一、肾性高血压大鼠心房肌L型钙通道α_(1C)亚单位和Na~+-Ca~(2+)交换器mRNA变化的意义（论文文献综述）
古春凌[1]（2021）在《针刺内关穴不同层次与不同留针时间对心律失常刺激效应的比较研究》文中研究表明目的:对比针刺“内关”穴不同的层次与不同的留针时间对快速性心律失常模型兔心电图和心肌组织形态、心肌组织L型钙离子通道α1C亚基mRNA表达水平、心肌组织Ca2+-Mg2+-ATPase 活性的影响。方法:采用兔耳缘静脉注射氯化钡的方法制作快速性心律失常模型。选用56只清洁级健康成年雄性新西兰大耳白兔,应用随机数字表法,分为8组,每组7只,分别为浅刺“内关”穴10分钟组、浅刺“内关”穴20分钟组、浅刺“内关”穴30分钟组、深刺“内关”穴10分钟组、深刺“内关”穴20分钟组、深刺“内关”穴30分钟组、正常对照组、模型组。运用电生理学、HE染色法、RT-PCR法、定磷法等技术手段,观察针刺“内关”穴不同层次和不同留针时间对快速性心律失常模型兔心律失常持续时间和心肌组织形态、L型钙离子通道α1C亚基mRNA表达水平、Ca2+-Mg2+-ATPase活性的影响。结果:与模型组比较,各针刺治疗组心律失常持续时间均不同程度的缩短（均P<0.05）。在心律失常持续时间上,浅层针刺组,浅刺“内关”穴20分钟组<浅刺“内关”穴10分钟组<浅刺“内关”穴30分钟组;深层针刺组,深刺“内关”穴30分钟组<深刺“内关”穴20分钟组<深刺“内关”穴10分钟组。家兔左心室前壁肌HE染色结果显示:正常对照组心肌组织结构正常,细胞核完整呈椭圆状,核周围有较窄的空白间隙,无异常形态学改变;模型组结构改变明显,表现为心肌细胞显着水肿呈细颗粒状,心肌细胞出现明显空泡性变,细胞核浓缩,核有皱褶,形状不规则,核周间隙明显增宽,有的心肌细胞出现胞质淡颜,有的心肌细胞出现核溶解现象,心肌纤维排列疏散紊乱,出现明显的心肌波浪样变;各针刺治疗组均有不同程度的改善。RT-PCR检测显示:模型组与正常对照组相比,心肌组织L型钙离子通道mRNA表达明显上调（P<0.01）。除浅刺“内关”穴30分钟组外（P>0.05）,其他针刺治疗组与模型组比较均有不同程度的下调（均P<0.05）。在L型钙通道α1C亚基mRNA表达水平上,浅层针刺组,浅刺“内关”穴20分钟组<浅刺“内关”穴10分钟组<浅刺“内关”穴30分钟组;深层针刺组,深刺“内关”穴30分钟组<深刺“内关”穴20分钟组<深刺“内关”穴10分钟组。定磷法检测显示:模型组与正常对照组相比,Ca2+-Mg2+-ATPase活性下降（P<0.01）。除浅刺“内关”穴30分钟组外（P>0.05）,各针刺治疗组与模型组相比Ca2+-Mg2+-ATPase活性均不同程度的升高（均P<0.05）。在Ca2+-Mg2+-ATPase的活性上,浅层针刺组,浅刺“内关”穴30分钟组<浅刺“内关”穴10分钟组<浅刺“内关”穴20分钟组;深层针刺组,深刺“内关”穴10分钟组<深刺“内关”穴20分钟组<深刺“内关”穴30分钟组。结论:针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间可以不同程度的减少氯化钡诱发的心律失常的持续时间,改善家兔心肌组织的病理改变,不同程度的下调L型钙离子通道α1C亚基mRNA表达水平,不同程度的提高Ca2+-Mg2+-ATPase活性。调节心肌组织的L型钙离子通道α1C亚基mRNA表达水平和Ca2+-Mg2+-ATPase活性,可能是针刺“内关”穴防治快速性心律失常的作用机制之一。“内关”穴浅层组织与深层组织可能均参与针刺信息的传导。“内关”穴的浅层针刺存在最佳针效时间窗,浅刺在最佳诱导期内,可能有达到深刺效果的趋势。
张凯[2]（2020）在《多西环素对慢性间歇缺氧导致的大鼠心房重构干预机制研究》文中认为目的:通过慢性间歇缺氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）的方式建立雄性Sprague-Dawley大鼠心房重构房颤（atrial fibrillation,AF）模型,探究多西环素对CIH导致的大鼠心房重构的干预作用及其相关机制。方法:150只SD大鼠随机分为正常对照组（normal control group,Control group）、慢性间歇缺氧模型组（CIH-induced atrial remodeling group,CIH group）及多西环素干预组（CIH with doxycycline intervention group,CIH-D group）,每组50只（n=50）。模型组与干预组大鼠接受每日8小时的CIH,干预组大鼠在CIH的基础上经胃给予多西环素进行干预（30mg/kg）。模型建立周期为30天,之后对各组大鼠进行称重、气体麻醉,麻醉满意后对各组大鼠进行心脏彩超、血流动力学检测,之后留取各组大鼠心房组织,称重后按不同实验要求进行储存。各组中,10只大鼠用于病理学实验,5只用于体外心脏电生理学实验,5只用于实时荧光定量聚合酶链反应（RT-q PCR）实验,5只用于蛋白印迹（Western Blotting）实验,20只用于全细胞膜片钳实验,5只用于共聚焦显微镜实验。HE染色用于观察各组大鼠心房组织一般结构变化,Masson染色用于分析比较各组大鼠心房组织中胶原纤维沉积程度,体外心脏电生理实验用于检测各组大鼠心房有效不应期、心房外膜传导速度、传导异质性及AF诱发率。免疫组织化学染色（IHC）及Western Blotting实验用于检测各组大鼠心房组织中心房重构相关蛋白PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、TGF-β1、CTGF、Nav1.5、Cav1.2、Kv4.2、Kv4.3、NCX1、Ry R2的表达水平,RT-q PCR实验用于检测各组大鼠心房组织中心房重构相关微小核糖核酸（micro RNAs,mi Rs）1、21、29b、30、133a、328及上述蛋白的m RNA表达水平。膜片钳实验用于检测各组大鼠心房肌细胞的动作电位（action potential,AP）、动作电位时程（action potential duration,APD）、INa、ICa,L、Ito的电流密度及通道动力学参数。共聚焦显微镜实验用于分析比较各组大鼠心房肌细胞内Ca2+瞬变情况。结果:与对照组大鼠相比,模型组的大鼠心脏重量、肺动脉平均压力、平均动脉压增加,心房组织纤维化程度明显增加,此外,心肌细胞间隙增加、走形紊乱。体外心脏电生理实验结果表明,模型组大鼠的心房外膜传导速度减慢、传导异质性增加,AF诱发率明显增加,心房组织中mi R-1、mi R-21、mi R-133a、mi R-328、TGF-β1、CTGF、Ry R2的表达水平明显升高,而PI3K、AKT、p-AKT、Nav1.5、Cav1.2、Kv4.2、Kv4.3的表达水平降低。细胞电生理实验表明,模型组大鼠心房肌细胞的APD延长,ICa,L、INa、Ito电流密度明显降低,心房肌细胞Ca2+瞬变增加,NCX1表达水平及离子通道动力学参数无明显改变。给予多西环素干预后,干预组大鼠较模型组相比,心房组织纤维化程度明显改善,AF诱发率有所降低,心房外膜传导速度增加、传导异质性降低,心房组织中mi R-21、mi R-133a、TGF-β1、CTGF、Ry R2的表达水平明显降低,而PI3K、AKT、p-AKT、Nav1.5、Cav1.2、Kv4.2、Kv4.3的表达水平升高,心房肌细胞的APD缩短,INa、Ito电流密度增加,离子通道动力学参数无明显改变。结论:1)CIH可导致雄性SD大鼠心房明显的结构重构和电重构,是研究AF心房重构机制的重要平台。2)心房组织胶原纤维沉积增加、心房外膜传导速度减慢、传导异质性增加、心房组织中mi R-1、mi R-21、mi R-133a、mi R-328、TGF-β1、CTGF、Ry R2表达水平的升高,PI3K、AKT、p-AKT、Nav1.5、Cav1.2、Kv4.2、Kv4.3表达水平的降低、心房肌细胞APD延长、INa、ICa-L、Ito电流密度减低、Ca2+瞬变增加是CIH促进AF的重要机制。3)多西环素可通过调节mi R-21/PTEN/PI3K/AKT通路、mi R-133a/TGF-β1/CTGF通路、Nav1.5、Kv4.2、Kv4.3、Ry R2、INa、Ito进而改善CIH导致的大鼠心房结构重构和电重构,是其干预AF重构的重要分子及离子机制。
