一、戊巴比妥腹腔内注射对腹膜转运功能的影响（论文文献综述）
刘威[1]（2021）在《预处理的外泌体对骨质疏松骨整合及糖尿病创面修复作用的研究》文中研究说明第一部分miR-20a预处理的MSC来源的外泌体通过靶向BAMBI增强成骨作用来促进钛合金的骨整合的研究背景:骨质疏松症患者由于不良的骨整合而具有较高的植入物松动风险,可能造成植入物断裂、植入物翻修和骨折等不良后果。RNA干扰（RNA interference,RNAi）疗法是一种新兴的表观遗传疗法,在这项研究中,我们发现mi R-20a可以增强成骨分化作用。此外,源自人骨髓间充质干细胞（Human bone marrow derived mesenchymal stem cells,h BM-MSC）的外泌体（Exosomes,Exos）被用作保护和递送mi R-20a（Exo-20a）的纳米载体。本研究将探讨过表达mi R-20a的Exos是否可以改善骨质疏松性骨整合以及其潜在的机制。方法:为了评估Exo-20a对成骨的影响,我们进行了体外和体内研究。在体外,我们首先证明了mi R-20a在成骨过程中被上调,并且通过转染方法获取过表达mi R-20a的Exo-20a。然后,通过CCK-8分析、碱性磷酸酶染色、茜素红染色、q RT-PCR和Western blot实验,检测Exo-20a对h BM-MSC增殖、迁移和成骨分化的作用。在体内,我们建立了骨质疏松性骨缺损模型,并通过Micro CT、顺序荧光标记和组织学分析评估了Exo-20a对骨形成的影响。为了进一步探讨生物学机制,研究了BAMBI在mi R-20a成骨效应中的作用。结果:通过过表达进行预处理的方法在体外成功构建了Exo-20a,并证明其可促进h BM-MSC的迁移和成骨分化。在体内实验中,Exo-20a能够促进骨质疏松大鼠模型的骨整合。为了进一步阐明相关机制,我们证明了Exo-20a可以通过靶向BAMBI来增强成骨作用。结论:以上体外和体内结果证实,以h BM-MSC为基础的Exo-20a可通过靶向BAMBI发挥促成骨作用,进而有效促进骨质疏松大鼠植入物的骨整合。第二部分褪黑素预处理的MSC来源的外泌体通过靶向PTEN/AKT通路来调节巨噬细胞M1和M2极化,从而改善糖尿病慢性伤口的愈合目的:糖尿病患者骨科手术后,其伤口可能会因为炎症而延迟愈合,而这会增加手术感染的风险,目前尚无安全有效的方法来解决此问题。h BM-MSC来源的Exos已被证明能够通过抗炎作用来治疗糖尿病伤口。在这项研究中,我们探讨了用褪黑素（Melatonin,MT）预处理的MSC来源的外泌体（MT-Exo）是否可以有效促进糖尿病伤口的愈合,并且阐明产生这种作用的潜在机制。方法:为了评估MT-Exo的抗炎作用,我们进行了体外和体内研究。在体外研究中,我们通过ELISA检测了Raw264.7细胞上清中炎症相关因子的水平,包括IL-1β、TNF-α和IL-10,通过q RT-PCR检测了Raw264.7细胞中IL-1β、TNF-α、IL-10、Arg-1和i NOS的相对基因表达情况,并通过Western blot研究了Raw264.7细胞中PTEN、AKT和p-AKT的蛋白表达情况。在体内研究方面,我们建立了小鼠气囊模型和链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病伤口模型,并通过流式细胞计数、伤口大体观拍照、H&E染色、Masson三色染色、免疫组织化学染色、免疫荧光以及q RT-PCR检测α-SMA、I型和III型胶原的表达,进而评估MT-Exo对糖尿病伤口修复的的作用。结果:与PBS、LPS和Exo组相比,MT-Exo显着减少了Raw264.7细胞分泌的促炎因子IL-1β和TNF-α,并降低了Raw264.7细胞中IL-1β、TNF-α和i NOS的相对基因表达,同时促进了Raw264.7细胞抗炎因子IL-10的分泌,增强了Raw264.7细胞中抗炎因子IL-10和Arg-1的相对表达水平。在机制方面,MT-Exo通过增加PTEN的表达并抑制AKT的磷酸化来增加M2极化与M1极化的相对比值,进一步实现抗炎作用。同样,MT-Exo通过抑制炎症反应显着促进了糖尿病伤口的愈合,从而进一步促进了体内伤口愈合、再上皮化、血管生成和胶原蛋白的合成。结论:MT预处理的MSC来源的外泌体可通过抑制炎症反应来促进糖尿病伤口的愈合,这是通过激活PTEN/AKT信号通路增加M2极化与M1极化的相对比值来实现的,因此MT的预处理的MSC来源的外泌体有希望成为糖尿病伤口愈合的新策略和新疗法。
刘书林,姚永杰,刘秋红,巴剑波[2]（2021）在《人工诱导动物低代谢休眠药物研究进展》文中提出人工诱导低代谢休眠是指利用各种方法诱导机体进入深度睡眠状态（即休眠）,显着降低机体代谢率。为应对人类长期空间飞行的挑战,人工诱导低代谢休眠可能是一种有效的医学保障措施。介绍了低代谢休眠在长期空间飞行中的应用前景,选取了二甲基亚砜、氯胺酮、利血平、氯丙嗪、氧化震颤素、戊巴比妥、氦气、3-碘甲状腺素、脑啡肽、神经肽Y1、硫化氢等11种药物,对近年来这11种药物的基本情况、动物实验、低代谢休眠诱导效果和机制等方面进行总结,对存在的问题及下一步研究方向进行了展望。
郭文彬[3]（2021）在《盆腔泌尿疼痛动物模型的构建及腹下神经传导神经纤维构成的研究》文中研究说明第一章临床男性盆腔疼痛（胡桃夹综合征并精索静脉曲张）患者疼痛物质的检测目的:大量的临床研究报道胡桃夹综合征与盆腔疼痛综合征/盆腔淤血综合征、性腺静脉淤血密切相关。有研究发现女性盆腔淤血综合征（卵巢静脉综合征）86%继发于胡桃夹综合征,且该患者的疼痛物质降钙素基因相关肽（CGRP）及P物质（SP）明显升高。男性胡桃夹综合征主要表现为腰腹部疼痛及精索静脉曲张继发的睾丸疼痛,该类患者的疼痛物质表达变化未见报道,本部分研究从临床样本出发,探讨临床男性胡桃夹综合征继发精索静脉曲张患者血清疼痛物质CGRP的表达变化。方法:取超声诊断胡桃夹综合征并精索静脉曲张患者及正常对照各40例,分为实验组及正常组。对精索静脉曲张主诉疼痛者行疼痛数字评分及生活质量影响评分。取各组外周血标本分别提取血清,购买商业化试剂盒,检测实验组及对照组血清CGRP的表达情况。结果:实验组患者疼痛评分平均5.6,生活质量评分平均7.4,平均年龄为28.6岁,对照组平均为31.0岁（差异无统计学意义）。实验组及对照血清CGRP表达存在显着差异,实验组CGRP平均为94.3±39.8,对照组为51.1±27.1,P<0.001。结论:男性盆腔泌尿系统疼痛（胡桃夹综合征并精索静脉曲张）患者疼痛物质（CGRP）明显升高,提示胡桃夹综合征继发的静脉曲张淤血可引起疼痛物质的释放,最终引起患者的盆腔泌尿系统疼痛表现,后期还需增加样本量研究疼痛程度与CGRP的相关性。第二章雄性大鼠盆腔疼痛（胡桃夹综合征法）动物模型的构建目的:为研究盆腔泌尿疼痛传导的机制,我们结合临床疾病特点,拟通过构建胡桃夹综合征的动物模型,为探讨盆腔疼痛综合征/盆腔淤血综合征相关泌尿生殖系统的疼痛机理打下基础。方法:本研究采用左肾静脉半缩窄构建胡桃夹综合征大鼠模型,以精索静脉曲张作为模型评价标准。尝试通过采用不同银夹内径缩窄肾动脉来构建大鼠肾性高血压的动物模型的方法构建银夹肾静脉缩窄胡桃夹动物模型。将购买的40只SPF级雄性SD大鼠分为5组,每组共8只:各组命名为假手术组,银夹组A（0.70 mm）、银夹组 B（0.80 mm）,银夹组 C（0.90mm）,传统组（0.85 mm）。结果:各组均不同程度成功构建了胡桃夹精索静脉曲张模型,各组实验数据如下:1.成功率方面,传统组、银夹组A、银夹组B、银夹组C成功率分别为75.0%,77.8%,37.5%及37.5。2.在并发症方面,在手术过程中传统组有2只大鼠由于结扎线过紧,术后出现了左肾静脉破裂出血,其中1只大鼠术中因误扎输尿管,术后导致左肾周围积水及脓肿;银夹组A术中没有出现明显出血、肾周积脓等并发症情况,银夹组B和C组由于银夹直径过大,部分银夹从左肾静脉发生脱落导致建模失败。结论:本课题组采用银夹缩窄左侧肾静脉法成功构建了雄性大鼠盆腔泌尿系统疼痛（胡桃夹综合征）模型。与传统方法对比,初步探讨了银夹法盆腔泌尿系统疼痛动物模型的可行性,本模型的成功构建为后续盆腔泌尿系统疼痛,尤其是胡桃夹综合征所致的疼痛机制研究奠定了基础。第三章雌性大鼠盆腔疼痛（胡桃夹综合征法）动物模型的构建目的:在临床上,女性的盆腔淤血综合征也叫卵巢静脉曲张综合征。有报道卵巢静脉曲张综合征86%继发于胡桃夹综合征,因而,构建胡桃夹综合征继发的卵巢静脉曲张综合征盆腔泌尿疼痛模型更符合临床研究需要。在成功构建雄性胡桃夹大鼠盆腔泌尿疼痛模型的基础上,我们拟应用丝线行左肾静脉半结扎构建雌鼠的盆腔泌尿生殖系统疼痛模型。方法:参考雄鼠左肾静脉半结扎的方法构建雌鼠胡桃夹动物模型,以卵巢静脉曲张作为模型评价标准。将购买的16只SPF级雌性SD大鼠取回,在实验研究所进行适应性饲养,一周后观察有无异常情况后,将大鼠随机分为2组,每组共8只:分别命名为假手术组,实验组（0.85 mm）,建模一个月后处死大鼠,检测两组大鼠卵巢静脉曲张程度、血清疼痛物质表达差异,即SP及CGRP。结果:实验组成功构建了胡桃夹模型,两组大鼠的存活率均为75%,其中SP的平均浓度分别为,假手术组0.21 umol/L,实验组0.32umol/L;CGRP平均浓度分别为,假手术组0.40umol/L,实验组0.58 umol/L。结论:本部分实验同样成果构建了盆腔泌尿系统疼痛动物模型,验证了左肾静脉半结扎（胡桃夹综合征）也可引起疼痛物质的释放,为后续研究雌鼠胡桃夹综合征所致的盆腔泌尿系统疼痛的机制研究奠定了基础。第四章醋酸诱导盆腔泌尿疼痛动物模型的构建目的:利用胡桃夹综合征继发盆腔淤血构建的模型为慢性盆腔泌尿疼痛模型,为了方便实验需要,课题组同时构建了急性诱发的盆腔泌尿疼痛模型,模拟膀胱激惹状态,更方便后期研究。方法:由于醋酸急性模型更简便,猫的神经传导机制更接近人类,课题组用醋酸膀胱灌注构建盆腔泌尿疼痛模型。将双侧腹下神经分离、结扎并离断,分别撕成神经细丝,将神经细丝搭在记录电极上,同时经尿道导管用生理盐水或0.5%醋酸（AA）灌注扩张膀胱,记录膀胱压力改变时腹下神经传入神经的动作电位发放响应,从而了解腹下神经纤维痛觉传导的纤维构成。结果:取成年猫3（2雄1雌）只做预实验,结果在3只猫均记录到了神经信号的发放,而且随着膀胱内压力的升高,神经信号发放逐渐增强。同时,醋酸灌注膀胱后,信号发放明细增强。提示腹下神经的信号与膀胱内压及激惹状态有关。结论:成功构建了醋酸膀胱痛觉腹下神经传导模型,为腹下神经痛觉信号传导的神经纤维构成研究打下了基础。第五章腹下神经膀胱痛觉应答传导的神经纤维构成研究目的:支配及传导盆腔泌尿疼痛的神经包括交感神经（腹下神经）、副交感神经（盆神经）及体神经（阴部神经）。已知盆神在靶器官（如膀胱）激惹后可激活“沉默”神经纤维从而传导低压痛觉,但腹下神经是否存在同样的“沉默”神经,其传导机制如何尚未清楚。由此,本部分研究拟借助访学单位实验条件,研究腹下神经传入纤维的各类神经纤维,以揭示腹下神经参与膀胱及盆腔脏器痛觉传导的机制。方法:由于盆腔泌尿系统包括多个器官,本课题以膀胱为载体来探讨盆腔泌尿腹下神经传导的机制。将双侧腹下神经分离、结扎并离断,分别撕成约15-25条神经细丝,尽量撕细到足以记录单个或多个传入神经纤维动作电位。将神经细丝搭在记录电极上,同时经尿道导管用生理盐水或0.5%醋酸（AA）灌注扩张膀胱,记录膀胱压力改变时腹下神经传入神经的动作电位发放响应。结果:本研究纳入17只猫,共记录到90条腹下神经对生理盐水或0.5%AA引起的膀胱灌注扩张有响应。最后共鉴定出三种腹下神经传入纤维。第一类是机械敏感的非伤害性纤维,能在正常生理压力（10-40 cmH2O）下对膀胱扩张作出响应。第二类是机械敏感的伤害性纤维,仅对有害（痛觉）的高压（50-80 cmH2O）膀胱灌注扩张有响应。第三种类型是化学敏感的伤害性纤维,也叫“沉默”纤维,即使在生理高压膀胱灌注扩张时也无响应,但可被0.5%AA刺激致敏从而对低压膀胱灌注扩张作出响应。结论:这些结果表明,除盆神经的传入神经外,腹下神经传入纤维在膀胱痛觉传导也起重要作用。腹下神经传入纤维在正常生理压力下膀胱灌注扩张时“沉默”,但在化学刺激后反应敏感,这对于理解盆腔泌尿疼痛中膀胱痛觉的可能病理生理机制有重要的意义。
