一、雷公藤内酯醇对小鼠腹腔激活巨噬细胞释放一氧化氮的影响(论文文献综述)
郑璐[1](2021)在《扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究》文中研究表明研究背景:本课题组前期对扶芳藤进行粗提并对其抗炎能力进行初步筛选,结果显示,在体外LPS诱导的RAW264.7细胞实验中,粗提的扶芳藤能够抑制各种炎性因子,具有明显的抗炎活性;在体内二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀实验中,粗提的扶芳藤对小鼠耳肿胀也有一定的抑制作用,表明扶芳藤粗提物体内体外有一定的抗炎作用。本文在前期实验结论的基础上进一步研究扶芳藤粗提物对抗LPS诱导的急性肺损伤活性,并对扶芳藤进行不同极性萃取,深入探寻其抗急性肺损伤的活性成分和作用机制。目的:本课题旨在从体内和体外评价扶芳藤提取物的主要抗炎活性成分对巨噬细胞和A549细胞的影响,并初步探讨扶芳藤主要有效活性单体调控巨噬细胞和A549细胞的潜在作用机制。方法:第一部分中药扶芳藤提取物、主要活性成分以及各萃取物对炎症反应的影响1.建立小鼠急性肺损伤模型测定扶芳藤乙醇提取物高、中、低剂量组对LPS所致小鼠急性肺损伤的影响。2.MTT法检测扶芳藤乙醇提取物以及乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对RAW264.7细胞活力的影响。3.Griess法检测扶芳藤乙醇提取物以及乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO产量的影响。4.ELISA法测定扶芳藤乙醇提取物以及正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌IL-6和TNF-α的影响。5.高效液相色谱法检测正丁醇提取物所含的主要活性成分,以及所含主要活性成分的含量。第二部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞的影响及机制探究1.MTT法检测甜醇对RAW264.7细胞活力的影响。2.Griess法检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO的影响。3.ELISA法测定甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌IL-6和TNF-α的影响4.RT-PCR检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞Myd88、TLR4、TRIF、NF-κB p65、iNOS、COX-2、IL-6、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响。5.Western-blot检测甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。6.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65核转位的影响。第三部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的A549细胞的影响及机制探究1.MTT法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞活力的影响。2.Griess法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞分泌NO产量的影响。3.RT-PCR检测甜醇对LPS诱导的A549细胞Myd88、TLR4、TRIF、NF-κB p65、iNOS、COX-2、IL-6、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响。4.Western-blot检测甜醇对LPS诱导的A549细胞分泌TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。5.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞NF-κB p65核转位的影响。第四部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤中的抗炎作用及其作用机制研究1.ELISA法检测甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的影响。2.肺湿质量/干质量(W/D)比值检测甜醇对LPS诱导的小鼠急性肺损伤肺组织干湿比的影响。3.BCA及细胞计数法检测甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤BALF中总蛋白浓度和细胞渗出数的影响。4.HE染色检测甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠的肺部组织炎症反应影响。5.Western-blot法检测甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠肺组织细胞中TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。6.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠NF-κB p65核转位的影响。结果:1.中药扶芳藤提取物可显着降低LPS诱导小鼠急性肺损伤肺组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平;可显着降低LPS诱导RAW264.7细胞NO及IL-6的分泌。2.中药扶芳藤中单体甜醇、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物在0~50μmol·L-1浓度下对RAW264.7细胞无明显毒性(P﹤0.05);甜醇在1~25μmol·L-1时,对A549细胞无明显毒性(P﹤0.05)。因此,RAW264.7细胞选用的浓度为10μmol·L-1、25μmol·L-1和50μmol·L-1;A549细胞选用的浓度为1μmol·L-1、10μmol·L-1和25μmol·L-1。3.扶芳藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌的NO、IL-6和TNF-α有显着的抑制作用。4.HPLC表明扶芳藤中甜醇的含量为2.915%,甜醇在乙酸乙酯提取物含量为2.6%,在正丁醇提取物含量为4.6%。在正丁醇提取物中含量最高,与正丁醇提取物抗LPS诱导的急性肺损伤效果最显着相呼应,推测甜醇是主要活性的成分之一。5.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7和A549细胞分泌NO。6.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白的表达。7.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β、TRIF、TLR4、Myd88和NF-κB p65的mRNA的表达。8.甜醇抑制LPS诱导的A549细胞iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β、TRIF、TLR4、Myd88和NF-κB p65 mRNA的表达;同时,甜醇抑制细胞对TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白的表达。9.扶芳藤中主要活性成分甜醇从病理学角度上明显改善LPS诱导的急性肺损伤小鼠的肺组织的炎性浸润,显着减轻了小鼠肺组织病理状态,改善组织充血的现象,还可以减轻小鼠肺组织渗出物的分泌,肺泡中出血状态减轻,红色变异区域也随之减少,表明小鼠的急性肺损伤状况得到改善,炎症区域普遍缩小,抑制炎症的发生发展,甜醇起到了明显改善小鼠急性肺损伤的作用。结论:1.扶芳藤粗提物高中低剂量在体外实验中,对炎症反应有显着的抑制作用;扶芳藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物均对炎症反应有显着的抑制作用,且正丁醇提取物活性最高。2.扶芳藤不同提取物均含有甜醇,且正丁醇提取物中甜醇含量最高,证明甜醇是扶芳藤中主要抗炎活性成分之一。3.甜醇对LPS诱导的RAW264.7和A549细胞的炎症反应有显着的抑制作用。4.甜醇抑制RAW264.7和A549细胞的TLR4-NF-κB p65信号通路。5.扶芳藤中主要活性成分甜醇通过抑制TLR4-NF-κB p65通路发挥抗炎作用,从而对LPS诱导的急性肺损伤小鼠具有保护作用。
陈清[2](2021)在《基于HMGB1/RAGE/NF-κB探讨雷公藤甲素的抗炎分子机制》文中认为目的:本研究旨在基于HMGB1/RAGE/NF-κB通路探讨雷公藤甲素(Triptolide,TP)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7增殖的影响及体外抗炎作用的分子机制。方法:体外培养RAW264.7细胞,以0.5μg/m L脂多糖刺激RAW264.7细胞8 h以诱导建立炎症模型,利用CCK8法筛选TP的最佳作用浓度即25n M。实验分为以下3组:空白组,模型组(LPS组),实验组(LPS+TP组),按实验因素处理8h后,利用ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α),白介素1β(IL-1β),白细胞介素-10(IL-10)等炎症因子的分泌情况。利用Western blot(WB)技术检测HMGB1/RAGE/NF-κB通路蛋白的表达,利用RT﹣PCR实验检测HMGB1/RAGE/NF-κB通路的m RNA表达水平。结果:与模型组相比,实验组炎症因子TNF-α,IL-1β和IL 10的分泌水平均显着降低,差异具有统计学意义(p<0.05);与模型组相比,实验组中HMGB1/RAGE/NF-κB蛋白及m RNA表达均显着降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:体外细胞实验结果表明,TP可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子的产生,其机制可能与调节HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路有关。