师慧[3]（2019）在《脊髓电刺激对房颤犬左心房重构及miRNA表达谱的影响》文中提出[背景]心房颤动（Atrial Fibrillation,AF,以下简称房颤）是以心房电活动极快速而紊乱为特征的心律失常。因其增加患者死亡风险,抗AF治疗非常重要,目前房颤治疗的措施均存在局限性。研究发现自主神经系统（Autonomic Nervous System,以下简称ANS）张力失衡与房颤的发生与维持关系密切。通过刺激和消融自主神经,可影响其ANS平衡状态,促进或抑制房颤。脊髓电刺激（Spinal Cord Stimulation,以下简称SCS）通过调控交感副交感神经活性,可纠正ANS张力失衡,并已被成功应用于治疗顽固性心绞痛、心律失常电风暴、顽固性心衰、无休止室速等危急重症,但可否在治疗房颤中发挥作用,国内外尚无系统研究。[目的]对成功建立的房颤犬模型施加颈胸段脊髓电刺激,观察左心房肌的组织细胞形态结构变化、心房重构相关标志蛋白的表达、微小RNA（microRNA,以下简称miRNA）表达谱变化,与空白对照组及非脊髓电刺激房颤犬模型组对比,分析脊髓电刺激对房颤的治疗效果,及对房颤犬左心房重构和miRNA表达谱的影响,探讨脊髓电刺激治疗房颤的可能机制及作用靶点。[方法]1、18只健康成年比格犬随机平均分为空白对照（Ctrl组）,房颤模型对照（AF组）,房颤模型实施脊髓电刺激（SCS组）3组。（1）给AF组及SCS组实验犬植入高频率起搏器,以AOO模式快速起搏右房以建立房颤模型。（2）建模成功的SCS组实验犬植入脊髓电刺激器,刺激电极定位于脊髓背侧T1～T4节段水平,调整参数逐渐增加刺激电压,每次持续刺激2～6小时,共持续12周。（3）将心电追踪仪植入AF组和SCS组实验犬前胸壁皮下,动态监测心电活动和分析房颤负荷。（4）完成模型制作、脊髓电刺激干预后,处死实验犬,留取左心房肌组织,对组织切片行HE染色和Masson染色后,光镜下观察3组实验犬左心房组织的形态学特征及纤维化程度;电镜下观察3组实验犬左心房组织心肌细胞超微结构变化。2、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及免疫印迹法（Western blot）测定3组实验犬左心房肌组织L-型钙通道蛋白α亚基、缝隙连接蛋白40（Connexin40,CX40）、缝隙连接蛋白 43（Connexin43,CX43）、酪氨酸羟化酶（Tyrosine Hydroxylase,TH）、乙酰胆碱转移酶（Choline Acetyltransferase,CHAT）和生长相关蛋白43（Growth Associated Protein43,GAP43）的mRNA及蛋白表达水平,并统计分析组间差异;免疫组化和免疫荧光法观察上述6种目标蛋白在3组实验犬左心房肌的表达分布,以平均光密度值统计分析各组间表达差异。3、采用miScript miRNAPCR Array检测3组实验犬左心房肌miRNA表达谱,筛选出3组间明显差异表达的miRNA并对其行聚类分析、qRT-PCR验证,运用生物信息学预测软件对差异表达较显着的miR-33a及miR-219-3p的靶基因及其与靶基因的主要结合位点进行预测分析,用KEGG数据库查找靶基因下游信号通路。[结果]1、18只实验犬中3只在房颤建模过程中死亡,其余15只完成实验。（1）AF组和SCS组存活的9只犬植入起搏器,AOO模式下快速右房起搏均成功完成房颤模型制作,房颤出现时间10.45±2.32周,建模成功率75%,建模成功时起搏频率587.82±13.35次/min。（2）心电追踪仪监测到的房颤负荷,SCS组（7.35±2.42）%明显低于AF组（46.45±6.21）%,P<0.05。（3）左心房肌HE染色光镜下表现为:Ctrl组心肌细胞排列整齐、结构完整;AF组心肌细胞排列紊乱,镜下可见少许细胞变性坏死表现,有间质水肿及纤维化;SCS组心肌细胞排列稍紊乱,有少许间质水肿及核浓缩,但程度均较AF组减轻。（4）左心房肌Masson染色光镜下表现为:AF组左心房纤维化程度较Ctrl组明显增加,SCS组也有纤维化表现,但程度较AF组降低。（5）左心房肌电镜下表现为:Ctrl组心肌细胞核内结构正常、肌原纤维节有序排列;AF组心肌细胞有少许肌浆网扩张、线粒体肿胀变形表现,但是表现不突出;SCS组心肌细胞肌原纤维排列相对整齐,无明显线粒体肿胀或肌浆网扩张之表现。2、脊髓电刺激对房颤犬左心房重构标志物的影响qRT-PCR法、Western blot法、免疫组化和免疫荧光四种方法检测3组实验犬的左心房组织中GAP43、TH、CHAT、CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基mRNA层面和蛋白层面的表达水平,发现各指标在3组间均存在差异。（1）mRNA表达水平,AF组的GAP43、TH、CHAT表达较Ctrl组上调,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达较Ctrl组下调,P均<0.05;SCS组与Ctrl组比较,GAP43、CHAT 表达上调,P<0.05,TH 表达上调但P>0.05,CX40、CX43表达下调,P<0.05,L-型钙通道α亚基表达下调但P>0.05;SCS组与AF组比较,GAP43、TH、CHAT表达下调,P均<0.05,CX40、CX43表达上调,但P均>0.05,L-型钙通道蛋白α亚基表达上调,P<0.05。（2）蛋白表达水平,AF组与Ctrl组比较,GAP43、TH、CHAT表达上调,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达下调,P均<0.05;SCS组与Ctrl组比较,GAP43、TH、CHAT表达上调,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达下调,P均<0.05;SCS组与AF组比较,GAP43、TH、CHAT表达下调,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达上调,P均<0.05。（3）免疫组化染色结果显示,与Ctrl组相比,AF组左心房肌标本中反映心房神经重构的标志蛋白GAP43、TH、CHAT阳性着色反应增加,SCS组也有着色增加,但程度较AF组浅;而反映电-解剖重构的标志蛋白CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基在Ctrl组阳性着色反应深,AF组着色明显变浅,SCS组着色介于二者之间。图片处理软件计算平均光密度值并统计分析,AF组与Ctrl组比较,GAP43、TH、CHAT升高,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基降低,P均<0.05,SCS 组与 Ctrl 组比较,GAP43、TH 升高,P 均<0.05,CHAT 升高但P>0.05,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基降低,P均<0.05;SCS组与AF组比较,GAP43、TH、CHAT均降低,P均<0.05,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均升高,但 P>0.05。（4）免疫荧光显像结果显示,与Ctrl组相比,AF组代表心房神经重构的GAP43、TH、CHAT均高表达,代表心房电-解剖重构的CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均低表达;与Ctrl组相比,SCS组GAP43、TH、CHAT均高表达,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均低表达;与AF组相比,SCS组GAP43、TH、CHAT均低表达,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达差异不明显。利用图片分析软件计算平均光密度值并统计分析,与Ctrl组对比,AF组GAP43、TH、CHAT升高,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基降低,P均<0.05;与Ctrl组对比,SCS 组 GAP43 升高,P<0.05,TH、CHAT 也升高但 P>0.05,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均降低,P均<0.05;与AF组对比,SCS组GAP43、TH、CHAT降低,P均<0.05,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均升高但P>0.05。3、脊髓电刺激对房颤犬左心房肌miRNA表达谱的影响miScript miRNA PCR Array筛选3组实验犬左心房肌组织中差异表达的miRNA,按变化倍数（Fold change,FC）>2或<0.5,且P<0.05为判断标准,与Ctrl 组比较,AF 组上调表达的 miRNA 为 let-7a、miR-33a、miR-92b、miR-345、miR-500、miR-875,下调表达的 miRNA 为 miR-30b、miR-143、miR-196b、miR-216a、miR-219-3p、miR-222、miR-665、miR-1306;与 Ctrl 组比较,SCS 组上调表达的miRNA为miR-33a和miR-105b,下调表达的miRNA为miR-122、miR-143、miR-216a、miR-219-3p、miR-222、miR-665、miR-1306;与 AF 组比较,SCS组上调表达的miRNA为miR-30b、miR-105b,下调表达的miRNA为let-7a、miR-33a、miR-92b、miR-375、miR-500、miR-875。