一、Inhibitory effect of antisense oligodeoxynucleotide to p44/p42 MAPK on angiotensin Ⅱ-induced hypertrophic response in cultured neonatal rat cardiac myocyte（论文文献综述）
徐建荣[1]（2016）在《PKA信号通路参与UrotensinII致心肌肥大的分子机制研究》文中指出研究背景随着人口老龄化及城镇化进程的加速,我国心血管疾病（Cardiovascular diseases,CVD）患病率及死亡率仍处于上升阶段。目前,CVD死亡占城乡居民总死亡原因的首位,在农村为44.8%,城市为41.9%,已经严重威胁人类健康[1]。预测截止2030年,我国CVD患者将增加2130万,因此疾病而死亡的患者将增加770万[2]。因此,CVD已逐渐成为人们所面临的重要健康问题,了解各种CVD疾病的发病机制并针对相应靶点进行对应预防和治疗已刻不容缓。心力衰竭是目前CVD中最常见,对患者危害最大的疾病,许多CVD患者最终死于该疾病。随着对该疾病研究的不断深入,越来越多证据表明心力衰竭发生和发展的基础是心肌肥大[3]。因此对心肌肥大过程中心肌细胞接受相应刺激后下游一系列胞内的确切机制的研究越来越引发人们的关注。尾加压素II（Urotensin II,UII）是一种生长抑素样环肽,最早是在硬骨鱼的脊髓尾部神经分泌系统被发现并分离出来,人体内UII（h UII）也于1998年被克隆出来[4]。UII及其受体分布十分广泛,人体内多种组织中都可发现其表达,尤以心血管系统内分布最多。UII是目前发现的最强的缩血管物质,但其作用并不仅限于此,在不同种属、身体不同部位对血管的作用也千差万别。还有研究表明,UII也可调节心功能。有实验表明,在离体实验中,UII对人的心房和心室表现出正性肌力作用,其对于右心房肌小梁收缩的促进作用呈剂量依赖性[5]。Douglas等提出,与早期充血性心力衰竭患者相比,h UII及其受体的m RNA在慢性心力衰竭终末期患者心肌细胞中表达明显增加[6]。Lapp等发现人体内血浆h UII明显升高与心功能损害正相关[7]。我们前期研究也发现UII呈浓度依赖性的抑制大鼠心功能。因此,对UII诱导心肌肥大通路机制的研究可为预防治疗该疾病提供新的思路。另有研究提示,心肌细胞的肥大过程涉及多条信号通路,比如G蛋白、小G蛋白、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、蛋白激酶C、TGF-β等,但UII对于诱导心肌肥大是否同样依赖于这些通路尚未可知。本实验前期研究结果表明,PKA信号通路在UII诱导的心力衰竭大鼠中发挥至关重要的作用。在Langendorff离体大鼠心脏模型上,PKA的特异性抑制剂KT-5720可以阻断UII作用于心力衰竭大鼠心脏功能的作用,由此可推断出UII可能通过PKA途径对大鼠心脏功能进行调节。那么,UII在致心肌肥大过程中,PKA信号通路是否参与了这一过程,如若参与,可能涉及的细胞分子机制是什么?近期有文献报道,UII致心肌肥大效应与心肌细胞内Ca2+及其相关通路活化有关,心肌细胞的肌浆网可通过调节多种钙调蛋白保持Ca2+进出胞浆处于动态平衡状态,从而使其浓度保持在一定范围内,进而调控心肌细胞的收缩和舒张功能。本实验前期研究结果也表明UII可能通过PKA途径抑制心室肌细胞L-型钙电流而发挥心功能抑制作用,故本课题推测UII致心肌细胞肥大作用可能与PKA信号通路及下游钙相关调控蛋白对胞内Ca2+浓度的调节有关。本实验计划分三个部分进行。首先,在腹主动脉缩窄术所导致的心衰模型上,观察模型大鼠心功能情况及心肌细胞形态学变化,检测胞内UII及钙相关蛋白的表达情况。其次,在离体培养的乳鼠心肌细胞上,给予不同浓度UII处理,在不同时间点进行相应的分析检测,观察胞内UII、Ca2+及相关蛋白的表达变化是否受到UII浓度和处理时间的影响。最后,在离体培养的乳鼠心肌细胞中加入PKA的特异性抑制剂KT-5720,观察PKA信号通路被阻断后UII对心肌细胞肥大作用的诱导是否会改善。本实验拟探明UII对心肌肥大诱导作用的机制是否与PKA信号通路及下游各种钙调蛋白相关,为今后心肌肥大乃至心力衰竭疾病的预防和治疗的过程提供新的干预靶点。第一部分UⅡ在慢性压力超负荷大鼠心肌组织中表达的变化目的:观察慢性压力超负荷大鼠的心功能情况,心肌组织形态学以及UII、PKA及相关蛋白表达情况。方法:采用腹主动脉缩窄术建立慢性压力超负荷大鼠模型,随机选取32只为假手术组,其余40只制作腹主动脉缩窄模型,于造模后2w、4w、8w、12w动态观测各项指标:⑴超声心动图对心功能进行整体评价;⑵右颈总动脉插管行血流动力学检测;⑶HE染色观察心肌组织形态变化,进而推断病理改变;⑷免疫组化学法观察UⅡ、RYR2、PKA、p-PKA、ser16p-PLN、PLN、SERCA2a在心肌组织中表达的变化。结果:（1）超声心动图结果显示模型组动物室间隔厚度（IVST）、左室后壁厚度（LVPWTd）左室舒张末期内径（LVDd）于术后均明显增厚,至术后12w时,厚度增加极显着,心室腔扩大。（2）血流动力学结果显示,随着造模时间的增加,造模后左心室舒张末压（LVEDP）增加,左心室收缩压（LVSP）、左心室压力上升/下降最大速率（+dp/dtmax、-dp/dtmax）逐渐降低,造模8w后差异极其显着。（3）HE染色结果显示模型组动物心肌细胞肥大,心肌纤维增生,心肌细胞排列紊乱,尤以8w、12w显示最为明显。