作用及机制。方法:1、由2位培训合格的研究员严格按照纳入/排除标准,独立筛选文献和提取资料,通过系统评价和Meta分析全面评价现有的中药地龙治疗缺血性脑卒中的实验证据,探讨中药地龙对缺血性脑卒中动物的神经功能缺失评分、神经系统症状体征疗效、血液流变学、血凝的影响和作用。2、研究地龙素制备工艺;通过酸度计检测酸碱度确定地龙素的纯净度;通过紫外风光光度计检测紫外可见吸收光谱;通过高效液相色谱法分析地龙素不同组分;相同方法下制备不同批次的地龙素,并进行药效稳定性试验及小鼠药物安全性试验。3、光化学栓塞法制备小鼠局部缺血性脑卒中模型,随机分为假手术组、模型组、地龙素低剂量组（40mg/m L）、地龙素中剂量组（60mg/m L）、地龙素高剂量组（80mg/m L）。依照Bederson评分标准进行神经功能缺失评分;行为学测试中用疲劳转移棒来评价动物运动的协调平衡能力,前肢抓力测试用来测试和评价前肢的抓力;采集心脏血检测各组小鼠的凝血功能;术后7天用TTC染色检测梗死体积。4、光化学栓塞法制备小鼠局部缺血性脑卒中模型,随机分为假手术组、模型组、地龙素组。采用HE染色观察实验各组小鼠脑组织病理形态学结果;通过免疫组织化学染色法观察地龙素对缺血性脑卒中脑组织VEGF、CD34的表达水平及微血管密度的影响;通过Western-blot技术检测地龙素对PI3K/Akt/m TOR信号通路的调节作用。5、制备地龙素含药血清,利用Co Cl2建立PC12细胞缺氧模型,用地龙素含药血清进行干预,实验分为对照组、模型组、地龙素含药血清低剂量组、地龙素含药血清中剂量组、地龙素含药血清高剂量组。采用MTT法检测PC12细胞缺氧损伤后的OD值计算细胞存活率;Ed U法检测细胞增殖率;通过乳酸脱氢酶试验检测PC12细胞的损伤程度;通过Western-blot技术检测地龙素对HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响,以探讨对PI3K/AKT/m TOR信号通路的调节作用。结果:1、通过系统评价和Meta分析全面评价现有的实验证据,结果表明:相比于生理盐水组或蒸馏水组,地龙和（或）含地龙药物组大鼠的神经功能缺损有显着改善（P<0.05）;大鼠运动的协调和整合功能、躯体感觉功能、前肢肌力测试等均得到改善;血小板聚集性降低,凝血功能降低（P<0.05）,血液流变学得到改善（P<0.01）。2、我们用鲜地龙成功提取了地龙素,确定了制备工艺流程。制备的地龙素进行酸碱度检测,p H值固定在5.5～7.5,显示药物较纯净。经检测地龙素的最大吸收波长集中在200～280nm之间,多次实验发现最稳定的特征吸收峰为220nm、254nm、280nm。高效液相色谱法波长220nm的显示峰值最高,最能反映产品的特征,因此将波长220nm的吸收峰设定为地龙素的特征吸收峰。按照最佳制备工艺流程,得出制备过程中质量控制的关键参数。药物长期稳定性试验及小鼠药物安全性试验结果显示本提取物稳定、安全。3、各组小鼠于术后4小时观察其神经系统症状,绝大多数动物评分都达到3分以上,挑选3分以上的动物用于后续实验。疲劳转移棒实验显示三种剂量的地龙素在小鼠脑卒中后7天增加了在疲劳转棒上的时间,与模型组比较具有统计学意义（P<0.05）,在缺血后3天高剂量组在疲劳转移棒上增加的时间最多,在缺血后7天,高剂量组在疲劳转移棒上的时间比低剂量组及中剂量组明显增加（P<0.05）,但低剂量组和中剂量组之间没有显着差异。卒中后7天内前肢抓力测试的结果显示三种剂量的地龙素均可使前肢抓力提高,高剂量组明显好于低剂量组和中剂量组（P<0.05）。4、凝血功能检测结果显示不同剂量地龙素给药1周后PT和TT均有所延长。低剂量组与模型组的PT比较差异无统计学意义（P>0.05）,中剂量组、高剂量组比模型组的PT明显延长（P<0.05）。TT检测显示,高剂量组比模型组明显延长（P<0.05）,而低剂量组、中剂量组与模型组差异无统计学意义（P>0.05）。国际标准化比率（INR）显示高剂量组增高,与模型组相比有统计学意义（P<0.05）,低剂量组、中剂量组与模型组差异无统计学意义（P>0.05）。相比模型组,不同剂量地龙素组的纤维蛋白原（Fbg）含量显示,高剂量组差异有统计学意义（P<0.05）,而低剂量组和中剂量组与模型组差异无统计意义（P>0.05）。5、TTC染色结果显示,三种剂量的地龙素均显着降低了光化学法诱导小鼠脑缺血后的梗死体积,与模型组比较,均有统计学意义（P<0.01）;低剂量组使梗死体积降低了36.29%,中剂量组使梗死体积降低了56.91%,高剂量组使梗死体积降低了68.32%,高剂量组在梗死体积的降低上明显优于低剂量组与中剂量组（P<0.01）。综合行为学和组织学结果,在后期动物实验中地龙素干预选择高剂量组的剂量（80mg/m L）。6、HE染色观察病理形态学结果显示,假手术组:小鼠脑组织细胞形态基本正常,神经元细胞胞膜光滑,胞浆丰富,胞核清晰可见。神经细胞排列整齐,极向规则,横纹清晰,颗粒层细胞与锥体细胞界限分明,细胞间隙无明显水肿。