qRT-PCR 法对上述差异表达miRNA进行验证,所得结果与miScript miRNA PCR Array筛选结果一致;聚类分析这些差异表达的miRNA,在TargetScan数据库中查找到miR-33a、miR-219-3p有一共同靶基因TLR4,其中miR-33a与TLR4仅有1个非保守作用位点,miR-219-3p与TLR4有1个保守作用位点和2个非保守作用位点。然后从KEGG数据库中查找到TLR4在NF-κ B信号通路中起重要作用。[结论]1、高频率持续起搏右心房制作房颤犬模型安全、有效、成功率高;从90次/分起始,逐渐增加起搏频率,个体化实施间断或持续犬右心房起搏制作房颤模型,可减小实验意外发生率,房颤模型更稳定且更类似慢性房颤发生发展实际情况。2、脊髓电刺激干预犬房颤模型,安全性高,可操作性强。3、脊髓电刺激有效抑制犬房颤的发生和持续,缓解和逆转房颤相关左心房重构及纤维化,有可能用作治疗房颤的手段之一。4、房颤模型犬存在左心房电-解剖重构和神经重构,SCS可缓解和逆转这类重构,尤其是逆转心房神经重构。SCS可能通过调控心脏自主神经进而逆转左心房神经重构。SCS对左心房重构的逆转作用可能对治疗房颤有利。5、SCS可改变房颤犬左心房肌的部分差异miRNA表达,主要涉及的miRNA包括 let-7a、miR-30b、miR-92b、miR-375、miR-500、miR-875,它们可能是脊髓电刺激干预房颤的分子调控机制,进而可能是脊髓电刺激干预房颤的靶点。6、左心房肌差异表达的miR-33a和miR-219-3p,可能通过TLR4/NF-κ B经典炎症信号转导通路参与调控房颤犬的炎症反应,从而影响房颤转归,有可能成为脊髓电刺激治疗房颤的靶点之一。
努尔比耶·热扎克[4]（2019）在《慢性房颤犬Notch-1激活与钙循环通道相关性研究》文中提出目的:基于建立慢性起搏犬左心房致心房颤动模型,研究Notch-1信号通路、L型钙通道α1C亚基Cav1.2和SERCA2a蛋白在慢性心房颤动犬的心房中的表达,分析Notch-1通路与房颤钙循环通道的相关性。方法:健康状态经严格审查的比格犬,体重控制于18±2.66 kg,年龄限制在79岁,雌雄均可纳入。动物质量属于一级标准。实验的设计和整体实施过程由实验动物伦理委员会批准。将实验动物随机分成2组,其中假手术犬（n=5）进行微创手术,但没有将起搏器植入体内。房颤组犬（n=5）:进行相同的微创手术,并将心脏起搏器植入左心耳,并进行连续起搏8周。结果:在快速左心耳起搏后,房颤组犬诱发心房颤动成功。实验8周后,假手术组犬Notch-1、Cav1.2和SERCA2a蛋白表达呈棕色。相对于假手术组,房颤组犬Cav1.2、SERCA2a阳性蛋白表达呈现浅棕色,Notch-1蛋白阳性表达呈现为深棕色。房颤组犬Notch-1阳性蛋白的表达和浓度均显着增加,Cav1.2、SERCA2a阳性蛋白表达和浓度均显着减少,差异有统计学意义（P<0.05）;Pearson检验房颤组Notch-1与Cav1.2和SERCA2a浓度相关分析指标显示,Notch-1与Cav1.2、SERCA2a呈负相关（r=-0.52,P=0.034;r=-0.66,P=0.025）。结论:心房颤动时Notch-1激活与Cav1.2、SERCA2a变化相关,Notch-1可调控房颤钙循环通道,并参与房颤的发生发展。
王凌鹏[5]（2015）在《转SERCA2a基因治疗房颤的心房电生理评价》文中研究表明目的:房颤是心血管领域急待解决的课题,本研究希望探索既能够根治房颤又副作用小的有效治疗途径。既能够根治房颤又副作用小的有效治疗途径。房颤发生机制的研究表明:心房电重构和结构重构是房颤发生维持的主要原因,其中钙超载发挥重要作用,而心房肌细胞SERCA 2a表达不足是钙循环失衡的关键,本课题在制作稳定的动物房颤模型基础上,通过心脏特异性感染AVV9病毒载体,应用分子学方法转SERCA 2a基因对房颤心房肌细胞进行基因调补,观察SERCA2的蛋白表达,检测转基因前后房颤诱发率、应用膜片钳技术记录心房肌细胞的动作电位及其离散度、L-型钙电流,评估转SERCA 2a基因对房颤心房肌细胞电生理、病理生理的影响。评价转基因的病毒载体AAV9的安全性及转SERCA 2a基因治疗房颤的分子学机制,为房颤的机制研究和治疗提供理论依据和新的思路。本研究课题包括:（1）比较不同转染方式转导9型腺相关病毒介导肌浆网钙ATP酶基因的有效性和安全性。（2）研究AAV9-SERCA 2a基因转染对心房颤动物模型心房结构重构和电重构的影响。（3）研究AVV9-SERCA 2a基因转染后对急性房颤模型心肌细胞L-型钙电流影响。方法:本课题第一部分采用60只雄性SD大鼠根据基因转染方式不同,随机分为2组:心包腔注射组（IPI）、心肌注射组（IMI）,各组再根据转染对象不同各分为三个亚组:AAV9-SERCA 2a-EGFP组、AAV9-EGFP组和生理盐水组。检测不同方法转染的有效性和安全性。本课题第二部分采用60只新西兰大白兔根据转染对象不同,随机分为4组,房颤组、转染荧光蛋白房颤组、转染SERCA 2a基因房颤组和对照组。转染后建立急性房颤模型。检测动物模型的、房颤诱发率测定、右心房有效不应期、SERCA 2a和LVDCCa1c蛋白表达情况。本课题第三部分采用9只新西兰大白兔根据转染对象不同,分为房颤组、转染SERCA 2a基因房颤组,对照组3个组。检测SERCA 2a基因转导对急性房颤模型L-型钙电流的影响。结果:本课题第一部分结果:1)SERCA 2a蛋白的WesternBlot结果心肌转染基因表达明显高于肝、肾,IPI组转染表达高于IMI组（P<0.01）。2)基因导入28d,IPI组大鼠心电图正常,观察时间内无心律失常发生,IMI组2只大鼠（其中转染NS组1只,转染AAV9-SERCA 2a-EGFP组1只）出现室性早搏。3)基因导入28d,各组大鼠转染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA 2a-EGFP与转染NS相比,血液生化学指标AST、ALT、CRE、BUN差异无统计学意义。本课题第二部分结果:1)房颤组和转染荧光蛋白房颤组起搏4h后AERP150较起搏前及对照组缩短（P<0.05）,随起搏时间延长呈进行性加重。AERP在AF组和rAAV9+EGFP+AF组间无明显差异（P>0.05）,rAAV9+EGFP+SERCA 2a+AF组自起搏8h后AERP150较对照组缩短（P<0.05）,起搏12h后AERP150较AF组和rAAV9+EGFP+AF组缩短程度减轻（P<0.05）2)与AF组相比,rAAV9+SERCA 2a+EGFP+AF组兔左右心房直径有一定程度的增大,但未达到统计差异（P>0.05）,EF值明显降低,降低了32.56%,差异有统计学意义（P<0.05）。而rAAV9+EGFP+AF组各项参数与AF组相比并未显着改善（P>0.05）。本课题第三部分结果:房颤24h后,可见心房肌细胞L-型钙电流幅值和电流密度明显减小。房颤24h组转峰值电流密度比SERCA 2a基因组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1)心肌注射法、尾静脉注射法及心包腔内注射法转导滴度AAV9-SERCA 2a基因28天时,实验大鼠无明显肝肾毒性和心功能损害,未引起炎性反应。两种转染方式均是安全有效的。IPI法在转染效率及副作用方面均优于IMI法。2)AAV9-SERCA 2a基因转染可明显改善急性房颤模型的心房肌结构重构和电重构。3)转SERCA 2a基因治疗可减少急性房颤模型心细胞钙超载,减少房颤对Ica-L的电流密度的影响,对防止心脏电重构具有积极的意义。本研究结果提示转SERCA 2a基因治疗可减少急性房颤模型心细胞钙超载,减少房颤对Ica-L的电流密度的影响,对防止心房电重构和机械重构具有积极的意义,从而减少了房颤的发生和维持,为发现房颤新的防治途径提供了有在益的探索。