任小娟[4]（2020）在《肾不藏志不寐的理论及实验研究》文中认为目的:（1）探讨肾不藏志不寐论治的理论依据、因机证治和常用安肾志方药。（2）采用D-半乳糖联合对氯苯丙氨酸（PCPA）建立肾不藏志不寐大鼠模型,观察肾不藏志不寐模型大鼠衰老方面、睡眠方面和海马转录组变化,衰老方面包括记忆能力、氧化应激、凋亡基因,睡眠方面包括睡眠时间、脑电图、炎症因子和神经递质。（3）观察远志对肾不藏志不寐大鼠睡眠、神经递质和炎性因子的影响,以及远志对肾不藏志不寐大鼠海马转录组的影响。方方法:（1）收集、归纳和探讨肾不藏志不寐的理论依据和论治方药。（2）将实验动物随机分为空白对照组、D-半乳糖组、对氯苯丙氨酸组、肾不藏志不寐组,采用D-半乳糖120mg/kg/d皮下注射42d联合PCPA 300mg/kg/d腹腔注射3d建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）通过Morris水迷宫（MWM）观察肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力,检测肾不藏志不寐大鼠脑氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）的含量,海马超氧化物歧化酶1（SOD1）、超氧化物歧化酶2（SOD2）、CAT、B淋巴细胞瘤相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）m RNA的表达,观察肾不藏志不寐大鼠衰老方面的变化。（4）采用戊巴比妥实验观察肾不藏志不寐大鼠睡眠情况,通过脑电图观察大鼠觉醒（Wake）、慢波睡眠I期（SWS1）、慢波睡眠II期（SWS2）、快速动眼睡眠（REMS）和睡眠总时间（TST）,检测肾不藏志不寐大鼠血浆白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,脑5-羟色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量,海马白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子-κB（NF-κB）、5羟色胺1A受体(5-HT1AR)、γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABAARα1)、代谢型谷氨酸受体2（m Glu R2）m RNA的表达,观察肾不藏志不寐大鼠进行睡眠方面的变化。（5）对空白对照组和肾不藏志不寐组大鼠海马提取总RNA进行转录组测序和分析。（6）观察远志对肾不藏志不寐大鼠的影响:将实验动物随机分为空白对照组、肾不藏志不寐组、远志低剂量组（0.0875g/kg）、远志中剂量组（0.175g/kg）、远志高剂量组（0.35g/kg）、地西泮组（0.92mg/kg）,通过MWM观察远志对肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力的影响,检测各组大鼠海马5-HT、Glu、GABA的含量,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。（7）对空白对照组、肾不藏志不寐组、远志中剂量组、地西泮组大鼠海马提取总RNA进行转录组测序和分析。结结果:（1）肾志对寐寤具有调节作用,肾不藏志不寐的主症为夜寐早寤,病位在肾,病因是肾脏虚损,肾志不入于舍是肾不藏志不寐的核心病机。肾不藏志不寐常见临床证型包括肾气不固型、肾精不足型、肾阳虚型、肾阴虚型、肾虚水泛型和肾不纳气型六种证型。远志、刺五加、人参、茯神、五味子、交泰丸、黄连阿胶汤、六味地黄丸、磁朱丸和孔圣枕中丹是治疗肾不藏志不寐常用方药。（2）D-半乳糖120mg/kg/d皮下注射42d联合PCPA 300mg/kg/d腹腔注射3d可以建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）肾不藏志不寐大鼠模型衰老方面的变化:与空白对照组比较,模型大鼠体重减轻,MWM中逃避潜伏期延长、穿台次数减少,脑SOD、CAT、GSH-px含量减少、MDA含量增加,海马SOD1、SOD2、CAT m RNA表达上调,海马Bax、Caspase-3 m RNA的表达上调、Bcl-2 m RNA表达下调。（4）肾不藏志不寐大鼠模型睡眠方面的变化:戊巴比妥实验发现肾不藏志不寐大鼠睡眠潜伏期延长、睡眠时间缩短,肾不藏志不寐大鼠脑电图WAKE增加、SWS1、SWS2、REMS和TST减少,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α含量增加,脑5-HT、GABA含量减少、Glu含量增加,海马IL-6、TNF-αm RNA表达上调,海马5-HT1AR、GABAARα1m RNA表达下调、m Glu R2 m RNA表达上调。（5）肾不藏志不寐大鼠海马转录组分析结果:与空白对照组相比,肾不藏志不寐组的差异基因共有1628个,其中上调基因上调887个,下调741个;差异基因的功能涉及神经发育、细胞发育、甘油三酯代谢、核糖体、氧化应激、炎性因子;并与帕金森病、阿尔茨海默病、逆行神经的信号通路、慢性进行性舞蹈病有密切联系。通过组间差异基因GO分析、KEGG Pathway分析、蛋白互作分析以及肾不藏志不寐内涵,筛选肾不藏志不寐组的关键差异基因并进行验证,发现肾不藏志不寐大鼠海马显着差异基因为Gnb3、Faah、Mmp9、Twist1。（6）远志可以提高肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力,增加模型大鼠海马5-HT、GABA的含量、降低Glu的含量,降低血浆IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。（7）药物干预肾不藏志不寐大鼠的海马转录组分析结果:（1）与肾不藏志不寐组相比,远志组的差异基因共有663个,其中上调240个,下调423个;差异基因主要涉及神经发育、昼夜节律调控、细胞凋亡与增殖、氧化磷酸化、能量代谢、免疫调节;并与帕金森病、阿尔茨海默病、慢性进行性舞蹈病、非酒精性脂肪肝、I型糖尿病、哮喘的发生有密切联系。（2）与肾不藏志不寐组相比,地西泮组的差异基因共有1660个,其中上调基因732个,下调基因928个;差异基因主要涉及神经系统发育的调控、氧化磷酸化、神经元凋亡、氧化应激、能量代谢;并与帕金森病、慢性进行性舞蹈病、阿尔茨海默病、非酒精性脂肪肝有密切联系。（3）远志对肾不藏志不寐干预作用的差异基因235个,其中显着治疗作用的基因37个;差异基因的功能涉及神经元发育、γ-氨基丁酸信号通路、细胞生长调控、参与免疫球蛋白介导的免疫应答、能量代谢;并与慢性进行性舞蹈病、帕金森病、阿尔茨海默病、I型糖尿病、非酒精性脂肪肝等有关。（4）地西泮对肾不藏志不寐干预作用的差异基因753个,其中显着治疗作用的基因49个;差异基因涉及中枢神经系统发育、老化、突触的调节、凋亡的调控、多巴胺、糖原、脂肪酸、嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸代谢。并与慢性进行性舞蹈病、帕金森病、阿尔茨海默病、非酒精性脂肪肝、心肌收缩、单纯疱疹病毒感染等有关。（5）肾不藏志不寐与远志、地西泮关联的靶标基因及分子通路分析:通过组间差异基因GO分析、KEGG Pathway分析以及肾不藏志不寐内涵,筛选肾不藏志不寐组、远志组和地西泮组的关键差异基因并进行验证,发现远志有效靶基因为Faim、Pcp2、Elovl6;地西泮有效靶基因为Npr3、Trh;两药共同作用的靶点为BDNF、Gabra6。结结论:（1）肾志与不寐有着密切联系,肾不藏志是肾不藏志不寐的核心病机,补益肾脏、安神定志为肾不藏志不寐的治疗原则,远志是归经入肾的的安肾志药物,具有安神、强志、益肾的功效,是治疗志异常的首选药物。（2）D-半乳糖联合PCPA可以建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）肾不藏志不寐大鼠模型与衰老相关的学习记忆能力、氧化应激、凋亡记忆基因的表达发生了改变,与睡眠相关的睡眠时间、脑电图、神经递质和炎性因子的表达发生了改变。（4）肾不藏志不寐大鼠模型海马存在基因转录水平上的变化,显着差异基因功能涉及神经系统、代谢和炎症等。（5）远志可以改善肾不藏志不寐大鼠的睡眠、调节神经递质、降低炎性因子的表达。（6）远志和地西泮对肾不藏志不寐大鼠海马的神经系统和炎症相关基因具有一定的干预效应,远志更侧重对神经功能相关靶基因的调节。