模型组:缺血损伤部位细胞数量较少,细胞肿胀,可见核固皱、核溶解,间质有明显水肿,缺血半影区可见少量毛细血管。地龙素组:与假手术组比较,梗死区细胞分布稀少,且出现空泡变性;与模型组比较,细胞间质水肿不明显,可见神经纤维走行,缺血半影区可见较多毛细血管。7、免疫组化结果显示:与假手术组相比,模型组脑组织缺血半影区VEGF表达增多（P<0.05）,地龙素组脑组织缺血半影区VEGF表达明显增多（P<0.01）,与模型组相比,地龙素组脑组织缺血半影区中VEGF表达水平增高,具有统计学意义（P<0.05）。与假手术组相比,模型组脑组织缺血半影区CD34表达增多（P<0.05）,地龙素组脑组织缺血半影区CD34表达明显增多（P<0.01）;与模型组相比,地龙素组（80 mg/m L）脑组织缺血半影区中CD34表达水平增高,差异具有统计学意义（P<0.01）。微血管密度值:与假手术组相比,模型组与地龙素组微血管密度增多（P<0.05）;与模型组相比,地龙素组脑组织缺血半影区中微血管密度增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。8、Western印迹法定量分析结果如下:VEGF:与假手术组比较,模型组蛋白表达差异无统计学意义（p>0.05）,地龙素治疗组蛋白水平明显增高（P<0.01）。与模型组比较,地龙素治疗组蛋白表达水平明显增高（P<0.01）。PI3K:与假手术组比较,模型组蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）,地龙素治疗组蛋白水平明显增高（P<0.05）;与模型组相比,地龙素治疗组蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。AKT:与假手术组相比,模型组蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）,地龙素治疗组蛋白水平明显增高（P<0.05）;与模型组比较,地龙素治疗组蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。P-AKT（Ser473）:与假手术组比较,模型组蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）,地龙素治疗组蛋白水平明显增高（P<0.05）;与模型组比较,地龙素治疗组蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。m-TOR:与假手术组相比,模型组、地龙素治疗组蛋白水平明显增高（P<0.05）;与模型组相比,地龙素治疗组蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。9、MTT法检测结果显示,缺氧24小时后,与正常对照组比较,模型组的OD值显着降低,细胞存活率为57%;地龙素低剂量组（含药血清5%）,地龙素中剂量组（含药血清10%）、地龙素高剂量组（含药血清15%）细胞存活率分别为73%,80%及81%。结果表明模型组的存活率与正常对照组相比明显下降,差异显着（P<0.01）;与模型组相比,地龙素低剂量组、地龙素中剂量组、地龙素高剂量组细胞存活率均升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;地龙素低剂量组与中剂量组比较,差异显着（P<0.01）,地龙素中剂量组与高剂量组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。10、Ed U法检测实验各组PC12细胞的增殖能力结果如下:模型组细胞增殖率为35.7%,地龙素低剂量组增殖率为42%,地龙素中剂量组增殖率为51%,地龙素高剂量组增殖率为52%。与正常组相比,模型组的增殖率明显下降,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组相比,地龙素低剂量组增殖率增高（P<0.05）、地龙素中剂量组、地龙素高剂量组细胞增殖率均升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。11、采用酶联免疫吸附法检测地龙素对缺氧PC12细胞LDH漏出的影响来判断细胞的损伤程度。结果显示,与正常对照组比较,模型组LDH漏出水平升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,地龙素高、中、低剂量组LDH的漏出水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.01）,地龙素高、中、低剂量组之间LDH的漏出水平差异没有统计学意义（P>0.05）。12、用Western印迹法定量分析结果如下:HIF-1α:与正常对照组比较,缺氧模型组和地龙素组HIF-1α蛋白表达量明显增高,具有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,地龙素治疗组蛋白表达水平明显增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。