（4）免疫组化结果显示模型组UII、Ry R2、p-PKA、p-PLN、SERCA2a等蛋白的表达量显着增加并表现出时间依赖性。结论:（1）通过腹主动脉缩窄术建立慢性压力超负荷心力衰竭大鼠模型,结果发现心室腔增大,心肌出现肥大,心肌纤维化增生,且呈时间依赖性。（2）UⅡ、RYR2、p-PKA、ser16p-PLN、SERCA2a在心肌组织中的表达呈时间依赖性增加。（3）PKA信号通路可能在UII促进心力衰竭发生过程中发挥重要作用。第二部分UrotensinⅡ在诱导心肌细胞肥大过程中的作用目的:进一步探讨不同浓度UII在不同作用时间下对离体培养乳鼠心肌细胞的作用。方法:对乳鼠心肌细胞进行分离和培养,将原代心肌细胞随机分组:⑴正常对照组;（2）UⅡ组（U II浓度分别是10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L）,每种浓度的UII分别在不同的作用时间点进行检测（12h、24h、48h）。采用MTT法检测心肌细胞的活力情况,应用倒置相差显微镜下观察心肌细胞生长状态,采用图像分析软件测量心肌细胞的截面面积,BCA法检测心肌细胞胞内蛋白质总量,Hoechst33258染色检测心肌细胞胞内DNA的总量以及相应蛋白质/DNA的比值,Fura-3AM荧光染色用于检测心肌细胞胞浆内钙离子浓度变化,Western blot方法检测离体培养心肌细胞胞内ANP、p-PKA、PKA、Ry R2、p-PLN、PLN、SERCA2a蛋白的表达变化。结果:（1）MTT实验结果显示,在相同处理时间下,从无UII到10-6mol/L浓度下,活的心肌细胞数量有随UII浓度增加而呈显着增加的趋势。UII处理时间延长,细胞活性也随时间依赖性增强。（2）离体培养的乳鼠心肌细胞截面面积、蛋白质总量有显着增加的趋势（p<0.05）,而DNA总量无显着变化,相应蛋白质/DNA的比值也显着升高（p<0.05）。（3）随着UII处理浓度的增加（从0-10-6mol/L）,心肌细胞胞内Ca2+浓度呈显着上升趋势。（4）与对照组相比,UII处理组的心肌细胞中ANP、p-PKA、Ry R2、p-PLN、SERCA2a等蛋白的表达量均呈剂量依赖性的升高,且在10-9mol/L的处理浓度下即表现出与对照组显着的差异（p<0.05）。结论:（1）UII可增强心肌细胞的活性,并可诱导心肌细胞肥大。（2）UII诱导心肌细胞肥大作用可能有PKA信号通路的参与。第三部分PKA信号转导通路在UⅡ促进心肌细胞肥大过程中的作用及其机制研究目的:探讨PKA信号通路参与UII诱导的心肌细胞肥大作用及其机制。方法:乳鼠心肌细胞分离和培养,采用原代心肌细胞随机分组:⑴对照组;⑵UⅡ组:UⅡ10-8mol/L;⑶UⅡ+KT-5720组:UⅡ10-8mol/L+KT-5720;（4）KT-5720组。于倒置荧光显微镜下拍照,并用相应软件测量心肌细胞的截面面积,检测心肌细胞胞内蛋白质总量（BCA法）,Hoechst33258染色检测心肌细胞胞内DNA的总量,计算相应蛋白质/DNA的比值,Fura-3AM荧光染色用于探测心肌细胞胞浆内钙离子浓度变化,Western blot方法检测离体培养心肌细胞p-PKA、PKA、p-PLN、PLN、SERCA2a的蛋白表达变化。结果:（1）10-8mol/L浓度的UⅡ处理可诱导心肌肥大,而KT-5720预处理则可抑制心肌细胞的肥大。（2）UII可导致肥大心肌细胞内钙离子浓度升高,KT-5720预处理可减弱钙浓度的升高。（3）KT-5720的预处理可使UII诱导的p-PKA、p-PLN、SERCA2a等蛋白的升高显着降低。结论:PKA信号通路参与了UII诱导的心肌细胞肥大过程。
刘红梅,陈新,孙丹云,唐渊,李晓辉[2]（2014）在《miR-199a-5p在血管紧张素Ⅱ致心肌肥大细胞中的表达变化》文中提出目的研究miR-199a-5p在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）导致肥大心肌细胞中的表达变化。方法雄性SD大鼠30只,采用完全随机方法将其分为假手术组、模型组、氯沙坦组[10 mg/（kg·d）],每组10只。制备腹主动脉缩窄致心肌肥大模型,在术后第28天,检测心脏质量指数和左心室质量指数,HE染色观察左心室心肌细胞肥大情况,qRT-PCR方法测定左心室miR-199a-5p表达。取10只13 d SD乳鼠,消化获得心肌细胞,分为对照组、模型组（1×10-7mol/L AngⅡ）和氯沙坦组（1×10-7mol/L AngⅡ+1×10-6mol/L氯沙坦钾）,qRT-PCR方法测定心肌细胞miR-199a-5p表达;分别转染miR-199a-5p模拟物或者抑制物,观察[3H]-亮氨酸的掺入情况。结果腹主动脉缩窄大鼠左心室心肌细胞明显肥大,左心室miR-199a-5p表达显着升高（P<0.05）,AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦可显着逆转上述变化。体外实验发现氯沙坦可显着降低AngⅡ刺激致乳鼠心肌细胞所致的miR-199a-5p显着升高（P<0.05）,采用转染miR-199a-5p抑制物的方法抑制miR-199a-5p表达可显着抑制AngⅡ刺激所致的心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入（P<0.01）;且转染miR-199a-5p模拟物增加miR-199a-5p表达可显着增加[3H]-亮氨酸掺入（P<0.01）。结论 miR-199a-5p是介导AngⅡ致心肌细胞肥大的重要调节分子,可能在该信号通路中发挥重要作用。
