一、猪脱细胞主动脉瓣叶不同方法预处理后种植内皮细胞的比较研究（论文文献综述）
冯昊[1]（2020）在《钙三醇对脂多糖诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制研究》文中提出目的:探讨钙三醇[1α,25-dihydroxycholecalciferol,1,25（OH）2D3]对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导猪主动脉瓣膜间质细胞（PVICs）成骨分化的影响,为干预与治疗钙化性主动脉瓣膜病（calcific aortic valve disease,CAVD）提供理论支持与实验依据。方法:人Normal组（正常组）心脏瓣膜组织从主动脉夹层患者获取,人CAVD组（病变组）瓣膜组织取自行主动脉瓣膜置换术的患者,采用免疫组化和Western blot法检测Normal组和CAVD组中Runt相关转录因子2（Runx2）、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的蛋白表达水平。选取8只健康家猪（雌雄不限）,立即取出主动脉瓣叶,胶原酶连续消化并分离PVICs,观察细胞特性及特点,采用免疫荧光染色法进行细胞表型鉴定。利用1-5μg/ml LPS诱导细胞成骨分化,碱性磷酸酶染色（ALP染色）和茜素红S染色实验分别检验细胞成骨分化能力,实时荧光定量法（qPCR）和免疫印迹法（Western blot）法分别检测细胞成骨相关指标Runx2和OPN的表达情况,从而建立PVICs体外钙化模型;采用不同浓度（0.001-1μmol/L）钙三醇预先处理细胞2h后和4μg/ml LPS共同作用于细胞,ALP和茜素红S染色检验细胞钙化情况;qPCR和Western blot法验证细胞成骨相关指标Runx2和OPN的表达情况。4μg/ml LPS不同时限处理细胞,Western blot法检测TGF-βR、TGF-β1、p-Smad2/3表达水平;0.1μmol/L钙三醇预处理细胞2h后和4μg/ml LPS共同作用于细胞并用Western blot法检测TGF-β1及其下游经典成骨途径中Smad2/3的磷酸化水平,初步探讨其机制。结果:人瓣膜组织中Runx2、OPN、TGF-β1在CAVD组中表达明显高于Normal组（P<0.01）。成功培养原代PVICs,免疫荧光结果提示α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（vimentin）染色阳性,血管性血友病因子（von Willebrand factor,vWF）染色阴性。采用LPS刺激PVICs,与空白组相比,PVICs在2-4μg/ml LPS的诱导下ALP活性明显升高,钙盐沉积显着增强,细胞中Runx2和OPN转录及蛋白水平显着升高（P<0.05）;其中4μg/ml LPS组Runx2和OPN表达水平升高较为显着（P<0.05）。同时,在4μg/ml LPS不同时限的刺激作用下,TGF-βR、TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达水平均显着增加（P<0.05）。经钙三醇预处理后,PVICs碱性磷酸酶活性显着降低,钙盐明显沉积明显减少;与LPS组相比,钙三醇+LPS组中Runx2和OPN的转录及蛋白表达水平显着下调（P<0.01）,并且TGF-β1和p-Smad2/3蛋白水平均明显降低（P<0.001）。结论:LPS可以诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化,并且可能是通过上调TGFβ1-Smad2/3信号通路来实现的;钙三醇可能可以抑制LPS诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化,并且TGF-β1/Smads信号通路可能在其中发挥重要作用。
李彬寒[2]（2020）在《鱼鳔源抗钙化心血管生物材料的研究》文中研究说明心血管疾病呈现高发病率和高死亡率,其中全球共有超过3亿人口患心脏瓣膜疾病和心肌缺血,因此人工心血管替代物,包括人工心脏瓣膜和人工血管,在临床有很大需求。现该领域针对新材料和新制备方法已有一定研究基础,但仍有部分关键性问题亟待解决,钙化就是其中之一。心血管生物材料长期植入后出现的严重钙化会缩短材料的使用寿命,限制其在临床上广泛应用。目前,人工生物心脏瓣膜主要来源于同种移植物和异种材料如脱细胞牛心包、脱细胞猪心包和脱细胞主动脉瓣等。但这些上市的人工生物瓣膜产品的使用寿命仅为10-15年,其衰败主要源于钙化、力学衰败及瓣叶退化、撕裂、矿化,大大限制了青年和中年患者的使用。另外,构成小口径人工血管的天然材料和合成材料的研究和开发也迫在眉睫,但是近年的研究主要集中在促进血管的快速内皮化和抑制血管内部内膜增生,忽视了对抗钙化材料的研究,而钙化是人工血管在临床长期植入应用中所面临的最大问题。综上,探索新型抗钙化生物材料具有重要的研究意义和临床意义。然而,现阶段除了对新型交联方法的探究和报道之外,较少的研究致力于新型材料的开发与应用。基于以上背景,开发一种具有优异理化性能、血液相容性、细胞相容性和抗钙化能力的新型心血管生物材料至关重要。近年来,鱼源胶原逐渐走进人们的视野并受到研究人员广泛的关注,并作为新型生物材料被应用于多个领域。本论文主要探索了鱼鳔来源的新型生物材料用于抗钙化心血管生物材料包括人工心脏瓣膜和小口径人工血管开发的可行性。研究结果显示,与牛心包相比,鱼鳔具有更高的弹性模量,其主要由I型胶原蛋白,糖胺聚糖和弹性蛋白组成,尤其富含弹性蛋白。此外,通过大鼠皮下埋植实验和体外抗钙化实验评估,证明鱼鳔的抗钙化能力明显强于牛心包。同时,实验表明鱼鳔具有优良的生物相容性和抗酶解稳定性。此外,我们成功制备了鱼鳔源的小口径人工血管,并且通过大鼠腹主动脉原位移植实验证实了其较高的通畅性和较低的钙化。综上所述,鱼鳔材料具有优异的抗钙化性能,适宜的机械强度和稳定性以及良好的血液相容性和细胞相容性,这些都使鱼鳔有望成为心血管生物材料的理想选择。由于不同鱼种来源的鱼鳔结构与组分上存在差异性,通过研究对比不同鱼种来源的鱼鳔材料的特性,尤其是其抗钙化性能,有望筛选获得具有最佳抗钙化性能的鱼鳔来源。因此,为了找到最佳的鱼鳔来源,我们对来自草鱼、翘嘴白,鲤鱼和鲢鱼的四种类型的鱼鳔进行了深入分析和研究。数据显示,所有鱼鳔均由弹性蛋白,I型胶原蛋白和糖胺聚糖组成。除草鱼鱼鳔外,其他组均可满足生物瓣膜的机械性能和材料稳定性要求。体内大鼠皮下埋植实验中,鲢鱼鱼鳔钙化沉积显着低于翘嘴白鱼鳔和鲤鱼鱼鳔。并且,体外实验证实了各组血液相容性和细胞相容性优良。研究结果提示,综合优异的抗钙化性能、适宜的机械和稳定性、良好的血液相容性和细胞相容性等,鲢鱼鱼鳔作为新型抗钙化生物瓣膜材料的潜能最大,而草鱼鱼鳔、翘嘴白鱼鳔、鲤鱼鱼鳔则可应用于其他心血管生物材料。通过以上研究,我们证实鱼鳔源生物材料具有巨大的研究意义和发展潜力,为其在心血管系统疾病中的应用提供了重要的实验依据。
任恺[3]（2019）在《新型全生物肺动脉带瓣管道与全生物人工瓣膜的临床前动物实验》文中认为心脏瓣膜病是世界范围内发病率和死亡率的主要原因。与人口老龄化和先天性功能障碍有关。据统计2016年全世界约有40万心脏瓣膜置换术患者,随着人口老龄化,预计2050年心脏瓣膜置换术患者将达到85万。目前对于严重的瓣膜功能障碍,瓣膜置换术是最有效的解决方案。目前全世界每年进行的瓣膜置换手术,大约55%的病例使用机械瓣膜,其余45%选择生物瓣膜。机械瓣多为金属材料制成,术后患者需要终身抗凝,并不适用于高龄等高危患者。生物心脏瓣膜（BHV）包括牛、猪或马的心包、牛颈静脉或猪心脏瓣膜,和机械瓣膜对比,其具有的特点为低血栓形成率,不需要终身抗凝,但普遍存在抗疲劳能力差,易于钙化等缺点。我国现存先天性心脏病患儿约150万,每年新出生近20万,其中复杂先心病占30%左右,约有5-10%的病儿需要重建肺动脉才能获得根治。目前对于肺动脉的重建至今仍缺乏理想的材料和成熟的产品,人工带瓣管道可用于重建肺动脉,挽救患儿生命,提高手术效果。生物组织材料常用的有自体心包、异种心包、异种主动脉瓣等。随着物质生活水平的提高和人口老龄化,瓣膜手术患者的平均年龄有逐渐升高趋势,而经导管主动脉瓣置入术（transcatheter aortic valve implantation,TAVI）已成为治疗心脏瓣膜疾病的一种新的选择,具有不开胸、无需体外循环、微创和恢复快等优点,生物心脏瓣膜的应用越来越广泛。由于介入瓣膜存在长期耐久性欠佳等缺点,目前仅在高龄危重患者应用,其表面性能需要进一步改进。