一、Effect of Thiopental Sodium on the Release of Glutamate and γ-aminobutyric Acid from Rats Prefrontal Cortical Synaptosomes（论文文献综述）
Mohammad Uzair,Turki Abualait,Muhammad Arshad,Woo-Kyoung Yoo,Ali Mir,Reem Fahd Bunyan,Shahid Bashir[1]（2022）在《Transcranial magnetic stimulation in animal models of neurodegeneration》文中指出Brain stimulation techniques offer powerful means of modulating the physiology of specific neural structures. In recent years, non-invasive brain stimulation techniques, such as transcranial magnetic stimulation（TMS） and transcranial direct current stimulation, have emerged as therapeutic tools for neurology and neuroscience. However, the possible repercussions of these techniques remain unclear, and there are few reports on the incisive recovery mechanisms through brain stimulation. Although several studies have recommended the use of non-invasive brain stimulation in clinical neuroscience, with a special emphasis on TMS, the suggested mechanisms of action have not been confirmed directly at the neural level. Insights into the neural mechanisms of non-invasive brain stimulation would unveil the strategies necessary to enhance the safety and efficacy of this progressive approach. Therefore, animal studies investigating the mechanisms of TMSinduced recovery at the neural level are crucial for the elaboration of non-invasive brain stimulation. Translational research done using animal models has several advantages and is able to investigate knowledge gaps by directly targeting neuronal levels. In this review, we have discussed the role of TMS in different animal models, the impact of animal studies on various disease states, and the findings regarding brain function of animal models after TMS in pharmacology research.
Adejoke Yetunde Onaolapo,Olakunle James Onaolapo[2]（2021）在《Glutamate and depression:Reflecting a deepening knowledge of the gut and brain effects of a ubiquitous molecule》文中研究表明The versatility of glutamate as the brain’s foremost excitatory neurotransmitter and modulator of neurotransmission and function is considered common knowledge. Years of research have continued to uncover glutamate’s effects