张玮函,郭海燕,阎晶晶,刘郁,李昕[3]（2010）在《替米沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及p-ERK1/2的调节作用》文中指出观察替米沙坦（Telmisartan）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大及p-ERK1/2表达的影响.通过培养新生大鼠心肌细胞、用相差显微镜计数心肌细胞搏动频率、细胞图像分析系统测量细胞体积、考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量、[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;以ERK免疫沉淀活性试剂盒测定ERK活性;用Western-blot测定p-ERK1/2表达.实验结果显示Telmisartan能显着降低AngⅡ诱导的心肌细胞搏动频率、体积、总蛋白含量、蛋白合成速率上升,同时对p-ERK1/2表达具有剂量、时间依赖性抑制作用.因此考虑Telmisartan可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制与抑制p-ERK1/2表达有关.
李树生,冯俊,郑智,梁黔生[4]（2008）在《Effect of Sodium Tanshinone ⅡA Sulfonate on Phosphorylation of Extracellular Signal-regulated Kinasel/2 in Angiotensin Ⅱ-induced Hypertrophy of Myocardial Cells》文中认为Objective:To observe the effects of sodium tanshinoneⅡA sulfonate（STS） on angiotensinⅡ（AngⅡ）-induced hypertrophy of myocardial cells through the expression of phosphorylated extracellular signal-regulated kinase（p-ERK1/2）.Methods:In the primary culture of neonatal rat myocardial cells,the total protein content in myocardial cells was determined by coomassie brilliant blue and the protein synthesis rate was measured by[3H]-Leucine incorporation as indexes for hypertrophy of myocardial cells.The expression of p-ERK1/2 was determined using Western blot and immunofluorescence labeling.Results:（1）The total protein and protein synthesis rate increased significantly in contrast to the control group after the myocardial cells were stimulated by AngⅡ（1μmol/L）for 24 h;STS markedly inhibited the increment of the total protein level induced by AngⅡand the syntheses of protein.（2）After pretreatment of myocardial cells with AngⅡ（1μmol/L）for 5 min,the p-ERK1/2 protein expression was increased,with the most obvious effect shown at about 10 min;pretreatment of myocardial cells with STS at different doses（2,10, 50μmol/L）for 30 min resulted in obvious inhibition of the expression of p-ERK1/2 stimulated by AngⅡin a dose-dependent manner.（3）After the myocardial cells were stimulated by AngⅡ（1μmol/L）, the immunofluorescence of ERK1/2 rapidly appeared in the nucleus.The activation and translocation process of ERK1/2 induced by AngⅡwas blocked distinctly by STS.Conclusion:STS inhibited the myocardial cell hypertrophy induced by AngⅡ,and the mechanism may be associated with the inhibition of p-ERK1/2 expression.