陈鹏[5]（2020）在《碱性成纤维细胞生长因子对颅脑创伤合并腹腔高压后血脑屏障的保护作用及机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景与目的:腹腔高压症（intra-abdominal hypertension,IAH）指腹内压（intra-abdominal pressure,IAP）持续或反复病理性上升≥12mmHg。腹腔间隙综合征（abdominal compartment syndrome,ACS）则是指IAP持续≥20mmHg,并伴有新的器官功能障碍或失调。IAH/ACS分为原发性和继发性,原发性IAH/ACS的病因主要是腹腔/盆腔原发性疾病或直接损伤,继发性IAH/ACS的病因主要是全身炎症反应综合征、失血性休克、大面积烧伤等。继发性IAH/ACS大都具有低血容量需要大量液体复苏的特征,病理过程包括缺血再灌注损伤,炎症因子释放,毛细血管通透性增高、液体渗漏、组织脏器水肿等。IAH/ACS不仅导致腹腔内脏器损害,还可导致胸腔、颅腔远处脏器损害,如导致颅内压升高引起继发性脑损伤,具体机制可能与血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）破坏有关。临床上常见创伤性颅脑损伤（traumatic brain injury,TBI）合并休克的多发伤患者,复苏后引起IAH/ACS,两者互相影响加重脑损伤,导致预后不佳。碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）有广泛的生物学效应,它有助于血管形成、创伤愈合、组织修复、神经生长等。有研究发现在脑出血模型中,bFGF可与成纤维细胞生长因子受体（fibroblast growth factor receptor,FGFRs）结合,上调紧密连接（tight junctions,TJ）和粘附连接（adheren junctions,AJ）蛋白表达,保护血脑屏障,但具体机制不清楚。TBI合并IAH/ACS对血脑屏障的影响研究很少,本实验希望了解TBI合并IAH后对血脑屏障、颅内压的影响,探寻bFGF对损伤后血脑屏障的作用,并揭示其中的作用机制。我们拟使用“皮质控制损伤”模拟TBI及“失血性休克大量液体复苏联合腹腔注氮气模拟继发性IAH/ACS”的大鼠作为动物模型进行体内实验,以及体外培养人脑微血管内皮细胞进行糖氧剥离诱导实验。具体包括以下研究:实验一,继发性IAH/ACS模型建立及对血脑屏障影响;实验二,TBI合并IAH对血脑屏障影响及bFGF的作用及机制研究;实验三,bFGF对人脑微血管内皮细胞糖氧剥离后渗透性及凋亡的作用及机制研究。此研究将有助于揭示TBI合并继发性IAH破坏血脑屏障,升高颅内压的过程,并为bFGF治疗血脑屏障损伤提供理论基础。主要实验方法与实验步骤:1.继发性IAH/ACS模型建立及对血脑屏障影响通过失血性休克大量液体复苏联合腹腔注氮气建立继发性IAH/ACS大鼠模型,观察不同腹内压（IAP12mmHg,20mmHg）对颅内压、脑组织大体形态,脑MRI,脑含水量,血脑屏障渗透性的影响,用Western blotting和PCR检测损伤后模型血脑屏障表达ZO-1、β-catenin、MMP2、IL-1β等指标,评估不同IAP对血脑屏障的损伤程度及其影响颅内压的病理过程。2.TBI合并IAH对血脑屏障影响及bFGF的作用及机制研究在前述建立的继发性IAH基础上利用可控皮质打击法建立大鼠中型颅脑创伤模型。分为control组,combined（TBI+IAH）组,combined+bFGF组,combined+bFGF+PD173074组,combined+bFGF+PD98059组。观察各组损伤后对颅内压、脑含水量及血脑屏障渗透性的影响,用免疫荧光、Western blotting和PCR检测损伤后各组血脑屏障表达FGFR1/p-FGFR1、ZO-1、Claudin-5,Occludin、β-catenin、MMP9、MMP12、L-1β和TNF-α等指标。探讨bFGF对TBI合并IAH后血脑屏障的保护作用以及作用机制,包括结合的受体及激活下游信号通路,为临床治疗提供实验参考。3.bFGF改善人脑微血管内皮细胞糖氧剥离（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）后渗透性及凋亡的作用及机制研究利用人脑微血管内皮细胞（HBMECs）进行体外实验。分组为control组,OGD/R组,OGD/R+bFGF组,OGD/R+bFGF+PD173074组,OGD/R+bFGF+PD98059组。观察各组OGD/R对HBMECs渗透性、凋亡、活力的影响,用免疫荧光,Western blotting和PCR检测损伤后各组HBMECs表达FGFR1/p-FGFR1、FGFR2/p-FGFR2、ERK/p-ERK、ZO-1、Claudin-5、Occludin、β-catenin、MMP2、MMP9、BAX、Bcl-2和Caspase-3等指标,观察bFGF对HBMECs在OGD/R后的渗透性、凋亡、活力影响及作用机制。主要研究结果:1.成功建立继发性IAH/ACS大鼠模型,发现IAH/ACS能引起血脑屏障损伤,导致颅内压升高。通过失血性休克大鼠大量液体复苏联合腹腔注氮气建立继发性IAH/ACS大鼠模型,ACS模型较IAH模型死亡率更高。IAH组与ACS组均引起颅内压增高,脑水肿及脑含水量增加,血脑屏障渗透性增加,血脑屏障表达特异TJ（ZO1）、AJ（β-catenin）下降,MMP2表达增强,引起血脑屏障破坏的炎症因子（IL-1β）增强。而导致颅内压增高及血脑屏障破坏方面两组间并无明显差异。2.bFGF可减轻TBI合并IAH后的血脑屏障破坏,降低颅内压,其作用机制可能是与BMECs上FGFR1结合,激活下游ERK通路完成。TBI合并IAH导致颅内压增高,脑含水量及血脑屏障渗透性增加。构成血脑屏障的BMECs表达p-FGFR1,p-ERK发生改变。给予bFGF激活p-FGFR1及下游p-ERK,上调AJ（ZO-1、Claudin-5、Occludin）、TJ（β-catenin）,下调MMP（MMP9、MMP12）,IL-1β,从而降低脑含水量,血脑屏障渗透性及颅内压。给予FGFR1拮抗剂（PD173074）,ERK拮抗剂（PD98059）可以逆转bFGF的保护作用。3.bFGF改善人脑微血管内皮细胞糖氧剥离（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）后渗透性及凋亡,机制是与HBMECs上FGFR1结合,激活下游ERK通路完成。在OGD/R损伤导致HBMECs渗透性和凋亡增强,而对活力影响不大。OGD/R后HBMECs表达p-FGFR1,p-ERK发生改变,而p-FGFR2无变化。给予bFGF激活p-FGFR1及下游p-ERK,上调AJ（ZO-1、Claudin-5、Occludin）、TJ（β-catenin）,Bcl-2,下调MMP（MMP2、MMP9）、BAX、Caspase-3,从而降低HBMECs渗透性及凋亡细胞数。给予FGFR1拮抗剂（PD173074）,ERK拮抗剂（PD98059）可以逆转bFGF的保护作用。结论:1.成功构建动物模型（大鼠）,揭示了不同腹腔内压与颅内压的关系以及IAH/ACS可能通过血脑屏障破坏引起脑水肿、导致颅内压增高的病理过程。以与人类基因同源性的大鼠为动物模型,具有体积小,操作简单,花费少,实验试剂易制备或获得,可用于继发性IAH/ACS病理生理的相关研究。2.TBI合并IAH导致血脑屏障破坏,脑水肿,引起颅内压升高。bFGF能通过上调血脑屏障紧密连接,粘附连接相关蛋白,降低MMP及炎症因子而保护血脑屏障,减轻脑水及降低颅内压。其保护机制可能是通过与BMECs上FGFR1结合激活下游ERK信号通路发挥作用;3.体外培养HBMECs在OGD/R条件下渗透性及凋亡增强,bFGF通过与FGFR1结合激活ERK通路,上调AJ、TJ、MMP及凋亡蛋白（Bcl-2,BAX,Caspase-3）,降低HBMECs的渗透性和减少凋亡数量,对HBMECs损伤有保护功能。
杨阳[6]（2020）在《Acetylated α-tubulin在脑出血后运动神经传导通路损伤中的保护作用与机制研究》文中研究表明脑出血（Intracerebral hemorrhage,ICH）指血管破裂导致血液在脑实质内的聚集,是最严重的脑卒中亚型。人群中ICH的发病率为12-15/10万人每年,占所有脑卒中类型的1015%,急性期病死率为30%40%,90%以上患者遗留不同程度的神经功能障碍。随着医疗水平的逐渐提高,ICH患者的病死率呈下降趋势,但致残率仍居高不下,而且目前临床仍缺乏治疗ICH后神经功能障碍的有效策略,高致残率仍然是ICH治疗的瓶颈。因此,如何改善ICH患者的神经功能（如运动、感觉、认知等）障碍、降低ICH患者的残疾率成为ICH研究领域的重点。高血压性ICH好发于基底节区域,此区域含有大量的下行白质纤维传导束,损伤后往往导致严重的运动功能障碍。很多临床研究用弥散张量成像（diffusion tensor imaging,DTI）和弥散加权成像（diffusion-weighted imaging,DWI）来观察ICH后白质纤维束-皮质脊髓束（corticospinal trac,CST）的损伤,发现ICH后CST损伤的程度和运动功能障碍的程度密切相关。结果提示,在ICH早期减轻CST损伤有利于运动功能恢复。加之中枢神经系统神经再生困难,因此,在ICH早期保护更多神经纤维比促进后期神经再生更加关键,残存的神经纤维也是神经功能康复的结构基础。然而,我们回顾了既往ICH的主要研究方向,发现绝大多数研究聚焦在ICH后血脑屏障保护、灰质区神经元保护、炎症抑制、铁螯合、血肿吸收等机制和转化研究。值得注意的是,既往有1000多种在实验性脑卒中动物模型上证实有保护效果的药物,而且近200种药物进行了临床试验,但所有药物在临床试验中均没有显着性治疗效果。造成这种现象的原因有很多:第一,啮齿类动物与人类有巨大差异;第二,绝大多数研究忽略了非常重要的早期运动神经传导通路的保护;第三,随着研究的不断深入,我们会发现神经损伤的机制有很多,单一的干预措施只能取得适度的效果,只有把几种干预措施联合应用,才可能取得显着的效果。综上,ICH位置特殊性和多种损伤机制提示我们应该探索新的研究方向、干预靶点和模式动物来改善脑出血后神经功能障碍。因此,我们认为ICH的基础研究要注重以下几个方面:1)注重ICH早期运动神经传导通路-白质纤维束的保护,为功能恢复保留结构基础;2)利用与人类神经系统解剖结构相似的大动物进行实验,如非人灵长类动物、猪等;3)针对多种干预靶点、采用多种措施进行联合治疗。然而,关于ICH早期运动神经传导通路损伤的作用和机制研究仍为空白,在论文的第二章和第三章我们探索了两种关键的运动神经传导通路在ICH后的病理改变:控制精细运动的锥体系-CST和协调精细运动的锥体外系-黑质纹状体通路（Nigrostriatal pathway,NSP）近年来研究发现微管解聚和线粒体功能障碍参与了脊髓损伤、阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）、帕金森病（Parkinson’s disease,PD）等疾病的发生发展。维持微管的稳定性可以促进啮齿类动物脊髓损伤后轴突再生、改善AD和PD症状;新近研究也发现,脊髓损伤后保护线粒体功能可以促进小鼠神经再生、改善运动功能障碍。Acetylatedα-tubulin是稳定型微管的标志物,促进acetylatedα-tubulin表达可以维持微管的稳定;抑制线粒体通透性转换孔（Mitochondrial Permeability Transition Pore,m PTP）开放可以缓解线粒体肿胀、改善线粒体的功能。我们推测促进acetylatedα-tubulin表达以维持微管的稳定和线粒体保护将有利于改善ICH后运动神经传导通路的损伤,并在论文的第二章和第三章探索了维持微管稳定性和线粒体保护对CST和NSP通路的保护作用。此外,稳定的、可重复的大动物脑出血模型非常必要,也可以用来探索临床前药物干预的剂量、周期、时机等。此外,在建立大动物脑出血模型后,应该建立相应的检测额评估脑出血严重程度的手段,特别是MRI对模型脑水肿、铁含量和白质纤维成像的分析。在本论文的第四章,我们重点探索了巴马香猪脑出血模型的建立,并利用MRI-T2、定量磁化率成像（quantitative susceptibility mapping,QSM）、弥散张量成像（diffusion tensor imaging,DTI）对脑组织结构、脑铁含量、白质纤维束进行无创、准确、定量的分析,为更多临床转化研究提供更符合临床的脑出血模型,而后探索了具有脑出血治疗前景的药物米诺环素（minocycline,Mino）在巴马香猪脑出血模型中的保护作用。