and roles in several neurological and neuropsychiatric disorders, including depression. It had been considered that a deeper understanding of the roles of glutamate in depression might open a new door to understanding the pathological basis of the disorder, improve the approach to patient management, and lead to the development of newer drugs that may benefit more patients. This review examines our current understanding of the roles of endogenous and exogenous sources of glutamate and the glutamatergic system in the aetiology, progression and management of depression. It also examines the relationships that link the gut-brain axis, glutamate and depression; as it emphasizes how the gut-brain axis could impact depression pathogenesis and management via changes in glutamate homeostasis. Finally, we consider what the likely future of glutamate-based therapies and glutamate-based therapeutic manipulations in depression are, and if with them, we are now on the final chapter of understanding the neurochemical milieu of depressive disorders.
戴雅玲[3]（2021）在《电针调控miR-219a促进血管性认知障碍大鼠内嗅-海马CA1神经环路突触可塑性的机制》文中研究表明目的:本课题探讨电针是否通过调控mi R-219a促进内嗅皮层-海马神经环路突触可塑性,进而改善VCI大鼠的空间学习记忆功能,以期丰富电针改善血管性认知障碍的实验依据。方法:共纳入70只雄性SD大鼠（280g±30g）,随机选取10只作为假手术组,其余大鼠进行模型制备;将造模成功的VCI模型大鼠（n=50）,采用随机数字表法分为5组,即模型组、电针组、模型+mi R-219a过表达组、电针+mi R-219a过表达组、电针+空载病毒组,每组10只。电针组、电针+空载病毒组、电针+mi R-219a过表达组采用电针“百会”、“神庭”穴进行干预,疏密波1/20Hz,30min/次,1次/天,5天/周,干预4周,其余组别采用同等抓取,固定30min不做任何处理;（1）构建神经元特异性过表达mi R-219a的腺相关病毒,内嗅皮层区注射r VAACMV-Dio-mi R-219a-m Cherry-p A顺示踪病毒,海马CA1区注射r AVV-h Syn-e GFP-2ACRE-WPRE-PA逆示踪病毒;r VAA-CMV-Dio-m Cherry-p A空载病毒作为对照;（2）采用巴恩斯迷宫、Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆功能;（3）应用磁共振波谱成像分析各组大鼠内嗅皮层区、海马CA1区兴奋性神经物质代谢谷氨酸（glutamate,Glu）,抑制性神经递质γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）和N-乙酰天门冬氨酸（N-acetylaspartate,NAA）神经递质改变;（4）采用高尔基染色观察各组大鼠内嗅皮层区、海马CA1区突触形态学变化;（5）采用膜片钳电生理记录各组大鼠内嗅皮层-海马CA1神经环路长时程增强（Long-tern potentiation,LTP）,全细胞电压钳模式检测内嗅皮层、海马自发性兴奋性突触后电流（Spontaneous Excitatory Post Synaptic Current,s EPSC）与N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR）离子通道电流变化;（6）采用激光共聚焦显微镜下观察内嗅皮层-海马CA1 mi R-219a荧光定位;（7）采用RT-q PCR检测各组大鼠内嗅皮层区、海马区mi R-219a的定量表达。