石永英[5]（2008）在《TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞肥大及葛根素干预的实验研究》文中认为左室肥厚（Left Ventricular Hypertrophy,LVH）是高血压主要的靶器官损害之一,约有30%的高血压并发左室肥厚。众多研究表明LVH是发生心血管事件的独立危险因素。因此,逆转LVH是高血压治疗的主要目标之一。心肌细胞肥大是左室肥厚的主要病理变化,其发生、发展的分子机制正越来越受到重视。对心肌细胞肥大病理生理过程中细胞内信号转导机制的研究将有助于进一步探讨左室肥厚的发病机制,并为采取积极有效的药物治疗寻找新途径。转化生长因子β1（Transforming growth factor beta 1,TGF-β1）是一种调控细胞生长的重要细胞因子,参与免疫调节、创伤修复、胚胎发生、细胞增殖与凋亡、骨髓造血等调控。研究表明TGF-β1参与了高血压心肌肥厚、冠状动脉粥样硬化、心肌梗死后心力衰竭及心肌病等多种心血管疾病的发生、发展过程。近年研究发现TGF-β1由心肌成纤维细胞在血管紧张素II受体（Angiotensin II Receptor,ATR II）的刺激下,通过内分泌及旁分泌的方式产生,参与心肌细胞肥大、细胞外基质增生及心肌成纤维细胞肥大和增殖的病理生理过程,但其具体机制尚不明确。TGF/Smad （Drosophlia mothers against dpp and Celegans Sma,Smad）通路参与了心肌细胞肥大的过程,其具体作用复杂,且与其他信号通路交错表达,仍有待进一步研究。对TGF-β1在心肌细胞肥大中的作用特点、TGF-β1诱导心肌肥厚时调控核转录的下游信号分子及针对TGF-β1致肥大效应的干预手段等也研究较少。本研究以TGF-β1诱导的新生大鼠心肌细胞体外原代培养为实验模型,从观察药物刺激后心肌细胞的肥大和凋亡效应,并观察细胞内信号转导通路Smads的作用、癌基因p15及c-myc的表达、以及葛根素干预等的影响,旨在从多个角度探讨TGF-β1对心肌细胞肥大中的作用,为左室肥厚的发病机制和临床药物防治提供依据。实验内容主要包括以下三部分:第一部分新生SD大鼠心肌细胞的原代培养及鉴定目的建立新生SD大鼠心肌细胞体外原代培养模型。方法采用胰酶分步消化法、差速贴壁法及化学抑制法分离、纯化新生SD大鼠心肌细胞后作原代培养,采用倒置显微镜、透射电镜观察细胞。结果倒置显微镜下观察原代培养的心肌细胞呈不规则三角形、多边形,多数单个或成团细胞出现自发性搏动。培养的心肌细胞在3～7天内细胞形态和细胞搏动良好。透射电镜下观察心肌细胞线粒体丰富,肌丝排列整齐。结论采用胰酶消化法、差速贴壁法及化学抑制法建立体外原代培养的新生SD大鼠心肌细胞,经倒置显微镜和透射电镜观察证实所培养的细胞为心肌细胞。第二部分TGF-β1诱导的心肌细胞肥大和凋亡及其与Smads通路和癌基因相关蛋白的关系目的1.观察TGF-β1诱导的心肌细胞肥大和凋亡及其相互关系;2.探讨Samds通路在TGF-β1诱导心肌细胞肥大时的作用;3.了解TGF-β1诱导心肌细胞肥大时癌基因相关蛋白p15、c-myc的表达及其与Samds通路的相关性。方法应用不同浓度的TGF-β1（0.1μg/L、1μg/L、3μg/L）分别刺激15min、30min、1h、2h、24h后观察TGF-β1对心肌细胞的影响,单纯DMEM培养液组为空白对照组。TGF-β1诱导孵育24h,采用3H-亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率,PI标记细胞内RNA含量,实时荧光定量PCR检测心肌细胞内ANF、α-MHC及β-MHC的mRNA表达,TdT-FragEL染色及FCM检测TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡,透射电镜观察心肌细胞形态学变化。TGF-β1（3μg/L）作诱导浓度孵育心肌细胞15min、30min、1h、2h、24h,Western-blot检测Smad2、pSmad2、Smad2/3、p15、c-myc的蛋白表达。同时应用Smad2siRNA与TGF-β1（3μg/L）共孵育2小时和24h,特异性抑制Smads表达后观察心肌细胞蛋白合成速率、心脏胚胎型基因和Smad2的mRNA表达及Smad2、p15和c-myc的蛋白表达。结果1.TGF-β1对心肌细胞的影响1.1 3H-亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率TGF-β1刺激心肌细胞24h后,心肌细胞蛋白合成速率均高于空白对照组,呈浓度依赖性（P<0.01）。抑制Smad2后心肌细胞合成速率较TGF-β1组明显下降（P<0.01）。1.2 PI标记的RNA含量检测TGF-β1组PI荧光强度明显高于对照组,其中TGF-β1（3μg/L）组荧光强度最高（92.89±3.12）（P<0.01）,呈浓度依赖性（P<0.05）。1.3实时荧光定量PCR检测心肌细胞胚胎型心脏基因与对照组比较,TGF-β1组中ANFmRNA、β-MHCmRNA水平明显增高（1.61±0.14）、（2.28±0.13（）P<0.01）,呈剂量依赖性;α-MHCmRNA表达相对减少（0.69±0.05）（P<0.01）。1.4 TdT-FragEL染色心肌细胞凋亡对照组心肌细胞凋亡率为（1.3%±0.08%）,TGF-β1组心肌细胞凋亡率明显增加,TGF-β1（3μg/L）组凋亡率最高达（9.4%±1.16%）（P<0.01）。1.5 FCM检测心肌细胞凋亡TGF-β1刺激可使心肌细胞凋亡率增加,Caspase-3表达增加,且呈剂量依赖性（P<0.01）。Capase-3表达与心肌细胞凋亡率呈正相关。1.6透视电镜观察心肌肥大和凋亡正常心肌细胞线粒体丰富,细胞核很小。TGF-β1（3μg/L）组心肌细胞线粒体肿胀增大,高尔基体丰富,心肌细胞核及核仁增大变形,异染质丰富,并且部分心肌细胞出现染色质边集或凋亡小体。对照组细胞形态正常,TGF-β1组观察到细胞肥大和凋亡形态同时出现。2. Smads通路表达2.1 Smad2mRNA水平检测心肌细胞中Smad2的mRNA水平在TGF-β1（3μg/L）刺激2h后显着上升,在Smad2基因沉默后较TGF-β1组明显下降（P<0.01）。2.2 Smads蛋白表达空白对照组心肌细胞pSmad2、Smad2/3微量表达,Smad2有少量表达;TGF-β1（3μg/L）刺激后pSmad2、Smad2/3在30min内即表达增加,至1～2h后达高峰,24h开始下降,蛋白表达量均较对照组显着增高（P<0.01）。Smad2在TGF-β1（3μg/L）刺激后有所增加（P<0.05）,但与同时段内pSmad2相比,pSmad2增加明显（P<0.01）。