孙文静[3](2021)在《地锦多糖的制备及对小鼠免疫增强活性研究》文中提出多糖是中药的重要组成部分,具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、等生物活性。多糖作为免疫增强剂对动物疾病具有增强抵抗力的作用。地锦草在我国分布范围广且药理作用广泛,具有显着的抗氧化、抗肿瘤以及抗菌抗炎的功效,有重要的临床应用和开发价值。本研究选择地锦多糖作为研究对象,从提取纯化、结构鉴定、对淋巴细胞免疫活性、对巨噬细胞功能及对小鼠巨噬细胞的抗氧化等方面初步筛选出3个效果较好的活性部位,进一步研究其体内对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。试验Ⅰ地锦多糖的提取纯化采用一步醇沉和分步醇沉法提取粗地锦总多糖(EHPS tc)和各分级多糖EHPS60c、EHPS70c和EHPS80c。然后以脱色率、多糖保留率为指标,采用L25(56)正交设计对双氧水加入量、反应温度、p H值、反应时间等脱色条件进行优选。脱色后EHPStc经DEAE-Sephadex A-25葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化的地锦多糖1(EHPStp-1)和地锦多糖2(EHPStp-2),分别用苯酚-硫酸法和考马斯亮兰法测定多糖和蛋白含量。结果表明,EHPStc最优脱色条件为反应温度50℃、反应时间4 h、p H值为2、双氧水加入量4%时,多糖脱色率达到71.10%,保留率为63.31%,多糖含量为74.52%。经柱层析纯化后EHPStp-1糖含量提高为95.36%,EHPStp-2糖含量提高为92.35%。因此可以看出,地锦多糖经过DEAE-Sephadex A-25葡聚糖凝胶柱的洗脱纯化可以显着提高多糖含量;经验证试验发现双氧水脱色工艺有效可行。试验Ⅱ地锦多糖的结构鉴定采用红外光谱法(IR)、紫外光谱法(UVS)、PMP柱前衍生高效液相色谱法(PMP-HPLC)、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法、硫酸咔唑法、刚果红法和核磁共振波谱法(NMR)等方法分析各多糖结构。结果表明,EHPStc和EHPStp-2中可能含有少量蛋白。EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2均符合多糖类物质红外光谱基本特征。EHPStp-1主要包括Glc(83.1%)、Gal(6.1%)、Glc UA(1.6%);EHPStp-2主要包括Gal(25.6%)、Gal UA(22.2%)、Ara(16.6%);EHPStc主要包括Glc(53.5%)、Ara(16.8%)、Gal(14.3%)。EHPStc和EHPStp-1的重均分子量分别为26.2和26.0 k Da;EHPStp-2重均分子量分别为145.6 k Da和8.9 k Da。EHPStp-1和EHPStp-2的糖醛酸含量分别为15.9%和27.9%。EHPStc和EHPStp-1均具有明显的三螺旋结构。EHPStp-1存在α构型的单糖;EHPStc存在α和β构型的单糖。经结构鉴定,水提醇沉提取物均为多糖,但多糖结构复杂,要得到具体的结构成分还需进一步检测。试验Ⅲ地锦多糖对淋巴细胞免疫活性的影响将EHPS60c、EHPS70c、EHPS80c、EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2加入到小鼠外周血淋巴细胞培养体系中,用MTT法测定其安全浓度;然后取安全浓度范围内6个多糖,分别单独或协同PHA加入到小鼠外周血淋巴细胞中,培养48 h后,测定淋巴细胞增殖(细胞A570值和最高淋巴细胞增殖率)的变化,筛选增强免疫活性的较好部位;将筛选出的3个多糖在31.25μg/m L时刺激淋巴细胞,分别在24 h、48 h和72 h收集细胞处理后,在流式细胞仪上检测各个时间点的周期分布情况和CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的变化;ELISA法测定免疫球蛋白IgA、IgG和细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN-r的含量。结果表明,多糖单独刺激时EHPStp-1在15.625μg/m L时的细胞增殖率最高,为15.099%,其次为EHPStp-2在相同浓度时,达到12.129%;多糖与PHA共同刺激时,EHPStc在15.625μg/m L时的细胞增殖率最高,为23.820%;其次为EHPStp-1在31.25μg/m L时,为20.499%。综合评价,筛选出EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2可能是增强免疫活性的较好部位。细胞周期分布结果表明,与EHPStc相比较,EHPStp-1和EHPStp-2处理细胞48 h和72 h后,SPF值和PI值显着升高。EHPStp-1和EHPStp-2处理细胞48 h后,CD4+、CD8+淋巴细胞百分率显着高于EHPStc对照组。EHPStp-1、EHPStp-2和EHPStc均能显着促进IgA、IgG和IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的分泌。说明,地锦多糖能够有效提高小鼠淋巴细胞免疫活性,其中EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2免疫增强活性最强。试验Ⅳ地锦多糖对巨噬细胞功能的影响取安全浓度范围内5个浓度的6个多糖,分别单独或协同LPS加入到培养的小鼠腹腔巨噬细胞中,培养48 h后,测定巨噬细胞增殖的变化;检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性、NO和iNOS分泌;ELISA法测定细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ、MCP-1、MIP-1?的含量;流式细胞术分析CD14和MHC-II表达。结果表明,多糖单独刺激时EHPStp-1在31.25μg/m L时的细胞增殖率最高,为23.17%;其次为EHPStc,在31.25μg/m L时的细胞增殖率为16.42%;协同LPS刺激巨噬细胞时,EHPStp-1在31.25μg/m L时的细胞增殖率最高,为20.29%;其次为EHPS60c,在31.25μg/m L时的细胞增殖率为17.41%。在31.25~1.953μg/m L时,EHPStc和EHPStp-1促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用最强,且在31.25~15.625μg/m L时,EHPStc促进噬细胞吞噬作用显着强于EHPStp-1。EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2分别在31.25~1.953μg/m L和31.25~3.907μg/m L时,对小鼠腹腔巨噬细胞NO和iNOS分泌功能显着强于其余多糖组。EHPStp-1、EHPStp-2和EHPStc均能显着促进细胞因子的分泌。在31.25~7.813μg/m L时,EHPStp-1组对CD14和MHC-II的表达显着高于EHPStp-2组和BL组。说明,地锦多糖能够有效促进小鼠腹腔巨噬细胞功能,其中EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2免疫增强活性最强。试验Ⅴ地锦多糖对小鼠巨噬细胞的抗氧化作用取安全浓度范围内5个浓度的EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2,加入到培养的小鼠腹腔巨噬细胞中,培养48 h后,ELSIA法测定EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2对小鼠巨噬细胞的SOD、GSH-PX、MDA及MPO含量。结果表明,EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2均可显着提高小鼠SOD酶、GSH-PX酶活性,其中EHPStp-1组地锦多糖SOD酶、GSH-PX酶活力显着高于其他多糖组。EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2在7.813~31.25μg/m L均能显着降低MDA含量,减少体内脂质过氧化程度。EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2作用小鼠巨噬细胞后MPO酶活力均有显着降低。其中31.25μg/m L组MPO酶活力显着低于其他多糖组。说明,EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2具有显着的抗氧化作用,以减轻动物机体自由基损伤,保护动物机体,增强免疫功能。试验Ⅵ地锦多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用建立环磷酰胺(CTX)小鼠免疫抑制模型,测定EHPStc和EHPStp-1对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。小鼠随机分为5组(n=10)。分别为正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、EHPStc组、EHPStp-1组、阳性对照组(PC组)。NC组小鼠,每天灌胃给予生理盐水,2个多糖组小鼠每天灌胃150 mg/kg EHPStc和EHPStp-1,PC组小鼠给予左旋咪唑(100 mg/kg)。实验持续24 d。第15、16、17 d腹腔注射100 mg Cy/kg bw,对小鼠进行免疫抑制造模。NC组和MC组灌胃0.1 m L/10g生理盐水。结果显示,EHPStc和EHPStp-1在大多时间点能促进T淋巴细胞增殖、促进淋巴细胞进入S期和G2/M期,提高CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的百分率,提高血清中免疫球蛋白和细胞因子水平,提高小鼠免疫器官指数及脾脏抗氧化指标。说明,EHPStc和EHPStp-1能够有效提高免疫抑制小鼠细胞免疫、体液免疫能力。综合评价EHPStp-1免疫增强活性最强。本研究首先通过对地锦多糖提取脱色纯化后,获得总多糖和各分级多糖,利用小鼠外周血淋巴细胞、巨噬细胞和免疫抑制小鼠检测了多糖的淋巴细胞免疫活性、巨噬细胞功能和抗氧化能力及其对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,发现地锦多糖具有显着的免疫增强作用。本研究为地锦草等中药多糖在防治动物疾病中的推广应用提供了理论依据。
刘佳[4](2021)在《女贞子免疫增强活性成分分离鉴定及作用机制研究》文中认为女贞子Ligustri Lucidi Fructus系木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ail.的干燥成熟果实,性味甘、苦,凉;归肝、肾经;功能补肝肾,强筋骨,明目;主治阴虚内热,腰肢无力,肾虚滑精,视力减退等。研究表明,女贞子主要含有齐墩果酸、熊果酸、特女贞苷、女贞子苷等化学成分,具有免疫调节、保肝、抗炎、抗菌和抗病毒等作用。已有文献证明女贞子可以提高家畜的生产性能和免疫功能,然而目前的研究未能阐释女贞子发挥免疫增强活性的化学成分,对其作用机制的研究更是少见。本研究进行了女贞子免疫增强活性部位筛选、活性成分分离鉴定、活性成分增强巨噬细胞和淋巴细胞免疫活性的作用及机制研究,取得以下主要结果:(1)女贞子免疫增强活性部位的筛选通过乙醇提取法和液-液萃取法制备女贞子五个极性部位,通过巨噬细胞吞噬试验和淋巴细胞增殖试验检测五部位萃取物的免疫活性。结果表明,女贞子石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水部位萃取物得率分别为1.64%、1.28%、1.13%、11.15%和26.96%;女贞子石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位萃取物均可不同程度地提高RAW264.7巨噬细胞吞噬中性红的能力,且正丁醇和乙酸乙酯部位萃取物的增强效果较好;女贞子乙酸乙酯、正丁醇和水部位萃取物均可不同程度地促进淋巴细胞增殖,其中正丁醇和乙酸乙酯萃取物的促增殖效果较好。说明正丁醇和乙酸乙酯部位为女贞子的主要免疫增强活性部位。