结果:（1）巴恩斯迷宫行为学进行模型检验。干预前,与假手术组相比,其余五组的逃避潜伏期均显着增加（P<0.01）,各组间比较没有明显差异（P>0.05）。与假手术组相比,其余五组的正确洞口接触次数以及目标象限时间明显减少（P<0.01）,且相比五组间两两比较均未见明显差异。（2）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a对VCI模型大鼠空间学习记忆功能的影响。干预后Morris水迷宫实验结果显示:学习阶段,与假手术组相比,模型组逃避潜伏期延长（P<0.01）;与模型组相比,电针组与电针+空载病毒组逃避潜伏期出现缩短（P<0.05）,模型+mi R-219a过表达组在逃避潜伏期出现延长（P<0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组逃避潜伏期明显增加（P<0.05）。记忆测试阶段,与假手术组相比,模型组穿越平台次数以目标象限占比明显减少（P<0.01）;与模型组相比,电针组与电针+空载病毒组大鼠的穿越平台与目标象限占比显着增加（P<0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组穿越平台与目标象限占比出现减少（P<0.05）。（3）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a对VCI模型大鼠内嗅皮层、海马CA1区神经物质代谢的影响。磁共振波谱结果显示:与假手术组相比,模型组内嗅皮层、海马CA1区NAA含量减少（P<0.01）,兴奋性谷氨酸神经递质含量下降（P<0.01）,而GABA神经递质含量呈升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组与电针空载病毒组均出现NAA含量升高（P<0.05）,兴奋性Glu神经递质含量升高（P<0.05）,GABA神经递质含量降低（P<0.05）。与模型组对比,模型+mi R-219a过表达组NAA含量下调趋势（P>0.05）,兴奋性Glu神经递质呈下降趋势（P>0.05）,GABA神经递质含量具有升高趋势（P>0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组NAA含量降低（P<0.05）,兴奋性Glu神经递质含量降低趋势（P>0.05）,GABA神经递质含量升高（P<0.05）。（4）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a改善VCI模型大鼠内嗅皮层和海马CA1区突触形态。内嗅皮层与海马CA1区,假手术组的树突棘高分布且排列致密,其余五组的树突棘呈现脱落萎缩,模型组的树突棘数量显着下降（P<0.01）;与模型组相比,模型+mi R-219a过表达组的树突棘数量进一步减少（P<0.05）;电针组与电针+空载病毒组树突棘数量明显增加（P<0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组树突棘数量减少（P<0.05）。（5）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a改善VCI模型大鼠内嗅皮层-海马CA1神经环路场电位。与假手术组相比,模型组内嗅皮层-海马CA1神经环路f EPSP斜率显着降低（P<0.01）,而电针组较模型组内嗅皮层-海马CA1区神经环路f EPSP斜率升高（P<0.05）,与模型组相比,模型+mi R-219a过表达组该环路f EPSP斜率进一步降低（P<0.05）,而与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组f EPSP斜率出现下调（P<0.05）。（6）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a影响VCI模型大鼠内嗅皮层、海马CA1区锥体神经元放电模式。结果显示:与假手术组相比,模型组内嗅皮层、海马CA1区s EPSC的振幅与频率显着降低（P<0.01）,电针组较模型组内嗅皮层、海马CA1区振幅与频率均升高（P<0.05）;与模型组相比,模型+mi R-219a过表达组内嗅皮层-海马CA1区s EPSC振幅、频率均呈降低（P<0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组内嗅皮层-海马区s EPSC振幅与频率均出现下降（P<0.05）。（7）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a上调VCI模型大鼠海马NMDAR离子通道电流强度。结果显示:与假手术组相比,模型组海马区NMDAR通道电流显着降低（P<0.01）;与模型组相比,电针组较海马区NMDAR通道电流升高（P<0.05）;与模型组相比,模型+mi R-219a过表达组海马区NMDAR通道电流显着降低（P<0.05）;而与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组海马区NMDAR通道电流下调（P<0.05）。