具体研究内容如下:一、微管稳定和线粒体保护在小鼠脑出血后皮质脊髓束损伤中的作用与机制研究目的 脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）好发于白质纤维束密集的丘脑基底节区域,皮质脊髓束（Corticospinal tract,CST）是白质纤维束的轴突部分,作为控制精细功能的最重要结构,ICH后CST损伤的病理改变仍不清楚,本部分主要研究小鼠ICH后CST轴突的病理变化。探索微管和线粒体在ICH后CST轴突损伤的作用和机制,以及利用转基因小鼠、药物等技术增加稳定型微管acetylatedα-tubulin表达、保护线粒体功能能否改善小鼠ICH后CST轴突损伤和运动功能障碍,以及为脑出血后CST运动神经传导束的保护提供理论依据和可能的治疗策略。方法 利用Thy1-YFP小鼠,采用自体血25μL立体定位注入小鼠右侧纹状体区域构建ICH模型,首先利用免疫荧光、电镜等方式观察ICH后24h时血肿周围CST损伤的特点。然后利用MEC17-/-小鼠减少acetylatedα-tubulin表达使微管处于不稳定状态,HDAC6的特异性抑制剂Tubastatin A（Tub A）来增加acetylatedα-tubulin表达以增加微管稳定性,Cyp D的抑制剂环孢菌素A（cyclosporin A,Cs A）阻断m PTP形成、缓解线粒体肿胀等方式单独或者联合应用到ICH小鼠上,并采用免疫荧光染色、电镜、神经环路示踪等方法评估CST运动神经传导束的形态学变化,利用Beam-walking,irregular ladder walk等行为学方法检测精细运动功能改变,评估稳定微管及线粒体保护的作用。此外,提取原代皮层神经元,观察神经元突起内线粒体的运动以及acetylatedα-tubulin和线粒体的位置关系。结果1.小鼠ICH导致CST轴突的退缩样小球的病理改变,电镜结果发现退缩小球内含有无规则排列的微管和肿胀的线粒体,形成无营养神经锥。顺行神经环路示踪提示CST的损害,行为学发现CST相关精细运动功能障碍。2.小鼠ICH后24小时内白质纤维的损伤仅发生在轴突内,髓鞘没有显着损伤,ICH后第7天髓鞘崩解最为严重,ICH后第14天有新形成髓鞘的出现。3.小鼠原代皮层神经元突起上41%线粒体与acetylatedα-tubulin表达的“增强点”共标,敲除MEC17导致acetylatedα-tubulin表达缺失引起运动的线粒体数目显着减少。4.MEC17敲除小鼠的ICH模型表现出更加严重的CST轴突损伤和运动功能障碍。5.利用Tub A增加acetylatedα-tubulin表达、Cs A缓解线粒体肿胀均能够减轻ICH导致的CST损伤,如减少退缩小球的形成、改善运动功能障碍,两者联合干预ICH小鼠能够取得更加显着的保护效果。结论该部分研究探索了小鼠ICH导致的锥体系-CST运动神经传导束的病理损伤以及机制,我们发现了ICH后早期微管解聚和线粒体损伤是CST运动神经传导束损伤重要原因,acetylatedα-tubulin和线粒体相辅相成,同时促进acetylatedα-tubulin表达和保护线粒体功能显着改善ICH后CST损伤,并认为联合多种治疗措施在ICH早期进行运动神经传导通路保护是治疗运动障碍的关键,为ICH后运动功能障碍治疗提供了新的研究策略和干预靶点。二、微管稳定在脑出血后小鼠黑质纹状体通路损伤中的保护作用与机制研究目的黑质纹状体通路（Nigrostriatal pathway,NSP）是锥体外系主要神经结构之一,由起源于黑质、投射到纹状体的多巴胺能神经元胞体及纤维构成,主要作用是调节肌肉张力、协调各种精细复杂的运动。纹状体内含有尾状核、豆状核以及大量从中间穿行的白质纤维束,是脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）好发部分。目前仍没有对纹状体出血后NSP通路损伤的系统性研究及干预。因此,本部分关注于小鼠ICH对NSP通路的损伤,以及探索Acetylatedα-tubulin介导微管稳定在ICH后NSP损伤中的保护作用与机制,为ICH后精细运功功能障碍的恢复开拓新的研究思路。方法本实验采用自体血25μL立体定位注入小鼠右侧纹状体区域构建小鼠ICH模型。在建模成功后的1、3、7天分别用免疫荧光染色、电镜、Western-blot、神经环路示踪等技术检测出血周围纹状体及同侧黑质区多巴胺能神经元纤维和胞体的病理改变,并检测转运多巴胺的囊泡单胺转运体2（vesicular monoamine transporter-2,VMAT2）、囊泡运输蛋白（Kinesin和Dynein）表达水平以及多巴胺神经递质含量来检测多巴胺能神经元功能。此外,我们利用评估大体运动功能的行为学（旷场、神经功能评分、Rotarod）和精细的行为学（Beam walking和irregular ladder walk task）检测ICH后小鼠的运动功能障碍,以及检测稳定型微管acetylatedα-tubulin的蛋白表达水平与上述多巴胺能神经元形态和功能异常的相关性。同时,我们给予微管稳定剂Epo B来干预小鼠ICH模型、体外氧合血红蛋白模拟的ICH模型,观察其对NSP中多巴胺能神经元及纤维损伤的保护作用及对精细运动行为学的修复作用。此外,利用上述实验方法,我们将微管解聚剂Nocodazole注射到纹状体内观察单独微管解聚因素对NSP的损伤效应和Epo B的反转效应。最后,我们利用慢病毒、腺病毒载体将αTAT1/MEC17（α-tubulin的乙酰基转移酶）sh RNA在体及离体干预黑质区的多巴胺能神经元来降低acetylatedα-tubulin表达,观察单纯的稳定型微管acetylatedα-tubulin降低对黑质神经元胞体、纤维以及相关行为学的影响。结果1.小鼠纹状体出血导致血肿周围多巴胺能神经元纤维密度、同侧黑质区多巴胺能够神经元数目均显着降低。多巴胺能神经元呈现“空泡状”病理改变,伴随多巴胺神经递质囊泡转运相关蛋白VMAT2、Kinesin、Dynein表达降低、多巴胺神经递质含量降低、稳定型微管标记物acetylatedα-tubulin表达显着降低。2.顺行、逆行神经环路示踪均显示小鼠纹状体出血导致黑NSP通路的显着损害,旷场、神经功能评分方法只能发现3天内ICH小鼠的运动功能障碍,但需要技巧性的精细运动（Beam waking和irregular ladder walk task）在ICH后14天仍有功能障碍。3.微管稳定剂Epo B干预可以增加稳定型微管acetylatedα-tubulin表达,改善上述脑出血导致的NSP结构和功能的损害,并显着提高ICH后精细运动功能。4.微管解聚剂Nocodazole注射到纹状体内可以引起上述ICH后NSP的损伤及运动功能障碍,提示单独微管解聚因素对NSP既有损伤效应,维持微管稳定性是保护ICH后NSP损伤是重要靶点。5.αTAT1 sh RNA干预均可以降低多巴胺能神经元稳定型微管acetylatedα-tubulin表达下调,加重ICH及氧合血红蛋白对NSP结构和功能损伤,Epo B对αTAT1 sh RNA及氧合血红蛋白干预引起的多巴胺能神经元损伤也有显着的保护作用。结论小鼠纹状体出血会导致NSP通路的损害,ICH后acetylatedα-tubulin表达降低导致微管稳定性下降可能是NSP运动通路损伤的重要原因。微管稳定剂Epo B的干预可以增加acetylatedα-tubulin表达、显着减轻ICH导致的NSP通路损害,改善了ICH小鼠运动功能障碍。该部分研究首次探索了ICH导致的锥体外系-黑质纹状体通路的损害以及可能的机制,为改善ICH后运动功能障碍提供了新的思路。三、巴马香猪脑出血模型的建立及大动物MRI检测方法的探索目的实验性脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）模型主要建立在啮齿类动物中,但啮齿类动物白质纤维组织不够丰富,也无明显的内囊解剖结构。因此,本实验我们拟建立稳定性好、可重复、便于操作的巴马香猪ICH模型,同时对出血后脑水肿、脑室体积改变、铁沉积等进行多时间点的观察分析,并采用MRI-T2、QSM、DTI等序列进行脑组织结构分析、铁含量定量分析和白质纤维束定量分析,并观察米诺环素干预猪ICH模型的治疗效应,以此来评估模型的稳定性和可靠性,为更多临床转化研究提供更符合临床的ICH模型。方法我们选取10-12Kg的雄性巴马香猪,异氟烷麻醉后将猪固定到大动物立体定位仪上,在内囊上方（坐标为:前囟前11mm;旁开11mm）的颅骨表面钻一个直径约1mm大小的孔,利用微量注射泵、5m L注射器和33G针头将2m L自体动脉血缓慢注射到猪的右侧内囊区域,深度18mm。在脑出血后1天、7天、28天对巴马香猪进行MRI-T2、QSM、DTI扫描、脑含水量测定、血肿周围铁含量测定以及免疫组织化学染色。此外,我们在巴马香猪ICH模型中检测米诺环素的保护效应。结果1.自体血注入巴马香猪内囊处,造成了脑内血肿、脑室扩张、脑水肿、白质纤维损伤及神经功能障碍,较好的模拟了ICH的临床特点,表明巴马香猪ICH模型是一个具有相似性、重复性、可靠性的模型;2.血肿周围铁含量测定和QSM定量磁化率数值相关性好,QSM可以对脑出血后血肿周围铁含量进行无创的、准确的定量分析。DTI可以对白质纤维束进行定量分析;3.米诺环素可以行使铁螯合功能,降低血肿周围铁含量的同时,改善了巴马香猪脑水肿、侧脑室扩张、白质纤维束损伤及神经功能障碍。结论巴马香猪ICH模型具有相似性、重复性、可靠性;QSM是一种可以无创的、准确的评估ICH后急性、慢性期血肿铁含量的方法;米诺环素可以减轻巴马香猪ICH模型引起的脑水肿、脑室扩张、铁超载、白质纤维损伤、胶质细胞激活、神经功能障碍等。
赵玉宇[7]（2020）在《包载miR-139-5p的EpCAM适配体功能化阳离子脂质体纳米颗粒的制备及对结直肠癌靶向治疗作用的研究》文中认为结直肠癌（CRC）是全球最常见的癌症之一,每年约有70万人死于CRC。约有50%的CRC患者在诊断时或治疗后复发时出现局部或远处转移。具有远处转移的CRC患者五年生存率小于10%。目前对于CRC的治疗主要是外科手术、化疗、放疗和靶向治疗。MicroRNA（miRNA）在多种生物学过程中起着至关重要的作用。MiRNA作为治疗剂面临的主要挑战是它们在血浆中的快速降解、短半衰期和脱靶效应。其中,miR-139-5p被认为是在CRC中过表达的抑癌基因,有助于减缓癌症的进展。在此课题中,我们开发了一种基于阳离子脂质体的纳米粒子药物递送系统,该药物递送系统负载了 miR-139-5p（miR-139-5p-HSPC/DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-COOH纳米粒子,MNPs）,并用上皮细胞粘附分子（EpCAM）适配体（Apt）进行了表面修饰（miR-139-5p-EpCAM Apt-HSPC/DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-COOH纳米粒子,MANPs）,用于CRC的靶向治疗。MANPs的尺寸为150.3±8.8 nm,表面电势为37.8±3.2 mV,具有圆形外观和低溶血性。MANPs在体外明显抑制了 HCT116和HCT8细胞的增殖、迁移和侵袭,且对EpCAM（+）细胞具有靶向能力。NOTCH1是miR-139-5p的靶基因之一,是一种CRC促癌基因,我们的结果表明,MANPs在HCT116和HCT8细胞中显着下调了 NOTCH1的mRNA水平和蛋白水平。此外,ANPs在体内具有显着的EpCAM（+）肿瘤靶向性,MANPs在裸鼠皮下肿瘤模型中和腹膜肿瘤模型中都明显抑制了 CRC的发展,且对裸鼠主要脏器无毒副作用。我们的结果证明MANPs是能够将治疗性miR-139-5p传递至CRC肿瘤部位的有效药物递送系统。