(2)女贞子免疫增强活性成分的分离纯化与结构鉴定通过大孔树脂、硅胶和Sephadex LH-20柱色谱法及制备薄层色谱法,对女贞子正丁醇部位萃取物进行分离纯化,并运用1H-NMR、13C-NMR和HR-ESI-MS对单体化合物进行结构鉴定;通过巨噬细胞吞噬试验和淋巴细胞增殖试验检测大孔树脂乙醇洗脱段和单体化合物的免疫活性。结果表明,女贞子正丁醇部位萃取物的大孔树脂水洗脱段、30%、50%、70%和90%乙醇洗脱段得率分别为8.54%、25.62%、58.34%、1.42%和1.07%,其中30%乙醇洗脱段的免疫活性较强;对30%乙醇洗脱段进行分离纯化得到10个单体化合物,结构鉴定为:橄榄苦苷酸(oleuropeinic acid)、女贞子苷(nuezhenide)、异女贞子苷(isonuezhenide)、红景天苷(salidroside)、异女贞苷酸(isoligustrosidic acid)、ligulucidumoside A、8(E)-女贞子苷(8(E)-nuezhenide)、羟基酪醇(hydroxytyrosol)、橄榄苦苷(oleuropein)和p-hydroxyphenethyl 7-β-D-glucosideelenolic acid eater,其中橄榄苦苷酸、红景天苷、羟基酪醇、橄榄苦苷和p-hydroxyphenethyl7-β-D-glucosideelenolic acid eater有不同程度增强免疫细胞活性的作用,且羟基酪醇的作用最强。说明羟基酪醇等是女贞子的主要免疫增强活性成分。(3)女贞子活性成分羟基酪醇增强巨噬细胞免疫活性的作用及机制通过荧光显微镜观察羟基酪醇作用于RAW264.7巨噬细胞后细胞抗原摄取能力,ELISA检测细胞因子分泌,Griess法检测一氧化氮(NO)释放,荧光显微镜和流式细胞术检测活性氧(ROS)产生,流式细胞术检测细胞表面分子和共激活分子的表达,并通过Western blot检测NF-κB和TLR4信号通路相关靶点蛋白的表达。结果表明,羟基酪醇能显着增强巨噬细胞对FITC-OVA的摄取能力,提高肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)等分泌,促进NO释放和ROS产生,并显着上调细胞表面分子MHC-Ⅱ和共激活分子CD80和CD86的表达;进一步研究表明,羟基酪醇可以显着上调细胞核NF-κB p65表达,下调细胞浆IκB-α表达,同时还能显着上调TLR4,My D88,TRIF和IKKβ的表达,说明羟基酪醇对RAW264.7巨噬细胞的活化可以通过TLR4/My D88(TRIF)/IKKβ介导的信号反应激活细胞内NF-κB信号通路实现。(4)女贞子活性成分羟基酪醇增强淋巴细胞免疫活性的作用及机制通过ELISA检测细胞因子和免疫球蛋白分泌,流式细胞术检测细胞亚群比例,荧光显微镜和流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,微板法检测细胞中钙调神经磷酸酶(Calcineurin)活力,并通过Western blot检测核转录因子NFAT和NF-κB信号通路相关靶点蛋白表达。结果表明,羟基酪醇可显着增加白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)和TNF-α分泌,提高淋巴细胞亚群CD3+和CD4+/CD8+比例;进一步研究表明,羟基酪醇可以显着增加细胞内Ca2+浓度,提高Calcineurin活力,并且显着上调细胞核NFAT和NF-κB p65表达,同时下调细胞浆NFAT和IκB-α表达,说明羟基酪醇可以通过促进Ca2+/Calcineurin/NFAT和NF-κB信号通路的级联反应,激活脾淋巴细胞。综上所述,本研究发现女贞子正丁醇和乙酸乙酯部位萃取物为其主要免疫增强活性部位,并分离和筛选得到多个具有免疫增强活性的单体化合物,其中羟基酪醇活性最好;进一步研究阐释了羟基酪醇可以通过影响细胞信号通路的传递,引起NF-κB p65和NFAT的入核来增强巨噬细胞和淋巴细胞的免疫活性。本论文研究结果为今后将女贞子开发为免疫增强剂提供了理论依据,为发展可以替代抗生素的中兽药饲料添加剂提供思路。
李晓辰[5](2021)在《TRPM7介导膝骨关节炎中滑膜巨噬细胞M1型极化的机制研究及膝痹宁方的干预作用》文中提出目的:探究瞬时电位受体通道(Transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)介导膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)滑膜巨噬细胞M1型极化的分子机制以及膝痹宁方的干预效应。方法:1)体内实验采用内侧半月板失稳(destabilization of the medial meniscus,DMM)方法使C57BL/6小鼠膝关节失稳,ELISA检测血清中炎症因子IL-1β和TNF-α水平,通过HE染色评估滑膜炎症并行Krenn评分,通过番红O固绿染色评估软骨退变并行OARSI评分,采用免疫荧光双重染色技术标记F4/80与iNOS或CD206等巨噬细胞特异性标记物,以评估机械应力失常的KOA模型中滑膜巨噬细胞的极化方向。2)体外实验采用细胞应力加载系统,给与巨噬细胞5HZ的0%、7%、12%幅度的循环机械牵张力,Western Blot和PCR检测M1型巨噬细胞极化标记物iNOS、IL-1β及M2型巨噬细胞极化标记物CD206、Arg-1蛋白和基因的表达;应用TRPM7的选择性抑制剂NS8593,给与巨噬细胞5HZ的12%的循环机械牵张力,Western Blot和PCR检测iNOS、IL-1β、CD206、Arg-1蛋白和基因的表达。3)应用TRPM7的小干扰RNA,验证小干扰RNA效率,Western Blot检测TRPM7、ERK1/2及其磷酸化、P65及其磷酸化和IκBα等表达变化。4)应用TRPM7选择性抑制剂,通过HE染色、天狼星红染色和番红O固绿染色分别观察KOA小鼠滑膜炎症、纤维化及软骨退变并分别行滑膜Krenn和软骨OARSI评分,采用免疫荧光双重染色技术标记F4/80与iNOS或CD206等巨噬细胞特异性标记物,ELISA检测血清中炎症因子IL-1β和TNF-α水平,Western Blot检测滑膜组织中TRPM7、ERK1/2及其磷酸化、P65及其磷酸化和IκBα等蛋白表达变化,Western Blot和PCR检测软骨组织基质降解相关蛋白和基因表达变化。5)DMM方法建立KOA小鼠模型,TRPM7抑制剂组为阳性对照组,膝痹宁组为观察组,通过HE染色、天狼星红染色和番红O固绿染色分别观察KOA小鼠滑膜炎症、纤维化及软骨退变并分别行滑膜Krenn和软骨OARSI评分,ELISA检测血清中炎症因子IL-1β和TNF-α水平,Western Blot和PCR检测软骨组织基质降解相关蛋白和基因表达变化。6)DMM方法建立KOA小鼠模型,采用免疫荧光双重染色技术标记F4/80与iNOS或CD206等巨噬细胞特异性标记物,观察KOA模型中滑膜巨噬细胞的极化表型,Western Blot检测滑膜组织中TRPM7、ERK1/2及其磷酸化、P65及其磷酸化和IKBα等的蛋白表达。结果:1)DMM方法建立的KOA小鼠模型中,表现出滑膜炎症和软骨退变,血清IL-1β、TNF-α表达增高,滑膜巨噬细胞浸润增多,iNOS阳性细胞比率显着上调(P<0.05)。2)7%的循环机械牵张力干预巨噬细胞后,与0%组相比,CD206和Arg-1蛋白表达上调,iNOS、IL-1β蛋白表达下调(P<0.05);而12%组iNOS、IL-1β蛋白相比于0%组表达显着上调,CD206和Arg-1蛋白表达下调(P<0.05);应用TRPM7抑制剂后,12%循环牵张力造成的iNOS、IL-1β上调趋势下降,而CD206和Arg-1下调趋势回调(P<0.05)。3)12%的机械牵张力可以增强TRPM7的蛋白表达,ERK和P65的磷酸化增多,使IκBα表达下调(P<0.05),在应用TRPM7的siRNA后,ERK和P65磷酸化减少,IκBα表达回调(P<0.05)。4)对比假手术组小鼠,KOA小鼠滑膜和软骨病理评分显着增高,滑膜组织中的TRPM7、ERK和P65磷酸化明显增多(P<0.05);而在给与小鼠选择性抑制剂后,病理评分显着下降,软骨中MMP-3和MMP-13蛋白和基因及Adamts-4和-5基因表达显着下调,滑膜中TRPM7、磷酸化的ERK和P65也显着下调(P<0.05)。5)对比模型组小鼠,膝痹宁组小鼠血清IL-1β、TNF-α显着下调,滑膜和软骨病理评分减少,软骨中MMP-3和MMP-13蛋白和基因及Adamts-4和-5基因表达显着下调(P<0.05)。6)对比模型组小鼠,膝痹宁方显着降低小鼠滑膜组织中M1型巨噬细胞比率,同时也能降低滑膜组织中TRPM7、磷酸化ERK1/2、磷酸化P65等的蛋白表达,同时上调IκBα表达(P<0.05)。结论:1)DMM方法诱导的KOA模型中存在巨噬细胞极化,异常机械应力可以刺激滑膜巨噬细胞极化。2)循环机械牵张力通过激活TRPM7-ERK及NF-κB信号通路诱导巨噬细胞极化。3)膝痹宁方有效改善KOA小鼠滑膜炎症、滑膜纤维化和软骨退变。4)膝痹宁方的治疗效应是通过抑制TRPM7-ERK及NF-κB信号通路的活化,从而抑制滑膜巨噬细胞M1型极化实现的。
梁婧[6](2021)在《雷公藤种子提取物Tws抑制NFκB信号通路影响巨噬细胞体外抗炎活性研究》文中提出目的 探讨雷公藤种子提取物Tws通过调控核因子-κB(NFκB)信号对巨噬细胞体外抗炎活性作用的研究。方法 将正常培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7作为对照组;同期培养的该细胞予以100ng/m L的LPS处理6小时作为模型组;实验组分别再予以15,30,60μmol/L的低、中、高剂量雷公藤种子提取物Tws培养。Tws处理12小时后,分别使用逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测一氧化氮合酶(iNOS),白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平,用酶联免疫吸附试剂盒检测TNF-α,IL-1β和白细胞介素-6(IL-6)分泌水平,用Western Blotting法检测NF-κB p65蛋白表达情况,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)含量。结果 qRT-PCR检测对照组、模型组、低、中、高剂量实验组诱导型一氧化氮合酶i NOS的m RNA相对表达量分别为(1.00±0.05),(8.57±0.59),(6.86±0.62),(4.73±0.69)和(3.66±0.19);IL-1β表达量分别为(1.00±0.11),(294.62±8.15),(228.79±6.09),(182.13±4.18)和(146.71±6.63);TNF-α表达量分别为(17.59±6.97),(931.19±32.44),(641.10±16.22),(534.38±11.64)和(389.26±15.79);ELISA检测TNF-α的分泌水平分别为(17.59±6.97),(931.19±32.44),(641.10±16.22),(534.38±11.64)和(389.26±15.79);IL-1β分泌水平分别为(12.96±5.88),(1637.25±32.07),(1363.11±30.55),(1100.36±12.14)和(848.53±24.61);IL-6分泌水平分别为(6.31±3.59),(398.71±14.02),(310.36±7.74),(251.00±14.46)和(206.74±10.09);NFκB磷酸化相对水平分别为(0.411),(1.399),(1.041),(0.423)和(0.500);活性氧(ROS)产生率分别为(0.23±0.00)%,(1.00±0.02)%,(0.84±0.01)%,(0.73±0.01)%,(0.57±0.01)%。结果表明,模型组与对照组比较,低、中、高剂量实验组分别与模型组比较,i NOS,TNF-α,IL-1β的m RNA表达水平,细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6分泌水平,磷酸化NFκB蛋白水平,胞内活性氧产生水平均有显着差异,且均有统计学意义(P<0.05)。结论 雷公藤种子提取物通过抑制NFκB信号通路能够影响巨噬细胞的体外抗炎活性。