牛心包作为一种心血管外科手术修补用植入材料,经历40多年临床应用的考验,具有比其他人工修补材料更具方便经济、安全可靠、来源广泛等优点。近年来,利用化学改性后的牛心包组织材料制成的生物瓣,以其优异的耐久性表现成为人工生物瓣的主流产品。鉴于我们在新一代改良型无支架猪瓣设计和抗钙化生物心脏瓣膜研究取得的成果,联合研发了新型全生物肺动脉带瓣管道、全生物主动脉瓣膜,现需探索实验方法,拟观察新型牛心包生物材料的防钙化效果、理化性能、组织相容性的研究。建立可行的实验动物模型,并验证应用新型全生物管道及全生物瓣膜在实验动物体内行置入后的安全性和有效性,为进一步临床应用提供依据。研究目的:新型全生物牛心包材料,经过胰蛋白酶、去垢剂和改变渗透压去细胞处理、戊二醛（Glutaradehyde GA）交联鞣制及2.3丁二醇（butanediol BD）抗钙化改性处理后,经仿生外形结构设计,全牛心包覆膜,采用柔弹性瓣架,通过肺动脉瓣、主动脉瓣在羊体内的植入,观察其有效性及安全性。1.经去细胞处理、戊二醛交联鞣制及丁二醇抗钙化改性后生物材料的实验研究。2.新型全生物肺动脉带瓣管道的大动物试验。3.新型全生物主动脉瓣的大动物试验。研究方法:1.牛心包经过胰蛋白酶、去垢剂和改变渗透压去细胞处理,分别对GA处理、GA+BD联合处理及未经处理的去细胞牛心包材料行分组测定茚三酮实验,胶原酶消化实验,血浆蛋白吸附实验以及血小板黏附实验,以分别探讨新型生物材料的胶原交联度及血液相容性的影响。分别测定牛心包生物材料的急性全身中毒实验、亚急性毒性试验、遗传毒性试验、力学性能测定,观察新型牛心包生物材料的理化性能。将牛心包生物材料植入大鼠体内包埋8周天后取出行HE染色及茜素红染色,观察生物材料钙化程度。2.新型全生物肺动脉带瓣管道,经去细胞处理、GA交联鞣制及BD抗钙化改性处理后的牛心包,通过仿生结构设计,由近心端管道和远心端管道组成,近心端管道采用带有三叶瓣膜用聚酯缝线缝合而成。本试验拟在体外循环辅助心脏不停跳下对羊行肺动脉瓣置换术,植入14例带瓣管道,术后1、3、7、30、90、180天作为观察期。观察植入后动物的血流动力学性能（血流速度、返流面积、跨瓣压差）变化、超声评估结构变化（瓣膜启、闭是否良好）;观察植入后有无不良事件（动物的死亡、感染、行为异常情况）;植入物周围的炎症反应:周围组织有无粘连、感染、坏死;白细胞、淋巴、细胞、中性粒细胞等数量;人工生物管道及周围组织的病理改变;血栓形成:探查带瓣管道及主要脏器是否有血栓形成;溶血反应:观察红细胞形态、血红蛋白数量变化等;器官病变:心脏、肺、肝、肾、脾等形态学变化;瓣叶及管道的钙化情况及钙含量测定。评价新型全生物肺动脉带瓣管道的安全性和有效性。3.新型全生物主动脉瓣,经去细胞处理、GA交联鞣制及BD抗钙化改性处理后的牛心包,采用柔弹性瓣架,再经仿生结构设计与缝制工艺制造而成。本试验拟在体外循环辅助下对羊行主动脉瓣置换术,植入全生物主动脉瓣10例,1例对照组采用生物心脏瓣膜（美国,爱德华）。术后1、3、7、30、90、180天作为观察期。试验终点观察指标:评价观察植入后的有效性:植入后的血流动力学性能（血流速度、返流面积、跨瓣压差）;植入后的结构变化（瓣膜启、闭是否良好）。评价植入后的安全性:不良事件:所有动物的死亡、感染、行为异常情况;植入物周围的炎症反应:人工生物瓣膜和周围组织有无粘连、感染、坏死;白细胞、淋巴、细胞、中性粒细胞等数量;人工生物瓣膜及周围组织的病理改变;血栓形成:观察凝血变化,探查瓣膜及主要脏器是否有血栓形成;溶血反应:观察红细胞形态、血红蛋白数量变化等;器官病变:心脏、肺、肝、肾、脾等形态学变化;瓣环及瓣叶的钙化情况及钙含量测定。评价新型全生物主动脉瓣的安全性和有效性。结果:1.牛心包经过去细胞处理、GA交联鞣制、BD抗钙化改性处理后,急性全身中毒实验、亚急性毒性试验、遗传毒性试验未见明显异常。力学性能测定显示:GA+BD组牛心包断裂伸长率、抗拉负荷较GA组增大,抗拉负荷无明显差异。GA+BD组较未处理组茚三酮值均明显下降,较单用GA处理组茚三酮值进一步下降。牛心包经GA处理后,未消化率较对照组明显增加,GA+BD处理后,未消化率进一步增加,其抗消化能力也进一步增强。GA组蛋白质吸附率较对照组明显升高,再经BD处理后低于对照组。GA处理组血小板黏附率可明显下降,GA+BC组血小板黏附率较对照组低,但两者无显着差异。包埋实验结果显示,新型生物材料未见明显钙化灶,而对照组材料组织钙化明显。2.实验共完成14例全生物肺动脉带瓣管道的羊肺动脉原位植入实验,无意外死亡和严重并发症。其中12例按照计划处死终止实验,2例仍健康存活。植入后瓣膜开启关闭良好,实验全程未出现严重狭窄和关闭不全。经胸超声心动图及血流动力学测定术后存活绵羊肺动脉瓣返流百分比、返流量、中心静脉压、平均主动脉压等指标与术前测量值差异均无统计学意义。和术前对比,植入后肺动脉瓣跨压差未见明显变化。除2例瓣叶钙含量升高,其余所有瓣叶、血管组织钙含量均小于10μg/mg。尸体解剖中各脏器均未发现明显的血栓形成和血栓栓塞。随访过程中实验室检查和尸体解剖未发现明显血细胞破坏、肝肾功损伤、炎症反应等不良事件。组织病理检查未见明显异常。3.实验共完成9例全生物主动脉瓣、1例对照生物主动脉瓣原位植入实验。所有动物均按照实验方案进行了手术植入、术后喂养和数据采集。1只实验组动物在第167天意外死亡。对照组第172天意外死亡。其余动物正常存活至预期时间,按计划进行处死、采集数据和尸体解剖。植入后瓣膜开启关闭良好,实验全程未出现严重狭窄和关闭不全,最大跨瓣压差44.1mmHg,跨瓣压差平均为23.8mmHg。最大反流面积2.4cm2,平均为1.12±0.53cm2,未发现瓣周漏或其他异常。和术前相比,术后与实验终点左心室收缩压、左室舒张末压、有效瓣口面积、血流速度无明显差异。实验动物植入的人工全生物心脏瓣膜瓣叶平均钙含量为2.01±1.02μg/mg,对照组瓣叶钙含量2.20μg/mg。实验动物植入的人工全生物心脏瓣膜瓣环平均钙含量为2.53±1.75μg/mg,实验组中1例瓣环钙含量最高为43.57μg/mg,对照组瓣环钙含量71.20μg/mg。尸体解剖中各脏器均未发现明显的血栓形成和血栓栓塞。随访过程中实验室检查和尸体解剖未发现明显血细胞破坏、肝肾功损伤、炎症反应等不良事件。结论:1.本实验应用胰蛋白酶、去垢剂和改变渗透压去细胞处理、GA交联鞣制及BD抗钙化改性处理后的牛心包,通过测定牛心包生物材料的急性全身中毒实验、亚急性毒性试验、遗传毒性试验未见明显毒性反应,力学性能测定良好。通过茚三酮实验,胶原酶消化实验分析,牛心包生物材料的胶原交联度提高。而血浆蛋白吸附实验和血小板黏附实验则验证了处理能够提高牛心包生物材料的血液相容性。通过观察大鼠包埋后的HE染色及茜素红染色,能够有效降低牛心包生物材料的钙化程度。经GA及BD处理能够进一步改善牛心包材料的理化性质,有利于提高血液相容性和减缓钙化,同时对于GA及BD处理方法在进一步研究中的应用提供了重要的理论依据。2.本实验建立了体外循环辅助下不停跳的肺动脉置换的绵羊模型和实验方法,可用于新型防钙化肺动脉带瓣管道的实验研究,同时也为研发新型肺动脉瓣介入系统并进行在体实验研究奠定了基础。新型全生物肺动脉带瓣管道植入后未出现明显并发症和不良事件,具有良好的防钙化效果,术后6个月的随访数据说明该新型全生物肺动脉带瓣管道的动物植入手术是安全的,满足医疗器械植入的安全性和有效性的要求,远期的植入后效果还需进一步观察。3.本实验建立了体外循环下的主动脉瓣置换的绵羊模型和实验方法,可用于新型防钙化瓣膜的实验研究,同时也为研发新型TAVI的介入瓣膜系统并进行在体实验研究奠定了基础。新型全生物主动脉瓣植入后未出现明显并发症和不良事件,1例实验组意外死亡（考虑出血）。实验动物尸检研究均未发现各脏器明显的血栓形成和血栓栓塞,结果表明该产品在常规抗凝强度下有良好的血液相容性。实验结果表明除个别出现局灶钙化,该产品具有良好的防钙化效果。术后6个月的随访数据说明该新型全生物主动脉瓣的动物植入手术是安全的,满足医疗器械植入的安全性和有效性的要求,远期的植入后效果还需进一步观察。