贾瑞华[8]（2019）在《氢气对难治性癫痫持续状态的治疗作用及机制研究》文中指出癫痫持续状态（status epilepticus,SE）是神经科的急危重症。目前的治疗原则主要为在对症支持治疗的前提下,尽快终止癫痫发作。但是,约有三分之一的患者在经过治疗后,其癫痫发作仍然难以被控制进而发展为难治性癫痫持续状态（refractory status epilepticus,RSE）。癫痫发作的时间越长,其对患者的危害越重。目前观点认为,持续的癫痫样放电会引起炎症反应、氧化应激、电解质紊乱、酸碱失衡等,导致神经元死亡,从而造成很多患者遗留不同程度的认知功能损伤。因此,如何帮助患者尽快终止癫痫发作、如何保护神经元和其他神经细胞、以及如何改善发作后遗留的认知功能损害已经成为神经科临床工作中迫切需要解决的难题。研究发现,在诸多神经系统疾病的动物模型中,氢气都可发挥保护性作用。例如脑缺血模型、帕金森病以及阿尔茨海默病模型等。氢气具有很强的自由扩散能力,可穿透血脑屏障快速扩散到组织中,甚至可穿透细胞膜进入细胞内。而且作为一种抗氧化剂,氢气能够选择性地减少最具细胞毒性的活性氧自由基:·OH。另外,研究表明氢气还可发挥抗炎、调控离子通道受体等作用。例如,在治疗痛觉过敏时,氢气可以抑制N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体的亚单位NR2B的膜转运,进而调控NMDA受体功能,降低神经兴奋性。基于氢气的这些功能特性,我们推测氢气可能对RSE产生积极的治疗作用。因此,我们对氢气在RSE中的作用及机制进行研究,期望为解决神经科临床中的难点问题提供新的思路和理论依据。目的:1、探讨氢气治疗对RSE大鼠癫痫发作的作用以及对NR2B亚基在海马细胞膜上的表达和磷酸化水平的影响。2、探讨氢气治疗对RSE导致的神经细胞死亡的影响。3、观察氢气治疗对RSE导致的认知功能损害的作用。方法:1、建立大鼠难治性癫痫持续状态模型后,通过行为学评分（Racine Scores）观察氢生理盐水（hydrogen-rich saline,HRS）治疗对模型大鼠癫痫发作严重程度的影响,通过脑电图（electroencephalogram,EEG）分析观察HRS对脑电图的波幅和功率的影响。然后利用Western blot对NR2B及p-NR2B在膜上的表达进行研究,观察它们在治疗后的变化。2、通过免疫荧光染色、透射电镜及Western blot等方法观察治疗后各组大鼠海马内细胞的死亡方式、其所在的区域以及炎症反应等的变化。3、通过水迷宫实验中的逃避潜伏期、在目标象限停留的时间和进入目标象限的频率等指标对各组大鼠在RSE后14天的认知功能状况进行分析。结果:1、行为学Racine评分和脑电图结果。行为学评分:与RSE+saline组的相比,RSE+HRS组的大鼠Racine评分没有明显的变化。脑电图结果:与RSE+Saline组的大鼠相比,RSE+HRS组中大鼠的脑电图波幅及功率均降低。2、NR2B表达和磷酸化水平的变化。与对照组（Con组）相比,癫痫发作后RSE组的大鼠海马细胞膜上NR2B的表达水平和磷酸化水平均随时间逐渐升高;NR2B的表达水平在RSE+Saline组和RSE+HRS组间没有明显差异,但RSE+HRS组的大鼠NR2B的磷酸化水平明显低于RSE+Saline组。3、细胞凋亡的变化。与Con组相比,RSE组在CA1区、CA3区和DG区的凋亡细胞明显增多。与RSE+Saline组相比,RSE+HRS组CA1区和DG区的凋亡细胞比例下降,CA3区没有明显变化。更进一步,对凋亡细胞类型的分析结果显示,在CA1区,与RSE+Saline组相比,RSE+HRS组神经元发生凋亡的比例降低,存活数量增加,而两组间发生凋亡的星形胶质细胞的数量和星形胶质细胞的总数量均没有差异;在DG区的神经元和星形胶质细胞中,与RSE+Saline组相比,RSE+HRS组的发生凋亡的细胞比例明显降低。4、细胞坏死性凋亡的变化。（1）形态学结果提示,与Con组相比,RSE组的大鼠海马内发生坏死性凋亡的细胞明显增多。Western blot结果和电镜结果进一步充分证实了坏死性凋亡的发生。坏死性凋亡主要分布在CA1区和DG区;在CA1区内发生坏死性凋亡的细胞主要为神经元,而在DG区内发生坏死性凋亡的细胞主要为星形胶质细胞。（2）Western blot结果提示,与RSE+Saline组相比,RSE+HRS组的坏死性凋亡相关的蛋白表达在CA1区域明显降低,包括MLKL、p-MLKL以及RIP3等。（3）CA1区的染色结果提示,相比于Con+Saline组和Con+HRS组,在RSE+Saline组的CA1区神经元群体中,MLKL阳性的细胞明显增多;而在RSE+HRS组,MLKL阳性的神经元相比RSE+Saline组有明显减少（4）DG区的染色结果提示,在DG区的星形胶质细胞中,MLKL阳性的细胞所占比例在RSE+Saline组和RSE+HRS组中,均显着高于Con+Saline组以及Con+HRS组,而RSE+HRS组中MLKL阳性的细胞所占的比例又明显低于RSE+Saline组。5、海马小胶质细胞的活化程度的变化。RSE+Saline组和RSE+HRS组的大鼠海马Iba1阳性的小胶质细胞数量均高于Con+HRS组和Con+Saline组的大鼠。与RSE+Saline组相比,RSE+HRS组的大鼠的Iba1阳性海马小胶质细胞的数目明显减少。6、大鼠认知功能的改变。RSE+Saline组和RSE+HRS组的大鼠的逃避潜伏期明显长于Con+HRS组和Con+Saline组的大鼠,而大鼠在目标象限停留的时间和进入目标象限的次数则明显少于Con+HRS组和Con+Saline组的大鼠。与RSE+Saline组相比,RSE+HRS组的大鼠的逃避潜伏期明显缩短,大鼠在目标象限停留的时间和进入目标象限的次数明显增加。结论:1、HRS治疗对RSE大鼠的行为学发作评分没有明显影响,但可减轻RSE大鼠发作时的脑电幅度和功率;HRS治疗降低了NR2B亚基的磷酸化水平。2、HRS对RSE导致的神经细胞死亡有改善作用,可减少RSE诱导的海马神经细胞的凋亡和坏死性凋亡,尤其对阻止CA1区神经元的坏死性凋亡具有很好的作用效果;HRS对海马部位小胶质细胞活化也有明显的减轻作用。3、HRS治疗可以改善RSE引起的认知功能损害。4、HRS既能减轻发作期RSE大鼠脑电发作,又能增加RSE后大鼠海马神经细胞的存活数量并改善RSE大鼠的认知功能。这提示临床上减轻脑电异常放电,可能具有积极的治疗意义。
吕婷婷[9]（2019）在《DRG中P2X7和P2Y1受体介导电针缓解IBS大鼠内脏痛敏机制研究》文中研究表明目的:探讨DRG中P2X7和P2Y1受体在电针足三里、三阴交缓解内脏痛敏中的作用机制。方法:TNBS灌肠诱导IBS大鼠内脏痛模型,给予足三里（双）、三阴交穴（双）电针刺激干预（强度1m A,频率2Hz,波宽0.1ms）,15min/次,1次/日,共1周。运用病理形态学、行为学、逆行示踪、电生理学、分子生物学等方法,探讨DRG中P2X7和P2Y1受体介导电针缓解内脏痛敏的神经生物学机制。结果:电针明显抑制内脏高敏感性,可被鞘内注射氟代柠檬酸部分抑制。电针能够抑制内脏痛大鼠DRG神经元的兴奋性:降低静息膜电位、上调基强度、抑制神经元动作电位发放,鞘内注射FCA后电针的调节作用受到一定程度抑制,表明胶质细胞可能参与电针对神经元电生理学特性的调节。P2X7选择性激动剂Bz ATP增加AWR评分,拮抗剂A740003抑制AWR评分,说明P2X7在内脏痛敏中发挥促进作用。Bz ATP拮抗了电针镇痛效应,A740003能够协同电针镇痛效应。电针显着抑制P2X7蛋白与m RNA表达。P2Y1激动剂ADP-β-S降低AWR评分,而P2Y1拮抗剂MRS2179对评分无影响;TNBS下调DRG中P2Y1蛋白及其m RNA表达,提示P2Y1内脏痛敏中发挥抑制作用。ADP-β-S协同电针镇痛作用,MRS2179拮抗电针的镇痛效应,说明P2Y1介导了电针缓解内脏高敏感过程。MRS2179抑制A740003的镇痛效应。TNBS诱导P2Y1表达下调,Bz ATP下调P2Y1蛋白及其m RNA表达,A740003上调其表达,说明P2Y1参与P2X7对内脏痛觉调节。内脏痛大鼠DRG中P2X3表达上调,Bz ATP进一步上调其表达,A740003抑制其上调。Bz ATP拮抗电针上调P2Y1,A740003协同EA上调P2Y1。Bz ATP拮抗电针下调P2X3,A740003协同电针抑制P2X3,表明P2X7介导电针缓解内脏痛。TNBS能上调P2X3表达,ADP-β-S下调DRG中P2X3表达,MRS2179进一步上调P2X3表达。TNBS上调结肠相关DRG中P2X3 m RNA的表达;ADP-β-S下调P2X3m RNA表达,MRS2179进一步上调P2X3 m RNA表达。说明P2Y1通过调节P2X3受体蛋白及其m RNA的表达来实现对内脏痛觉的调制。电针显着抑制P2X3蛋白的表达;ADP-β-S协同电针对P2X3蛋白的下调,MRS2179拮抗电针的下调作用。结论:DRG胶质细胞参与TNBS诱导IBS内脏痛的外周敏化与电针镇痛效应;DRG中P2X7、P2Y1受体介导IBS大鼠内脏高敏感与电针镇痛效应;