宋慧娜[7](2020)在《线粒体靶向的雷公藤甲素衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究》文中研究表明肿瘤(Tumor)严重威胁着人类的生命健康和生活质量。肿瘤细胞的显着特征为不死性(无限增殖),迁移性和接触抑制现象消失。线粒体是重要的能量代谢和生物合成的工厂,对细胞正常功能和人类健康至关重要,肿瘤细胞的线粒体明显异于正常细胞的线粒体,肿瘤细胞的特殊表现与线粒体功能异常有密切的关系,如今,癌症也被认为是一种线粒体代谢疾病,线粒体成为肿瘤细胞治疗的重要靶点。相关研究表明,肿瘤细胞的线粒体膜电位远大于正常细胞。电子移位亲脂性阳离子化合物(DLCs)可以利用肿瘤细胞膜电位这一差异在肿瘤细胞线粒体内选择性地积聚,而小分子抗肿瘤活性化合物可与DLCs连接作为线粒体靶向性化合物,实现一定肿瘤细胞选择性,增强抗肿瘤活性。目前为止使用和研究最多的DLCs是三苯基膦盐(TPP+),其靶向线粒体的功能被多篇文献报道证实。雷公藤甲素(Triptolide,TP)是从雷公藤根部提取分离得到的具有抗肿瘤活性的天然成分,但因水溶性差、全身毒性大、治疗窗口窄等缺点,使其不能在临床上得到系统应用。为考察TPP+的线粒体靶向性是否可以保持雷公藤甲素的抗肿瘤活性,增加其对肿瘤细胞选择性,从而降低毒性,本论文设计并合成了雷公藤甲素的TPP+衍生物,进而评价了其体内外抗肿瘤活性。经过活性筛选发现我们设计并合成的5个雷公藤甲素TPP+衍生物中,Mito-TP-2不仅能保持雷公藤甲素的抗肿瘤活性,在肝正常细胞HL-7702与肝肿瘤细胞HepG-2中的表现显示一定的肿瘤细胞选择性;RP-HPLC法测定细胞内的积聚量,发现Mito-TP-2在HepG-2细胞线粒体的积聚量约是母药雷公藤甲素的3倍,证明其有一定的线粒体靶向性。进一步实验结果表明Mito-TP-2将肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,并能引起细胞内LDH释放量增加,ROS升高,线粒体膜电位降低。在斑马鱼HepG-2移植瘤模型中,1 μM Mito-TP-2具有与TP相当的抑制作用,且对斑马鱼幼鱼无明显毒性影响,而同等剂量的TP对斑马鱼幼鱼毒性大,可见明显心包水肿。雷公藤甲素与Mito-TP-2的毒性试验还显示,雷公藤甲素在较低浓度组即出现致畸现象,随着浓度加大孵化率和体长均不断降低,且具有明显的肝脏毒性;而Mito-TP-2在同等剂量下的各浓度组均未出现明显毒性。在化合物Mito-TP-2高浓度发育毒性实验中发现,当化合物Mito-TP-2浓度高达12 μM时偶有心包水肿出现,但在浓度≤12 μM时,Mito-TP-2对斑马鱼的死亡率、孵化率、畸形率和体长均没有影响。说明化合物Mito-TP-2保持母药的抗肿瘤活性的同时降低了母药的毒性。本论文是对保持雷公藤甲素抗肿瘤药效的同时降低其毒性的探索,为基于天然产物的药物开发提供了研究基础与思路。
敖丽梅[8](2020)在《蒙药三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠关节新生血管的影响》文中研究说明目的1.观察蒙药三子汤对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)模型大鼠关节炎症的影响,比较三子汤、森登4汤、忠伦5汤缓解炎症的作用差异。2.明确三子汤为基础的系列方剂对CIA模型大鼠关节新生血管形成的作用和潜在机制,分析森登4汤、忠伦5汤与三子汤相比是否具有增效作用或其他作用机制差异。3.观察三子汤为基础的系列方剂含药血清对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)和人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的影响以及对HUVEC管腔形成的影响。方法实验一:以CIA大鼠为研究对象,通过对其体重、关节肿胀度、关节炎评分、关节病理改变和炎性因子白介素(Interleukin,IL)-1β、干扰素(Interferon,IFN)-γ水平的评估,观察三子汤、森登4汤、忠伦5汤的不同剂量改善CIA滑膜炎症的作用,筛选出最佳剂量,比较三种复方的药效差异。对120只雄性SD大鼠随机分组:正常对照组(n=10)、造模组(n=110),对造模组构建CIA模型;模型建立完成后,对大鼠随机分组如下:模型对照组,雷公藤多苷片组(0.02g/kg/d),三子汤低、中、高剂量组(1.35g/kg/d,2.7g/kg/d,5.4g/kg/d),森登 4 汤低、中、高剂量组(1.35g/kg/d,2.7g/kg/d,5.4g/kg/d)和忠伦 5汤低、中、高剂量组(1.35g/kg/d,2.7g/kg/d,5.4g/kg/d),各组6只,对正常对照组和模型对照组灌胃蒸馏水;在初次接受免疫后的第21天,对大鼠口服灌胃给药,持续4周,每日一次;分别在致炎前、给药前、给药1周、2周、3周和4周后,观察记录各组大鼠的一般状态、体重、足爪厚度,对关节炎指数进行评分;灌胃给药前实施大鼠目内眦取血,酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)法检测抗二型胶原(Collagen typeⅡ,CⅡ)抗体含量;给药4周结束后取材,采用苏木精-伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色对CIA大鼠踝关节的病理改变进行观察,采用免疫组化法对大鼠踝关节中的炎性因子IL-1β、IFN-γ的表达情况进行检测。实验二:明确三种复方改善CIA大鼠滑膜新生血管的作用和潜在的机制,筛选最佳剂量,比较三种复方的作用差异。延续实验一,取材结束后Elisa法检测CIA大鼠外周血清中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(Endothelial nitric-oxide synthase,eNOS)、组织纤溶酶原激活物(Tissue plasminogen activator,tPA)含量;运用免疫组化法检测CIA大鼠踝关节中VEGFA、胎盘生长因子(Placental growth factor,PLGF)、缺氧诱导因子(Hypoxia inducible factor,HIF)-α的表达情况;蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测大鼠踝关节中血管生成素(Angiopoietin,Ang)-1、Ang-2、酪氨酸激酶受体(Tyrosine kinase receptor,Tie)-2蛋白的表达。实验三:通过运用血清药理学方法观察三种复方不同浓度的含药血清在体外实验中对RA-FLS和HUVEC增殖的作用以及对HUVEC管腔形成的影响,筛选出最佳浓度,比较三种复方之间差异,并结合检测血管生成相关的细胞因子,初步探讨三种复方对RA-FLS和HUVEC增殖的作用机制。制备三种复方的含药血清,分别建立以IL-1 β诱导的RA-FLS损伤模型和以VEGF165诱导的HUVEC损伤模型,MTT法检测三种复方不同浓度(5%、10%、20%)的含药血清对两种体外细胞损伤模型的细胞活力;观察三种复方含药血清对HUVEC管腔形成的影响;Elisa法检测RA-FLS细胞上清中VEGF、PLGF、Ang-1、Ang-2的含量及HUVEC细胞上清中血管内皮生长因子受体(Vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-1、VEGFR-2、Tie-2 的含量。结果实验一:与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清抗CⅡ抗体含量显着增高(P<0.01),提示CIA模型建立成功。与模型对照组相比,三子汤和忠伦5汤高剂量可明显增加大鼠体重(P<0.05);森登4汤和忠伦5汤的高剂量能明显缓解CIA大鼠关节肿胀的程度(P<0.05);三子汤中、高剂量,森登4汤低、中、高剂量和忠伦5汤高剂量都能明显降低CIA大鼠关节炎症评分(P<0.05);三种复方的高剂量都可以明显缓解CIA大鼠踝关节炎症及减轻新生血管的生成(P<0.05);森登4汤和忠伦5汤的高剂量对降低大鼠踝关节中IL-1β、IFN-γ表达具有明显作用(P<0.05),而三子汤没有明显作用(P>0.05)。实验二:Elisa结果显示,与模型对照组相比,三子汤、森登4汤的高剂量和忠伦5汤中、高剂量可以明显降低大鼠血清中VEGF含量(P<0.05);各给药组大鼠外周血清中eNOS含量均明显降低(P<0.05),以三子汤、森登4汤的高剂量和忠伦5汤中剂量效果最佳;忠伦5汤中、高剂量组大鼠外周血清中tPA含量均明显降低(P<0.05)。免疫组化方法结果显示,与模型对照组相比,森登4汤、忠伦5汤的高剂量组大鼠踝关节中VEGFA的表达明显降低(P<0.01);雷公藤多苷片组,三子汤、森登4汤和忠伦5汤的中、高剂量组大鼠踝关节中PLGF表达均呈降低趋势,但没有统计学意义(P<0.05);森登4汤和忠伦5汤高剂量组大鼠踝关节中的HIF-α表达明显降低(P<0.05)。WB检测结果显示,与模型对照组相比,三子汤、忠伦5汤的高剂量和森登4汤的中、高剂量有下调大鼠踝关节中的Ang-1蛋白表达的趋势,但无统计学意义(P<0.05);三种复方的各给药剂量都能降低大鼠踝关节中Ang-2蛋白的表达(P<0.05);三子汤、森登4汤的中剂量能降低大鼠踝关节中Tie-2蛋白的表达(P<0.05)。实验三:MTT结果显示,与IL-1 β诱导组相比,三种复方含药血清在抑制RA-FLS增殖方面均有显着作用(P<0.05),最佳浓度都是20%;与VEGF165诱导组相比,三种复方含药血清均能抑制HUVEC的增殖(P<0.05),以20%浓度的三子汤、10%和20%的忠伦5汤含药血清的效果最显着;两种细胞得出各组含药血清疗效的最佳作用时间均为24小时。HUVEC管腔形成实验结果显示三种复方20%浓度组的含药血清都有减少VEGF165诱导的HUVEC的管腔形成的趋势,但无统计学意义(P>0.05)。Elisa检测结果显示,与IL-1β诱导组相比,10%、20%的三子汤、森登4汤和忠伦5汤含药血清组作用下的VEGF含量均明显降低(P<0.01);各浓度组的三子汤、森登4汤和忠伦5汤含药血清均能有效降低PLGF、Ang-1的含量(P<0.01);20%的三子汤、10%、20%的森登4汤和忠伦5汤含药血清均能明显降低Ang-2的含量(P<0.05)。与VEGF165诱导组相比,三种复方含药血清的各个浓度都能降低VEGFR-1的含量(P<0.01);10%、20%三子汤以及5%、10%、20%的森登4汤和忠伦5汤含药血清能降低VEGFR-2的含量(P<0.01);10%、20%的三种复方含药血清能降低Tie-2的含量(P<0.05);各细胞因子有效药物的最佳浓度均为20%。结论森登4汤和忠伦5汤与基础方三子汤相比,在缓解CIA大鼠关节炎症方面具有一定的增效作用,但两者之间没有显着差异。三种复方都能通过调控参与HIF-VEGF-Ang轴中的关键细胞因子来发挥缓解CIA关节新生血管的作用,但发挥药效作用机制各有偏重,三子汤主要通过降低血管生成刺激因子VEGF、eNOS的表达、抑制Ang-2/Tie-2途径发挥作用;森登4汤通过VEGF、HIF-α、eNOS的表达、抑制Ang-2/Tie-2途径发挥作用;忠伦5汤通过下调VEGF、HIF-α、eNOS和Ang-2的表达发挥作用;森登4汤的作用靶点更多,在抗血管新生方面可能更具优势。为三子汤为基础的系列方剂治疗类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)和进一步研究蒙药优化组方、新药研发提供了科学依据。