蒙滋滋[6]（2014）在《MicroRNA-101、L型钙通道β2亚基及钠钙交换体在风湿性心脏病心房颤动中的相关作用研究》文中研究说明目的微小RNA（microRNAs）与心房颤动（房颤）的发生密切相关，已有文献报道microRNA-101（miR-101）参与心房颤动的发生与维持。生物信息学预测L型钙通道β2亚基（CACNB2）可能是miR-101调控的靶基因，而心肌细胞钙离子电流异常是导致房颤的重要原因，miR-101是否通过调控CACNB2而在房颤发生与维持中起着重要作用，未见相关报道。钠钙交换体（NCX）是广泛分布于心肌细胞膜上的一种膜转运蛋白，其通过3Na+-Ca2+交换维持细胞内钙平衡。NCX对心肌细胞钙稳态的维持起着至关重要的作用，其表达异常也是房颤发生的重要机制之一。本研究将通过检测风湿性心脏病合并房颤患者右心耳组织miR-101、CACNB2、NCX表达变化，初步探讨miR-101与心肌细胞钙离子电流紊乱的相关性，阐述miR-101在房颤发生与维持中可能机制。方法收集95例风湿性心脏病瓣膜置换术患者右心房组织，分为心房颤动组（AF组，49例）和窦性心律组（SR组，46例）。应用荧光定量逆转录聚合酶链式技术（Real-Time quantity PCR）分别检测两组病人右心耳组织中miR-101以及CACNB2、NCX的mRNA表达，应用免疫印迹（Westernblot）方法分别检测两组病人右心耳组织中CACNB2、NCX的蛋白表达水平。结果（1）房颤组和窦律组比较，年龄、性别比例、手术方式等无显着差异。超声心动图资料显示房颤组左心房内径较窦律组显着增大，（57.0±9.1vs46.7±4.5，P<O.O5）。（2）与窦律组比较，房颤组右心耳miR-101表达明显下调，（0.6157±0.1749vs2.2900±0.3992，P<0.05），差异有统计学意义。（3）与窦律组相比较，房颤组右心耳CACNB2和NCX在mRNA及蛋白水平明显上调。CACNB2在房颤组中的mRNA表达较窦律组明显上调（1.9783±0.3231vs0.7215±0.4021，P<0.05）。NCX在房颤组中的mRNA表达较窦律组明显上调（1.8317±0.3015vs0.5978±0.3121，P<0.05）。CACNB2在房颤组中蛋白表达显着高于窦律组（1.35±0.20vs1.07±0.23，P<0.05）。NCX在房颤组中蛋白表达显着高于窦律组（1.42±0.13vs1.03±0.26，P<0.05）。结论（1）房颤患者右心耳miR-101显着下调，提示miR-101可能与房颤的发生有关。（2）房颤患者右心耳CACNB2的mRNA及蛋白水平上调，符合miRNAs生理调节规律，提示CACNB2可能是miR-101调控的靶基因。（3） miR-101可能对CACNB2存在负性调控，提示miR-101可能通过引起心肌细胞钙离子电流紊乱而参与房颤。（4）NCX的mRNA及蛋白水平上调提示心肌细胞或存在钙离子超载，进一步表明miR-101可能通过引发心肌细胞内钙离子超载而导致房颤。
许国军[7]（2013）在《增龄性心房颤动心房重构的离子分子机制研究》文中进行了进一步梳理目的：房颤的流行病学特征首先和年龄相关，伴随着人口老龄化等社会进步的表现，房颤的患病人数正迅速增加，房颤、老龄化是21世纪全世界必须面对的医疗与社会问题。因此，关注房颤、关注老年房颤就更具有重要的意义。基于房颤和增龄之间的密切关系，近年来国内外学者提出了增龄性房颤这一概念。本研究旨在探讨增龄性心房颤动心房重构的离子分子机制，以期为增龄性房颤的病因、发病机制和治疗等提供新的思路和理论依据。本研究目的是为探索与论证：1)是否心房肌细胞内钙离子平衡异常与左心房复极化障碍伴随增龄而显现，其是否为老年人易触发和易维持房颤的离子机制；2)是否存在心房肌细胞膜L-型钙通道蛋白和细胞内肌质网钙转运调控蛋白异常表达伴随增龄而显现，致使心肌细胞内钙稳态遭到破坏，其是否为增龄性房颤心房电重构的分子基质；3)是否心房肌细胞钙激活中性蛋白酶（calpain1、calpain2）、钙蛋白酶抑素（calpastatin）的表达变化与这种细胞内可能普遍存在的病理生理改变相关，包括在心房老化和房颤中左心房心肌细胞膜特征性的L-型钙通道表达改变、加速的纤维化和细胞凋亡，以期阐明增龄与房颤时心房肌电重构和结构重构以及心功能下降的分子生物学机制及其在增龄性房颤发生维持中的作用；4)伴随着心房老化或者在房颤这种疾病状态下，是否存在MMP-9与TIMP-1，BCL-2与BAX的表达改变与心房结构重构有关；5)是否可能存在的microRNA-1、microRNA-21、microRNA-29和microRNA-133的异常表达与伴随衰老和房颤疾病状态下加重的纤维化和细胞凋亡是否相关。方法：通过持续快速心房起搏建立持续性房颤犬模型，用全细胞膜片钳的方法记录4组犬（成年和老年窦性心律犬、成年和老年持续性房颤犬）的L-型钙电流（ICa-L）电流密度以及动作电位特征；用实时荧光定量聚合酶反应（Realtime PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）的方法针对四组犬：1)检测左心房心肌细胞膜L-型钙通道蛋白和肌浆网钙转运调控蛋白在mRNA和蛋白质表达水平变化；2)检测左心房肌细胞钙激活中性蛋白酶（calpain1、calpain2）、钙蛋白酶抑素（calpastatin）在mRNA和蛋白质表达水平变化；3)检测左心房肌细胞MMP-9与TIMP-1，BCL-2与BAX在mRNA和蛋白质表达水平变化；4)检测左心房肌细胞microRNA-1、microRNA-21、microRNA-29和microRNA-133的表达变化；5)应用光镜、电镜及TUNEL法检测各组犬左心房心肌组织细胞的超微结构变化、心肌纤维化程度以及细胞凋亡指数等结构重构；6)检测目标基因及蛋白的表达变化与心房电重构及结构重构之间是否存在相关性。结果：1.电生理变化：1)窦性心律时体表心电图数据显示，与成年犬比较，老年犬的心电图P波持续时间显着地延长，P波离散度显着地增大（P＜0.05）；2)在窦性心律时成年犬和老年犬左心房组织细胞动作电位的特征性变化趋势：与成年犬比较，老年犬的心肌细胞膜动作电位平台期（2相）电压显着降低，动作电位持续时间（APD90）显着延长，L-型钙电流密度出现了明显地减低（均P＜0.05）；3)与窦性心律时比较，两组犬在发生房颤时均出现了显着的去极化趋势，均出现动作电位持续时间（APD90）缩短，动作电位振幅显着地增大，平台期电位电势显着地减少，L-型钙电流密度出现了显着地减低（均P＜0.05）。2.分子生物学变化：1)在mRNA和蛋白质表达水平，老年犬左心房肌LVDCCa1c显着地降低，而Ca2+-ATPase显着地升高（均P＜0.05），RYR2，IP3R1和PLN普遍地显示出上调的趋势，但无统计学差异（P＞0.05）；与窦性心律犬比较，房颤犬除受磷蛋白（PLN）之外，LVDCCa1c和肌浆网钙转运调控蛋白均显着地下调，尤其是老年房颤犬这种下调趋势更加明显（（均P＜0.05））；2)与成年犬比较，老年犬左心房肌细胞calpain1，calpain2和calpastatin在mRNA和蛋白质表达水平均普遍地显示出上调的趋势，但是未显示出统计学差异（P＞0.05）。此外，在相同年龄的窦性心律犬和慢性房颤犬之间的比较中显示，房颤犬左心房肌细胞calpain1在mRNA和蛋白质表达水平均显着地增高（均P＜0.05），尤其是老年房颤犬增高最为明显；然而，calpain2和calpastatin在mRNA和蛋白质表达水平均未显示出统计学差异（均P＞0.05），老年房颤犬的LVDCCa1c与calpain1在蛋白质表达水平呈现负相关（r=-0.583，P=0.019）；3)与成年犬比较，老年犬左心房肌细胞MMP-9和BAX在mRNA和蛋白质表达水平表达均显着地增高（均P＜0.05），而TIMP-1和BCL-2表达均显着地下降（均P＜0.05）；与窦性心律犬比较，房颤犬左心房肌细胞MMP-9和BAX在mRNA和蛋白质表达水平均显现出有意义的上调趋势（均P＜0.05），尤其是老年房颤犬最为明显，TIMP-1和BCL-2在mRNA和蛋白质表达水平均显现出有意义的下调趋势（均P＜0.05），尤其是老年房颤犬最为明显；4)与成年犬组相比较，在窦性心律时老年犬左心房肌细胞miR-21，29的表达水平显现出显着的上调趋势（均P＜0.05）；然而，miR-1，133的表达水平呈现出显着的下调趋势（均P＜0.05）；与窦性心律老年犬组相比较，在持续性房颤老年组犬左心房心肌组织的miR-1，21，29的表达水平显现出显着的上调趋势（均P＜0.05）；miR-133的表达水平显现出显着的下调趋势（P＜0.05）。3.组织病理学变化：伴随老龄与房颤，犬心肌纤维化程度、细胞超微结构及凋亡指数均显现出有统计学意义的改变（均P＜0.05）。结论：1)这种伴随增龄与房颤而显现的左房电生理和钙转运调控蛋白特异性改变（适应与不良适应反应）可能是增龄性房颤心房电重构的分子基质之一。2)这种伴随增龄与房颤而显现的钙激活中性蛋白酶特异性生物活性改变可能是增龄性房颤心房电重构与结构重构的分子基质之一。3)这种伴随增龄与房颤而显现的MMP-9与TIMP-1，BCL-2与BAX特异性的生物活性改变可能是增龄性房颤心房纤维化重构的分子基质之一。4)这种伴随增龄与房颤而显现的microRNA-1、microRNA-21、microRNA-29和microRNA-133的异常表达与心房结构重构进程中特征性的加重的纤维化和细胞凋亡相关，其对将来可能的临床诊断、预后评估及基因治疗与干预提供了有意义思路和措施。