（8）电针“百会”、“神庭”对内嗅皮层、海马CA1区mi R-219a表达的影响。RT-q PCR结果显示:与假手术组相比,模型组内嗅皮层、海马区mi R-219a表达量均呈上升（P<0.01）。电针组较模型组mi R-219a表达量显着下降（P<0.05）;与模型组相比,mi R-219a过表达组大鼠的内嗅皮层与海马CA1区mi R-219a表达量显着上升（P<0.05）。（9）内嗅皮层-海马CA1区神经环路投射与mi R-219a定位表达情况:激光共聚焦显微镜观察显示,内嗅皮层-海马CA1存在直接神经纤维投射,且内嗅皮层、海马CA1区见mi R-219a荧光定位表达。结论:电针“百会”、“神庭”穴调控mi R-219a可促进内嗅皮层-海马神经环路突触可塑性改善血管性认知障碍模型大鼠空间学习记忆功能,其电生理机制与NMDAR离子通道电流增强,促进神经元兴奋性放电,诱发内嗅皮层-海马CA1神经环路LTP形成有关。
王茜[4]（2020）在《未定带-伏隔核GABA神经通路对大鼠胃功能和摄食的影响及潜在机制研究》文中研究表明目的能量代谢与肥胖相关疾病严重威胁人类健康,能量摄入过多是肥胖主要原因之一。中枢神经系统除直接参与调控外周消化系统外,还可通过摄食“奖赏”通路进一步影响摄食行为,从而调控能量代谢。伏隔核（Nucleus accumbens,NAc）是中枢奖赏通路中极为重要的一环,可涉及调控刺激动机、学习及奖励行为等多种复杂生理行为。研究发现,NAc内有大量γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）神经元,这些神经元可参与调节体内能量平衡,尤其是对摄食行为的调控。此外,近期研究发现,丘脑未定带（Zona incerta,ZI）与摄食行为关系密切,是参与摄食和胃功能调节的又一重要核团。光遗传学技术研究显示,光刺激ZI内GABA神经元可导致小鼠暴饮暴食或强迫进食行为。胰高血糖素样肽1（Glucagon like peptide 1,GLP-1）可明显抑制胃排空、减少肠道蠕动,进而抑制摄食,其也是目前治疗肥胖的重要靶点之一。有研究报道,在中枢,GLP-1神经元投射广泛,其纤维可投射至整个大脑,包括NAc。因此,本研究拟采用逆行追踪结合荧光免疫组化染色、单细胞外放电记录、核团微量注射药物、在体胃运动记录等研究方法,观察未定带-伏隔核（ZI-NAc）间GABA神经通路,研究ZI-NAc GABA神经通路对大鼠胃功能和摄食的影响及潜在机制,目的是探讨ZI-NAc间是否有GABA能神经通路,该通路是否参与大鼠胃功能和摄食的调控及其潜在机制。方法1.选用10～12周龄雄性Sprague Dawley（SD）大鼠。2.随机选取5只大鼠,采用逆行追踪结合荧光免疫组化技术,观察ZI-NAc之间GABA神经通路构成;3.采用单细胞外放电记录,观察NAc微量注射GABA或其受体拮抗剂Bicuculline（Bic）等对大鼠胃牵张（GD）反应性GLP-1敏感性神经元放电活动的影响;观察电刺激ZI、或预先NAc注射GABA-A受体（GABA-AR）拮抗剂Bic再电刺激ZI,观察GD反应性GLP-1敏感性神经元的放电活动的改变;4.参照大鼠脑图谱于大鼠NAc置管,采用在体胃运动记录、胃酸分泌测定以及摄食分析等实验方法,观察NAc微量注射GABA或Bic对大鼠胃运动频率和幅度、胃酸分泌量、以及0-2 h累计摄食量的影响。实验设计及分组:随机选取48只NAc置管大鼠,并按照随机数字法分为8组（n=6）:（1）0.5μL生理盐水组（NS组）;（2）0.5μg GABA组;（3）2.5μg GABA组;（4）5μg GABA组;（5）10μg Bic组;（6）10μg GLP-1受体（GLP-1R）拮抗剂Exendin9-39组（10μg Ex9组）;（7）10μg Bic+2.5μg GABA组;（8）10μg Ex9+2.5μg GABA组。上述各组NAc微量注射0.5μL药物或NS,观察大鼠胃运动、胃酸分泌以及0-2h摄食量改变;另外,随机选取10只大鼠,随机分为2组（n=5）,在观察NAc内微量注射GABA对GD反应性GLP-1敏感性神经元放电活动变化的同时,观察大鼠在体胃运动变化,以NAc内注射NS为对照组。5.参照大鼠脑图谱于大鼠NAc及ZI置管,采用电刺激ZI,或预先NAc注射Bic再电刺激ZI方法,观察大鼠胃运动频率和幅度、胃酸分泌量、以及0-2 h累计摄食量的改变。实验设计及分组:选取36只大鼠随机分为6组（n=6）:（1）假电刺激（SS）组;（2）电刺激ZI（ES）组;（3）假电刺激+NAc内微量注射0.5μL NS（SS+NS）组;（4）电刺激ZI+NAc内微量注射0.5μL NS（ES+NS）组;（5）假电刺激+NAc内微量注射0.5μL 10μg GABA-AR拮抗剂Bic组（SS+Bic）组;（6）电刺激ZI+NAc内微量注射0.5μL 10μg GABA-AR拮抗剂Bic组（ES+Bic）组。