VEGF:与正常对照组比较,缺氧模型组和地龙素组VEGF蛋白表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,地龙素治疗组蛋白表达水平明显增高,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论:系统评价及Mata分析表明中药地龙治疗能有效改善缺血性脑卒中动物的神经系统症状及体征,同时地龙能改善血流环境和血凝状态,有利于血栓的溶解。但由于纳入研究质量的限制,有必要进行更多高质量的实验研究进一步证实,为开展临床治疗提供实验依据和新的思路。以祛痰化瘀、活血通络为治则的地龙素对缺血性脑卒中小鼠具有改善行为学功能、降低凝血功能、减少梗死体积,从而保护神经功能的作用;地龙素能够改善缺血性脑卒中后脑组织缺血损伤的病理反应,促进缺血半影区VEGF、CD34的表达,有助于新生血管的生成,产生这种效应的机制与地龙素上调PI3K/Akt/m TOR信号通路有关,进而对缺血性脑卒中具有神经保护作用;地龙素可以促进缺氧损伤的PC12细胞存活率及增殖能力,降低缺氧对细胞的损伤程度,通过激活PI3K/AKT/m TOR信号通路上调HIF-1α、VEGF表达,从而对缺氧损伤的神经细胞起保护作用。
吴晋[9]（2017）在《miRNA-98与缺血性脑卒中相关性研究》文中认为脑卒中是全球威胁人类健康的重大疾病之一,是目前首要的致残和仅次于癌症和心血管疾病的第三大致死性疾病。流行病学显示,脑卒中发病呈年轻化和逐年递增的趋势。脑卒中根据病因的不同主要分为缺血性和出血性脑卒中,其中缺血性脑卒中占87%。研究揭示影响脑卒中发生、发展的主要病理机制包括能量代谢障碍、神经元的过度去极化、兴奋性毒性损伤、离子稳态失衡、炎症与免疫障碍、凋亡及自噬等。控制脑卒中病死率并提高生存质量是当前医学研究亟待解决的难题。目前美国FDA批准用于治疗缺血性脑卒中的仅有重组组织型纤维蛋白酶原激活剂（r-tPA）一种药物。但严格的治疗时间窗及易诱发脑出血等并发症极大地限制了其临床的广泛应用,脑卒中的药物研发任重道远。血小板活化因子（platelet activating factor,PAF）是一种内源性活性磷酸介质,与花生四烯酸代谢密切相关,具有广泛的生物活性。在机体发生变态反应和炎性反应过程中,血小板活化因子由巨噬细胞、内皮细胞、血小板、多形核细胞等多种参与反应的细胞或组织产生,广泛的参与到相应的病理生理过程中。血小板活化因子的特异性的受体是PAFR（platelet activating factor receptor,PAFR）。缺血性脑卒中的过程中,异常释放的PAF与其受体PAFR结合后,可通过以下机制造成脑损伤:（1）增加神经细胞内钙离子浓度,扰乱细胞膜功能,对神经元造成直接损伤;（2）促进血小板聚集和激活,释放血管活性物质,引起血管栓塞等,加重脑水肿;（3）趋化和激活炎性细胞,促进炎性因子的释放,启动和加重炎性损伤等。大量动物实验和临床试验表明,急性脑梗死患者血浆和脑梗死模型鼠脑组织中PAF含量显着升高。但其激活的途径并不清楚。MicroRNA（miRNA,即微小RNA）,一类非蛋白编码的RNA家族,在体内的主要功能是调控目标基因的表达。MicroRNA是通过与特定mRNA结合或者通过调节特定mRNA的蛋白质翻译过程发挥相应的功能。目前人类基因组中已确认的miRNA有一千多种,可能参与调控人类30%蛋白编码基因的表达。miRNA通过调节靶基因的表达在细胞中行使重要的功能,与胚胎的发育,生长发育、细胞的增殖、分化密切相关。在人类基因组序列中,miRNA-98为一种MicroRNA,序列为 5’-UGAGGUAGUAAGUUGUAUUGUU-3’（GeneBank:GeneID:407054）。miRNA-98在进化上高度保守,不同物种间存在同源性。在动物或人身上有相似的作用。综上,本研究推测,miRNA可以通过调节血小板激活因子受体的表达,影响血小板激活因子的下游信号通路,进而参与到缺血性脑卒中的损伤过程中。为了探讨该作用及相关机制,我们进行如下的研究。实验分为两个部分。第一部分miRNA-98和PAFR相关性研究目的:研究miRNA-98和血小板活化因子受体PAFR的表达相关性。在缺血性脑卒中病人血清中miRNA-98的表达情况和血小板活化因子的表达情况。方法:构建一个质粒,将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染HEK293T,研究miRNA-98和PAFR的相关性。搜集脑卒中病人患者的血清,并抽取同一地区的性别及年龄与病例组相匹配的个体作为健康对照组。对两组研究对象抽取血液,分别使用Real-time PCR进行miRNA-98的表达,使用Elisa法进行血小板活化因子的检测。结果:构建的hsa-miR-98-5p对PTAFR WT&Mut表达的影响。