史昀青[8]（2010）在《心肌细胞膜表面钙离子通道在心房颤动时的表达水平及功能变化》文中提出心房颤动（Atrial Fibrillation,AF）是临床上最为常见的心律失常,其主要表现为≥400次/分钟的不规则电节律所引起的心房各部分快速颤动,它对人类健康的影响不容小觑。不论导致何种并发症,AF均可显着增加患者的致残率和死亡率。它常伴有左心室收缩功能减退和充血性心力衰竭,还可以引起脑血管栓塞。AF可以恶化患者的生活质量,并消耗大量的医疗资源。但由于目前对于AF的发生机制尚不十分清楚,因此目前临床上对AF的治疗尚缺乏有效手段。钙离子通道蛋白是一类由多种不同亚型构成的离子通道家族,广泛存在于各种组织中,其作用涉及生长发育的调控、自律性的调节等多方面。在心肌细胞表面,目前已证实存在的钙离子通道仅有T型及L型,参与了钙稳态的调控。研究发现,无论是临床AF患者还是快速心房起搏（Rapid Atrial Pacing）诱发心房颤动的动物的心房肌细胞中,胞浆内游离钙的水平均明显升高,提示心肌细胞胞浆内钙超负荷（Intracellular Calcium Overloading）可能与AF的发生密切相关。心肌细胞胞浆内的游离Ca2+水平（[Ca2+]i）取决于两个因素：一方面是出胞的Ca2+减少,如SERCA／PMCA系统及Na+-Ca2+／H+-Na+交换系统异常时,均可导致肌质网及细胞膜回摄及外排Ca2+减少,从而导致细胞内游离钙水平增高；另一方面是入胞Ca2+增加,入胞的Ca2+有两个来源,一是肌质网表面的钙离子通道（兰利碱受体,1,4,5-三磷酸肌醇受体）释放Ca2+增加,二是细胞膜表面的钙离子通道（心肌表面为T型及L型钙离子通道）介导的细胞外Ca2+入胞增加。由于心房肌细胞膜表面的钙离子通道（T型及L型钙离子通道）是心房肌细胞胞浆内游离ca2+的重要来源之一,因此,研究其在AF时表达和功能的改变对于揭示AF时细胞内钙超负荷形成的机制及作用有着重要的意义。本研究目的是采用多种技术手段研究AF时心房肌细胞膜表面钙离子通道的表达及功能变化,以此阐述细胞膜钙离子通道在AF时心房肌细胞胞浆内钙超负荷形成中的作用。标本是采自于接受开胸心脏手术患者的少量心房肌组织,按照基础疾病类型和心律分组,借助于分子生物学及免疫组织化学方法比较了风湿性AF组患者、风湿性窦性心律患者和正常窦性心律患者之间T型和L型钙离子通道的表达水平,并用激光共聚焦显微镜钙成像技术比较了两种钙离子通道不同心律组患者中对Ca2+通量的影响。目的：研究正常窦律（NSR）、风湿性瓣膜病窦律（RSR）及风湿性瓣膜病房颤（RAF）三组患者右房组织中L型钙离子通道α1C和T型钙离子通道α1G、α1H亚基mRNA丰度及蛋白定位和表达差异。方法：术中获取各组患者（NSR=10,RSR=11,RAF=16）少量右房标本,所有纳入患者在建立体外循环后、灌注心肌停搏液前切取少量心房肌组织（约200mg-400mg）,于冰生理盐水中洗净血迹,分为两部分,一部分（大小约200mg）剪切为小块组织后放入无RNA酶的冻存管中,迅速置入液氮中冷冻,随后转入-80℃深低温冰箱保存；剩下组织放入10%中性福尔马林溶液中固定,留作免疫组化染色用。提取总RNA,设计引物,实时荧光定量RT-PCR对各组α1C、α1G及α1H亚基的mRNA丰度相对定量（2-△△Ct法）；提取总蛋白,蛋白免疫印迹法比较三种α1亚基蛋白表达水平；HE染色及免疫组织化学染色比较三组标本的差异。结果：与NSR及RSR组相比,RAF组的α1C及α1H的mRNA丰度及蛋白水平显着上调（P<0.05）,α1G表达水平三组间差异不显着；三种α1亚基在NSR及RSR两组间表达水平无显着差异；HE染色及免疫组化染色发现RAF组较另外两组间质增生明显,核粗大,细胞膜表面通道蛋白重染,RSR组及NSR组则差异不明显。结论：房颤时,α1C及α1H亚基表达水平上调,而α1G亚基表达水平不变；风湿性因素对L及T型钙离子通道的表达并无直接影响,但不能排除其对钙离子通道功能发生影响的可能。目的：1、在分离人单个心房肌细胞的经典方法基础上,探索适合本中心所获得的心房颤动患者心房肌组织的心肌细胞分离方法；2、在分离获得的单个心房肌细胞基础上,借助于激光共聚焦荧光倒置显微镜及钙成像技术,观察心房颤动组及窦率组不同钙离子通道激活前后胞浆内游离Ca2+水平的改变；3、探索成人心房肌活组织切片制备及培养方法,建立一种保留心肌完整结构的多细胞电生理研究模型,为下一步电生理研究作准备。方法：1、改良Bustamante法急性分离成人单个心房肌细胞：所有纳入患者在建立体外循环后、灌注心肌停搏液前切取少量心房肌组织,立即保存于37℃氧饱和的无钙液中,并在5-10min内转运至实验室；将标本切成细小的组织块（<2mm3）,在36-37℃下以氧饱和的无钙液冲洗3次；将组织块在含有胶原酶Ⅰ（0.4mg/ml）和蛋白酶XXIV（0.2mg/ml）的无钙液中孵育20-30min,37℃下持续充氧,磁力搅拌器4Hz频率持续搅拌；用无钙液冲洗lmin；将组织块在含有胶原酶Ⅰ（0.4mg/ml）的无钙液中孵育,37℃下持续充氧,磁力搅拌器4Hz频率持续搅拌,每10min镜下观测一次,直至出现单个心肌细胞；将组织块放入KB液中轻轻吹打,所获得的细胞悬液以200目滤网过滤,KB液保存；取KB液保存30-60min的心肌悬液,吹匀,经200目滤网过滤,1000r/min离心5 min,弃上清,按由低到高梯度复钙至1.5mmol/L,吹匀后加入培养皿中,于倒置显微镜下观察。加入台盼蓝（4g/L台盼蓝1份+9份细胞悬液,放置3min）,血球计数板分别计数活细胞及死细胞数。2、激光共聚焦荧光倒置显微镜观察T型及L型钙离子通道对Ca2+的通量在房颤组及窦律组的差异：分离获得AF组及对照组单个心房肌细胞,在细胞悬液中加入Thapsigargin（TG,毒胡萝卜内酯）以耗竭肌质网内的储备钙,终浓度1μmol/L,放置10min后,用无钙液洗净；将每例标本所获取的存活心肌细胞悬液分为两份,滴入激光扫描共聚焦荧光显微镜专用培养皿中放置半小时,让其自然贴壁。在培养皿中加入荧光染料Fluo-4/AM（终浓度20p.mol/L）,孵育30min,用无钙液洗净细胞膜表面染料,然后细胞外液换用1mmol/L的含钙液,在其中一份的培养皿中加入L型钙通道阻断剂Verapamil（终浓度10μmol/L）,另一份加入T型钙通道阻断剂Mibefradil（终浓度1μmol/L）,分别孵育20min；在LSCFM下,用氪氩离子激光激发（激发波长494nm,发射波长516nm）,观察并记录钙离子通道静息状态下人心房肌细胞内游离Ca2+的荧光强度（OD1）；在培养皿中加入40mmol/L KCl溶液,使细胞膜除极化,激活未被阻断的钙离子通道,记录钙离子通道激活后心肌细胞内游离Ca2+的荧光强度（OD2）；将所测得的激活后细胞内荧光强度除以静息状态下的细胞内荧光强度（OD2/OD1）,所得即为统计量。组间t检验比较两组荧光强度比值。3、探索成人心房肌活组织切片制备及培养方法：所有纳入患者在建立体外循环后、灌注心肌停搏液前切取少量心房肌组织,立即保存于37℃氧饱和的无钙液中,并在5-10min内转运至实验室；在标本到达之前,将低熔点琼脂糖粉在70℃水浴下用超纯水溶解成液体（浓度4%）,然后保存于45℃水浴中；标本运到后用冷无钙液冲洗干净血迹；将组织块放入标本固定槽中,将液态的琼脂糖溶液倒入槽中,使其没过组织块,并立即在标本固定槽外周放置冰屑,让装置快速冷却,使琼脂糖溶液在极短的时间内凝固并将心房肌组织块包埋其中；小心切除多余琼脂,保留含有心房肌组织的部分；安装好自动组织振动切片机的工作槽及刀片,在槽外填入冰屑,槽内加入无钙液的冰水混合物；用快速黏合剂将包埋有心房肌组织的琼脂糖块固定在物台上,放入切片机内切片,切片厚度为150μm-300μm；将获得的心房肌组织切片4℃下放入含钙液中梯度复钙共计30min,液体持续用100%O2饱和；将复钙后的心房肌组织切片移入高糖DMEM细胞培养液中,37℃水浴下孵育30min,持续用5%CO2+95%O2混合气体饱和液体；孵育后的心肌组织切片放入红外倒置相差显微镜载物台的灌流槽中观察,灌流槽中为100%O2饱和的含钙液（1mmol/L）结果：1、采用改良的Bustamante两步酶消化法,可以分离获得形态呈杆状、横纹清晰、细胞膜完整的具有典型特征的单个人心房肌细胞。复钙后,倒置显微镜下观察可见部分细胞恢复自主收缩活动,完全贴壁后收缩消失,形态无明显变化。经台盼蓝染色后,死细胞被染成淡蓝色,活细胞拒染,细胞存活率约在20%-50%；2、阻滞L型钙通道后,NSR组细胞激动前后OD比值（OD2/OD1）低于RAF组（1.38±0.20 vs 1.88±0.32）,阻滞T型钙通道后,NSR组细胞激动前后细胞内钙水平的升高亦低于RAF组（1.43±0.24 vs 2.48±0.40）。通过比较各组在阻断不同钙离子通道后所得的OD比值发现,在NSR组中,阻断两种钙离子通道对细胞内钙离子水平的影响相当,而在RAF组中,阻断T型钙通道对细胞内钙离子水平的影响要大于阻断L型钙通道；3、采用本方法制备所得成人心肌活组织切片心态良好,横纹清晰,间质及闰盘结构清楚,复钙后可见自发性搏动。结论：1、利用改良Bustamante两步酶消化法能够成功分离获得形态学良好单个人心房肌细胞；2、RAF组对比NSR组,其T型钙通道和L型钙通道的钙通量均明显增加,提示其可能参与了心肌细胞内钙超负荷的形成；AF发生后,L型钙通道钙通量的增加明显高于T型钙通道钙通量的增加,提示L型钙通道在AF时心肌细胞内钙超负荷形成中所起的作用较T型钙通道更大；3、采用低熔点琼脂糖包埋及自动组织振动切片机切片培养的方法,能够获得形态良好、具有正常机械活动的心肌活组织切片。创新点：1.首次研究了T型钙离子通道的两个亚型（α1G、α1H）在风湿房颤、风湿窦律及正常窦律患者心房组织中的mRNA丰度及蛋白表达水平,并发现L型钙离子通道（α1C）及T型钙离子通道（α1H）亚型在AF组表达上调。2.首次探讨了T型钙离子通道在AF时钙通量（Ca2+ Influx）的变化,发现T型钙离子通道及L型钙离子通道在AF组钙通量均明显上调。3.首次建立成人心房肌活组织切片的制备和培养方法,该方法能够保留心肌组织正常结构及细胞间联系,是一种良好的多细胞体外研究模型,可用于后续的电生理研究。