结果1.荧光金（FG）逆行示踪结合荧光免疫组化研究显示,NAc微量注射0.2μL 3%荧光金,7天后荧光显微镜下可见ZI内有FG标记的神经元,在同一切片上进行GABA免疫荧光组化染色,镜下ZI内有GABA免疫阳性神经元表达,其中部分GABA免疫阳性神经元与FG共存。提示,ZI内部分GABA免疫阳性神经元可发出神经纤维投射至NAc,即在ZI-NAc间可能有GABA神经通路。2.NAc微量注射GABA对GLP-1/GD-R神经元放电活动的影响研究显示,NAc内有GD神经元;NAc微量注射GABA,大部分GLP-1/GD-E或GLP-1/GD-I神经元的放电活动显着减弱（P<0.05）,而预先NAc注射GLP-1R拮抗剂Ex9,可明显降低GABA对GLP-1/GD-R神经元的放电活动的抑制作用（P<0.05）。提示,NAc内有接收胃牵张刺激传入信息神经元（GD神经元）,大部分GD神经元对GLP-1有应答（GLP-1/GD-R神经元）,GABA参与GLP-1/GD-R神经元兴奋性调控,GLP-1受体信号通路参与GABA该过程调控。3.电刺激ZI对NAc GLP-1/GD-R神经元放电活动的影响研究显示,电刺激ZI可兴奋NAc内大多数GLP-1/GD-E和GLP-1/GD-I神经元（P<0.05）,预先NAc注射GABA-AR拮抗剂Bic,可明显抑制电刺激ZI对这些GLP-1/GD-R神经元的兴奋效应（P<0.05）。提示,在ZI-NAc之间可能有直接或间接GABA功能通路,该通路可能参与胃传入信息调控。4.NAc微量注射GABA对大鼠在体胃运动的影响研究显示,与NS组比较,NAc微量注射GABA,约3 min后大鼠胃运动幅度（P<0.05～0.01）和运动频率（P<0.05～0.01）均显着增加,且呈显着剂量依赖关系。GABA促胃运动幅度和频率的效应可持续约10 min。若NAc注射Bic或Ex9,可阻断或明显减弱GABA对大鼠胃收缩幅度（P<0.05）和收缩频率（P<0.05）促进效应。但NAc单独注射Bic或Ex9,大鼠胃运动幅度（P>0.05）或频率（P>0.05）均无显着改变。提示,NAc外源性GABA可促进大鼠胃动力,该效应可能通过激活GABA受体信号通路而实现的,GLP-1受体信号通路可能也参与了该过程调控。5.NAc微量注射GABA对实时胃运动和GLP-1/GD-R神经元放电活动的影响研究显示,NAc微量注射GABA,GLP-1/GD-E神经元（P<0.05）或GLP-1/GD-I神经元（P<0.05）放电频率均显着降低;同时发现,在大约4 min后,大鼠胃运动幅度（P<0.05）和胃运动频率（P<0.05）也显着增加,且峰值持续大约10 min。提示,NAc部分GLP-1/GD-R神经元可能参与GABA诱导的胃运动增强效应调控。6.NAc微量注射GABA对大鼠胃酸分泌的影响研究显示,与NS组比较,NAc微量注射GABA,可显着增加大鼠胃酸分泌量（P<0.05～0.01）,且呈显着剂量依赖性关系;与GABA组相比,NAc注射GABA+Bic混合液或注射GABA+Ex9混合液,可阻断（P<0.01）或降低（P<0.05）GABA促大鼠胃酸分泌作用。但NAc单独注射Bic或Ex9,大鼠胃酸分泌量无显着改变（P>0.05）。提示,NAc外源性GABA可显着促进大鼠胃酸分泌,该作用可能与GABA受体信号通路激活有关,GLP-1受体信号通路可能也参与了该过程调控。7.NAc微量注射GABA对大鼠0-2小时摄食量的影响研究显示,与NS组比较,NAc微量注射GABA,大鼠0-2 h摄食量显着增加（P<0.05）。与GABA组相比,NAc注射GABA+Bic混合液或GABA+Ex9混合液,大鼠0-2 h摄食量明显减少（P<0.05）。但NAc单独注射Bic或Ex9,大鼠0-2 h摄食量无显着改变（P>0.05）。提示,NAc外源性GABA可显着促进大鼠急性阶段摄食,GABA和GLP-1受体信号通路的激活与GABA促大鼠摄食效应密切相关。8.NAc注射Bic对电刺激ZI诱导大鼠在体胃运动的影响研究显示,与假电刺激组（SS）比较,电刺激ZI,大鼠胃运动幅度（P<0.05）和运动频率（P<0.05）均显着增加,且这种促进效应可持续约10 min。但NAc预先注射Bic,再电刺激ZI（Bic+ES）可明显抑制大鼠胃收缩幅度（P<0.05）和收缩频率（P<0.05）。单独NAc注射Bic对大鼠胃运动无显着影响（P>0.05）。提示,ZI-NAc间可能有参与胃运动调控的GABA能神经通路。9.NAc注射Bic对电刺激ZI诱导大鼠胃酸分泌的影响研究显示,与SS组比较,电刺激ZI可明显促进大鼠胃酸分泌量（P<0.01）。但NAc预先注射Bic,大鼠胃酸分泌量明显减少（P<0.05）。单独NAc注射Bic对大鼠胃酸分泌量无显着影响（P>0.05）。提示,ZI-NAc间GABA能神经通路可能参与胃酸分泌调控。10.NAc注射Bic对电刺激ZI诱导大鼠摄食的影响研究显示,与SS组比较,电刺激ZI可明显促进大鼠0-2 h摄食量（P<0.05）。但NAc预先注射Bic,电刺激ZI诱导的促大鼠0-2 h摄食量明显减少（P<0.05）。单独NAc注射Bic对大鼠0-2 h摄食量无显着影响（P>0.05）。提示,电刺激大鼠ZI可促进大鼠摄食,可能与NAc内GABA增加有关;还提示,ZI-NAc间GABA能神经通路可能还参与大鼠急性阶段摄食调控。结论NAc内有接收胃机械牵张刺激传入信息的GD神经元,该神经元兴奋改变可能与胃动力变化相关;在ZI-NAc间存在GABA神经和功能通路,该通路可参与胃动力、胃酸分泌和摄食调控,GABA-A受体激活是实现该调控的重要因素,GLP-1受体信号通路也参与了该过程调控。