抑制Smad2mRNA表达后,心肌细胞pSmad2蛋白水平较TGF-β1对照组明显下降（P<0.01）。心肌细胞蛋白合成速率与Smad2mRNA水平及pSmad2蛋白表达呈正相关（P<0.05）。3. p15及c-myc蛋白表达p15蛋白在对照组中表达极微（0.08±0.02）,TGF-β1刺激后24h后p15蛋白表达增加（0.28±0.03）（P<0.01）。TGF-β1刺激后,c-myc表达也增高,作用2小时后表达最高（0.42±0.03）（P<0.01）,24h后表达开始下降。与TGF-β1组相比,抑制Smad2表达后,p15蛋白降低（P<0.01）,c-myc无明显改变（P>0.05）。心肌细胞蛋白合成速率与c-myc、p15蛋白表达呈正相关（P<0.05）。结论1. TGF-β1诱导大鼠心肌细胞肥大的同时也诱导心肌细胞凋亡增加。2. TGF-β1诱导心肌细胞肥大的过程中Smad2蛋白磷酸化显着增高,Smad2/3、Smad2表达也增加。3. TGF-β1诱导心肌细胞肥大时伴随原癌基因c-myc和抑癌基因p15的蛋白表达增加;p15是Smad2通路的下游信号分子。第三部分葛根素对TGF-β1诱导心肌细胞肥大的干预研究目的1.观察葛根素对TGF-β1诱导的心肌细胞肥大和凋亡的影响;2.观察葛根素、Smad2siRNA对Smad2、p15、c-myc表达的影响;探讨葛根素对心肌细胞肥大的作用机制。方法葛根素（0.g1/L、1g/L、5g/L）或Smad2siRNA分别与TGF-β1（3μg/L）共同诱导培养心肌细胞24h后,采用3H-亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率,实时荧光定量PCR检测心肌细胞内ANF、α-MHC及β-MHC的mRNA水平, FCM检测心肌细胞凋亡率。Western-blot检测分别培养2h及24h后Smad2、pSmad2、Smad2/3、p15、c-myc的表达。结果1.葛根素可明显改善TGF-β1诱导的心肌细胞肥大,葛根素干预后心肌细胞3H-掺入量为（20463.10±3052.15）,比TGF-β1组（48625.18±3325.47）明显下降（P<0.01）。Smad2siRNA也可有效干预心肌细胞肥大（28675.08±2168.34）,两组比较葛根素组干预更为明显（P<0.01）。2.经葛根素干预后,心肌细胞ANFmRNA、β-MHCmRNA水平较TGF-β1对照组下降,并且葛根素组（1.41±0.15、2.36±0.14）较Smad2siRNA组下降更明显（1.83±0.12、3.85±0.23）（P<0.01）。3.葛根素与TGF-β1共孵育24h后,可明显降低TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡率（12.54%±1.12%）,其中葛根素（5g/L）+TGF-β1（3μg/L）组凋亡率最低（2.83%±0.40%）,呈剂量依赖性（P<0.01）。葛根素干预后Caspase-3水平明显下降,呈剂量依赖性（P<0.01）。4.与TGF-β1对照组相比,葛根素的干预使Smad2mRNA、pSmad2蛋白表达均明显下降（P<0.01）,p15蛋白表达下降（P<0.01）,c-myc表达无明显改变（P>0.05）。Smad2siRNA干预后,Smad2mRNA、pSmad2蛋白表达较葛根素组下降更明显（P<0.01）,但对c-myc、p15的作用与葛根素组相比无明显差别（P>0.05）。结论1.葛根素可有效改善TGF-β1诱导的心肌细胞肥大和细胞凋亡;葛根素可通过明显降低Smad2磷酸化而改善心肌细胞肥大。2.葛根素干预可下调TGF-β1诱导下心肌细胞中p15的表达,而c-myc表达则无明显改变;3. Smad2siRNA也可有效干预心肌细胞肥大,两者比较葛根素干预效果更为明显。
江凤林,冯俊,郑智[6]（2008）在《丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的作用》文中认为目的从细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）激活角度研究丹参酮ⅡA磺酸钠（sodium tanshinoneⅡ Asulfonate,STS）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥大反应中的作用。方法培养新生大鼠心肌细胞,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[3H]-亮氨酸参入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;用免疫荧光标记法和Western blot测定磷酸化ERK1/2蛋白（p-ERK1/2）表达。结果（1）AngⅡ（1μmol·L-1）处理24h,心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率、蛋白含量明显增加,STS能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率、蛋白含量的增加;（2）AngⅡ刺激心肌细胞可见胞核内出现磷酸化ERK1/2荧光染色,丹参酮ⅡA可阻断AngⅡ引起的ERK1/2活化、入核过程;（3）用AngⅡ（1μmol·L-1）处理心肌细胞5min,磷酸化ERK1/2蛋白（p-ERK1/2）表达即开始增加,10min左右时最明显。以AngⅡ（1μmol·L-1）处理心肌细胞10min,磷酸化ERK1/2蛋白（p-ERK1/2）表达为标准,预先以STS（2,10,50μmol·L-1）处理心肌细胞30min,发现STS可明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达;（4）预先以不同浓度STS处理心肌细胞30min,发现STS对AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达的抑制作用存在剂量依赖性。结论STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚,其机制与抑制磷酸化ERK1/2表达有关。