罗程[4]（2012）在《环孢素预处理对同种带瓣血管移植的保护作用》文中指出背景：白1966年Ross首次应用同种异体带瓣主动脉治疗肺动脉闭锁病人获得成功后,抗生素灭菌、程控降温、深低温保存等技术的发展,推动了同种带瓣血管（valved homograft conduit, VHC）在心脏外科手术中的广泛应用。同种带瓣血管结构自然、中心血流及抗返流、免疫性低、不易形成血栓、不易附着细菌等特性,成为复杂先天性心脏病重建右（左）室流出道的主要生物材料。但临床上经常会遇到同种瓣膜由于内在异常而退化的情况。虽然这种情况并不一定导致瓣膜功能异常。在年轻患者中可见到同种瓣膜植入后早期衰败,这种结构性衰败可能有其免疫学基础。因为瓣膜的供受体之间不进行主要组织相容性复合体抗原的配型检验,而且患者不常规接受免疫抑制治疗。术后常因发生反流、狭窄及免疫排斥而导致管道早期失功,需二次或多次手术更换VHC。VHC在小儿表现出较成人使用寿命短、耐久性差的特点,同种异体血管移植后也会引起宿主机体的钙化反应,其最终结果造成移植物狭窄和闭塞,这是同种异体血管移植成功的一大障碍。因此如何降低同种异体血管的钙化成为一个新的研究方向。血管钙化过程过去被认为是一个被动过程,与自然老化和细胞凋亡有关。近来研究认为它是一个主动的、细胞参与调节的过程。细胞外钙调蛋白（包括MGP和胎球蛋白-A）是钙磷沉积的强抑制剂。正常情况下,主动脉和冠状动脉壁,以及早期内膜纤维化病变（粥样斑形成之前）中没有MGP表达,但是在动脉粥样硬化性损伤,尤其是脂质丰富的斑快和钙化区域周围表达显着增加。在每一个有钙质沉积的标本中均能检测出MGP,尤其是微钙化的区域。免疫组织化学研究使用抗人类MGP单克隆抗体染色动脉粥样硬化性损伤的动脉壁,发现局部大量的MGP聚集。这说明MGP是一种强有力的抑制动脉钙化的局部作用因子。异体血管移植前必须经过预处理,以消除血管上的异体抗原。降低同种异体血管免疫钙化的方法有多种,如酒精、甲醛、甘油浸泡；戊二醛（glutaraldehyde, GA）、多聚环氧化合物（polyepoxycompound, PC）交联；深低温冷冻、冻干加辐射、青霉素和链霉素离体预处理、玻璃化法、自体内皮细胞衬里等。国内外学者在降低同种异体血管抗钙化方面均做了大量的研究。异体血管去内皮后自体内皮细胞衬里为一种比较理想的方法。摸索出更好的保存和处理同种异体血管的方法,使其像自体血管一样被运用,具有非常重要的意义。结合上述各方面,将自体血管内皮细胞经体外培养,种植于经冻干辐照处理的异体血管,将可能减轻同种异体血管移植的钙化,为其临床运用展现出光明的前景。近年来随着基因工程技术在组织工程的应用,有望通过基因重组技术对种植的血管内皮细胞进行基因修饰,不仅可减轻钙化的问题,而且通过改变抗凝和促凝基因的表达水平.从而增强内皮细胞凝血活性,将提供一个更为理想的方法.这在国内外已有相关文献报道。另外一种方法是用环孢素预处理同种组织,这在早期曾应用于狗的同种静脉,该处理方法可提高移植物的存活,电镜扫描也发现退行性变减轻。环孢素是一种高效免疫抑制剂,已在临床应用于个别瓣膜置换的患者,因为该药有严重的不良反应,一般主张瓣膜移植后慎用。已有大量资料显示同种瓣移植后早期使用免疫抑制剂具有抗钙化作用,其机制在于抑制移植后早期的免疫排斥,减轻了内皮细胞和平滑肌细胞所受到的免疫攻击,保护了内皮细胞和平滑肌细胞。Augelli等对接受移植同种静脉的狗应用与不应用环孢素治疗进行观察,发现应用环孢素狗的移植物存留率提高。周江桥等用自制的环孢素A（CsA）复合肾灌注液对移植肾进行灌注,观察其对肾缺血再灌注损伤的保护作用,结果显示,实验组血清BUN及Cr值明显低于对照组（A组及B组）,证明CsA对移植肾具有保护作用。血管钙化过程过去被认为是一个被动过程,与自然老化和细胞凋亡有关。近来研究认为它是一个主动的、细胞参与调节的过程。细胞外钙调蛋白（包括MGP和胎球蛋白-A）是钙磷沉积的强抑制剂。正常情况下,主动脉和冠状动脉壁,以及早期内膜纤维化病变（粥样斑形成之前）中没有MGP表达,但是在动脉粥样硬化性损伤,尤其是脂质丰富的斑快和钙化区域周围表达显着增加。在每一个有钙质沉积的标本中均能检测出MGP,尤其是微钙化的区域。免疫组织化学研究使用抗人类MGP单克隆抗体染色动脉粥样硬化性损伤的动脉壁,发现局部大量的MGP聚集。这说明MGP是一种强有力的抑制动脉钙化的局部作用因子。因此,通过PCR检测环孢素处理后的同种带瓣血管基质Gla蛋白（Matrix Gla Protein,MGP）的表达水平可了解钙化反应的发生,并可对其强烈程度进行评价。目前未见文献报道有关用环孢素预处理同种瓣膜钙化影响的对照随访研究。目的：研究同种带瓣管道移植环孢素预处理后,糖代谢、免疫反应、移植血管钙含量及MGP mRNA在移植血管中的表达情况,探讨环孢素预处理对同种带瓣血管移植的保护作用。方法：将成年白兔50只随机分2组,体重2.50-3.50Kg。左侧颈动脉（接受移植时的供体带瓣主动脉接受环孢素预处理）作为处理组,右侧颈动脉（接受移植时的供体带瓣主动脉不接受环孢素预处理）作对照组。再将每个组的白兔随机分为5个小组,每组5只,于移植后2,4,8,12周切取移植标本,进行光镜和电镜观察,糖代谢的测定取血后流式细胞仪测定CD25,免疫组化测定CD40的表达,测定钙含量、RT-PCR检测MGP mRNA蛋白。结果：1.形态学：实验组的内皮细胞脱落和平滑肌细胞钙化较对照组轻。2.免疫反应的趋势：实验组：在移植后2-4周CD25、CD40的表达水平明显低于对照组,差别有统计学意义（P<0.05）,但在移植后8、12周的表达水平与对照组比较差别差别无统计学意义（P>0.05）。3.钙含量的变化趋势：实验组在移植后2,4,8,12,周4个不同时间点的钙含量明显低于对照组,差别有统计学意义（P<0.05）。4.基质Gla蛋白（Matrix Gla Protein, MGP） mRNA的表达：移植后2,4周MGP mRNA水平逐渐升高。移植后8,12周水平开始下降。呈现先升高后下降的动态变化。结论：1.环孢素预处理的同种带瓣血管可提高移植血管通畅率,降低血栓形成,血管内皮细胞改变较轻。2.使用免疫抑制剂可以降低移植血管的钙含量,抗钙化的机理在于对带瓣血管内皮细胞和平滑肌细胞的保护。3.同种带瓣血管移植后的钙含量不与当时的免疫排斥水平成正比,但二者互为因果,互相影响。4. MGP mRNA水平的动态变化可能与环孢素抑制血管平滑肌细胞的表型转化及增殖有关。
马旭兵[5]（2012）在《原花青素交联制备人工生物瓣的改性研究》文中提出心脏瓣膜病具有较高的致死率,目前瓣膜置换手术是治疗此类疾病的唯一有效手段。临床上置换手术使用的瓣膜主要是机械瓣和生物瓣。生物瓣置换后无需终身服用抗凝剂和较低的免疫原性等特点使其在瓣膜置换时使用数量逐年增加,近几年这一比列已于机械瓣持平。但是生物瓣手术后易钙化、耐久性差等缺点严重制约了其在临床上的进一步应用。戊二醛作为交联剂交联制备生物瓣始于20世纪60年代末,四十余年来由于其可有效交联瓣膜基质、降低免疫原性以及减少感染风险而被广泛使用。但是戊二醛交联瓣膜易钙化、易撕裂损坏及耐久性差等缺点使其手术置换十年瓣膜失败率超过50%,严重限制了生物瓣的进一步临床应用。因此,目前新型交联剂或交联剂改性的研究成为瓣膜研究领域的热点问题。近年来,我们发现原花青素（Procyanidins, PC）可通过氢键交联瓣膜细胞外基质,可有效抑制其钙化和提高瓣膜稳定性。此外,PC本身还具有多种生物活性,如抗菌、抗血栓和抑制免疫原性等,因而有可能较好地改进或替代GA交联瓣膜的缺陷。因此,本研究采用原花青素前处理戊二醛交联瓣膜及酸性条件下改性处理瓣膜,通过一系列体外性能测试评价,探讨原花青素是否可以做为一种较好的戊二醛改性交联方法或交联剂应用于心脏瓣膜的交联制备。本研究第一、二章通过原花青素与戊二醛共交联处理脱细胞心脏瓣膜,以期制备性能优越的生物瓣材料。采用8mg/mL原花青素交联脱细胞猪主动脉心脏瓣膜4h后,再经1.25mg/mL戊二醛交联44h。本研究通过测定力学性能、抗酶降解能力、溶血率、血小板粘附、抗菌性能、交联稳定性、抗钙化及生物相容性等内容评价其性能。实验结果显示共交联瓣膜性能稳定、力学强度明显提高、抗钙化能力显着优于戊二醛。此外生物相容性检测结果显示,共交联瓣膜组细胞粘附率较戊二醛单独交联提高59%（78.75%±8.7%-19.75%±3.27%）、无明显溶血现象（0.75%±0.36%）、血小板粘附量较戊二醛单独交联显着减少（193±15.5个vs292.6±24.93个）、免疫原性低（49.33%±6.3%vs95.27%±5.26%）。研究结果表明,经原花青素与戊二醛共交联的脱细胞猪主动脉心脏瓣膜的力学性能、稳定性都有显着提高,与传统戊二醛交联瓣膜相比抗酶降解能力相当,较原花青素单独交联瓣膜抗菌能力、交联剂稳定性有显着提高。此外,共交联瓣膜材料有良好的细胞相容性、较好的血液相容性和较低的免疫原性。初步研究表明原花青素和戊二醛共交联制备的人工生物瓣膜材料是一种优良的生物瓣材料,有望应用于生物瓣制备。原花青素在酸性条件下也可交联弹性蛋白。因此,我们设想特定酸性条件下原花青素可同时交联胶原和弹性蛋白,以期制备保持或提高原花青素交联抗钙化的性能,进一步提高瓣膜耐久性。