谢良地,欧阳秋芳,赵红佳,谢泓,张广平[9]（2008）在《氟伐他汀、苯那普利对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞L型钙通道α1C表达的影响》文中研究说明背景在血管平滑肌细胞（VSMC）中,L 型钙通道是提高细胞内游离钙离子浓度的主要途径,L 型钙通道中的α1亚单位（LTCCα1C）是决定 L 型钙通道电压依赖性和药物敏感性的重要部位。目的通过比较LTCCα1C亚基在正常大鼠和自发性高血压大鼠（SHR）胸主动脉 VSMC 表达的差异,以及经苯那普利和氟伐他汀干预后的变化.来阐明氟伐他汀、苯那普利抗高血压血管重构的分子机制。方法 12周龄雄性 SHR 24只,随机分为空白对照组（SHRc 组,n=8）、氟伐他汀治疗组[SHRf 组:20 mg/（kg·d）,n=8]、苯那普利组[SHRb 组:10 mg/（kg·d）,n=8],年龄和体质量匹配的 Wistar-Kyoto（WKY）大鼠为正常对照组（n=8）。灌胃法给药18周后苏木精一伊红染色计算胸主动脉血管壁/腔面积,RT-PCR 法、免疫组织化学法、Western blotting 法比较各组大鼠胸主动脉 LTCCα1C 的表达。结果 SHRc 组的胸主动脉壁腔面积比（壁/腔）与 WKY 组比较显着增高（0.30±0.01比WKY:0.1 9±0.02,P<0.05）。氟伐他汀和苯那普利降低大鼠胸主动脉的壁/腔（分别下降20.0%和33.3%）。SHRc 组胸主动脉的 LTCCα1C mRNA 的表达高于 WKY 组（0.56±0.02比 WKY:0.31±0.05,P<0.05）,氟伐他汀和苯那普利降低 LTCCα1C 的 mRNA 表达（SHRf:0.42±0.03比 SHRb:0.38±0.03比 SHRc:0.56±0.02,P<0.05）。免疫组织化学方法与蛋白印迹法显示 SHRc 组大鼠胸主动脉 VSMC 中,LTCC α1C 蛋白表达强于 WKY 大鼠（0.25±0.04比 WKY:0.12±0.02,P<0.05）,氟伐他汀和苯那普利降低 VSMC 内 LTCC α1C 的蛋白表达（SHRf:0.19±0.03比SHRb:0.17±0.02比 SHRc:0.25±0.04,P<0.05）。结论自发性高血压大鼠主动脉L型钙通道表达增强,氟伐他汀、苯那普利在抗高血压血管重构的同时改善胸主动脉平滑肌细胞 L 型钙离子通道α1C的重构效应。
杨惠超[10]（2008）在《辛伐他汀对心肌肥大钙通道表达的影响及其机制研究》文中指出目的:研究辛伐他汀（simvastatin, SIM）对心肌肥大钙通道表达的影响,并探讨其作用机制。方法:（1）整体实验:雄性SD（sprague-dauley）大鼠随机分为五组,即假手术组（Sham组）、腹主动脉缩窄组（AAC组）、腹主动脉缩窄+维拉帕米组（AAC+Ver组,维拉帕米10mg·kg-1·d-1）、腹主动脉缩窄+辛伐他汀组（AAC+SIM组,辛伐他汀10mg·kg-1·d-1）、腹主动脉缩窄+辛伐他汀+甲羟戊酸组（AAC+SIM+MVA组,辛伐他汀10mg·kg-1·d-1及甲羟戊酸50mg·kg-1·d-1）。分别于术后1天给各用药组动物灌胃给药,并在术前及术后不同时间点测定大鼠尾动脉收缩压（systolic blood pressure, SBP）;采用超声心动图检测各组动物心脏构型及射血功能;应用微量考马斯亮兰法测定心室总蛋白含量;称重并计算心脏指数等心肌肥厚指标;应用生物化学方法检测心肌SOD和MDA等氧自由基代谢的变化;同时应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫印迹法（western blot）分别分析心肌L-型钙通道亚单位Cav1.2（α1C）、T-型钙通道亚单位Cav3.1（α1G）、Cav3.2（α1H）mRNA及其蛋白表达的变化。（2）心肌细胞培养实验:采用血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, AngⅡ）诱导制备新生SD大鼠心肌细胞肥大模型,随机分为五组,即对照组（Control组）、AngⅡ组、AngⅡ+Ver组、AngⅡ+SIM组、AngⅡ+SIM+MVA组。采用改良Lowry法测定心肌细胞总蛋白含量;采用相差显微镜和HJ2000通用图像分析系统测定心肌细胞表面积;应用CCK-8法检测心肌细胞细胞活力的变化;应用western blot分析心肌细胞L-型钙通道亚单位Cav1.2（α1C）、T-型钙通道亚单位Cav3.1（α1G）、Cav3.2（α1H）蛋白表达的变化;应用激光共聚焦显微镜技术,以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,检测[Ca2+]i的变化。结果:1.腹主动脉缩窄大鼠SBP升高,HW/BW比值、LVW/BW比值、IVS及LVPW厚度增加,FS及EF均明显下降,心室总蛋白含量增加,心肌形态明显肥厚。SIM处理后可明显降低腹主动脉缩窄大鼠SBP、HW/BW比值、LVW/BW比值、IVS及LVPW厚度、心室总蛋白含量,同时FS明显升高,其效果与钙通道阻滞剂Ver作用相似。2.腹主动脉缩窄大鼠心肌组织T-型钙通道亚单位α1G、α1H的蛋白表达增加,α1G、α1H mRNA表达水平升高。分别应用SIM、Ver处理后,均能明显降低T-型钙通道亚单位α1G、α1H mRNA和蛋白的表达。SIM、Ver对腹主动脉缩窄大鼠心肌L-型钙通道亚单位α1C mRNA表达水平及蛋白表达均无明显影响。3.腹主动脉缩窄大鼠心肌组织SOD活性明显下降,MDA含量升高,心肌抗氧化能力下降。分别应用SIM、Ver处理后,均能明显提高心肌组织SOD活性,降低MDA含量,心肌的抗氧化能力增强。4. AngⅡ可诱导心肌细胞总蛋白含量及细胞表面积的增加,造成心肌细胞肥大,并引起心肌细胞细胞活力降低。分别应用SIM、Ver处理后均能明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量及细胞表面积的增加,同时提高心肌细胞的细胞活力。5. AngⅡ诱导心肌细胞肥大可以引起T-型钙通道亚单位α1G、α1H的蛋白表达增加。分别应用SIM、Ver处理后,均能明显降低T-型钙通道亚单位α1G、α1H的表达。AngⅡ对心肌细胞L-型钙通道亚单位α1C的蛋白表达无明显影响。6. AngⅡ诱导的心肌细胞肥大可引起细胞内钙离子超载。应用SIM处理后,SIM可呈剂量依赖性抑制心肌细胞肥大所致的钙离子超载,其中SIM 10-6-4μmol/L作用明显,其效果与钙通道阻滞剂Ver作用相似。结论:1.腹主动脉缩窄能导致大鼠心肌肥大。SIM对腹主动脉缩窄所致的心肌肥大具有明显的防治作用,其作用机制可能与其抑制T-型钙通道亚单位α1G、α1H mRNA和蛋白的重新表达有关,但与L-型钙通道亚单位α1C mRNA和蛋白表达无关。2. AngⅡ可诱导培养的大鼠心肌细胞肥大。SIM对AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大具有明显的防治作用,其作用机制可能与其抑制T-型钙通道亚单位α1G、α1H的蛋白表达增加有关,同时与抑制细胞内钙超载密切相关,但与L-型钙通道亚单位α1C蛋白表达无关。
二、肾性高血压大鼠心房肌L型钙通道α_(1C)亚单位和Na~+-Ca~(2+)交换器mRNA变化的意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肾性高血压大鼠心房肌L型钙通道α_(1C)亚单位和Na~+-Ca~(2+)交换器mRNA变化的意义（论文提纲范文）
（1）针刺内关穴不同层次与不同留针时间对心律失常刺激效应的比较研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 综述一 “内关”穴针刺层次与留针时间的研究现状 |