李乐[7]（2008）在《E-选择素和细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞与单核细胞粘附功能的影响》文中进行了进一步梳理目的:探讨E-选择素（E-selectin）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）反义寡核苷酸（asODN）及其与辛伐他汀（simvastatin）联合应用对人脐静脉内皮细胞（HUVEC） ICAM-1和E-selectin表达的抑制和对外周血单个核细胞粘附的影响。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,并传代;应用脂质体转染法将人工合成E-selectin asODN和ICAM-1 asODN分别导入HUVECs;实验共分8组,分别为空白对照（basal）组、TNF-α诱导组、liposome对照组、liposome-control asODN组、裸asODN （nude asODN）组、脂质体asODN （lipo-asODN）组、simvastatin处理组、lipo-asODN与simvastatin联合组,除空白组外,其余7组均以TNF-α诱导内皮损伤;以流式细胞技术测定HUVECs细胞膜E-selectin和ICAM-1蛋白的表达;以RT-PCR半定量技术测定HUVECs E-selectin mRNA和ICAM-1 mRNA的表达;以细胞粘附试验测定HUVECs与单个核细胞的粘附率;应用辛伐他汀预先处理HUVECs,再用E-selectin lipo-asODN和ICAM-1 lipo-asODN转染HUVECs,观察E-selectin asODN和ICAM-1 asODN与辛伐他汀联合应用对HUVECs E-selectin和ICAM-1的表达以及对HUVECs与外周血单个核细胞粘附抑制的影响。结果:⑴与TNF-α诱导组相比,E-selectin asODN和ICAM-1 asODN以及E-selectin lipo-asODN和ICAM-1 lipo-asODN均明显降低了HUVECs相应的E-selectin和ICAM-1蛋白及mRNA的表达（P<0.01）;⑵E-selectin asODN和ICAM-1 lipo-asODN与simvastatin联合应用可降低对HUVECs相应的E-selectin和ICAM-1的蛋白及mRNA表达;⑶lipo-asODN与simvastatin联合组与1ipo-asODN组比较,E-selectin表达水平显着下降（P<0.01）,而ICAM-1的表达水平下降无显着意义（P>0.05）,表明E-selectin lipo-asODN与simvastatin联合作用有更好的抑制效果。⑷与TNF-α刺激组相比,lipo-asODN组及1ipo-asODN与simvastatin联合组HUVECs与单个核细胞粘附率均显着下降（P<0.01）,尤其以HUVECs与CD3+T淋巴细胞的粘附率下降最为明显,但1ipo-asODN与simvastatin联合组与1ipo-asODN组比较,未见明显变化（P>0.05）。结论:E-selectin asODN和ICAM-1 asODN可抑制HUVECs相应的蛋白及mRNA的表达,并可抑制HUVECs与单个核细胞的粘附,尤其对HUVECs与CD3+ T细胞粘附的抑制作用更为明显。1ipo-asODN与simvastatin联合应用比单独1ipo-asODN的抑制作用更加明显。本研究为E-selectin asODN和ICAM-1 asODN应用于临床抗动脉粥样硬化的基因治疗的前景开拓新的思路和提供理论依据。
田立祥,冯俊,李树生,郑智,梁黔生[8]（2007）在《丹参酮ⅡA磺酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞外信号调节激酶1/2的作用》文中研究表明目的研究丹参酮ⅡA磺酸钠（STS）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大反应中细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）是否有抑制作用。方法培养新生大鼠心肌细胞,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;用免疫荧光标记法和Western-blot测定磷酸化ERK1/2蛋白（p-ERK1/2）表达。结果1)AngⅡ（1μmol/L）处理24h,心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率、蛋白含量明显增加,STS能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率、蛋白含量的增加;2)AngⅡ刺激心肌细胞可见胞核内出现磷酸化ERK1/2荧光染色,丹参酮ⅡA可阻断AngⅡ引起的ERK1/2活化、入核过程。3)用AngⅡ（1μmol/L）处理心肌细胞5min,磷酸化ERK1/2蛋白（p-ERK1/2）表达即开始增加,10min左右时最明显。4)STS剂量依赖性抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达。结论STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚,其机制与抑制磷酸化ERK1/2表达有关。
高萍[9]（2006）在《Egr-1反义寡核苷酸对大鼠心肌细胞Egr-1蛋白表达及缺氧/复氧损伤的影响》文中指出心肌缺血／再灌注（ischemia-reperfusion，I／R）损伤是目前心血管疾病治疗中亟待解决的问题之一。其损伤机制有多方面，其中炎症反应的发生是最重要的原因之一。近年来研究发现早期生长反应因子-1（Early growth response-1，Egr-1）与I／R中炎性损伤的发生具有密切关系。有文献报道Egr-l基因的诱导在I／R损伤中发挥关键性作用。本研究在细胞水平模拟心肌I／R损伤，将人工设计合成的靶向Egr-1-mRNA的反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide，AS-ODN）转染入原代培养的乳鼠心肌细胞，观察其对心肌细胞缺氧／复氧（hypoxia-reoxygenation，H／R）条件下Egr-1蛋白表达、细胞损伤及细胞炎症反应的影响，进而证实Egr-1在心肌细胞H／R损伤的形成与发展过程中占有重要地位，而Egr-1AS-ODN对心肌细胞的H／R损伤具有保护作用。 一、Egr-1 AS-ODN对大鼠心肌细胞Egr-1蛋白表达及炎症反应的影响 将心肌细胞原代培养于盖玻片上，转染异硫氰酸（FITC）标记的AS-ODN。PBS清洗细胞，丙酮固定，甘油封片。利用荧光显微镜在488nm的激发光源下观察荧光标记的寡核苷酸在心肌细胞的转染情况并照相。 实验用细胞随机分为六组：1．正常对照组（N）；2．缺氧／复氧组（H／R）；3．脂质体组（LIP）；4．正义寡核苷酸转染组（S）；5．错配寡核苷酸转染组（Sc）；6．反义寡核苷酸转染组（AS）。其中，2、3、4、5、6组分别做H／R模型。 收集心肌细胞，PBS清洗、离心、裂解，再次离心取上清。利用Western blot方法检测心肌细胞中Egr-1蛋白表达的变化。取细胞培养液用ELISA双抗体夹心法测定心肌细胞分泌的TNF-α水平。