为此本研究第三章采用原花青素在酸性条件下交联猪主动脉生物瓣膜,使弹性蛋白和胶原蛋白这两种瓣膜主要成分均被交联,从抗钙化和力学性能及血液相容性等方面评价了交联改进的效果。研究表明pH6条件下原花青素交联的瓣膜材料形态柔软无皱缩、厚度（0.18±0.01mm）较不交联瓣膜（0.17±0.01）没有明显增厚、弹性模量较戊二醛交联瓣膜降低（15.54±1.19MPa vs22.28±0.33MPa）;同时抗钙化实验显示,pH6条件下原花青素交联的瓣膜材料钙化情况较戊二醛和pH7.4交联显着降低（34.51±1.84μg/mg vs50.85±1.85μg/mg,42.97±2.32pg/mg）；血液相容性实验显示：pH6条件下原花青素交联的瓣膜材料溶血率极低（0.38%±0.2%）、血小板粘附率低于戊二醛交联瓣膜（31.16%±2.51%vs45.2%±2.56%）和较长的部分凝血酶原时间（APTT）.研究表明：酸性条件下原花青素交联脱细胞猪主动脉心脏瓣膜较戊二醛柔软,具有较好的力学性能进而可以有效防止瓣膜撕裂。且该交联瓣膜材料在保留原花青素抗钙化的优势外,在酸性条件下抑制钙化效果更佳。同时该交联瓣膜材料不引起溶血,具有一定的抗血栓形成潜能、抗凝血作用,显示了良好的血液相容性。可见,酸性条件下原花青素交联作为制备人工生物瓣膜材料的改进方法,有望应用于临床瓣膜置换术的生物瓣制备。
王国锋[6]（2011）在《腹腔预处理去细胞光氧化猪主动脉瓣膜制备组织工程瓣膜》文中提出第一部分去细胞结合光氧化对猪主动脉瓣膜组织学和生物力学的影响目的：采用去细胞结合染料介导的光氧化法处理猪主动脉瓣膜,寻找合适去细胞方案；评价光氧化交联法对猪主动脉瓣膜的生物力学性能的影响。方法：体外性能的研究：将120个瓣膜随机分为12组,每组10个,通过对瓣膜多步骤的去细胞效果,以及胶原弹力纤维保存的完整性等方面评价,获得去细胞的合适方案；将修剪好的40去细胞猪主动脉瓣膜随机分为4组,每组10个。F组：为新鲜组,置于无菌PBS液中40℃保存备用。DP组：为去细胞结合光氧化处理组,共计三个亚组：DP12h组：为去细胞处理后再进行染料介导的光氧化处理12小时；DP24h组：去细胞后光氧化反应24小时；DP36h组：去细胞后光氧化反应36小时。通过热皱缩温度、组织含水量、最大抗张强度和最大拉伸距离及体外酶降解实验评价光氧化的最理想时间。体内性能研究：得到合适去细胞光氧化方案后,将45个瓣膜分为3组,新鲜组、戊二醛组、去细胞光氧化组。通过热皱缩温度、最大抗张强度和最大拉伸距离评价各瓣膜性能。然后建立大鼠皮下包埋模型,12周后获取组织标本,通过HE染色,比较各组瓣叶的形态结构变化及炎性反应情况；原子吸收光谱法测定组织钙含量,评价光氧化处理对去细胞猪主动脉瓣膜的体内生物稳定性及抗钙化性能影响。结果：采用多步骤去垢剂-酶消化法处理猪主动脉瓣膜,能够有效的去除瓣膜的细胞成分同时保留了完整的细胞外基质成分。第Ⅷ组脱细胞处理后的猪瓣膜比较理想,组织大体形态和新鲜猪瓣膜相似,光镜观察结果显示：细胞成分去除彻底,未见明显细胞残留成分,胶原弹力纤维保存较完整,组织结构无明显疏松。光镜结果显示,经光氧化反应进一步交联后去细胞瓣膜的组织结构将变紧凑,24小时可达最佳效果。机械性能检测显示,光氧化交联去细胞后的瓣膜,其机械性能将逐渐恢复,至光氧化24小时后去细胞猪主动脉瓣膜的机械性能与新鲜组比较无统计学差异（P>0.05）；体外抗酶降解实验结果表明,去细胞光氧化后的猪主动脉瓣膜抗酶解能力相比新鲜的猪主动脉瓣膜有所提高,光氧化处理24小时后的抗酶解能力要优于12小时,与再处理12小时的效果无明显差异（P>0.05）。体内性能研究结果显示,大鼠皮下包埋实验中,新鲜对照组的猪主动脉瓣膜发生了比较严重、广泛的炎性反应,并出现了一定程度的溶解；去细胞光氧化组的炎性反应是所有组别中最轻的。钙含量测定结果显示去细胞光氧化组钙化程度最低,与其它两组有统计学差异（P<0.05）；去细胞光氧化组的生物稳定性要优于新鲜的猪主动脉瓣膜及戊二醛组,瓣叶无明显降解,炎性细胞浸润少且范围局限,组织结构保存较好并有新生血管形成。戊二醛处理组可见明显大片团聚钙化区域,钙含量测定结果与其它两组比较有统计学差异（P<0.05）。结论：1.采用多步骤去垢剂一酶消化法（0.25%曲那通X-100 24h,0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA 10min,30u/m1DNase-Ⅰ和0.3mg、mlRNase-A 12h）是适合猪主动脉瓣膜的较佳脱细胞方案,能够有效去除其细胞成分,同时完整保存胶原纤维及弹力纤维。2.光氧化反应对去细胞猪主动脉瓣膜的交联作用呈时间依赖性,至光氧化反应24小时性能表现最佳。3.相比新鲜猪主动脉瓣膜,去细胞光氧化反应交联的猪主动脉瓣膜脉免疫原性低,生物耐受程度好。而相对戊二醛处理的猪主动脉瓣膜则具有更好的抗钙化性能。4.去细胞结合光氧化处理有可能成为前景广泛、适合于处理猪主动脉瓣膜新型处理方法。第二部分腹腔预处理制备组织工程瓣膜目的：评价腹腔预处理的去细胞光氧化的猪主动脉瓣膜在体内生物学性能及抗栓性能,细胞生长情况。方法：成年狗10只,雌雄不拘,随机分为两组,一组为腹腔预处理组,一组为普通组。去细胞光氧化的猪主动脉瓣膜,植入狗的腹腔内5天,然后取出裁剪成带瓣血管片,吻合到同一只狗的腹主动脉上,2月后取出,普通组是将去细胞光氧化的猪主动脉瓣膜裁剪成带瓣血管片直接吻合到狗的腹主动脉上,2月后取出。观察其细胞生成情况,Ⅷ因子染色和α-SMA免疫组化染色观察其内皮细胞和肌成纤维细胞的生长情况,通过热皱缩温度、最大抗张强度和最大拉伸距离评价其机械性能。结果：两组狗术后均无死亡,大体观察两组带瓣血管片光滑,无血栓形成。Ⅷ因子染色和α-SMA染色显示预处理组的带瓣血管片上有大量的肌成纤维细胞生成,表面有单层排列的内皮细胞,普通组有少量的肌成纤维细胞和散在的内皮细胞生成。机械性能研究显示腹腔预处理组的带瓣血管片热皱缩温度、最大抗张强度和最大拉伸距离明显强于普通组的带瓣血管片p<0.05。结论：去细胞结合光氧化反应处理的猪主动脉瓣膜植入体内后无不良反应,生物稳定性好,无血栓形成腹腔预处理制备的组织工程瓣膜体内能够再细胞化,其机械性能保持好,抗栓性能好。腹腔预处理方法有望成为构建组织工程瓣膜的新途径。
李秋泽[7]（2009）在《人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架组织工程心脏瓣膜研究》文中提出目的:通过生物信息学的方法找到人与猪细胞外基质蛋白的基因序列差异,并验证猪基质的免疫原性;通过人的细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架构建新型的组织工程瓣膜,并验证人细胞外基质包被瓣膜的效果。方法: （1）人与猪基质蛋白差异性生物信息学分析。（2）制备抗猪与人细胞外基质蛋白的单克隆抗体。（3）用制备的单克隆抗体来检测猪去细胞瓣膜的免疫原性。（4）用人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架来构建组织工程瓣膜并用抗体来检测细胞外基质的粘附效果。结果:通过基因比对的方法找到了人与猪IV型胶原的基因序列差异。通过杂交瘤技术成功制备检测细胞外基质的单克隆抗体。成功构建了由人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架的组织工程瓣膜。用免疫组化的方法检测到猪去细胞瓣膜上有猪的细胞外基质存留,在构建的瓣膜表面成功粘附上了人的细胞外基质。结论:猪去细胞瓣膜支架上检测到有猪的细胞外基质存留;体外构建的组织工程瓣膜上检测到有人的细胞外基质粘附。