| 1. “内关”穴的定位 |
| 2. “内关”穴的层次性解剖结构 |
| 3. “内关”穴的层次性针感 |
| 4. “内关”穴的层次性适应病证 |
| 5. “内关”穴的层次性施术 |
| 5.1 “内关”穴的刺皮法 |
| 5.2 “内关”穴的刺肉法(合谷刺法) |
| 5.3 “内关”穴的刺筋法(关刺法) |
| 5.4 “内关”穴的经刺法、络刺法 |
| 5.5 “内关”穴的三刺法(“烧山火”、“透天凉”刺法) |
| 5.6 “内关”穴透穴刺法 |
| 6. “内关”穴的留针时间 |
| 6.1 留针时间的研究现状 |
| 6.2 “内关”穴留针时间的研究现状 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 “内关”穴防治心律失常的研究现状 |
| 1. “内关”穴防治心律失常的研究进展 |
| 2. “内关”穴防治心律失常的机制 |
| 2.1 中枢机制 |
| 2.2 离子通道机制 |
| 2.3 与cAMP-PKA细胞信号转导通路有关 |
| 3. 心律失常动物模型的复制 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验部分 针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对快速性心律失常家兔刺激效应的比较研究 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 动物饲料 |
| 1.3 主要实验仪器、设备 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 1.5 主要实验耗材 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 技术路线 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 实验操作 |
| 2.4 腧穴定位 |
| 2.5 干预方案 |
| 2.6 取材及固定 |
| 2.7 指标检测及方法 |
| 2.8 统计学方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 家兔心律失常模型复制评判 |
| 3.2 家兔心律失常持续时间的干预效果 |
| 3.3 家兔心室心肌细胞形态比较 |
| 3.4 L型钙离子通道α1c亚基的表达 |
| 3.5 Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase的活性 |
| 4. 小结 |
| 4.1 针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对快速性心律失常家兔ECG的调节 |
| 4.2 针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对心律失常家兔心室肌细胞形态的影响 |
| 4.3 针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对心律失常家兔L型钙通道mRNA表达的影响 |
| 4.4 针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对心律失常家兔Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活性的影响 |
| 讨论 |
| 1.动物模型的复判及针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对快速性心律失常持续时间的影响 |
| 2.针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对心律失常家兔心室肌细胞形态的影响 |
| 3.针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对心律失常家兔L型钙通道mRNA表达的影响 |
| 4.针刺“内关”穴不同层次和不同留针时间对心律失常家兔Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活性的影响 |
| 5.针刺“内关”穴不同层次与不同留针时间对心律失常家兔刺激效应差异性的分析 |
| 结语 |
| 临床意义探讨 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）多西环素对慢性间歇缺氧导致的大鼠心房重构干预机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验对象、分组及模型建立 |
| 1.2 主要试验仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 基础参数采集 |
| 1.5 病理学实验 |
| 1.6 体外心脏电生理学实验 |
| 1.7 实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验 |
| 1.8 蛋白印迹(Western Blotting)实验 |
| 1.9 膜片钳实验 |
| 1.10 心房肌细胞钙瞬变实验 |
| 1.11 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠基础参数比较 |
| 2.2 病理学实验结果 |
| 2.3 体外心脏电生理学实验结果 |
| 2.4 RT-q PCR实验结果 |
| 2.5 蛋白印迹(Western Blotting)实验结果 |
| 2.6 膜片钳实验结果 |
| 2.7 心房肌细胞内 Ca~(2+)瞬变比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 CIH促进大鼠心房结构重构与电重构 |
| 3.2 多西环素通过干预miR-21/PTEN/PI3K/AKT信号通路改善大鼠心房重构 |
| 3.3 多西环素通过干预miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路改善大鼠心房重构 |
| 3.4 多西环素通过干预INa改善大鼠心房重构 |
| 3.5 CIH/多西环素对大鼠心房肌细胞ICa,L 的影响 |
| 3.6 多西环素通过干预Ito改善大鼠心房重构 |
| 3.7 CIH/多西环素对大鼠心房肌细胞AP的影响 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 心房颤动中心房电重构的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）脊髓电刺激对房颤犬左心房重构及miRNA表达谱的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表(以字母顺序排列) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 房颤犬模型建立及脊髓电刺激对房颤犬的干预作用 |
| 1.材料与方法 |
| 2.统计学分析 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第二部分 脊髓电刺激对房颤犬左心房重构的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 2.统计学方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第三部分 脊髓电刺激对房颤犬左心房肌miRNA表达谱的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 2.统计学方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 本研究的创新性 |
| 本研究的局限性 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 心房颤动与心房重构标志物的相关性 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）慢性房颤犬Notch-1激活与钙循环通道相关性研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.内容与方法 |
| 3.质量控制 |
| 4.统计方法 |