张进[10]（2006）在《氯沙坦干预对急性心肌梗死大鼠PKC-ERK1/ERK2、P38MAPK-MEF2A信号通路及心室重塑的影响》文中提出背景和意义心肌梗死后心室重塑是由于一系列复杂的分子和细胞机制导致心肌结构,功能和表型的变化,这些变化包括:心肌细胞肥大、凋亡,成纤维细胞异常增生,胚胎基因和蛋白质的再表达。其中心肌细胞肥大和间质纤维化是发生心力衰竭、心律失常及影响远期预后的独立危险因素。近年来研究显示,心肌梗死后心脏局部组织血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可能是心肌病理性肥大和心室重塑始动的分子机制之一。AngⅡ通过与心肌细胞及成纤维细胞表面的血管紧张素Ⅱ受体（AT1）结合,激活蛋白激酶C （PKC）,再由PKC激活细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/ERK2）,从而实现细胞内的信号转导和细胞核内基因转录的活化,最终诱发细胞发生表型的变化。一些研究显示,牵张及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素1（ET-1）可激活P38,后者作为胞内信号磷酸化核内转录因子-心肌增强因子（MEF2A）,作为一类脱氧核糖核酸（DNA）结合蛋白,磷酸化的MEF2A可与肌肉特异性基因启动子中富含AT的区域结合,诱导蛋白质和肥大的选择性表达。尽管有研究表明,体外培养的心肌细胞在AngⅡ刺激下会导致蛋白质合成增加和反应性肥厚,但在体心肌细胞如何感受胞外AngⅡ并将其转化为细胞内信号以及胞内信号如何改变基因转录活性,最终导致心肌肥厚和间质纤维化,目前国内外报道甚少。另外,国内外对心梗后心肌细胞信号分子表达的动态过程报道很少,结果也很不一致,并且主要集中
二、Inhibitory effect of antisense oligodeoxynucleotide to p44/p42 MAPK on angiotensin Ⅱ-induced hypertrophic response in cultured neonatal rat cardiac myocyte（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Inhibitory effect of antisense oligodeoxynucleotide to p44/p42 MAPK on angiotensin Ⅱ-induced hypertrophic response in cultured neonatal rat cardiac myocyte（论文提纲范文）
（1）PKA信号通路参与UrotensinII致心肌肥大的分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 UⅡ在慢性压力超负荷大鼠心肌组织中表达的变化 |
| 前言 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据统计 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第二部分 UrotensinⅡ在心肌细胞肥大过程中的作用研究 |
| 前言 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据统计 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第三部分 PKA信号转导通路在UrotensinⅡ致心肌细胞肥大过程中的作用及其机制研究 |
| 前言 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据统计 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）miR-199a-5p在血管紧张素Ⅱ致心肌肥大细胞中的表达变化（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器、药品及试剂 |
| 1.3 动物模型建立及分组 |
| 1.4 大鼠的一般生存情况 |
| 1.5 心脏指数测定 |
| 1.6 左心室HE染色 |
| 1.7 qRT-PCR方法检测左心室miR-199a-5p变化 |
| 1.8 SD乳鼠心肌细胞培养 |
| 1.9 qRT-PCR方法检测心肌细胞miR-199a-5p变化 |
| 1.1 0 心肌细胞转染及[3H]-亮氨酸掺入 |
| 1.1 1 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠一般生存情况 |
| 2.2 大鼠LVMI及CMI的变化 |
| 2.3 大鼠左心室心肌组织形态学变化 |
| 2.4 左心室心肌组织miR-199a-5p的表达 |
| 2.5 心肌细胞miR-199a-5p的表达 |
| 2.6 心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入 |
| 3 讨论 |
（5）TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞肥大及葛根素干预的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文词汇对照表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 新生SD 大鼠心肌细胞的原代培养及鉴定 |
| 一、研究目的 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分 TGF-β_1诱导的心肌细胞肥大和凋亡及其与SMADS 通路和癌基因相关蛋白的关系 |
| 一、研究目的 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第三部分 葛根素对TGF-β_1诱导心肌细胞肥大的干预研究 |
| 一、研究目的 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 全文结论 |
| 综述 |
| 致谢 |
（6）丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物和试剂 |
| 1.2 试验分组 |
| 1.3 新生大鼠心肌细胞培养 |
| 1.4 细胞免疫荧光法观察p-ERK1/2入核 |
| 1.5 蛋白含量测定 |
| 1.6 心肌细胞 |
| 1.7 免疫印迹法 (Western blot) 检测p-ERK1/2蛋白表达 |
| 1.7.1 心肌细胞蛋白的提取 |
| 1.7.2 标准曲线的绘制 |