洪昊[8]（2009）在《间充质干细胞联合复合支架构建组织工程瓣膜的研究》文中研究说明第一部分组织工程瓣膜种子细胞的研究目的：采用间充质干细胞（MSCs）构建组织工程心脏瓣膜（TEHV），并对MSCs的细胞生物学，及所构建TEHV的生物学和生物力学性能进行研究。方法：分离培养大鼠MSCs和肌成纤维细胞，进行细胞鉴定后分别种植于去细胞猪主动脉瓣叶支架上，然后在体外培养14d构建TEHV，并分别做为实验组A和B。对MSCs的细胞生物学，及两组TEHV的生物学和生物力学性能进行检测。结果：MSCs表达CD29（94．82％）和CD44（93．59％）。免疫组化和荧光染色检测显示MSCs的Vimentin染色均为阳性，部分MSCs的a-SMA染色阳性。实验组B的a-SMA、MMP-13和TIMP-1 mRNA表达均高于实验组A（P＜0．05），而LOX蛋白含量和LOX mRNA表达均低于实验组A（P＜0．05）。两组TEHV的形态学结构相似。实验组A支架上MSCs的Vimentin染色均为阳性，部分MSCs的a-SMA染色阳性。两组TEHV的DNA和羟脯氨酸含量，最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论在采用MSCs体外构建TEHV过程中，其细胞生物学性能与肌成纤维细胞相比存在差异，而两者所构建TEHV的生物学和生物力学性能相当。这说明MSCs构建的TEHV并没有在性能方面体现出明显的优势。有必要通过其他方法，对MSCs构建的TEHV性能加以改善。第二部分bFGF调控组织工程瓣膜构建的研究目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对MSCs构建的TEHV的生物学和生物力学性能的影响。方法：分离培养大鼠MSCs，种植于去细胞瓣叶支架上。将支架置于含10ng／ml bFGF的培养液中，培养14d构建的TEHV做为实验组A。实验组B除培养液中不添加bFGF外，其余同实验组A。实验组C为大鼠肌成纤维细胞构建的TEHV。对MSCs的细胞生物学，及各组TEHV的生物学和生物力学性能进行检测。结果：实验组A和C的a-SMA、MMP-13和TIMP-1 mRNA表达的差异无统计学意义（P＞0．05），但均高于实验组B（P＜0．05）。实验组A和C的LOX蛋白含量和LOX mRNA表达的差异无统计学意义（P＞0．05），但均低于实验组B（P＜0．05）。实验组A支架的再细胞化程度明显优于实验组B和C；DNA和羟脯氨酸含量高于实验组B和C（P＜0．05）。各组TEHV生物力学性能的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：在采用MSCs联合bFGF体外构建TEHV过程中，通过bFGF的调控作用，可以使MSCs的表型特性、基质金属蛋白酶及其抑制物的表达增强，达到与肌成纤维细胞相当的水平；可以使MSCs的LOX蛋白和基因表达降低，达到与肌成纤维细胞相当的水平；可以提高TEHV的生物学性能。但bFGF改善TEHV生物力学性能的作用不明显。第三部分组织工程瓣膜复合支架的研究目的：采用静电纺丝技术制备复合支架，然后在支架上种植MSCs构建TEHV，并研究复合支架对TEHV的生物学和生物力学性能的影响。方法：分离培养大鼠MSCs和肌成纤维细胞。实验组A为猪主动脉瓣叶经去细胞处理后，在其表面涂铺采用静电纺丝技术制备的聚（3—羟基丁酸酯—co—4—羟基丁酸酯）（P3／4HB）纤维膜，构建复合支架。实验组B和C为去细胞猪主动脉瓣叶支架。在实验组A和B的支架上种植MSCs，在实验组C的支架上种植肌成纤维细胞，各组均在体外培养14d构建TEHV，并进行生物学和生物力学检测。结果：复合支架的整个P3／4HB纤维膜结构均一，平均直径是156±3nm，并且与去细胞瓣叶支架表面紧密结合。各组支架的再细胞化程度相当，DNA和羟脯氨酸含量差异无统计学意义（P＞0．05）。实验组A与实验组B、C相比，最大负荷、最大应力和弹性膜量明显上升（P＜0．05），而最大应变的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：复合支架能明显增强TEHV的生物力学性能，而其对TEHV生物学性能的改善作用不明显。第四部分间充质干细胞联合bFGF复合支架构建组织工程瓣膜的研究目的：采用MSCs联合bFGF复合支架构建TEHV，以改善TEHV的生物学和生物力学性能。方法：分离培养大鼠MSCs。实验组A为猪主动脉瓣叶经去细胞处理后，在其表面涂铺采用缓释和静电纺丝技术制备的含有bFGF壳聚糖纳米粒的P3／4HB纤维膜，构建复合支架（bFGF）。实验组B为在去细胞瓣叶表面涂铺P3／4HB纤维膜，构建复合支架。实验组C和D为去细胞瓣叶支架。然后在各组支架上种植MSCs，实验组C在含10ng／ml bFGF的培养液中培养，其余各组均在不含bFGF的培养液中培养。各组均在体外培养14d构建TEHV。各组TEHV进行生物学和生物力学检测。结果：复合支架（bFGF）的载药量为0．00077％，包封率为88．1％，累积释放度为1d约16．3％，5d约42．4％，10d约51．1％和15d约53．9％。复合支架（bFGF）的整个bFGF壳聚糖纳米粒P3／4HB纤维膜结构均一，并且与去细胞瓣叶支架表面紧密结合。实验组A和C支架的再细胞化程度明显优于实验组B和D，DNA和羟脯氨酸含量明显高于实验组B和D（P＜0．05）。实验组A和B与实验组C和D相比，最大负荷、最大应力和弹性膜量明显上升（P＜0．05），而最大应变的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：采用MSCs联合复合支架（bFGF）构建TEHV，能明显改善和增强TEHV的生物学和生物力学性能。复合支架（bFGF）的制备为构建有再生活性和良好功能人工心脏瓣膜替代物提供了新方法和新思路。
姚祖武,陈发林,韩涛[9]（2009）在《向内皮细胞分化的骨髓间充质干细胞体外三维构建组织工程心脏瓣膜的实验研究》文中进行了进一步梳理目的以绵羊骨髓间充质干细胞在体外向内皮细胞诱导分化（MSC-ECs）作为种子细胞,去细胞猪主动脉瓣为支架,体外三维构建组织工程心脏瓣膜（TEHV）。方法羊骨髓穿刺液,以Percoll梯度分离液离心法获取骨髓间充质干细胞（MSCs）,在内皮细胞诱导分化液中体外培养、扩增,鉴定;以酶消化法制备去细胞猪主动脉瓣叶支架,将体外培养扩增的诱导分化后的MSCs种植于支架上,体外三维培养,构建组织工程心脏瓣膜,研究细胞功能及组织学结构。结果MSC-ECs为梭形的成纤维细胞状形态,呈网格状排列;α-SMA、Vimentin、CD-31及Ⅷ因子细胞免疫染色阳性,培养上清液NO及ET-1分别为（165.6±8.9）μmol/L及（50.6±5.6）ng/L,其中NO值明显高于未诱导组（P<0.05）,猪去细胞瓣膜支架去细胞完全,弹力纤维及胶原纤维保持完整;诱导分化的MSCs在支架上生长良好,形成完整的细胞层。结论MSCs在体外向内皮细胞诱导分化后已初步具有内皮细胞功能,在去细胞猪主动脉瓣膜支架上生长良好,可以在体外初步构建TEHV。
张洪波[10]（2009）在《Liotta生物瓣膜对体内环境适应性的相关分析研究》文中指出人工心脏瓣膜已经广泛应用于临床,取得了良好的效果。相对机械瓣膜而言,生物瓣膜不但具有优越的血流动力学性能、无需终身抗凝和抗感染强等优点,它还具有可以运用微创手术将其植入人体的潜力。经皮瓣膜置换术是近年来发展起来的一项微创瓣膜置换手术。随着经皮瓣膜置换术的不断发展,要求我们更多地去深入了解生物瓣膜对该技术的适应性,为临床研制出更为理想的生物瓣膜,为经皮瓣膜置换术的完善和发展奠定基础。因此,对常规手术和经皮瓣膜置换术植入的生物瓣膜临床使用后存在的问题进行研究分析具有非常重要的意义。本论文对62个病人体内取出的LLP（Liotta Low Profile）猪主动脉瓣膜进行了形态学、组织学和矿物学等相关研究,从生物相容性、生物功能性和生物耐久性方面分析研究了Liotta生物瓣膜在人体环境中的适应性。这62个瓣膜中,有一部分是采用经皮瓣膜置换术植入病人体内的。我们重点关注的是瓣膜的纤维层、室面层以及松质层随着植入时间所发生的变化,以期了解瓣膜对血液流动的适应性、不同瓣膜化学处理方法的优缺点,从而为生产厂商优化生产加工和储存生物瓣膜提供理论依据。这62个瓣膜失功能的原因有以下几方面:血流动力学、血栓形成和心内膜炎。其中使用寿命为短期（t≤1年）的瓣膜失功能原因为:血液渗透到瓣叶内部,纤维蛋白沉积,血栓形成;使用寿命为中期（1年﹤t≤5年）的瓣膜:内膜炎和血流动力学性能差;使用寿命为长期（t>5年）的瓣膜:钙化和撕裂所引起的血流动力学障碍。研究目的:本课题通过对62个从人体内取出的LLP猪主动脉瓣膜进行形态学,组织学和矿物学等相关分析,从生物相容性、生物功能性和生物耐久性方面分析研究了Liotta生物瓣膜在人体环境中的适应性,作为第一代经皮瓣膜置换的生物瓣膜,它失功能的原因以及它是否适合用于经皮瓣膜置换术。研究方法:采用62个从病人体内取出的LLP猪主动脉瓣膜。这些瓣膜植入人体的时间长短由几分钟到9年以上。其中10个瓣膜使用寿命为短期,19个瓣膜使用寿命为中期,另外33个瓣膜使用寿命为长期。通过形态学观察,分析瓣膜形态变化和失功能的相关性;通过组织学研究（包括光学显微镜,扫描电子显微镜和透射电镜）,分析瓣膜两个表面和内部层的相关变化;通过矿物学分析研究（包括X射线衍射和核磁共振）,检测瓣膜中钙盐的沉积以及测定钙化组分情况。研究结果:①使用寿命为短期的瓣膜:1)形态学:这10个瓣膜均保有较为完好的血流动力学性能。其中撕裂和穿孔的瓣膜占20%。经皮瓣膜置换术植入的瓣膜中,有些瓣膜的瓣叶有轻微的损伤、撕裂或者瓣叶处于非自然状态。