Michael Ntim[5]（2020）在《TRIM32基因敲除对小鼠海马突触可塑性的影响及机制研究》文中研究指明背景:TRIM32（Tripartite motif-containing protein 32,TRIM32）是TRIM蛋白（Tripartite motif protein）家族中的一种,既是一种神经干细胞抑制相关蛋白又影响转录进程。环状结构域的存在使TRIM家族的大多数成员都具有E3泛素连接酶的活性,能够对特定的底物进行泛素化,这是它们发挥生物学功能的手段之一。生理学上,E3泛素连接酶控制机体的稳态、细胞周期以及几种DNA修复途径。E3泛素连接酶主要通过大量泛素修饰反应对靶标进行翻译后修饰,最终将泛素基耦联到靶底物上。Nicklas等报道TRIM32启动神经元的分化和自我更新,这种作用可被c-Myc转录因子的泛素化和某些micro RNAs的激活所抑制。在海马齿状回（dentate gyrus,DG）区内层的神经干细胞有较高的TRIM32蛋白水平,在神经干细胞发育成神经细胞或未成熟神经元时转移到DG外层,但在海马脑室下区（subventricular zone,SVZ）和DG中的神经干细胞未见TRIM32表达。这些报道提示神经干细胞分化时可见TRIM32表达的上调。另外,TRIM32参与神经发生、抑制神经细胞增殖和细胞凋亡,而且脑内很多蛋白分子的异常表达均与TRIM32上调或下调有关。许多神经系统疾病,例如抑郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、自闭症和注意缺陷障碍的发生发展都与TRIM32的调节作用密切相关。学习记忆功能的障碍是许多神经疾病的共性,但是TRIM32缺乏对记忆的影响未见直接报道。有研究推测TRIM32的缺乏有可能引起突触可塑性改变损害学习和记忆功能,但是有关TRIM32对突触可塑性影响的确切报道至今未见。因此,本课题旨在研究TRIM32是否通过改变突触可塑性来影响学习和记忆。方法:本课题包括体内和体外实验两部分。用电生理学方法检测长时程增强（LTP）、输入/输出（I/O）曲线和双脉冲易化,以确定突触可塑性的变化。Western Blotting检测突触蛋白（Synaptophysin、Synapsin I、GAP-43、PSD95）、AMPA受体、NMDA受体、GABA受体、兴奋性和抑制性神经递质转运蛋白（EAAT2、SLC32A1）的表达水平。利用Western Blotting对Notch及其相关分子进行分析。免疫组织化学染色形态学观察相关蛋白的表达。RT-PCR和real-time PCR检测m RNA表达水平。采用Nissl染色法观察神经元数目的变化。高尔基染色来分析树突棘密度。宽频带（0.01-40000 Hz）记录神经元的电位信号,分析脉冲频率、局部场电位（LFPs）及各种振荡频宽（Delta、Theta、Alpha、Beta、Gamma）。同时,在体外实验中,在原代培养神经元上应用notch抑制剂DAPT梯度抑制notch,并使用上述一些技术验证其效果。统计分析采用不配对t检验分析两组间差异,采用单因素方差分析分析两组以上差异（Turkey’s post-hoc analysis分析比较差异）。结果:1、LTP为衡量突触可塑性的重要指标,在学习记忆中起着重要作用。高频刺激后诱导LTP,结果发现TRIM32敲除小鼠的局部场电位兴奋性突触后电位（f EPSP）的斜率和振幅较野生型小鼠相比显着降低（p<0.05）。输入/输出（I/O）曲线主要反映突触的基本传递效能,在本实验中TRIM32 KO型小鼠与野生型小鼠的I/O曲线无统计学差异,说明TRIM32基因敲除对小鼠神经元突触的基本传递效能未产生明显影响。双脉冲易化（PPF）是一种短时程突触可塑性模型。TRIM32基因敲除小鼠和野生型小鼠进行对比,PPF曲线无明显统计学差异,说明TRIM32的敲除不直接改变突触前膜的神经递质释放水平。2、树突棘的多少可以反应突触的形态可塑性。我们研究结果发现TRIM32敲除小鼠树突棘的平均数量是上调的,但是在海马CA1区域却是明显减少的。另外,TRIM32敲除小鼠的树突棘更纤细。说明TRIM32的敲除后突触形态可塑性减低。3、神经冲动传导过程中,突触前和突触后相关机制在LTP维持中被认为是非常重要的,首先我们观察了突触前及突触后标志分子的变化及神经递质及转运体的改变。