由于hsa-miR-98-5p mimics与含PTAFR基因3’UTR片段的双荧光素酶报告基因共转染验证试验相对于负对照（mimic control与含PTAFR基因3’UTR片段的双荧光素酶报告基因共转染试验）有显着性差异（p值为0.001）,荧光比值为负对照的65.8%。hsa-miR-98-5p mimics对含PTAFR-3’UTR预测作用位点的基因表达水平有抑制作用,但预测作用位点突变后抑制作用明显减弱。因此,hsa-miR-98-5p很可能通过PAFR起作用。脑卒中患者血清中PAF505.7±93.6pg/ml,而健康人群对照组的含量为163±36.6pg/ml,两者相比,脑卒中患者血清中PAF升高3.4倍。脑卒中患者组的血清中miRNA-98的含量为0.23±0.07,而健康对照人群的含量为0.92±0.18。与健康对照组相比,脑卒中患者血清中miRNA-98显着降低。结论:离体研究表明miRNA-98能与PAFR的启动子区结合。miRNA-98能影响PAFR的表达水平升高。临床研究表明,缺血性脑卒中患者中血清PAF含量显着升高,miRNA-98含量明显降低。第二部分:miRNA-98及PAFR相关信号通路的研究目的:研究在大鼠缺血模型上,半影区miRNA-98和PAFR的表达及相关性,并其与下游NF-kB,MAPK家族及细胞凋亡等信号通路的关系。方法:制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。使用Real-time PCR进行大鼠模型血清和脑组织半影区miRNA-98的表达的检测。使用蛋白免疫印迹法测定大鼠模型血清和脑组织半影区PAFR的表达量。观察两者相关性。使用蛋白免疫印迹法测定大鼠模型血清和脑组织半影区PAFR下游NF-kB,MAPK家族及细胞凋亡等信号通路的关系的表达。结果:与假手术组大鼠相比,缺血性脑卒中大鼠血清及半影区miRNA-98的表达显着降低。模型组的半影区中PAFR蛋白表达为1.72±0.06pg/ml,而假手术组的表达为1.00±0.14pg/ml。与假手术组相比,脑卒中大鼠缺血半影区PAFR表达上升,两者有显着性的差异。与假手术组相比,模型组pIKKβ表达显着升高,同时P65活化水平也显着上升。在缺血半影区,JNK和P38的磷酸化水平增高。PAFR下游细胞凋亡信号通路中,Bcl-2蛋白表达显着下调,Bax表达则明显升高。凋亡执行蛋白caspase-3在半影区表达也显着升高结论:在体研究表明miRNA-98能与PAFR的启动子区结合。在脑组织缺血损伤的半影区,miRNA-98表达水平降低,使PAFR的表达水平升高。在体研究PAFR下游信号通路变化情况,模型组IKKβ、P65、JNK和P38的磷酸化水平增高。Bcl-2蛋白表达显着下调,Bax和caspase-3表达则明显升高。
张大龙[10]（2017）在《一种新型额叶脑挫伤评分在颅脑创伤患者临床恶化中的预测价值研究》文中研究说明目的:基于颅脑CT扫描下挫伤灶形状,提出一种新型额叶脑挫伤评分（frontal contusion score,FCS）,并探讨其在颅脑创伤患者临床恶化中的预测价值。方法:回顾性分析复旦大学附属华山医院神经外科创伤中心2007年12月2016年7月收治的206例单纯额叶脑挫裂伤患者的临床及影像学资料。首先,基于CT结果提出并定义FCS细则,对206例纳入者分别进行FCS评分。其次,将206例患者按有无急性神经功能恶化分组,列表统计其临床特征（包括FCS评分）;将128例颅内压（intracranial pressure,ICP）监测患者按是否发生顽固性颅内高压分组并列表统计其临床特征（包括FCS评分）。最后,通过Logistic多因素逐步法筛选出急性神经功能恶化和顽固性颅内高压的独立危险因素,并基于FCS评分,绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC曲线）。调整变量后,经二项分布,统计得出FCS与急性神经功能恶化、顽固性颅内高压的相关性。通过随访格拉斯哥预后评分（glasgow outcome scale,GOS）,预测患者6个月死亡率和6个月不良预后的危险因素。结果:（1）本研究共纳入单纯额叶脑挫裂伤患者206例,其中急性神经功能恶化组72例（34.9%）,无急性神经功能恶化组134例（65.1%）。Logistic多因素分析显示FCS评分、基底池受压以及24小时血钠下降超过10 mmoL/L预示患者会发生急性神经功能恶化;128例（62.1%）患者行ICP监测,92例（71.9%）入院后即刻行ICP监测,这类患者中31例（33.7%）发生过顽固性颅内高压。Logistic多因素分析显示FCS评分、基底池受压是发生顽固性颅内高压的独立危险因素;（2）FCS经二项分布,并调整其它变量后,统计分析显示FCS评分58分患者急性神经功能恶化发生率是FCS评分14分患者的近3倍（OR 2.96,95%CI 1.505.87）;FCS评分58分患者顽固性颅内高压发生率是FCS评分14分患者的2.73倍（OR 2.73,95%CI 1.017.61）;（3）随访GOS,回归分析显示年龄、入院格拉斯哥昏迷评分（glasgow coma scale,GCS）、急性神经功能恶化是6个月死亡率和6个月不良预后的独立危险因素。结论:（1）基于CT结果对额叶脑挫裂伤患者行FCS评分,可便捷、准确描述患者伤情,指导临床决策;（2）FCS评分与急性神经功能恶化和顽固性颅内高压呈正相关,即FCS评分越高,急性神经功能恶化和顽固性颅内高压的发生率越高,患者临床恶化风险相应增加;（3）年龄、入院GCS评分、急性神经功能恶化是额叶脑挫裂伤患者6个月死亡率和6个月不良预后的独立危险因素。因此,通过简单的对患者进行FCS评分,就能预估病情演变,提高临床效率。