货架期较长的瓣膜植入病人体内后,在短时间内出现了严重的退化和钙化。2)组织学:所有瓣膜表面上的内皮几乎完全脱落,暴露出下面的纤维结构。在纤维层表面可以看到有少量的内皮细胞分散存在。血小板常常存在于瓣叶表面纤维网状结构的凹陷处。瓣膜植入2个月后,血管翳慢慢地从缝合环的两面长出。在纤维层表面,宿主自身内皮细胞开始生长。大多数瓣膜的表面没有发现血栓形成,仅少数瓣膜的瓣叶内部或者缝合处存有血栓。随着植入时间的延续,瓣膜瓣叶表面的形态和结构持续发生着变化,血液中的蛋白沉积在瓣叶表面,形成一均匀的生物膜,厚约有10μm。蛋白生物膜的存在使瓣叶表面变得更光滑,在生物膜比较薄弱或者有凹陷的位置,发现了巨噬细胞的浸入。生物膜结构随瓣膜植入时间的延长由粒状变成纤维状。3)矿物学:少数瓣膜出现较早瓣叶内的钙化或者瓣叶表面的钙化,且均为单瓣叶出现钙化现象。②使用寿命为中期的瓣膜:1)形态学:70%的瓣膜的生物功能性被减弱,主要原因是瓣叶的撕裂和钙化。瓣叶表面的钙化主要是由血栓和损伤所引起,瓣叶内的钙化主要发生在瓣叶压力集中的部位。少数瓣膜在瓣叶缝合处裂开。2)组织学:血管翳沿着瓣叶表面发展的同时也向瓣叶内部发展,随着时间的延长,变得愈加严重,呈不连续断裂式发展,延续到瓣叶活动部位。纤维层表面的内皮层延伸到了瓣叶缝合处。在室面层上,无生物膜的区域有单核细胞和淋巴细胞附着。生物膜覆盖较好区域的生物膜中有少量的单核细胞和淋巴细胞存在。纤维层的结构保存较好。随着植入时间的延续,巨噬细胞、单核细胞和淋巴细胞由瓣叶表面开始向内部渗透,从而为瓣叶内部的钙化创造了条件。由于瓣叶表面结构的改变,瓣叶表面的钙化开始伴随着发展,纤维层表面较为明显。3)矿物学:羟基磷灰石存在于所有的瓣膜内。③使用寿命为长期的瓣膜:1)形态学:极少数植入人体时间长的瓣膜有心内膜炎和血栓形成,但几乎所有的瓣膜都发生了撕裂和穿孔。约97%的瓣膜存在大量的钙化和多处撕裂,瓣膜的功能性严重减弱。由于钙化,瓣叶变硬;纤维层的瓣叶内的钙化转化为瓣叶表面的钙化沉淀物。纤维组织增生覆盖了瓣叶,因此严重影响瓣叶运动的灵活性。2)组织学:部分瓣膜纤维层表面的内皮细胞层仍然存在,这些瓣膜的形态和瓣叶结构均保持完好。瓣叶表面的生物膜呈碎片状存在。细胞和血液碎片等渗透到了瓣叶内部松质层,瓣膜的结构受到严重的破坏,表现为细胞、纤维、细胞外基质和坏死组织混合在一起。瓣叶内的钙化越来越严重,已经穿破瓣叶组织成为瓣叶表面的钙化。3)矿物学:所有的瓣膜均含有程度不同的钙沉淀物。研究结论:①生物相容性:LLP生物瓣膜具有较为良好的血流动力学特性和生物相容性,植入人体后极少产生由血流动力学不适或恶性组织反应而引发的血栓形成。但LLP生物瓣膜在以下几个方面还需要进一步改进:1)随植入人体时间的延续,瓣叶的表面变得粗糙。如能让瓣叶表面生长出一层内皮细胞,从而提高瓣叶表面的光滑度,将更为理想;2)应增强缝合环上的组织生长,从而减小缝合环与瓣叶之间的缝隙,以降低血液通过该缝隙的泄漏;3)应采取措施,不让血管翳延伸超过瓣叶。②生物功能性:LLP生物瓣膜在正常的生理学条件下具有自如的开启、关闭性能,且在心房面没有发现任何的泄漏。然而,由病理学引起的生物瓣膜的退化会大大削弱瓣膜的生物功能性。虽然瓣叶的变硬没有严重地影响瓣膜的生物功能性,但是它会引起瓣叶的撕裂和破损,从而最终影响到瓣膜的生物功能性。因此,如何防止或延缓生物瓣膜的病理性退化是亟待解决的课题。③生物耐久性:一个理想的生物瓣膜替代品的生物耐久性,应超过病人的寿命。但是由于病理的损害限制了生物瓣膜的发展,从而使其生物耐久性被大大地缩短了。Liotta生物瓣膜表面的内皮和基底膜在生产加工过程中受到了严重的破坏。纤维结构的暴露,加速了血液成分和细胞的渗透,从而为钙化的形成创造了条件,使瓣膜的生物耐久性被大大地缩短了。生物瓣膜组织表面内皮化是解决该问题的一个途径,然而体外内皮化方法受宿主内皮细胞来源、培养条件等因素的限制,体内内皮化受到生物瓣膜交联处理的细胞毒性作用等因素的影响,所以进展不大。本研究发现,瓣膜表面的蛋白生物膜不但可以提高瓣膜的生物相容性,同时可以作为一个保护屏障,防止血液成分和细胞渗入瓣叶。由此,我们建议可在瓣膜植入人体前,在生产加工过程中在瓣膜表面覆盖一层人工生物膜,作为屏障,阻止血液成分或组织液成分的渗入、钙盐沉积,预防瓣膜的变性和钙化,延长瓣膜的耐久性。④货架期较长的瓣膜在较短的时间内便出现了严重的退化,因此建议植入人体的瓣膜货架期不应超过2年。⑤Liotta生物瓣膜设计的构型独特,瓣架具有弹性,瓣架环为波浪形,支架的高度低,瓣叶的应力较小,且缝合环为瓣上型。这一设计的初衷是要使瓣膜更近于生理状态。然而,本研究发现,Liotta生物瓣膜并没有显示出明显的优势,有些瓣膜还发生了瓣叶缝合处的断裂。这说明,低剖面的设计影响了Liotta生物瓣膜的长期生物稳定性。⑥通过对经皮瓣膜置换术植入体内的Liotta生物瓣膜形态学观察发现,瓣膜存在撕裂和损伤,部分瓣膜的瓣叶处于非自然状态,严重影响了瓣膜的生物功能性。这表明,目前的经皮瓣膜置换术影响生物瓣膜的生物功能性,手术技术有待进一步的提高,以降低手术过程中对瓣膜的损伤,否则,生物瓣膜是不适合用于经皮瓣膜置换术的。
二、猪脱细胞主动脉瓣叶不同方法预处理后种植内皮细胞的比较研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、猪脱细胞主动脉瓣叶不同方法预处理后种植内皮细胞的比较研究（论文提纲范文）
（1）钙三醇对脂多糖诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 钙三醇对脂多糖诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 钙三醇对脂多糖诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述:钙三醇与钙化性主动脉瓣膜疾病研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表的论文 |
（2）鱼鳔源抗钙化心血管生物材料的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 心血管疾病概述 |
| 1.1.1 心血管疾病流行病学 |
| 1.1.2 心脏瓣膜钙化与血管钙化 |
| 1.2 生物心脏瓣膜的研究进展 |
| 1.2.1 天然心脏瓣膜 |
| 1.2.2 人工心脏瓣膜 |
| 1.2.3 引起生物瓣膜钙化的因素 |
| 1.2.4 生物瓣膜的抗钙化研究 |
| 1.3 抗钙化人工血管的研究进展 |
| 1.3.1 天然血管 |
| 1.3.2 人工血管 |
| 1.3.3 人工血管的抗钙化研究 |
| 1.4 鱼鳔源生物材料的研究进展 |
| 1.4.1 鱼鳔的功能 |
| 1.4.2 鱼鳔的成分 |
| 1.4.3 鱼鳔在生物医学工程领域的应用 |
| 1.5 研究目的和实验设计 |
| 第二章 鱼鳔脱细胞基质作为生物瓣膜材料可行性研究 |
| 2.1 实验材料及设备 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 脱细胞处理与交联 |
| 2.2.2 电子显微镜 |
| 2.2.3 冰冻切片与组织学染色 |
| 2.2.4 细胞外基质定量 |
| 2.2.5 DNA定量 |
| 2.2.6 机械性能测定-单轴拉伸实验 |
| 2.2.7 抗胶原酶解稳定性实验 |
| 2.2.8 差示扫描量热法 |
| 2.2.9 血液相容性实验 |
| 2.2.10 细胞相容性实验 |
| 2.2.11 体外抗钙化实验 |
| 2.2.12 皮下埋植实验 |
| 2.2.13 实验数据分析 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 组织学染色与细胞外基质评价 |
| 2.3.2 电子显微镜结果 |
| 2.3.3 机械性能、热稳定性及抗酶解稳定性 |
| 2.3.4 血液相容性 |
| 2.3.5 细胞相容性 |
| 2.3.6 体外牙周膜干细胞成骨分化实验 |
| 2.3.7 体内抗钙化实验 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 鱼鳔脱细胞基质制备小口径人工血管可行性研究 |
| 3.1 实验材料及设备 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 实验动物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 鱼鳔源小口径人工血管的制备 |