马斌祥,何万庆,周广超,关永林[9](2021)在《雷公藤内酯醇改善大鼠脊髓损伤后的运动障碍》文中提出背景:继发性脊髓损伤致残率高的主要诱因之一是氧化应激和炎症反应,如何抑制脊髓继发性损伤是目前研究的热点。目的:探讨雷公藤内酯醇对大鼠脊髓损伤后运动功能障碍的改善作用及其可能机制。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组和雷公藤内酯醇组,每组16只。采用改良的Allen法建立大鼠脊髓损伤模型。雷公藤内酯醇组大鼠行脊髓损伤30 min后腹腔注射雷公藤内酯醇[0.1 mg/(kg·d)],假手术组及脊髓损伤组均经相同途径给予等量含体积分数1%二甲亚砜的生理盐水,连续治疗10 d,假手术组仅行椎板切除不损伤脊髓。于术后第7,14,21,28,35天采用脊髓损伤的行为学评分法评定各组SD大鼠后肢运动功能;于术后第10天收集大鼠的胸脊髓(T8-11),用于组织学检测和蛋白质印迹、实时定量聚合酶链式反应分析。结果与结论:①脊髓损伤组和雷公藤内酯醇组的脊髓损伤的行为学评分随着伤后天数的增加而增加,且雷公藤内酯醇组在受伤后第14,21,28,35天的行为学评分均显着高于脊髓损伤组(P <0.05);②术后10 d切取各组大鼠的胸脊髓(T8-11)组织经苏木精-伊红染色发现,脊髓损伤组大鼠胸脊髓核心区纵切面显示严重水肿、出血和炎性细胞浸润,而这些异常现象均可被雷公藤内酯醇治疗明显减弱(P <0.05);③RTPCR检测发现,与脊髓损伤组相比,雷公藤内酯醇组大鼠脊髓中肿瘤坏死因子α,p-STAT3和p-JAK2 mRNA表达显着降低(P <0.05),且超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的mRNA表达水平明显升高(P <0.05);④结果证实,脊髓损伤后腹腔注射雷公藤内酯醇可适度改善运动功能障碍,其作用机制可能与雷公藤内酯醇调控JAK/STAT信号通路的异常活化有关。
周丹丹[10](2020)在《TSPO在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用及机制研究》文中研究说明目的:大量研究结果显示小胶质细胞的激活与新生儿缺氧缺血有关,受损脑组织内小胶质细胞存在经典激活(M1)和替代激活(M2)两种表型,分别发挥促炎和抗炎、修复功能。在缺氧的早期,小胶质细胞迅速激活,表现为M1型,约24小时后转为M2型。从分子水平分析HIE中小胶质细胞活化的相关机制,可为此类患儿的治疗提供新的靶点。研究显示TSPO在静息小胶质细胞中的表达很低,当小胶质细胞因神经系统受损而出现活化时,TSPO水平经检测呈现明显升高,表明小胶质的激活与TSPO的表达可能存在一定的联系。另有研究显示PPARγ通路的激活还可参与血肿的清除及神经功能的保护。因此本课题组通过体内、体外实验来探讨外周型苯二氮?受体转运蛋白(TSPO)是否介导PPARγ通路来调节小胶质细胞向M2型极化,从而为新生儿缺血、缺氧的治疗寻找新的靶点。方法:(1)体内实验:本次实验我们选择Rice-Vannucci法来建立新生Wistar大鼠缺血缺氧模型,将处理后的大鼠分成四组:(1)A组(假手术组,n=20);(2)B组(模型组,n=20);(3)C组(模型+PBS注射组,n=20);(4)D组[模型+Atriol(TSPO抑制剂)注射组,n=20]。各组大鼠造模后第3天后分两批处死,分别进行灌注取脑(用于免疫荧光分析)和断头取脑(用于蛋白检测)。对各组大鼠脑组织行尼氏染色检查,并检测大鼠脑组织含水量、伊文思蓝(EB)含量。通过Western blot法来检测造模后第3天不同组中PPARγ通路蛋白和凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达情况。选择免疫荧光染色法对脑组织中Iba-1+CD16/32、Neu N+caspase-3及Iba-1+CD206的共定位表达情况进行检测。(2)体外实验:分离BALB/c小鼠原代小胶质细胞,将上述培养处于对数生长期的原代小胶质细胞按照1×104的细胞数接种于48孔板内,并选择20ng/ml的r IL-4对小胶质细胞分别处理0,6,12,以及24小时。将细胞分成五组:(1)Control组:为正常培养的小胶质细胞;(2)IL-4组:为经过20ng/ml的r IL-4诱导小胶质细胞极化M2表型模型;(3)IL-4+Atriol组:为经过r IL-4诱导小胶质细胞极化M2表型模型加Atriol(50μM)处理;(4)IL-4+FGIN-1-27组:为经过r IL-4诱导小胶质细胞极化M2表型模型加FGIN-1-27(1μM)处理;(5)IL-4+HA-TSPO组:取转染处理后的小胶质细胞使用r IL-4进行诱导处理。将5组细胞置于37℃的细胞培养箱内继续培养12h。利用Western blot法检测各组TSPO、PPARγ蛋白的表达情况;通过实时定量PCR法检测各组TSPO、PPARγm RNA及M2极化型小胶质细胞标志物CD206、Arg-1、YM-1和FIZZ-1的表达情况;使用Elisa法检测各组中BDNF、CNTF-1、IGF-1和NGF-1细胞因子的表达水平。结果:1.体内实验:(1)造模后第3天B、C组大鼠的损伤侧可见明显的水肿,而D组大鼠的损伤侧水肿情况较B、C组大鼠显着减轻。经过统计分析,B、C及D组大鼠损伤侧脑含水量相较于A组大鼠显着升高;同时相较于B、C组大鼠,D组大鼠损伤侧脑含水量着降低(P<0.05)。同时B、C及D组大鼠损伤侧EB的含量相较于A组显着升高;而相较于B、C组大鼠,D组大鼠损伤侧的EB的含量显着降低(P<0.05)。Nissl染色结果则显示A组大鼠的海马区及大脑皮层的细胞整齐排列,具有正常的结构,而B、C、D组的上述细胞则可见结构出现紊乱,经统计分析3组细胞的丢失量显着高于A组大鼠(P<0.05)。然而D组大鼠右侧脑组织的细胞坏死及变性程度相较于B、C组大鼠显着减轻,且D组大鼠细胞的丢失量显着低于B、C组大鼠(P<0.05)。(2)相较于A组大鼠,B组、C组和D组大鼠脑组织中Neu N+Caspase-3荧光蛋白表达共定位的阳性细胞数表达水平显着增加,同时B组、C组大鼠脑组织中Neu N+Caspase-3荧光蛋白表达共定位的阳性细胞数表达水平显着高于D组大鼠(P<0.05)。A组大鼠的神经元基本未出现凋亡,而B组、C组和D组大鼠脑组织中Caspase-3、Bax蛋白的表达水平显着升高,Bcl-2蛋白的表达水平显着下降;同时B组、C组大鼠脑组织中caspase-3、Bax蛋白的表达水平相较于D组显着升高,Bcl-2蛋白的表达水平较于D组显着下降,差异均存在统计学意义(P<0.05)。(3)B组、C组新生Wistar大鼠脑组织在造模后的第3天,Iba-1+CD206及Iba-1+CD16/32荧光蛋白共定位阳性细胞的水平经对比无明显差异(P>0.05);但B组、C组和D组新生Wistar大鼠脑组织Iba-1+CD206及Iba-1+CD16/32荧光蛋白共定位阳性细胞的水平显着高于A组(P<0.05);同时B组、C组中荧光蛋白表达共位阳性细胞中Iba-1+CD16/32细胞的水平相较于Iba-1+CD206细胞显着升高;但在D组中,荧光蛋白表达共位阳性细胞中Iba-1+CD16/32细胞的水平相较于Iba-1+CD206细胞显着降低(P<0.05)。(4)B、C及D组大鼠脑组织中PPARγ蛋白的表达水平相较于A组均显着降低(P<0.05),而TSPO蛋白的表达水平则显着升高(P<0.05);同时D组大鼠脑组织中PPARγ蛋白的表达水平相较于B、C组显着升高(P<0.05),而TSPO蛋白的表达水平则显着降低(P<0.05)。2.体外实验:(1)小胶质细胞在镜下主要呈现长梭形、圆形及阿米巴样,该细胞贴壁生长。为了对小胶质细胞的纯度进行检测,我们对其进行DAPI和Lectin荧光双标,检测结果显示我们获取的小胶质细胞纯度已超过96%。(2)将纯化后的小胶质细胞使用20ng/ml的r IL-4分别诱导0、6、12和24小时,检测TSPO和PPARγ蛋白及m RNA在小胶质细胞中的表达水平。Western blot结果表明,在r IL-4诱导6、12小时后,TSPO蛋白的表达逐渐降低,诱导24小时后略有恢复。r IL-4诱导后PPARγ蛋白表达水平显着升高,其最高表达水平在诱导12小时后。同时TSPO和PPARγ的m RNA表达水平变化与两者的蛋白表达水平一致。(3)为了进一步研究TSPO在极化为M2表型小胶质细胞中的功能,用不同TSPO配体处理小胶质细胞12小时,并测定PPARγ的表达水平。结果显示活化的PPARγ定位于细胞核并引起靶基因的激活或抑制。在免疫印迹实验前提取小胶质细胞的核蛋白和胞质蛋白,分析PPARγ蛋白在细胞质和细胞核中的表达水平。结果显示TSPO拮抗剂Atriol增强了极化为M2表型小胶质细胞中PPARγ蛋白的表达,而TSPO激动剂FGIN-1-27则抑制了PPARγ蛋白在细胞质和细胞核中的表达。TSPO在小胶质细胞中的过度表达可显着抑制r IL-4诱导后小胶质细胞细胞质和细胞核中PPARγ蛋白的表达。提示极化为M2表型小胶质细胞中PPARγ的表达和激活受到TSPO的调控。(4)为了确定r IL-4诱导的小胶质细胞M2极化是否受TSPO的调节,我们通过实时PCR方法检测TSPO干预后极化为M2表型小胶质细胞标志物的表达。与对照组相比,r IL-4明显增加小胶质细胞中CD206、Arg-1、YM-1和FIZZ-1基因的表达,表明小胶质细胞呈M2表型极化。同时TSPO拮抗剂Atriol增强了r IL-4诱导的小胶质细胞中CD206、Arg-1、YM-1和FIZZ-1基因的表达。与r IL-4诱导组相比,TSPO激动剂FGIN-1-27和TSPO过表组上述基因的表达显着降低。提示TSPO是参与小胶质细胞M2极化的重要调节因子。(5)我们使用TSPO配体对培养的小胶质细胞进行干预,检测培养液中脑源性神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子1(CNTF-1)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和神经生长因子1(NGF-1)的表达水平。与对照组相比,r IL-4可诱导小胶质细胞释放BDNF、CNTF-1、IGF-1和NGF-1;PK11195同样可增强BDNF、CNTF-1、IGF-1和NGF-1的表达水平,FGIN-1-27和TSPO过度表达组上述细胞因子的表达水平受到明显抑制。提示TSPO通路可能参与调控了小胶质细胞的促营养能力。结论:TSPO可能通过介导PPARγ通路调控新生大鼠缺氧、缺血后M2表型小胶质细胞的极化而对受损神经发挥保护作用。
二、雷公藤内酯醇对小鼠腹腔激活巨噬细胞释放一氧化氮的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、雷公藤内酯醇对小鼠腹腔激活巨噬细胞释放一氧化氮的影响(论文提纲范文)