二、脑出血血肿周围半影区的病理生理研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、脑出血血肿周围半影区的病理生理研究进展（论文提纲范文）
（1）眼针对CI/RI模型大鼠神经营养因子表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 针灸治疗缺血性卒中作用机制研究 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（2）miR-18a靶向调控RUNX1影响大鼠脑出血后血脑屏障通透性的分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 总引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 细胞实验 调控mi R-18a和 RUNX1 表达对大鼠体外脑出血BBB细胞模型Occludin、ZO-1 蛋白表达及BBB通透性的影响 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 动物实验 调控mi R-18a和 RUNX1 表达对大鼠脑出血模型Occludin、ZO-1 蛋白表达及BBB通透性的影响 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:脑出血后继发性脑组织损伤机制和治疗研究新进展 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（3）环状RNA TLK1调控缺血性脑卒中神经损伤及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写词表 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1 非编码RNA |
| 1.1 microRNA |
| 1.2 lncRNA |
| 1.3 circRNA |
| 2 非编码RNA与脑卒中 |
| 2.1 缺血性脑卒中的病理生理过程 |
| 2.2 microRNA与缺血性脑卒中 |
| 2.3 lncRNA与缺血性脑卒中 |
| 2.4 circRNA与缺血性脑卒中 |
| 3 展望 |
| 第一章 circTLK1 在缺血性脑卒中神经损伤中的作用 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 实验材料 |
| 1.2.2 实验方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 circTLK1 在脑缺血后动物整体水平表达升高 |
| 1.3.2 circTLK1 对脑缺血所致脑梗死的影响 |
| 1.3.3 circTLK1 对脑缺血所致神经功能障碍的影响 |
| 1.3.4 circTLK1 对脑缺血所致长期功能预后的影响 |
| 1.3.5 脑缺血后下调脑内circTLK1 对卒中小鼠神经功能障碍的影响 |
| 1.3.6 circTLK1 对氧糖剥夺所致原代皮层神经元损伤的影响 |
| 1.3.7 靶向下调神经元中circTLK1 对脑缺血所致神经功能障碍的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 circTLK1 调控缺血性脑卒中神经损伤的机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 circTLK1 通过与miR-335-3p结合调节TIPARP |
| 2.3.2 circTLK1/miR-335-3p轴通过靶向TIAPRP调控神经元损伤 |
| 2.3.3 靶向下调神经元中TIPARP对脑缺血所致神经功能障碍的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 circTLK1 在急性缺血性脑卒中患者血浆中表达上调 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 circTLK1 在急性缺血性脑卒中患者血浆中表达上调 |
| 3.3.2 血浆circTLK1 水平与患者脑梗死体积的相关性分析 |