郭保君[10]（2019）在《基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠Per2、Clock基因及Glu/GABA-Gln代谢环路影响的研究》文中认为目的:通过针刺补泻跷脉穴位刺激失眠大鼠,观察大鼠行为学和睡眠实验变化,结合实时荧光定量PCR技术（RT-PCR）,Western Blot技术（WB）、免疫组织化学染色法（IHC）、酶联免疫吸附实验（ELISA）技术,研究针刺对大鼠SCN内生物钟基因Clock、Per2 mRNA相对表达量,CLOCK、PER2 mRNA蛋白表达水平的调节,并观察Glu/GABA-Gln代谢环路的变化。由此探讨针刺调理跷脉治疗失眠的机制。方法:1.观察基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠基本情况的改变:48只雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、西药组、针刺组,采用腹腔注射PCPA的方法复制失眠模型,西药组给予艾司唑仑溶液（0.08mg/ml）灌胃,0.558mg/kg,1天1次,连续五天,针刺组采用补照海、泻申脉的治疗方法,1天1次,连续5天。于造模前、造模后及干预后对各组大鼠的体重、24h二便量进行测量比较,观察其变化。2.观察基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠行为学的影响:分组、造模及干预情况同实验一,分别在造模前、造模后、治疗后进行水迷宫和旷场实验,对比造模前后、治疗前后大鼠的空间记忆能力、自发活动情况,观察其行为学变化。3.观察基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠睡眠实验的影响:分组、造模及干预情况同实验一,分别在造模后、治疗结束后,对4组大鼠进行戊巴比妥钠协同镇静催眠实验,观察各组在阈上剂量、阈下剂量的睡眠潜伏期和睡眠时间,对比各组数据,观察造模情况以及西药、针刺对睡眠实验的影响。4.观察基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠SCN内Per2、Clock基因和Glu/GABA-Gln代谢环路的影响:分组、造模及干预情况同实验一,在治疗干预结束后,将各组大鼠随机抽取一半,取下丘脑并剥离SCN,应用PCR、WB、ELISA、IHC技术观察SCN内Per2 mRNA、Clock mRNA相对表达量,PER2、CLOCK蛋白含量,检测下丘脑内GABA、Glu、GAD、GS含量;各组剩余大鼠,行大脑灌注后,应用IHC技术,观察下丘脑内GABAA的阳性表达率。结果:1.基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠基本情况的影响（1）造模前各组大鼠体重、24h二便量差异无统计学意义（p>0.05）。（2）体重方面:与空白组比较,造模后大鼠体重增长缓慢,差异无统计学意义（p>0.05）;与模型组比较,针刺、西药治疗可以减缓这种趋势,使大鼠体重增加,差异有统计学意义（p<0.05）。（3）二便方面:与空白组比较,造模可以增加大鼠24h二便量,其差异有统计学意义（p<0.05）;与模型组比较,针刺和西药治疗,可以减轻造模带来的影响,使大鼠二便量趋向正常水平,其差异有统计学意义（p<0.05）2.基于跷脉理论针刺对失眠大鼠行为学的影响（1）造模前各组大鼠在空间记忆能力、自发活动方面水平一致,差异无统计学意义（p>0.05）。（2）水迷宫实验:与空白组比较,造模后大鼠在目标象限进入次数、目标象限进入次数百分比、目标象限滞留时间、目标象限滞留时间百分比方面均下降,差异有统计学意义（p<0.05）;与模型组比较,针刺和西药治疗后,目标象限进入次数、目标象限进入次数百分比、目标象限滞留时间、目标象限滞留时间百分比方面均趋向正常组,但只有目标象限进入次数间的差异有统计学意义（p<0.05）。（3）旷场试验:与空白组比较,造模后,大鼠站立次数明显增加,其差异有统计学意义（p<0.05）,大鼠静止时间增加,运动时间减少,大鼠运动距离减少,但其差异无统计学意义（p>0.05）;与模型组比较,西药组和针刺组大鼠站立次数减少,大鼠静止时间减少,运动时间增加,差异有统计学意义（p<0.05）,运动距离增加,差异无统计学意义（p>0.05）。3.基于跷脉理论针刺对失眠大鼠睡眠实验的影响（1）造模对SD大鼠睡眠实验的影响:戊巴比妥钠协同镇静实验:与空白组比较,模型组、西药组、针刺组大鼠睡眠潜伏期延长、睡眠时间减少,差异有统计学意义（p<0.05）。戊巴比妥钠协同催眠实验:与空白组比较,模型组、西药组和针刺组大鼠睡眠潜伏期延长,睡眠时间减少,差异有统计学意义（p<0.05）。（2）针刺对SD大鼠睡眠实验的影响:戊巴比妥钠协同镇静实验:与空白组比较,模型组大鼠睡眠潜伏期延长,其差异有统计学意义（p<0.05）,经过干预后,西药组和针刺组大鼠睡眠潜伏期缩短,与模型组比较差异有统计学意义（p<0.05）,与空白组比较,差异无统计学意义（p>0.05）;与空白组比较,模型组大鼠睡眠时间减少,差异无统计学意义（p>0.05）,与模型组比较,针刺组大鼠睡眠时间增加,但差异无统计学意义（p>0.05）,西药组大鼠睡眠时间增加显着,高于空白组,差异有统计学意义（p<0.05）。戊巴比妥钠协同催眠实验:与空白组比较,模型组大鼠睡眠潜伏期显着增加,其差异有统计学意义（p<0.05）;与模型组比较,西药组、针刺组大鼠睡眠潜伏期缩短,但其差异无统计学意义（p>0.05）;与空白组比较,西药组和针刺组大鼠睡眠潜伏期仍较长,其差异有统计学意义（p<0.05）;与空白组比较,模型组大鼠睡眠时间减少,但其差异无统计学意义（p>0.05）;与模型组比较西药组、针刺组大鼠睡眠时间显着增加,其差异有统计学意义（p<0.05）,与空白组比较,差异无统计学意义（p>0.05）。4.基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠SCN内Per2、Clock基因和Glu/GABA-Gln代谢环路的影响（1）下丘脑ELISA检测结果显示:与空白组比较,模型组大鼠下丘脑内GABA浓度下降,Glu浓度升高,差异有统计学意义（p<0.05）;西药组、针刺组大鼠下丘脑内GABA浓度升高,Glu浓度降低,差异有统计学意义（p<0.05）。（2）下丘脑GABAA免疫组化结果显示:与空白组比较,模型组大鼠下丘脑内GABAA阳性表达较多,MD水平升高,差异有统计学意义（p<0.05）;西药组、针刺组大鼠下丘脑内GABAA阳性表达较少,MD较模型组降低,与空白组比较,差异无统计学意义（p>0.05）。（3）WB检测结果显示:与空白组比较,模型组大鼠SCN内CLOCK、PER2蛋白表达下降,差异有统计学意义（p<0.05）;经治疗后西药组、针刺组大鼠SCN内CLOCK、PER2蛋白表达高于模型组,与空白组比较,差异无统计学意义（p>0.05）。与空白组比较,模型组大鼠下丘脑内GAD蛋白表达水平下降、GS蛋白表达水平升高,差异有统计学意义（p<0.05）;西药组、针刺组大鼠下丘脑内GAD蛋白表达水平升高、GS蛋白表达水平下降,与空白组比较,差异无统计学意义（p>0.05）。（4）RT-PCR检测结果显示:与空白组比较,模型组大鼠SCN内Clock mRNA,Per2 mRNA相对表达量下降,差异有统计学意义（p<0.05）;经治疗后,西药组和针刺组大鼠SCN内Clock mRNA,Per2 mRNA相对表达量上升,与空白组比较,差异无统计学意义（p>0.05）。结论:1.针刺调理跷脉能够有效缩短入睡潜伏期、延长睡眠时间。2.针刺调理跷脉可以有效缓解失眠对体重和二便的影响,起到稳定体重,保持二便量正常的作用。3.针刺调理跷脉可以有效缓解失眠对大鼠空间记忆能力和自发活动的影响,使之恢复正常。4.针刺调理跷脉可以升高大鼠SCN内Clock mRNA、Per2 mRNA相对表达量,CLOCK、PER2蛋白表达水平;提高下丘脑内GABA浓度、GAD蛋白表达水平,降低Glu浓度、GS蛋白表达水平、GABAA阳性表达水平。5.针刺调理跷脉治疗失眠的机制可能与调节核心生物钟基因,并对其下游的Glu/GABA-Gln代谢环路产生影响有关。
二、戊巴比妥腹腔内注射对腹膜转运功能的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、戊巴比妥腹腔内注射对腹膜转运功能的影响（论文提纲范文）
（1）预处理的外泌体对骨质疏松骨整合及糖尿病创面修复作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 MiR-20a预处理的MSC来源的外泌体通过靶向BAMBI增强成骨作用来促进钛合金的骨整合的研究 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第二部分 褪黑素预处理的MSC来源的外泌体通过靶向PTEN/AKT途径来调节巨噬细胞M1 和M2 极化,从而改善糖尿病慢性伤口的愈合 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文及参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（2）人工诱导动物低代谢休眠药物研究进展（论文提纲范文）
| 1 二甲基亚砜 |
| 2 氯胺酮 |
| 3 利血平 |
| 4 氯丙嗪 |
| 5 氧化震颤素 |
| 6 戊巴比妥 |
| 7 氦气 |
| 8 3-碘甲状腺素 |
| 9 脑啡肽 |
| 1 0 神经肽Y1 |
| 1 1 硫化氢 |
| 1 2 展望 |
（3）盆腔泌尿疼痛动物模型的构建及腹下神经传导神经纤维构成的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 临床男性盆腔疼痛(胡桃夹综合征并精索静脉曲张)患者疼痛物质的检测 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 雄性大鼠盆腔疼痛(胡桃夹综合征法)动物模型的构建 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 雌性大鼠盆腔疼痛(胡桃夹综合征法)动物模型的构建 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 醋酸诱导盆腔泌尿疼痛动物模型的构建 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 腹下神经传入神经膀胱疼痛应答神经纤维构成的研究 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 致谢 |
| 5. 利益冲突 |
| 参考文献 |
| 综述 胡桃夹综合征致盆腔泌尿疼痛的致痛机理 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 不足及研究展望 |
| 博士期间的成果 |
| 致谢 |
（4）肾不藏志不寐的理论及实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 肾不藏志不寐理论研究 |
| 1 肾、志的含义及两者之间的关系 |
| 2 肾藏志对寐寤的调节作用 |
| 3 肾不藏志不寐的因机证治 |
| 4 常用安肾志的方药 |
| 5 小结 |
| 第二部分 肾不藏志不寐大鼠模型研究 |
| 研究一 肾不藏志不寐大鼠氧化应激、凋亡基因、炎性因子和神经递质的实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 研究二 肾不藏志不寐大鼠海马转录组学研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 安肾志药物远志对肾不藏志不寐大鼠镇静促眠作用的实验研究 |