(1)扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
常用缩写词中英文对照表 |
前言 |
第一部分 中药扶芳藤提取物、主要活性成分以及各萃取部位对炎症反应的影响 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 实验方法 |
2 结果 |
2.1 扶芳藤提取物对LPS所致小鼠急性肺损伤的影响 |
2.2 MTT法测定扶芳藤提取物对RAW264.7细胞活力的影响 |
2.3 Griess法检测扶芳藤提取物对LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO的影响 |
2.4 ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-6炎性因子分泌的影响 |
2.5 HPLC法测定正丁醇提取物的主要活性成分及含量 |
3 讨论 |
4 结论 |
第二部分 药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞的影响及机制探究 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 实验方法 |
2 结果 |
2.1 甜醇对RAW264.7细胞活力的影响 |
2.2 醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO的影响 |
2.3 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6的影响 |
2.4 醇对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、COX-2、iNOs、IL-6、IL-1β和TNF-α RNA表达的影响 |
2.5 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、蛋白表达的影响 |
2.6 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65核转位的影响 |
3 讨论 |
4 结论 |
第三部分 中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的A549细胞的影响及机制的探究 |
1 材料和方法 |
1.1 材料 |
1.2 实验方法 |
2 结果 |
2.1 甜醇对A549 细胞活力的影响 |
2.2 醇对LPS诱导A549细胞分泌NO的影响 |
2.3 甜醇对LPS诱导A549细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、COX-2、iNOs、IL-6、IL-1β和TNF-α RNA表达的影响 |
2.4 甜醇对LPS诱导A549细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65蛋白表达的影响 |
2.5 甜醇对LPS诱导A549 细胞NF-κBp65核转位的影响 |
3 讨论 |
4 结论 |
第四部分 中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎作用及其作用机制探究 |
1 材料和方法 |
1.1 材料 |
1.2 实验方法 |
2 结果 |
2.1 甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺湿质量/干质量比值的影响 |
2.2 甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺匀浆中IL-1β、TNF-α和IL-6含量的影响 |
2.3 甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠的肺组织病理学影响的影响 |
2.4 甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠BALF中总蛋白浓度和细胞渗出数的影响 |
2.5 甜醇对肺组织细胞中的TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65蛋白表达的影响 |
2.6 甜醇对肺组织细胞NF-κB p65核转位的影响 |
3 讨论 |
4 结论 |
全文结论 |
参考文献 |
综述 炎症及其机制与急性肺损伤的研究进展 |
参考文献 |
致谢 |
个人简介 |
(2)基于HMGB1/RAGE/NF-κB探讨雷公藤甲素的抗炎分子机制(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
中英文缩略词 |
第1章 前言 |
第2章 材料与方法 |
2.1 实验材料 |
2.2 实验方法 |
2.2.1 RAW264.7 细胞培养(细胞复苏,细胞传代及细胞冻存) |
2.2.2 ELISA法检测LPS刺激RAW264.7 细胞后肿瘤坏死因子水平 |
2.2.3 CCK-8 法检测TP对 RAW264.7 细胞安全范围 |
2.2.4 ELISA法检测TP对 LPS刺激的RAW264.7 细胞中炎症因子表达水平影响 |
2.2.5 Western blot技术检测细胞通路相关蛋白的表达 |
2.2.6 RT﹣PCR技术检测通路中HMGB1,RAGE,NFKB1的m RNA表达 |
2.2.7 统计学处理 |
第3章 结果 |
3.1 LPS不同浓度及时间对RAW264.7 细胞TNF-α表达的影响 |
3.2 不同浓度TP对RAW264.7 细胞存活率的影响 |
3.3 LPS刺激后TP对 RAW264.7 细胞中HMGB1﹣RAGE﹣NF-κB信号通路蛋白表达及下游炎症因子表达水平影响 |
3.4 WB实验检测LPS刺激后TP对 RAW264.7 细胞中炎症通路HMGB1﹣RAGE﹣NF-κB中各蛋白表达的影响 |
第4章 讨论 |
第5章 结论与展望 |
第6章 综述 |
6.1 雷公藤甲素的药理作用 |
6.2 巨噬细胞与炎症 |
6.3 脂多糖引起raw264.7 细胞炎症 |
6.4 炎症相关的炎症因子 |
6.5 HMGB1 与炎症 |
6.6 RAGE受体 |
6.7 NF-κB激活与炎症 |
参考文献 |
致谢 |
作者简历 |
(3)地锦多糖的制备及对小鼠免疫增强活性研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 文献综述 |
1.1 地锦草的研究进展 |
1.1.1 地锦草的化学成分 |
1.1.2 地锦草的药理作用 |
1.1.3 地锦草的临床应用 |
1.2 多糖的研究进展 |
1.2.1 多糖的生物活性 |
1.2.2 多糖结构的研究 |
1.2.3 多糖的提取及分离纯化 |
1.2.4 多糖在动物生产中的应用 |
1.3 本研究的目的意义 |
第二章 地锦多糖的提取与脱色纯化 |
2.1 材料 |
2.1.1 药材 |
2.1.2 主要试剂 |
2.1.3 主要仪器 |
2.2 方法 |
2.2.1 地锦样品的前处理 |
2.2.2 地锦多糖的提取 |
2.2.3 地锦多糖的含量测定 |
2.2.4 地锦多糖中蛋白含量测定 |
2.2.5 地锦多糖双氧水脱色的最佳条件的优化 |
2.2.6 地锦多糖的纯化 |
2.3 结果 |
2.3.1 地锦多糖的提取结果 |
2.3.2 地锦多糖的纯化结果 |
2.3.3 地锦多糖双氧水脱色的单因素试验结果 |
2.3.4 地锦多糖双氧水脱色的正交试验结果 |
2.3.5 地锦多糖双氧水脱色的验证试验结果 |
2.4 讨论 |
2.4.1 地锦多糖的提取方法 |
2.4.2 多糖的含量测定方法 |
2.4.3 地锦多糖的双氧水脱色 |
2.5 小结 |
第三章 地锦多糖的结构鉴定 |
3.1 材料 |
3.1.1 地锦多糖 |
3.1.2 主要试剂 |
3.1.3 主要仪器 |
3.2 方法 |
3.2.1 地锦多糖的紫外光谱分析 |
3.2.2 地锦多糖的红外光谱分析 |
3.2.3 地锦多糖的单糖组成分析 |
3.2.4 地锦多糖的分子量检测 |
3.2.5 地锦多糖的糖醛酸含量测定 |
3.2.6 地锦多糖的刚果红试验 |
3.2.7 地锦多糖的核磁共振波谱测定 |
3.3 结果 |
3.3.1 地锦多糖的紫外光谱分析结果 |
3.3.2 地锦多糖的红外光谱分析结果 |
3.3.3 地锦多糖的单糖组成结果 |
3.3.4 地锦多糖的分子量结果 |
3.3.5 地锦多糖的糖醛酸含量结果 |
3.3.6 地锦多糖的刚果红试验结果 |
3.3.7 地锦多糖的核磁试验结果 |
3.4 讨论 |
3.4.1 多糖的光谱分析 |
3.4.2 多糖的分子量及及糖醛酸分析 |
3.4.3 多糖的核磁分析 |
3.5 小结 |
第四章 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞免疫活性的影响 |
4.1 材料 |
4.1.1 地锦多糖 |
4.1.2 试验动物 |
4.1.3 主要试剂 |
4.1.4 主要仪器 |
4.2 方法 |
4.2.1 小鼠外周血淋巴细胞的分离和培养 |
4.2.2 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞最大安全浓度的测定 |
4.2.3 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞增殖的影响 |
4.2.4 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞周期的影响 |
4.2.5 地锦多糖对小鼠外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群的影响 |
4.2.6 地锦多糖对小鼠淋巴细胞免疫球蛋白IgA、IgG的影响 |
4.2.7 地锦多糖对小鼠淋巴细胞细胞因子分泌的影响 |
4.2.8 数据分析 |
4.3 结果 |
4.3.1 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞最大安全浓度的测定 |
4.3.2 地锦多糖单独刺激时各组淋巴细胞增殖的结果 |
4.3.3 地锦多糖协同PHA刺激时淋巴细胞增殖的结果 |
4.3.4 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞周期的影响结果 |
4.3.5 地锦多糖对CD4~+、CD8~+T 淋巴细胞亚群的影响结果 |
4.3.6 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞免疫球蛋白IgA、IgG的影响结果 |
4.3.7 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞细胞因子分泌的影响结果 |
4.4 讨论 |
4.4.1 地锦多糖对细胞生长的影响 |
4.4.2 地锦多糖对淋巴细胞增殖的影响 |
4.4.3 地锦多糖对淋巴细胞周期的影响 |
4.4.4 地锦多糖对CD4~+、CD8~+T 淋巴细胞亚群的影响 |
4.4.5 地锦多糖对淋巴细胞细胞因子分泌的影响 |
4.5 小结 |
第五章 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响 |
5.1 材料 |
5.1.1 地锦多糖 |
5.1.2 试验动物 |
5.1.3 主要试剂 |
5.1.4 主要仪器 |
5.2 方法 |
5.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离和培养 |