| 3.4 讨论 |
| 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（4）高压氧结合常规康复对脑卒中肢体运动功能障碍影响的临床观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 病例纳入与排除标准 |
| 1.3 研究分组 |
| 1.4 治疗方法 |
| 1.5 观察指标 |
| 1.6 评价标准 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组患者治疗前后的日常生活能力评分变化情况比较 |
| 2.2 两组患者治疗前后的Fugl-Meyer运动功能评分变化情况比较 |
| 2.3 两组患者治疗前后的NIHSS评分变化情况比较 |
| 2.4 两组患者治疗前后的MMSE评分变化情况比较 |
| 2.5 两组患者治疗前后生活质量评分变化情况比较 |
| 2.6 两组患者总有效率对比 |
| 3 讨论 |
| 3.1 现代医学对脑卒中运动功能障碍的认知 |
| 3.2 康复训练疗法治疗脑卒中运动障碍的作用机制以及临床疗效 |
| 3.3 高压氧治疗脑卒中运动障碍的作用机制以及临床疗效 |
| 3.4 高压氧治疗时机与国内外研究报道 |
| 3.5 高压氧结合常规康复促进脑卒中运动障碍恢复的临床疗效 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词表 |
| 综述 促进脑卒中运动障碍恢复相关治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读学位期间获得的科研成果 |
（5）缺血性脑卒中相关miRNA和靶基因miR-424的分析研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 缺血性脑卒中相关差异miRNA和靶基因的筛选 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 缺血性脑卒中候选miRNA的验证 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 miR-424 参与缺血性脑卒中发展的分子机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述一 脑卒中发病与预后相关的miRNA研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 脑血管病临床研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）高血压性脑出血患者血清BDNF、ET-1与神经功能缺失的相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 星形胶质细胞在高血压脑出血研究中的作用机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）牛膝活性肽的分离鉴定及生物学作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一部分 牛膝活性肽的分离鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 牛膝活性肽促神经元生长的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 牛膝活性肽对脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 缺血性脑卒中的血栓性炎症机制及天然药物的神经保护作用 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 博士生期间发表论文、获得专利及参加学术会议情况 |
| 博士生期间参加科研项目及海外研修情况 |
| 致谢 |
（8）地龙素对缺血性脑卒中神经保护作用及机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1 缺血性脑卒中的研究进展 |
| 1.1 缺血性脑卒中病理生理机制的研究进展 |
| 1.2 缺血性脑卒中的治疗研究进展 |
| 2 小鼠缺血性脑卒中模型建立进展 |
| 2.1 开颅法MCAO |
| 2.2 栓线法MCAO |
| 2.3 栓子法MCAO |
| 2.4 光化学栓塞法 |
| 3 立题依据 |
| 参考文献 |
| 第二章 中药地龙治疗缺血性脑卒中的系统评价/META分析 |
| 引言 |
| 1 方法 |
| 1.1 纳入/排除标准 |
| 1.2 文献检索来源 |
| 1.3 文献筛选和资料提取 |
| 1.4 偏倚风险评估 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献检索结果 |
| 2.2 纳入研究的基本信息 |