| 3.2.2 大鼠腹主动脉原位移植手术与取材 |
| 3.2.3 电子显微镜 |
| 3.2.4 冰冻切片与组织学染色 |
| 3.2.5 免疫荧光染色 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 术后鱼鳔源血管支架的形貌与组织学染色结果 |
| 3.3.2 鱼鳔源小口径人工血管的通畅情况 |
| 3.3.3 血管内皮细胞和平滑肌细胞的生长情况 |
| 3.3.4 巨噬细胞表型鉴定 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 不同种类鱼鳔脱细胞基质的性能研究 |
| 4.1 实验材料及设备 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 脱细胞处理与交联 |
| 4.2.2 电子显微镜 |
| 4.2.3 冰冻切片与组织学染色 |
| 4.2.4 细胞外基质定量 |
| 4.2.5 DNA定量 |
| 4.2.6 机械性能测定-单轴拉伸实验 |
| 4.2.7 抗酶解稳定性实验 |
| 4.2.8 差示扫描量热法 |
| 4.2.9 热皱缩温度 |
| 4.2.10 血液相容性实验 |
| 4.2.11 细胞相容性实验 |
| 4.2.12 皮下埋植实验 |
| 4.2.13 实验数据分析 |
| 4.3 实验结果与讨论 |
| 4.3.1 四种鱼的生活习性与新鲜鱼鳔的特征 |
| 4.3.2 组织学染色与细胞外基质定量 |
| 4.3.3 电子显微镜结果 |
| 4.3.4 机械性能 |
| 4.3.5 热力学稳定性与抗酶解稳定性 |
| 4.3.6 血液相容性 |
| 4.3.7 细胞相容性 |
| 4.3.8 体内抗钙化实验结果 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）新型全生物肺动脉带瓣管道与全生物人工瓣膜的临床前动物实验（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 一、生物心脏瓣膜的临床应用与进展 |
| 二、人工生物心脏瓣膜钙化的机制研究进展 |
| 三、心脏瓣膜新材料研究发展趋势与进展 |
| 第一部分 戊二醛交联鞣制及丁二醇抗钙化改性后牛心包的材料学研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 新型全生物肺动脉带瓣管道的大动物试验 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 新型全生物主动脉瓣的大动物试验 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 实验讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（4）环孢素预处理对同种带瓣血管移植的保护作用（论文提纲范文）
| 主要英文缩写 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硏究生阶段发表文章 |
（5）原花青素交联制备人工生物瓣的改性研究（论文提纲范文）
| 论文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 原花青素与戊二醛共交联心脏瓣膜的性能评价 |
| 前言 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 脱细胞猪心脏瓣膜制备 |
| 2.2 脱细胞心脏瓣膜的交联 |
| 2.3 扫描电镜(SEM)观察 |
| 2.4 力学性能 |
| 2.5 抗钙化能力测定 |
| 2.6 体外抗酶降解 |
| 2.7 瓣膜间质细胞的分离与培养 |
| 2.8 各共交联溶液对细胞的毒性检测 |
| 2.9 交联稳定性测试 |
| 2.9.1 浸泡不同时间交联瓣膜的力学性能变化 |
| 2.9.2 交联材料中交联剂的释放 |
| 2.10 共交联瓣膜材料抗菌能力评价 |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 脱细胞及交联瓣膜的形貌 |
| 3.2 力学性能测试 |
| 3.3 抗钙化生成能力 |
| 3.4 抗酶降解 |
| 3.5 各组共交联液对于细胞毒性评价 |
| 3.6 交联稳定性 |
| 3.7 共交联瓣膜的抗菌能力 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二章 原花青素与戊二醛共交联心脏瓣膜的相容性 |
| 前言 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 脱细胞猪心脏瓣膜制备 |
| 2.2 瓣膜间质细胞的分离与培养 |
| 2.3 交联剂配比的确定 |
| 2.4 脱细胞心脏瓣膜的交联制备 |
| 2.5 细胞相容性评价 |
| 2.6 扫描电子显微镜(SEM)观察 |
| 2.7 溶血实验 |
| 2.8 血小板粘附 |
| 2.9 单核巨噬细胞的粘附 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 共交联剂配比及交联浓度的确定 |
| 3.2 脱细胞及交联的心脏瓣膜形貌 |
| 3.3 细胞相容性 |
| 3.4 溶血 |
| 3.5 血小板粘附 |
| 3.6 免疫原性评价 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三章 酸性条件下原花青素交联猪脱细胞心脏瓣膜的研究 |
| 前言 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 猪主动脉脱细胞心脏瓣膜制备 |
| 2.2 脱细胞瓣膜的交联 |
| 2.3 不同pH交联瓣膜柔软比较 |
| 2.4 抗钙化测定 |
| 2.5 最大拉伸强度和弹性模量的测定 |
| 2.6 交联度测定 |
| 2.7 厚度测定 |
| 2.8 体外抗酶降解 |
| 2.9 溶血试验 |
| 2.10 血小板粘附实验 |
| 2.11 体外抗凝血性能的评价 |
| 2.12 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 交联后瓣膜形貌 |
| 3.2 交联瓣膜的柔软比较 |
| 3.3 厚度测量 |
| 3.4 力学性能测定 |
| 3.5 交联度测定 |
| 3.6 抗钙化能力测定 |
| 3.7 溶血实验 |
| 3.9 抗凝血性能评价 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 人工心脏瓣膜的发展历程 |
| 1 心脏瓣膜 |
| 2 人工心脏瓣膜 |
| 2.1 机械瓣 |
| 2.2 生物瓣 |
| 2.3 生物瓣与机械瓣的比较及手术选择 |
| 3 生物瓣存在的问题及解决方法 |
| 3.1 戊二醛 |
| 3.2 戊二醛的交联改性处理 |
| 3.3 环氧类化合物 |
| 3.4 碳二亚胺 |
| 3.5 京尼平 |
| 3.6 单宁酸( |
| 3.7 槲皮素 |
| 3.8 原花青素 |
| 4 理想的人工生物瓣 |
| 5. 组织工程心脏瓣膜 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）腹腔预处理去细胞光氧化猪主动脉瓣膜制备组织工程瓣膜（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 去细胞结合光氧化对猪主动脉瓣膜组织学和生物力学的影响 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料和方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 结论 |
| 5. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 腹腔预处理构建组织工程瓣膜的实验研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料和方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 |