5.2.2 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞最大安全浓度的测定 |
5.2.3 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖的影响 |
5.2.4 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响 |
5.2.5 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和iNOS生成的影响 |
5.2.6 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子的影响 |
5.2.7 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞CD14和MHC-II表达 |
5.2.8 数据分析 |
5.3 结果 |
5.3.1 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞最大安全浓度的测定 |
5.3.2 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖的影响结果 |
5.3.3 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响结果 |
5.3.4 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和iNOS生成的影响结果 |
5.3.5 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子的影响结果 |
5.3.6 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞CD14和MHC-II表达的影响结果 |
5.4 讨论 |
5.4.1 地锦多糖对巨噬细胞增殖的影响 |
5.4.2 地锦多糖对巨噬细胞吞噬能力的影响 |
5.4.3 地锦多糖对巨噬细胞分泌NO和iNOS生成的影响 |
5.4.4 地锦多糖对巨噬细胞细胞因子的影响 |
5.4.5 地锦多糖对巨噬细胞CD14和MHC-II表达的影响 |
5.5 小结 |
第六章 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的抗氧化作用研究 |
6.1 材料 |
6.1.1 地锦多糖 |
6.1.2 试验动物 |
6.1.3 主要仪器 |
6.1.4 主要试剂 |
6.2 方法 |
6.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离和培养 |
6.2.2 小鼠腹腔巨噬细胞形态学观察 |
6.2.3 地锦多糖对H_2O_2诱导的巨噬细胞氧化损伤细胞存活率影响 |
6.2.4 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞抗氧化作用的测定 |
6.2.5 数据分析 |
6.3 结果 |
6.3.1 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞形态的影响 |
6.3.2 地锦多糖对H_2O_2诱导的小鼠腹腔巨噬细胞氧化损伤细胞存活率影响 |
6.3.3 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞SOD酶活力的影响 |
6.3.4 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞GSH-PX酶活力的影响 |
6.3.5 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞MDA含量的影响 |
6.3.6 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞MPO酶活力的影响 |
6.4 讨论 |
6.4.1 地锦多糖对巨噬细胞SOD酶活力的影响 |
6.4.2 地锦多糖对巨噬细胞GSH-PX酶活力的影响 |
6.4.3 地锦多糖对巨噬细胞MDA含量的影响 |
6.4.4 地锦多糖对巨噬细胞MPO酶活力的影响 |
6.5 小结 |
第七章 地锦多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用研究 |
7.1 材料 |
7.1.1 地锦多糖 |
7.1.2 试验动物 |
7.1.3 主要仪器 |
7.1.4 主要试剂 |
7.2 方法 |
7.2.1 动物分组及处理 |
7.2.2 地锦多糖对免疫抑制小鼠免疫器官指数分析 |
7.2.3 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾细胞增殖和腹腔巨噬细胞增殖的影响 |
7.2.4 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞周期的影响 |
7.2.5 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞CD4~+、CD8~+T亚群的影响 |
7.2.6 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞免疫球蛋白的影响 |
7.2.7 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞细胞因子分泌的影响 |
7.2.8 地锦多糖对免疫抑制小鼠抗氧化作用指标的测定 |
7.2.9 数据分析 |
7.3 结果 |
7.3.1 地锦多糖对免疫抑制小鼠免疫器官指数分析 |
7.3.2 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾细胞增殖和腹腔巨噬细胞增殖的结果 |
7.3.3 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞周期的影响结果 |
7.3.4 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞CD4~+、CD8~+T亚群的影响结果 |
7.3.5 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞免疫球蛋白IgA、IgG的影响结果 |
7.3.6 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞细胞因子分泌的影响结果 |
7.3.7 地锦多糖对免疫抑制小鼠抗氧化活性的影响结果 |
7.4 讨论 |
7.4.1 多糖对免疫抑制小鼠周期和CD4+、CD8+的影响 |
7.4.2 多糖对免疫抑制小鼠细胞因子和免疫球蛋白的影响 |
7.5 小结 |
结论 |
创新点 |
参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
(4)女贞子免疫增强活性成分分离鉴定及作用机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 文献综述 |
1.1 中药增强免疫研究进展 |
1.1.1 中药促进免疫器官发育 |
1.1.2 中药增强免疫细胞功能 |
1.1.3 中药调节免疫分子生成 |
1.1.4 中药影响信号通路传递 |
1.2 女贞子研究进展 |
1.2.1 女贞子化学成分 |
1.2.2 女贞子药理作用 |
1.2.3 女贞子兽医临床应用 |
1.3 研究目的与意义 |
第二章 女贞子免疫增强活性部位的筛选 |
2.1 材料和方法 |
2.1.1 药材 |
2.1.2 主要试剂 |
2.1.3 主要仪器 |
2.1.4 方法 |
2.2 结果 |
2.2.1 女贞子五部位萃取物得率 |
2.2.2 女贞子不同部位萃取物对巨噬细胞活性的影响 |
2.2.3 女贞子不同部位萃取物对巨噬细胞吞噬功能的影响 |
2.2.4 女贞子不同部位萃取物对淋巴细胞增殖的影响 |
2.3 讨论 |
2.3.1 女贞子五部位萃取物的制备 |
2.3.2 女贞子免疫增强活性部位的筛选 |
2.4 小结 |
第三章 女贞子免疫增强活性成分的分离纯化与结构鉴定 |
3.1 材料与方法 |
3.1.1 药物 |
3.1.2 主要试剂 |
3.1.3 主要仪器 |
3.1.4 方法 |
3.2 结果 |
3.2.1 大孔树脂吸附法分离女贞子正丁醇部位萃取物试验结果 |
3.2.2 不同乙醇洗脱段的免疫活性检测结果 |
3.2.3 分离纯化和结构鉴定结果 |
3.2.4 单体化合物的免疫活性检测结果 |
3.3 讨论 |
3.3.1 女贞子正丁醇部位萃取物的分离纯化 |
3.3.2 女贞子免疫增强活性化合物的筛选 |
3.4 小结 |
第四章 女贞子活性成分羟基酪醇增强巨噬细胞免疫的作用机制 |
4.1 材料和方法 |
4.1.1 药物 |
4.1.2 主要试剂 |
4.1.3 主要仪器 |
4.1.4 方法 |
4.2 结果 |
4.2.1 羟基酪醇对巨噬细胞摄取FITC-OVA的影响 |
4.2.2 羟基酪醇对细胞因子TNF-α和IL-1β分泌的影响 |
4.2.3 羟基酪醇对NO释放的影响 |
4.2.4 羟基酪醇对ROS产生的影响 |
4.2.5 羟基酪醇对细胞表面分子MHC-Ⅱ及共激活分子CD80、CD86表达的影响 |
4.2.6 羟基酪醇对NF-κB信号通路关键蛋白表达的影响 |
4.2.7 羟基酪醇对TLR4/MyD88(TRIF)/IKKβ通路蛋白表达的影响 |
4.2.8 信号阻断试验 |
4.3 讨论 |
4.3.1 羟基酪醇增强巨噬细胞免疫活性 |
4.3.2 羟基酪醇活化巨噬细胞的分子机制 |
4.4 小结 |
第五章 女贞子活性成分羟基酪醇增强淋巴细胞免疫的作用机制 |
5.1 材料和方法 |
5.1.1 药物 |
5.1.2 主要试剂 |
5.1.3 主要仪器 |
5.1.4 方法 |
5.2 结果 |
5.2.1 羟基酪醇对细胞因子和免疫球蛋白分泌的影响 |
5.2.2 羟基酪醇对淋巴细胞亚群的影响 |
5.2.3 羟基酪醇对胞内Ca~(2+)浓度的影响 |
5.2.4 羟基酪醇对钙调神经磷酸酶的影响 |
5.2.5 羟基酪醇对核转录因子NFAT和NF-κB转运的影响 |
5.2.6 信号阻断试验 |
5.3 讨论 |
5.3.1 羟基酪醇增强淋巴细胞免疫活性 |
5.3.2 羟基酪醇激活淋巴细胞的分子机制 |
5.4 小结 |
结论 |
创新点 |
参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
(5)TRPM7介导膝骨关节炎中滑膜巨噬细胞M1型极化的机制研究及膝痹宁方的干预作用(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
前言 |
第一章 理论研究 |
第一节 KOA的现代医学研究进展 |
1 流行病学 |
2 发病机制 |
3 治疗进展 |
第二节 膝痹宁方治疗KOA的理论依据 |
1 膝骨关节炎病因病机沿革 |
2 膝痹宁方方解和现代医学根据 |
第三节 巨噬细胞极化调控KOA病理过程 |
1 巨噬细胞极化简述 |
2 巨噬细胞极化在OA中的作用研究进展 |
3 以巨噬细胞极化作为OA靶标的治疗方法研究现状 |
第四节 机械应力调控巨噬细胞极化研究进展 |
1 机械应力通过巨噬细胞调控组织器官内炎症环境 |
2 机械应力调控巨噬细胞极化研究进展 |