| 2.3 偏倚风险评估结果 |
| 2.4 统计结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 证据概要 |
| 3.2 研究间异质性来源及其影响 |
| 3.3 内在真实性 |
| 3.4 外部真实性 |
| 3.5 发表偏倚 |
| 3.6 本研究的优点和局限性 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 地龙素的制备工艺及质量标准 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物及药材 |
| 1.2 主要试剂与耗材 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 地龙素制备 |
| 2.2 酸碱度 |
| 2.3 紫外可见吸收光谱测试 |
| 2.4 高效液相色谱法分析地龙素不同组分 |
| 2.5 地龙素长期稳定性试验 |
| 2.6 小鼠安全性试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 成功制备地龙素,确定制备工艺流程 |
| 3.2 酸碱度 |
| 3.3 紫外可见吸收光谱测试 |
| 3.4 高效液相色谱法分析地龙素组分结果 |
| 3.5 质量控制参数 |
| 3.6 地龙素长期稳定性试验结果 |
| 3.7 小鼠安全性试验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 地龙素对缺血性脑卒中小鼠的神经保护作用 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物配制、动物分组及给药方法 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 小鼠预训练 |
| 2.2 光化学栓塞法制备局部缺血性脑卒中模型 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 行为学测试 |
| 2.5 凝血功能检测 |
| 2.6 TTC染色 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 光栓法制备局部缺血性脑卒中模型 |
| 3.2 地龙素对缺血性脑卒中模型小鼠行为学结果的影响 |
| 3.3 地龙素对缺血性脑卒中后凝血功能的影响 |
| 3.4 地龙素对缺血性脑卒中后梗死体积的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 地龙素对缺血性脑卒中模型小鼠行为学影响 |
| 4.2 地龙素对缺血性脑卒中后凝血功能的影响 |
| 4.3 地龙素对缺血性脑卒中后梗死体积的影响 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 地龙素对缺血性脑卒中小鼠神经保护作用的分子机制探讨 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物配制、动物分组及给药方法 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 缺血性脑卒中动物模型构建 |
| 2.2 组织切片分析 |
| 2.3 免疫组化检测脑组织 CD34、VEGF 蛋白的表达 |
| 2.4 Western blot检测VEGF、PI3K、AKT、P-AKT、m TOR表达 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 实验各组小鼠脑组织病理形态学观察结果 |
| 3.2 实验各组小鼠脑组织VEGF表达变化结果 |
| 3.3 实验各组小鼠脑组织 CD34~+表达及 MVD 结果 |
| 3.4 地龙素对VEGF、PI3K、AKT、P-AKT、m TOR表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 地龙素对缺血性脑卒中小鼠脑组织病理形态学的影响 |
| 4.2 地龙素对缺血性脑卒中小鼠脑组织VEGF、CD34 表达的影响 |
| 4.3 地龙素对缺血性脑卒中小鼠脑组织PI3K/Akt/m TOR信号通路的调节作用 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 地龙素对缺氧诱导的体外神经细胞损伤模型神经保护作用的实验研究 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 细胞株 |
| 1.3 实验药物 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 含药血清的制备 |
| 2.2 PC12 细胞处理 |
| 2.3 PC12 细胞模型制备及分组 |
| 2.4 MTT法检测细胞存活率 |