（7）人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架组织工程心脏瓣膜研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 详细摘要 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 一、研究背景 |
| 二、课题总体设计 |
| 参考文献 |
| 第一部分 人与猪基质蛋白差异性生物信息学分析 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验步骤和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 针对人与猪基质蛋白差异片段的单克隆 抗体制备 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验步骤和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 针对基质蛋白差异片段单抗的特异性检 测 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验步骤和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 猪瓣支架组织工程心脏瓣膜构建人基 质蛋白履盖效果检测 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验步骤和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述：组织工程心脏瓣膜中种子细胞粘附机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 读博士期间撰写及发表论文情况 |
| 致谢 |
（8）间充质干细胞联合复合支架构建组织工程瓣膜的研究（论文提纲范文）
| 一、英汉缩略词表 |
| 二、中文摘要 |
| 三、英文摘要 |
| 四、前言 |
| 五、正文 |
| 第一部分 组织工程瓣膜种子细胞的研究 |
| 第二部分 bFGF调控组织工程瓣膜构建的研究 |
| 第三部分 组织工程瓣膜复合支架的研究 |
| 第四部分 间充质干细胞联合bFGF复合支架构建组织工程瓣膜的研究 |
| 参考文献 |
| 六、结论展望 |
| 七、综述 |
| 参考文献 |
| 八、附录1 |
| 九、附录2 |
| 十、致谢 |
（9）向内皮细胞分化的骨髓间充质干细胞体外三维构建组织工程心脏瓣膜的实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 MSCs的分离 |
| 1.3 MSC-ECs培养及体外扩增 |
| 1.4 MSC-ECs的表型鉴定及细胞功能测定 |
| 1.5 MSC-ECs生长曲线测定 |
| 1.6 MSC-ECs的超微结构研究 |
| 1.7 瓣膜支架的制备及预处理 |
| 1.8 TEHV体外构建方法 |
| 1.9 构建的TEHV瓣叶的组织学研究 |
| 2 结 果 |
| 2.1 MSC-ECs的体外培养、扩增及形态学特点 |
| 2.2 MSC-ECs的表型鉴定及细胞功能测定 |
| 2.3 去细胞猪主动脉瓣支架的组织学检查 |
| 2.4 构建的TEHV的形态学检查 |
| 3 讨 论 |
（10）Liotta生物瓣膜对体内环境适应性的相关分析研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 问题的提出和研究意义 |
| 1.1.1 问题的提出 |
| 1.1.2 研究意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 人工心脏瓣膜的进展 |
| 1.2.2 人工生物瓣膜钙化机制的研究 |
| 1.3 研究的目的和内容 |
| 1.3.1 研究的目的 |
| 1.3.2 研究的主要内容 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 形态学观察 |
| 2.3.2 体外测试 |
| 2.3.3 组织学观察 |
| 2.3.4 矿物学观察 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 形态学观察 |
| 2.4.2 体外测试 |
| 2.4.3 扫描电子显微镜 |
| 2.4.4 光学显微镜 |
| 2.4.5 透射电镜 |
| 2.4.6 矿物学 |
| 2.5 本章小结 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料 |
| 3.3 方法 |
| 3.3.1 形态学观察 |
| 3.3.2 组织学观察 |
| 3.3.3 矿物学观察 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 形态学观察 |
| 3.4.2 扫描电子显微镜 |
| 3.4.3 光学显微镜 |
| 3.4.4 透射电镜 |
| 3.4.5 X 光 |
| 3.4.6 核磁共振 |
| 3.5 本章小结 |
| 5 年)Liotta 生物瓣膜的相关分析'>4 使用寿命为长期(即 t>5 年)Liotta 生物瓣膜的相关分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料 |
| 4.3 方法 |
| 4.3.1 形态学观察 |
| 4.3.2 组织学观察 |
| 4.3.3 矿物学观察 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 形态学观察 |
| 4.4.2 扫描电子显微镜 |
| 4.4.3 光学显微镜 |
| 4.4.4 透射电镜 |
| 4.4.5 X 光 |
| 4.4.6 核磁共振 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 对LLP 猪主动脉瓣膜的总体分析 |
| 5.1 瓣膜的生物相容性、生物功能性、生物耐久性 |
| 5.2 猪主动脉瓣膜替换人病理瓣膜的可接受性 |
| 5.3 猪主动脉瓣膜在人体内的适应性 |
| 5.4 生物瓣膜失效的相关机制分析 |
| 5.4.1 钙化 |
| 5.4.2 血管翳引起的机能障碍 |
| 5.5 生物瓣膜加工处理的最佳化 |
| 5.6 经皮瓣膜置换 |
| 5.7 本章小结 |
| 6 结论、创新性与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新性 |
| 6.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A 作者在攻读博士学位期间发表的论文目录 |
| B 附表 |
四、猪脱细胞主动脉瓣叶不同方法预处理后种植内皮细胞的比较研究（论文参考文献）
- [1]钙三醇对脂多糖诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制研究[D]. 冯昊. 重庆医科大学, 2020(12)
- [2]鱼鳔源抗钙化心血管生物材料的研究[D]. 李彬寒. 北京协和医学院, 2020(05)
- [3]新型全生物肺动脉带瓣管道与全生物人工瓣膜的临床前动物实验[D]. 任恺. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [4]环孢素预处理对同种带瓣血管移植的保护作用[D]. 罗程. 广西医科大学, 2012(09)
- [5]原花青素交联制备人工生物瓣的改性研究[D]. 马旭兵. 华东师范大学, 2012(12)
- [6]腹腔预处理去细胞光氧化猪主动脉瓣膜制备组织工程瓣膜[D]. 王国锋. 中南大学, 2011(12)
- [7]人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架组织工程心脏瓣膜研究[D]. 李秋泽. 第二军医大学, 2009(10)
- [8]间充质干细胞联合复合支架构建组织工程瓣膜的研究[D]. 洪昊. 华中科技大学, 2009(11)
- [9]向内皮细胞分化的骨髓间充质干细胞体外三维构建组织工程心脏瓣膜的实验研究[J]. 姚祖武,陈发林,韩涛. 福建医科大学学报, 2009(02)
- [10]Liotta生物瓣膜对体内环境适应性的相关分析研究[D]. 张洪波. 重庆大学, 2009(12)
标签：相容性论文; 主动脉瓣论文; 主动脉瓣关闭不全论文; 心脏瓣膜论文; 生物相容性论文;