第五节 力学敏感离子通道瞬时电位受体M7 |
第六节 研究假说 |
第二章 实验研究 |
第一节 TRPM7介导KOA模型小鼠关节滑膜巨噬细胞M1型极化机制研究 |
1 KOA模型小鼠膝关节滑膜巨噬细胞极化表型探究 |
2 TRPM7对循环牵张力诱导的小鼠巨噬细胞极化的介导作用 |
3 循环牵张力通过TRPM7-ERK1/2及NF-κB通路诱导小鼠巨噬细胞M1型极化 |
4 TRPM7抑制剂对KOA模型小鼠滑膜炎症、软骨退变及滑膜巨噬细胞极化的影响 |
第二节 膝痹宁方阻抑TRPM7介导的滑膜巨噬细胞M1型极化干预KOA的机制研究 |
1 膝痹宁方对KOA模型小鼠滑膜炎症、软骨退变的干预作用 |
2 膝痹宁方抑制TRPM7-ERK及NF-κB通路激活阻抑滑膜巨噬细胞M1型极化 |
结论 |
本研究的创新与不足 |
参考文献 |
英文缩略词 |
攻读博士学位期间取得的学术成果 |
致谢 |
(6)雷公藤种子提取物Tws抑制NFκB信号通路影响巨噬细胞体外抗炎活性研究(论文提纲范文)
中英文对照缩略词表 |
中文摘要 |
Abstract |
1 前言 |
2 材料与方法 |
2.1 .材料 |
2.2 实验方法 |
2.3 用逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测iNOS、IL-1β、TNF-α mRNA的表达水平 |
2.4 用ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清液中,TNF-α、IL-1β,IL-6的分泌水平 |
2.5 用Western Blotting法检测NF-κBp65蛋白表达水平 |
2.6 流式细胞术检测活性氧(ROS) |
2.7 统计学处理 |
3 实验结果 |
3.1 Tws对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症相关基因(iNOS、IL-1β、TNF-α) mRNA表达水平的影响 |
3.2 Tws对LPS诱导的细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)分泌水平的影响 |
3.3 Tws对巨噬细胞NFκB信号通路的影响 |
3.4 Tws对巨噬细胞活性氧(ROS)的影响 |
4 讨论 |
4.1 雷公藤种子提取物Tws对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症相关基因(TNF-α、IL-1β、iNOS) mRNA表达水平的影响 |
4.2 雷公藤种子提取物Tws对LPS诱导的细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)分泌的影响 |
4.3 雷公藤种子提取物Tws对巨噬细胞NFκB信号通路的影响 |
4.4 雷公藤种子提取物Tws对巨噬细胞活性氧(ROS)产生的影响 |
5 结论 |
参考文献 |
附录 个人简历 |
致谢 |
综述 雷公藤通过NF-κB信号通路对巨噬细胞的免疫调节作用研究进展 |
参考文献 |
(7)线粒体靶向的雷公藤甲素衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一章 雷公藤甲素与其抗肿瘤活性研究现状 |
1.1 雷公藤甲素的来源与结构 |
1.2 雷公藤甲素的抗肿瘤活性与作用机制 |
1.2.1 呼吸系统肿瘤 |
1.2.2 血液系统恶性肿瘤 |
1.2.3 消化系统恶性肿瘤 |
1.2.4 泌尿生殖系统肿瘤 |
1.2.5 其他肿瘤 |
1.3 雷公藤甲素毒性研究 |
1.3.1 心血管循环系统毒性 |
1.3.2 消化系统毒性 |
1.3.3 泌尿生殖系统毒性 |
1.3.4 免疫系统毒性 |
1.3.5 其他毒性 |
1.4 雷公藤甲素的结构改造与抗肿瘤活性 |
1.4.1 C-14β-OH的修饰 |
1.4.2 α,β-不饱和五元内酯环(D环)的修饰 |
1.4.3 C5,6-位的修饰 |
1.4.4 环氧基的修饰 |
1.4.5 其他修饰 |
第二章 线粒体靶向雷公藤甲素衍生物的设计与合成 |
2.1 引言 |
2.2 目标产物与合成路线 |
2.3 雷公藤甲素衍生物的波谱数据 |
2.4 实验部分 |
2.4.1 实验试剂与实验设备 |
2.4.2 雷公藤甲素衍生物的合成方法 |
2.4.3 雷公藤甲素衍生物的纯度检查 |
第三章 线粒体靶向雷公藤甲素衍生物的抗肿瘤活性研究 |
3.1 实验材料 |
3.1.1 细胞与动物 |
3.1.2 化合物 |
3.1.3 试剂 |
3.1.4 仪器 |
3.1.5 常用试剂的配制 |
3.2 实验方法 |
3.2.1 MTT法测细胞活力 |
3.2.2 LDH法检测细胞毒性 |
3.2.3 RP-HPLC法检测化合物TP和Mito-TP-2在线粒体内的分布与聚集 |
3.2.4 DAPI染色法观察细胞凋亡 |
3.2.5 DCFH-DA染色检测胞内ROS水平 |
3.2.6 JC-1染色法检测线粒体膜电位 |
3.2.7 Annexin/PI双染法检测细胞凋亡 |
3.2.8 PI染色法测细胞周期 |
3.2.9 化合物TP和Mito-TP-2抗肿瘤药效和毒性研究 |
3.3 实验结果与分析 |
3.3.1 雷公藤甲素衍生物的抗肿瘤活性评价 |
3.3.2 Mito-TP-2对LDH释放量的影响 |
3.3.3 Mito-TP-2在线粒体里的聚集与分布 |
3.3.4 Mito-TP-2对细胞内ROS的影响 |
3.3.5 Mito-TP-2对线粒体膜电位(ΔΨm)的影响 |
3.3.6 Mito-TP-2诱导细胞凋亡 |
3.3.7 Mito-TP-2对细胞周期的影响 |
3.3.8 化合物TP和Mito-TP-2抗肿瘤药效和毒性研究 |
总结与讨论 |
附录 化合物谱图 |
参考文献 |
致谢 |
硕士期间发表论文 |
学位论文评阅及答辩情况表 |
(8)蒙药三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠关节新生血管的影响(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一部分 文献综述 |
综述一 类风湿关节炎血管新生病理介质的研究概况 |
1 概述 |
2 巨噬细胞和滑膜成纤维细胞与RA血管新生 |
3 参与血管生成病理介质的研究概况 |
4 总结与展望 |
参考文献 |
综述二 中蒙药对RA抗血管生成作用的实验研究进展 |
1 概述 |
2 RA与血管新生 |
3 中药抗RA血管新生作用的实验研究进展 |
4 蒙药抗RA血管新生作用的研究进展 |
5 总结与展望 |
参考文献 |
前言 |
第二部分 实验研究 |
实验一 三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠关节炎症的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
实验二 三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠血管新生的影响及机制研究 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
实验三 三子汤为基础的系列方剂含药血清对体外RA-FLS、HUVEC细胞增殖和血管新生相关细胞因子的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
结语 |
参考文献 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
(9)雷公藤内酯醇改善大鼠脊髓损伤后的运动障碍(论文提纲范文)
0引言Introduction |
1 材料和方法Materials and Methods |
1.1 设计 |
1.2 时间及地点 |
1.3 材料 |
1.4 实验方法 |
1.4.1 分组、建模及给药 |
1.4.2 运动功能评分 |
1.4.3 病理形态观察 |
1.4.4 免疫组织化学染色 |
1.4.5 实时定量PCR分析 |
1.4.6 Western blot检测 |
1.5 主要观察指标 |
1.6 统计学分析 |
2 结果Results |
2.1 实验动物数量分析 |
2.2 雷公藤内酯醇对脊髓损伤大鼠运动障碍的影响 |
2.3 神经病理学变化和免疫组织化学分析 |
2.4 雷公藤内酯醇对脊髓损伤大鼠脊髓中炎症因子和氧化应激影响 |
2.5 雷公藤内酯醇对脊髓损伤相关JAK/STAT信号通路的影响 |
3 讨论Discussion |
(10)TSPO在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用及机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
abstract |
引言 |
参考文献 |
第一部分 TSPO抑制剂调控 PPARγ通路对缺血、缺氧新生大鼠的神经保护作用 |
1 材料和方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
第二部分 TSPO通过PPARγ途径调控IL-4诱导的小胶质细胞/巨噬细胞M2极化 |
1 材料和方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
总结 |
参考文献 |
综述 小胶质细胞在中枢神经系统的功能及其靶向治疗药物的研究进展 |
参考文献 |
中英文缩略词 |
攻读学位期间公开发表论文 |
致谢 |
四、雷公藤内酯醇对小鼠腹腔激活巨噬细胞释放一氧化氮的影响(论文参考文献)
- [1]扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究[D]. 郑璐. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]基于HMGB1/RAGE/NF-κB探讨雷公藤甲素的抗炎分子机制[D]. 陈清. 宜春学院, 2021(08)
- [3]地锦多糖的制备及对小鼠免疫增强活性研究[D]. 孙文静. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [4]女贞子免疫增强活性成分分离鉴定及作用机制研究[D]. 刘佳. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [5]TRPM7介导膝骨关节炎中滑膜巨噬细胞M1型极化的机制研究及膝痹宁方的干预作用[D]. 李晓辰. 南京中医药大学, 2021(01)
- [6]雷公藤种子提取物Tws抑制NFκB信号通路影响巨噬细胞体外抗炎活性研究[D]. 梁婧. 安徽医科大学, 2021(01)
- [7]线粒体靶向的雷公藤甲素衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究[D]. 宋慧娜. 山东大学, 2020(04)
- [8]蒙药三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠关节新生血管的影响[D]. 敖丽梅. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]雷公藤内酯醇改善大鼠脊髓损伤后的运动障碍[J]. 马斌祥,何万庆,周广超,关永林. 中国组织工程研究, 2021(05)
- [10]TSPO在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用及机制研究[D]. 周丹丹. 苏州大学, 2020(06)