| 1.7.3 样品蛋白质含量测定 (Bradfold方法) |
| 1.7.4 检测心肌细胞p-ERK1/2蛋白质含量 |
| 1.8 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 STS对心肌细胞总蛋白质含量的影响 |
| 2.2 STS对心肌细胞蛋白质合成速率的影响 |
| 2.3 AngⅡ对p-ERK1/2蛋白表达的影响 |
| 2.4 STS对p-ERK1/2蛋白表达的影响 |
| 2.5 STS对AngⅡ诱导心肌细胞磷酸化ERK1/2定位表达的影响 |
| 3 讨论 |
（7）E-选择素和细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞与单核细胞粘附功能的影响（论文提纲范文）
| 中英文简写对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 致谢 |
（8）丹参酮ⅡA磺酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞外信号调节激酶1/2的作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物和试剂 |
| 1.2 试验分组 |
| 1.3 新生大鼠心肌细胞培养 |
| 1.4 细胞免疫荧光法观察MAPK入核 |
| 1.5 蛋白含量测定 |
| 1.6 心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入测定 |
| 1.7 免疫印迹法 (Western blot) 检测p-ERK1/2蛋白表达 |
| 1.8 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 STS对心肌细胞总蛋白质含量的影响 |
| 2.2 STS对心肌细胞蛋白质合成速率的影响 (图1) |
| 2.3 Ang Ⅱ对p-ERK1/2蛋白表达的影响 |
| 2.4 STS对p-ERK1/2蛋白表达的影响 |
| 2.5 STS对Ang Ⅱ诱导心肌细胞磷酸化ERK1/2定位表达的影响 (图4) |
| 3 讨论 |
（9）Egr-1反义寡核苷酸对大鼠心肌细胞Egr-1蛋白表达及缺氧/复氧损伤的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第二部分 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论与展望 |
| 论文参考文献 |
| 文献综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（10）氯沙坦干预对急性心肌梗死大鼠PKC-ERK1/ERK2、P38MAPK-MEF2A信号通路及心室重塑的影响（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 论文正文：氯沙坦干预对急性心肌梗死大鼠PKC-ERK_1/ERK_2、P38MAPK-MEF2A信号通路及心室重塑的影响 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 PKC-ERK_1/ERK_2、P38MAPK-MEF2A 信号通路在急性心肌梗死大鼠左室重塑中的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 氯沙坦干预对急性心肌梗死PKC-ERK1/ERK2、P38MAPK-MEF2A 信号通路及心室重塑的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 局限性及尚需解决的问题 |
| 附图 |
| 文献综述 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 |
四、Inhibitory effect of antisense oligodeoxynucleotide to p44/p42 MAPK on angiotensin Ⅱ-induced hypertrophic response in cultured neonatal rat cardiac myocyte（论文参考文献）
- [1]PKA信号通路参与UrotensinII致心肌肥大的分子机制研究[D]. 徐建荣. 山西医科大学, 2016(08)
- [2]miR-199a-5p在血管紧张素Ⅱ致心肌肥大细胞中的表达变化[J]. 刘红梅,陈新,孙丹云,唐渊,李晓辉. 第三军医大学学报, 2014(10)
- [3]替米沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及p-ERK1/2的调节作用[J]. 张玮函,郭海燕,阎晶晶,刘郁,李昕. 南开大学学报(自然科学版), 2010(03)
- [4]Effect of Sodium Tanshinone ⅡA Sulfonate on Phosphorylation of Extracellular Signal-regulated Kinasel/2 in Angiotensin Ⅱ-induced Hypertrophy of Myocardial Cells[J]. 李树生,冯俊,郑智,梁黔生. Chinese Journal of Integrative Medicine, 2008(02)
- [5]TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞肥大及葛根素干预的实验研究[D]. 石永英. 广州医学院, 2008(07)
- [6]丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的作用[J]. 江凤林,冯俊,郑智. 中国药理学通报, 2008(03)
- [7]E-选择素和细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞与单核细胞粘附功能的影响[D]. 李乐. 福建医科大学, 2008(01)
- [8]丹参酮ⅡA磺酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞外信号调节激酶1/2的作用[J]. 田立祥,冯俊,李树生,郑智,梁黔生. 中华高血压杂志, 2007(07)
- [9]Egr-1反义寡核苷酸对大鼠心肌细胞Egr-1蛋白表达及缺氧/复氧损伤的影响[D]. 高萍. 汕头大学, 2006(12)
- [10]氯沙坦干预对急性心肌梗死大鼠PKC-ERK1/ERK2、P38MAPK-MEF2A信号通路及心室重塑的影响[D]. 张进. 重庆医科大学, 2006(01)