| 研究一 远志对肾不藏志不寐大鼠神经递质和炎性因子的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 研究二 远志对肾不藏志不寐大鼠作用的海马转录组学研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 失眠大鼠模型的建立及中药治疗对氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（5）碱性成纤维细胞生长因子对颅脑创伤合并腹腔高压后血脑屏障的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 腹腔高压后破坏血脑屏障,引起颅内压增高的作用观察 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 颅脑创伤合并腹腔高压后对血脑屏障影响及碱性成纤维细胞生长因子的作用及机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 碱性成纤维细胞生长因子改善人脑微血管内皮细胞糖氧剥离后渗透性及凋亡的作用及机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 腹腔高压对远处脏器影响研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述 颅脑创伤和血脑屏障关系概述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（6）Acetylated α-tubulin在脑出血后运动神经传导通路损伤中的保护作用与机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 微管稳定和线粒体保护在小鼠脑出血后皮质脊髓束损伤中的作用与机制研究 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 微管稳定在小鼠脑出血后黑质纹状体通路损伤中的保护作用与机制研究 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 巴马香猪脑出血模型的建立及大动物MRI检测方法的探索 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 自发性脑出血后脑白质损伤与修复的相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（7）包载miR-139-5p的EpCAM适配体功能化阳离子脂质体纳米颗粒的制备及对结直肠癌靶向治疗作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 结直肠癌现状概述 |
| 1.2 脂质体纳米颗粒概述 |
| 1.3 EpCAM概述 |
| 1.4 MiR-139-5p概述 |
| 1.5 研究目的、内容、创新点和意义 |
| 1.5.1 研究目的 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 研究创新点和意义 |
| 第2章 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 常用试剂 |
| 2.2 仪器和设备 |
| 2.3 常用试剂配制 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 细胞培养 |
| 2.4.2 细胞总蛋白的提取及定量 |
| 2.4.3 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳和蛋白免疫印迹实验(Western Blot) |
| 2.4.4 细胞中总RNA的提取及反转录PCR |
| 第3章 脂质体纳米颗粒的制备和表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 主要药品和试剂 |
| 3.2.2 主要仪器设备 |
| 3.2.3 实验动物 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 空载无修饰脂质体纳米颗粒(HSPC/DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-COOH,NPs)的制备 |
| 3.3.2 空载EpCAM核酸适配体修饰的脂质体纳米颗粒(EpCAM Apt-HSPC/DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-COOH,ANPs)的制备 |
| 3.3.3 包载miR-139-5p的EpCAM核酸适配体修饰的脂质体纳米颗粒(miR-139-5p-EpCAM Apt-HSPC/DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-COOH,MANPs)的制备 |
| 3.3.4 琼脂糖凝胶电泳实验观察EpCAM Apt与NPs的缀合以及ANPs包载量的考察 |
| 3.3.5 MNPs及MANPs的表征 |
| 3.3.6 NPs和ANPs的稳定性考察 |
| 3.3.7 溶血血液 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 EpCAM Apt与NPs连接的考察 |
| 3.4.2 ANPs载基因能力的考察 |
| 3.4.3 MNPs及MANPs的表征 |
| 3.4.4 MANPs的血液安全性评价 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 脂质纳米颗粒复合物的体外转染效率及细胞靶向性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 细胞株 |
| 4.2.2 主要药品和试剂 |
| 4.2.3 主要仪器设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞瞬时转染 |
| 4.3.2 MNPs/MANPs与细胞的共孵育 |
| 4.3.3 荧光显微镜观察细胞中的FAM-miR-139-5p |
| 4.3.4 流式细胞术检测细胞中FAM-miR-139-5p |
| 4.3.5 共聚焦显微镜观察MANPs与细胞的共定位 |
| 4.3.6 细胞中EpCAM蛋白表达量的检测 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 MNPs及MANPs的细胞摄取考察 |
| 4.4.2 MANPs细胞共定位考察 |
| 4.4.3 EpCAM在不同肿瘤细胞中的蛋白表达量 |
| 4.4.4 MANPs的细胞靶向性考察 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 脂质纳米颗粒复合物对结直肠癌细胞生长、侵袭和迁移的作用研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 细胞株 |
| 5.2.2 主要药品和试剂 |
| 5.2.3 主要仪器设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 NPs及ANPs的细胞毒性考察 |
| 5.3.2 MNPs及MANPs对细胞增殖的影响 |
| 5.3.3 Annexin V-FITC检测细胞凋亡 |
| 5.3.4 Transwell侵袭实验 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 NPs及ANPs的细胞毒性考察 |
| 5.4.2 MNPs及MANPs对细胞增殖的影响 |
| 5.4.3 MNPs及MANPs对细胞凋亡的影响 |
| 5.4.4 MNPs及MANPs对细胞侵袭能力的影响 |
| 5.4.5 MNPs及MANPs对细胞转移能力的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 第6章 脂质纳米颗粒复合物降低miR-139-5p靶基因的水平并影响下游基因的表达 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.2.1 细胞株 |
| 6.2.2 主要药品和试剂 |
| 6.2.3 主要仪器设备 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 靶基因NOTCH1的mRNA水平的检测 |
| 6.3.2 靶基因NOTCH1及相关基因BCL2、MMP2、E-Cadherin、N-Cadherin的蛋白水平的检测 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 MNPs及MANPs能够调控NOTCHl的mRNA及蛋白表达 |
| 6.4.2 MNPs及MANPs对BCL2、N-Cadherin、E-Cadherin及MMP2的调控 |
| 6.5 讨论 |
| 第7章 活体成像观察脂质体纳米颗粒复合物的体内靶向和生物分布 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料 |
| 7.2.1 细胞株 |
| 7.2.2 动物 |
| 7.2.3 主要药品和试剂 |
| 7.2.4 主要试剂配制 |
| 7.2.5 主要仪器设备 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 裸鼠皮下肿瘤异种移植模型的建立 |
| 7.3.2 给药方案及小动物活体成像 |
| 7.4 实验结果 |
| 7.4.1 ANPs的体内靶向性评价 |
| 7.5 讨论 |
| 第8章 脂质体纳米颗粒复合物的体内抗肿瘤评价和安全评估 |
| 8.1 引言 |
| 8.2 实验材料 |
| 8.2.1 细胞株 |
| 8.2.2 动物 |
| 8.2.3 主要药品和试剂 |
| 8.2.4 主要试剂的配制 |
| 8.2.5 主要仪器设备 |
| 8.3 实验方法 |
| 8.3.1 裸鼠皮下肿瘤异种移植模型的建立 |
| 8.3.2 裸鼠皮下肿瘤异种移植模型的治疗方案 |
| 8.3.3 裸鼠腹膜异种移植模型的建立 |
| 8.3.4 裸鼠腹膜异种移植模型的治疗及观察方案 |
| 8.4 实验结果 |
| 8.4.1 MNPs及MANPs对裸鼠皮下肿瘤生长的抑制作用 |
| 8.4.2 MNPs及MANPs的体内安全性评价 |
| 8.4.3 MNPs及MANPs对裸鼠腹腔肿瘤生长的抑制作用 |
| 8.5 讨论 |
| 第9章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间论文和专利发表情况 |
（8）氢气对难治性癫痫持续状态的治疗作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 HRS对 RSE大鼠癫痫发作的作用及机制 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 HRS对 RSE导致的神经细胞死亡的影响 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 HRS对 RSE大鼠认知功能损伤的作用 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（9）DRG中P2X7和P2Y1受体介导电针缓解IBS大鼠内脏痛敏机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词一览表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 DRG内胶质细胞介导电针缓解TNBS诱导IBS大鼠内脏痛敏效应观察 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 实验动物及伦理 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 主要实验试剂 |