| 2.5 Ed U法检测细胞增殖 |
| 2.6 乳酸脱氢酶试验检测PC12 细胞的损伤程度 |
| 2.7 Western blot检测HIF-1α、VEGF的表达 |
| 2.8 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 地龙素含药血清对PC12 细胞存活率的影响 |
| 3.2 地龙素含药血清对PC12 细胞增殖能力的影响 |
| 3.3 乳酸脱氢酶试验检测PC12 细胞的损伤程度 |
| 3.4 地龙素对缺氧后PC12 细胞HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 地龙素含药血清对PC12 细胞存活率的影响 |
| 4.2 地龙素含药血清对 PC12 细胞增殖的影响 |
| 4.3 乳酸脱氢酶试验检测PC12 细胞的损伤程度 |
| 4.4 地龙素上调缺氧后PC12 细胞HIF-1α、VEGF蛋白的表达 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 展望与不足 |
| 附录 |
| 附录 (一)英文缩略词表 |
| 附录 (二)在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（9）miRNA-98与缺血性脑卒中相关性研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 缺血性脑卒中miRNA-98和PAF相关性研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1、miRNA-98与PAFR启动子区的相互作用 |
| 2、脑卒中患者血清中血小板活化因子水平的检测 |
| 3、脑卒中患者血清miRNA-98表达的检测 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 miR98及PAF相关信号通路的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1、缺血性脑卒中的大鼠梗死区 |
| 2、缺血性卒中模型动物血清及半影区miRNA-98表达的检测 |
| 3、缺血性脑卒中动物模型半影区脑组织中PAFR表达的检测 |
| 4、PAFR下游NF-kB信号通路表达的检测 |
| 5、PAFR下游MAPK信号通路表达的检测 |
| 6、PAFR下游细胞凋亡信号通路表达的检测 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（10）一种新型额叶脑挫伤评分在颅脑创伤患者临床恶化中的预测价值研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 一、研究对象 |
| 二、方法 |
| 结果 |
| 一、入选TBI患者基本临床资料 |
| 二、FCS评分 |
| 三、急性神经功能恶化 |
| 四、顽固性颅内高压 |
| 五、6个月死亡率和不良预后 |
| 典型病例 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述一 颅脑创伤后进展性脑挫伤出血的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 双额叶脑挫裂伤的诊治进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 致谢 |
四、脑出血血肿周围半影区的病理生理研究进展（论文参考文献）
- [1]眼针对CI/RI模型大鼠神经营养因子表达的影响[D]. 李淼. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [2]miR-18a靶向调控RUNX1影响大鼠脑出血后血脑屏障通透性的分子机制研究[D]. 任思颖. 贵州医科大学, 2020
- [3]环状RNA TLK1调控缺血性脑卒中神经损伤及其机制研究[D]. 吴芳芳. 东南大学, 2019
- [4]高压氧结合常规康复对脑卒中肢体运动功能障碍影响的临床观察[D]. 赵宇琳. 广西中医药大学, 2019(02)
- [5]缺血性脑卒中相关miRNA和靶基因miR-424的分析研究[D]. 曹英肖. 河北医科大学, 2019(01)
- [6]高血压性脑出血患者血清BDNF、ET-1与神经功能缺失的相关性研究[D]. 张展展. 河北医科大学, 2019(01)
- [7]牛膝活性肽的分离鉴定及生物学作用研究[D]. 程琼. 苏州大学, 2018(06)
- [8]地龙素对缺血性脑卒中神经保护作用及机制的研究[D]. 李娟. 兰州大学, 2018
- [9]miRNA-98与缺血性脑卒中相关性研究[D]. 吴晋. 南京医科大学, 2017(05)
- [10]一种新型额叶脑挫伤评分在颅脑创伤患者临床恶化中的预测价值研究[D]. 张大龙. 苏州大学, 2017(04)