| 5.技术路线图 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（5）转SERCA2a基因治疗房颤的心房电生理评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 转染9型腺相关病毒介导肌浆网钙ATP酶基因在大鼠内体的有效性和安全性评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验分组 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 不同方法转染AAV9-SERCA2a基因 |
| 1.6 荧光显像检测 |
| 1.7 心电图检查 |
| 1.8 血生化检测 |
| 1.9 病理学检查 |
| 1.10 质量控制 |
| 1.11 统计学方法 |
| 1.12 技术路线图 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 AAV9-SERCA2a基因转染对心房颤动影响的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验分组 |
| 1.3 主要器材及试剂 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 SERCA2a和LVDCCa1c蛋白表达检测 |
| 1.6 质量控制 |
| 1.7 统计学处理 |
| 1.8 技术路线图 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 AVV9-SERCA2a基因转染后对急性房颤模型心肌细胞L型钙电流影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 心肌细胞分离 |
| 1.3 膜片钳实验 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 转Serca2a基因治疗房颤进展研究 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
（6）MicroRNA-101、L型钙通道β2亚基及钠钙交换体在风湿性心脏病心房颤动中的相关作用研究（论文提纲范文）
| 主要英文缩写索引 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 MicroRNA-101 在心房颤动患者右心耳组织中的表达作用 |
| 1、材料 |
| 2、方法 |
| 3、统计学分析及结果 |
| 4、讨论 |
| 5、结论 |
| 第二部分 L 型钙通道β2亚基在心房颤动患者右心耳组织中的表达作用 |
| 1、材料 |
| 2 、方法 |
| 3、统计学分析及结果 |
| 4、讨论 |
| 5、结论 |
| 第三部分 钠钙交换体在心房颤动患者右心耳组织中的表达作用 |
| 1、材料 |
| 2、方法 |
| 3、统计学分析及结果 |
| 4、讨论 |
| 5、结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 |
（7）增龄性心房颤动心房重构的离子分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 左心房心肌细胞电生理及钙转运调控蛋白的表达改变与增龄及房颤关系的实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象及分组 |
| 1.2 实验设备 |
| 1.3 实验材料 |
| 1.4 实验试剂及药品 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2 研究结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 钙激活中性蛋白酶表达改变与增龄及房颤关系的实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象及分组 |
| 1.2 实验设备 |
| 1.3 实验材料 |
| 1.4 实验试剂及药品 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 MMP-9/TIMP-1、BCL-2/BAX 表达改变与增龄及房颤关系的实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象及分组 |
| 1.2 实验设备 |
| 1.3 实验材料 |
| 1.4 实验试剂及药品 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2 研究结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四部分 miRNAs 的表达改变与增龄所致的左心房结构重构及房颤关系的实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象及分组 |
| 1.2 实验设备 |
| 1.3 实验材料 |
| 1.4 实验试剂及药品 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2 研究结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（8）心肌细胞膜表面钙离子通道在心房颤动时的表达水平及功能变化（论文提纲范文）
| 英汉缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一部分 心肌细胞膜表面钙离子通道(T型及L型)在心房颤动及对照组心房肌组织中的表达差异 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 心肌细胞膜表面钙离子通道(T型及L型)在心房颤动组及对照组心房肌组织中的功能差异 |
| 前言 |
| 第一节 成人单个心房肌细胞的分离及活性鉴定 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二节 膜表面钙离子通道(T型及L型)的钙通量在心房颤动及窦性心律组之间的功能差异 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三节 成人心肌活组织切片电生理研究模型的初步建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 致谢 |
| 附件 |
（10）辛伐他汀对心肌肥大钙通道表达的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表(Abbreviation) |
| 中文摘要(Abstract in Chinese) |
| 英文摘要(Abstract in English) |
| 前言（Introduction） |
| 材料和方法（Materials and Methods) |
| 结果（Results） |
| 讨论(Discussion) |
| 结论(Conclusion) |
| 参考文献(References) |
| 综述(Review) |
| 综述参考文献(References) |
| 致谢(Acknowledgements) |
| 获奖情况(Prize Information) |
四、肾性高血压大鼠心房肌L型钙通道α_(1C)亚单位和Na~+-Ca~(2+)交换器mRNA变化的意义（论文参考文献）
- [1]针刺内关穴不同层次与不同留针时间对心律失常刺激效应的比较研究[D]. 古春凌. 北京中医药大学, 2021
- [2]多西环素对慢性间歇缺氧导致的大鼠心房重构干预机制研究[D]. 张凯. 天津医科大学, 2020(06)
- [3]脊髓电刺激对房颤犬左心房重构及miRNA表达谱的影响[D]. 师慧. 昆明医科大学, 2019
- [4]慢性房颤犬Notch-1激活与钙循环通道相关性研究[D]. 努尔比耶·热扎克. 新疆医科大学, 2019(04)
- [5]转SERCA2a基因治疗房颤的心房电生理评价[D]. 王凌鹏. 新疆医科大学, 2015(05)
- [6]MicroRNA-101、L型钙通道β2亚基及钠钙交换体在风湿性心脏病心房颤动中的相关作用研究[D]. 蒙滋滋. 广西医科大学, 2014(11)
- [7]增龄性心房颤动心房重构的离子分子机制研究[D]. 许国军. 新疆医科大学, 2013(01)
- [8]心肌细胞膜表面钙离子通道在心房颤动时的表达水平及功能变化[D]. 史昀青. 复旦大学, 2010(12)
- [9]氟伐他汀、苯那普利对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞L型钙通道α1C表达的影响[J]. 谢良地,欧阳秋芳,赵红佳,谢泓,张广平. 中华高血压杂志, 2008(12)
- [10]辛伐他汀对心肌肥大钙通道表达的影响及其机制研究[D]. 杨惠超. 南通大学, 2008(03)