| 2.4 TNBS诱导大鼠IBS内脏痛模型 |
| 2.5 结肠组织微观病理评分标准 |
| 2.6 结直肠扩张球囊制作 |
| 2.7 内脏运动反射的行为测试 |
| 2.8 溶液配置 |
| 2.9 鞘内注射 |
| 2.10 大鼠穴位定位 |
| 2.11 动物分组与干预方法 |
| 2.12 标本采集与处理 |
| 2.13 结肠组织病理学HE染色 |
| 2.14 结肠相关DRG神经元逆行示踪 |
| 2.15 DRG神经元急性分离与培养 |
| 2.16 全细胞膜片钳记录 |
| 2.17 数据采集与分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 TNBS诱导结肠炎症在不同时间微观病理评分 |
| 3.2 DRG内胶质细胞介导电针缓解TNBS诱导内脏痛效应 |
| 3.3 胶质细胞介导电针调节TNBS诱导内脏痛大鼠DRG中结肠相关神经元电生理学特性 |
| 4.讨论 |
| 4.1 慢性内脏痛病因病机的中医认识 |
| 4.2 慢性内脏痛发病机制研究 |
| 4.3 穴位选择依据 |
| 4.4 DRG中“神经元-胶质细胞”共同参与感觉信息整合 |
| 4.5 结肠非炎症性内脏高敏感 |
| 4.6 DRG胶质细胞参与IBS内脏高敏感性及电针对结肠相关神经元兴奋性调节 |
| 小结 |
| 第二部分 DRG胶质细胞P2X_7受体介导电针缓解内脏痛敏研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验动物及伦理 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 主要实验试剂 |
| 2.4 TNBS诱导大鼠IBS内脏痛模型 |
| 2.5 内脏运动反射的行为测试 |
| 2.6 溶液配置 |
| 2.7 动物分组与干预方法 |
| 2.8 标本采集与处理 |
| 2.9 免疫荧光双标 |
| 2.10 Real time PCR m RNA检测 |
| 2.11 Western Blot蛋白检测 |
| 2.12 数据采集与分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 DRG中 GFAP-P2X_7、P2X_3-P2X_7免疫荧光共定位染色 |
| 3.2 DRG胶质细胞中P2X_7介导TNBS诱导IBS内脏痛外周敏化 |
| 3.3 P2X_7介导电针缓解IBS大鼠内脏痛敏 |
| 4.讨论 |
| 4.1 嘌呤受体与内脏痛 |
| 4.2 针刺发挥作用的重要信使物质-ATP |
| 4.3 P2X_7在TNBS诱导的IBS内脏高敏感过程中发挥促进作用 |
| 4.4 P2X_7介导电针抑制内脏痛外周敏化 |
| 小结 |
| 第三部分 DRG神经元P2Y_1受体介导电针缓解内脏痛敏研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验动物及伦理 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 主要实验试剂 |
| 2.4 TNBS诱导大鼠IBS内脏痛模型 |
| 2.5 内脏运动反射的行为测试 |
| 2.6 溶液的配置 |
| 2.7 动物分组与干预方法 |
| 2.8 标本采集与处理 |
| 2.9 免疫荧光双标 |
| 2.10 Real time PCR m RNA检测 |
| 2.11 Western Blot蛋白检测 |
| 2.12 数据采集与分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 DRG中 GFAP-P2Y_1、P2Y_1-P2X_3免疫荧光共定位染色 |
| 3.2 DRG神经元中P2Y_1介导IBS内脏痛敏的抑制效应 |
| 3.3 P2Y_1介导电针缓解IBS大鼠内脏痛敏 |
| 4.讨论 |
| 4.1 DRG神经元P2Y_1介导TNBS诱导IBS内脏痛敏 |
| 4.2 P2Y_1介导电针缓解IBS大鼠内脏痛敏 |
| 小结 |
| 第四部分 DRG中 P2X_7→P2Y_1→P2X_3途径介导电针缓解内脏痛敏研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验动物及伦理 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 主要实验试剂 |
| 2.4 TNBS诱导大鼠IBS内脏痛模型 |
| 2.5 内脏运动反射的行为测试 |
| 2.6 动物分组与干预方法 |
| 2.7 标本采集与处理 |
| 2.8 溶液的配置 |
| 2.9 Real time PCR m RNA检测 |
| 2.10 Western Blot蛋白检测 |
| 2.11 数据采集与分析 |
| 3.结果 |
| (一)“P2X_7→P2Y_1"介导IBS内脏痛大鼠DRG中“神经元-胶质细胞”信息交互及电针的镇痛效应 |
| 3.1 胶质细胞P2X_7受体抑制神经元P2Y_1受体介导IBS内脏痛外周敏化 |
| 3.2 “P2X_7→P2Y_1"调节途径介导电针缓解IBS内脏痛 |
| (二)DRG中“P2Y_1→P2X_3"调节途径介导IBS内脏痛及电针镇痛效应 |
| 3.3 内脏痛大鼠结肠相关DRG神经元P2Y_1抑制P2X_3受体表达 |
| 3.4 “P2Y_1→P2X_3"调节途径介导电针缓解TNBS诱导IBS内脏痛 |
| 4.讨论 |
| 4.1 背根神经节中“神经元-胶质细胞”与IBS内脏痛 |
| 4.2 “P2X_7→P2Y_1"介导IBS内脏痛大鼠DRG中“神经元-胶质细胞”信息交互及电针的镇痛效应 |
| 4.3 DRG中“P2Y_1→P2X_3"调节途径介导IBS内脏痛敏及电针镇痛效应 |
| 小结 |
| 创新点 |
| 结论 |
| 研究不足与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录一 :文献综述 P2受体介导IBS内脏痛外周敏化在中医经穴脏腑相关理论中的意义 |
| 参考文献 |
| 附录二 :在校期间发表学术论文全文及摘要 |
| 附录三 :参加学术会议情况 |
（10）基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠Per2、Clock基因及Glu/GABA-Gln代谢环路影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 1 选题背景 |
| 2 研究内容 |
| 3 技术路线 |
| 实验一 基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠基本情况影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验二 基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠行为学影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验三 基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠睡眠实验影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验四 基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠生物钟基因及Glu/GABA-Gln代谢环路影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 讨论 |
| 1 《黄帝内经》对睡眠的认识 |
| 2 跷脉理论在睡眠调节中的作用 |
| 3 生物钟与睡眠的关系 |
| 4 生物钟与《黄帝内经》“天人相应”的共同点 |
| 5 实验方案的设计与讨论 |
| 6 基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠体重、二便的影响 |
| 7 基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠行为学的影响 |
| 8 基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠睡眠实验的影响 |
| 9 基于跷脉理论针刺治疗失眠的机制探讨 |
| 结论 |
| 特色与创新 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附件1 综述 |
| 参考文献 |
| 附件2 |
四、戊巴比妥腹腔内注射对腹膜转运功能的影响（论文参考文献）
- [1]预处理的外泌体对骨质疏松骨整合及糖尿病创面修复作用的研究[D]. 刘威. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)
- [2]人工诱导动物低代谢休眠药物研究进展[J]. 刘书林,姚永杰,刘秋红,巴剑波. 航天医学与医学工程, 2021(02)
- [3]盆腔泌尿疼痛动物模型的构建及腹下神经传导神经纤维构成的研究[D]. 郭文彬. 南方医科大学, 2021
- [4]肾不藏志不寐的理论及实验研究[D]. 任小娟. 新疆医科大学, 2020(02)
- [5]碱性成纤维细胞生长因子对颅脑创伤合并腹腔高压后血脑屏障的保护作用及机制研究[D]. 陈鹏. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(01)
- [6]Acetylated α-tubulin在脑出血后运动神经传导通路损伤中的保护作用与机制研究[D]. 杨阳. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(01)
- [7]包载miR-139-5p的EpCAM适配体功能化阳离子脂质体纳米颗粒的制备及对结直肠癌靶向治疗作用的研究[D]. 赵玉宇. 华东理工大学, 2020
- [8]氢气对难治性癫痫持续状态的治疗作用及机制研究[D]. 贾瑞华. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [9]DRG中P2X7和P2Y1受体介导电针缓解IBS大鼠内脏痛敏机制研究[D]. 吕婷婷. 上海中医药大学, 2019
- [10]基于跷脉理论针刺对失眠SD大鼠Per2、Clock基因及Glu/GABA-Gln代谢环路影响的研究[D]. 郭保君. 成都中医药大学, 2019(04)