结果发现,TRIM32敲除鼠的Syp、Syn1、GAP-43和PSD-95的蛋白及m RNA表达降低,免疫组织化学染色的结果也证实与此相一致。其次,我们也发现TRIM32 KO小鼠中与LTP密切相关的突触受体GABAA表达显着降低,NMDA受体NR1、NR2A、NR2B亚基蛋白表达水平升高。虽然NR1的增加幅度不大,但NR2A和NR2B的增加幅度明显。免疫组化结果也发现TRIM32敲除小鼠中NR2A和NR2B蛋白表达上调。同样,PCR结果也证实了相应蛋白分子的m RNA水平的变化。Western blot结果还发现TRIM32敲除小鼠谷氨酸转运体EAAT2蛋白表达水平明显升高,GABA转运体SLC32A1表达水平明显降低。海马和皮层部分区域的EAAT2（红色）和SLC32A1（绿色）荧光双染证实了此结论。以上结果表明TRIM32基因敲除后,可影响参与学习记忆的神经递质及突触上关键分子的表达。4、脑电图的频率及幅度高低间接反应学习记忆情况。我们对TRIM32敲除小鼠的脑电活动进行了分析。对4000s的记录结果进行统计发现,与野生小鼠相比,TRIM32敲除小鼠放电幅度和频率明显升高,证实了TRIM32敲除小鼠神经电活动失衡。整体的LFP是突触活动的体现,滤波结果显示TRIM32敲除小鼠的LFP显着降低。在TRIM32敲除小鼠中,Delta波和Beta波的功率谱显着升高,而Theta波和Gamma波的功率谱显着降低。5、神经元是神经系统的结构和功能单位,我们通过Nissl染色观察神经元的完整性,发现敲除小鼠大脑皮层和海马区神经元数量都显着减少,也预示学习记忆及突触可塑性的减低。6、Notch信号通路可参与突触可塑性,我们体内外实验研究了TRIM32调控notch信号通路进而调节突触可塑性的机制。Western blots结果发现TRIM32敲除小鼠脑内notch相关基因（Notch1,Hes1,NGN3）表达明显高于同窝野生鼠。RT-PCR也证实了这些基因的m RNA表达水平的变化。同时,TRIM32敲除小鼠的NGF蛋白和m RNA表达水平也明显低于野生型小鼠。DAPT（γ分泌酶抑制剂）,是众所周知的notch抑制剂。原代培养神经元上应用DAPT处理,发现notch1、hes1、ngn3 m RNA和蛋白表达呈现浓度依赖性下调。NGF在DAPT处理后保持不变（所有浓度）。Mash1也被发现以浓度依赖的方式上调。与此相一致的是,DAPT处理后神经元AMPA、NMDA（NR1、NR2A、NR2B）受体蛋白表达明显下调。GABAA受体表达也轻度下调。同时我们还测定了它们对兴奋性（EAAT2）和抑制性（SLC32A1）转运蛋白的总体影响。DAPT处理后下调EAAT2和上调SLC32A1的表达。从而证实了我们的推论。结论:本研究表明,TRIM32的缺失会损伤突触可塑性,主要表现为LTP受损、树突棘数量减少、突触可塑性相关蛋白下调、兴奋和抑制的失衡导致神经元数量的减少。这些都是造成这种可塑性损伤的原因。脑电的变化也反映了TRIM32基因敲除突触可塑性的破坏。进一步研究结果表明,在TRIM32敲除小鼠脑内,notch及其相关分子的表达发生了改变,notch信号通路可能是TRIM32 KO小鼠突触可塑性受损的分子机制。综上所述:TRIM32可通过调控notch信号通路进而调节突触可塑性的变化。
尼娅（SIRIPITAKYOTIN NIYAPHORN）[6]（2020）在《嗜热链球菌产GABA发酵条件优化及prtS基因对GABA合成的影响》文中提出γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）是重要的生物活性物质。GABA具有抗焦虑、抗抑郁等生理功能,广泛存在于动物、植物、微生物中。最近筛选高产GABA的乳酸菌（lactic acid bacteria,LAB）成为研究热点。为了获得高产GABA的优良菌株,本研究对嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）CS9、CS11、CS12、CS17、CS19和CS22合成GABA能力进行了评价。PCR结果显示6株嗜热链球菌经PCR扩增后均含有gad基因,表明菌株均具有合成GABA潜力。本文的研究重点为探索该菌株在发酵乳中产GABA最优条件。采用了三种方法从发酵乳中提取GABA,其中常规离心方法效果最好。pH值是影响GABA合成的关键因素。本研究分析了不同pH值对菌株GABA合成的影响。初始pH值为4.5时,所有分离株的GABA产量均下降。CS9,CS12和CS19菌株在pH分别在6.0,5.0和5.5时,GABA产量达到最高。上述结果表明,低pH不利于乳酸菌合成GABA,不同菌株GABA的最佳产量所对应的pH值不同。添加适量谷氨酸钠（monosodium glutamate,MSG）有利于GABA的合成。CS19菌株在MSG含量为4%时,GABA产量最高可达11 453.17±164.80 mg/L。CS9添加2%的MSG的培养基中GABA产量最高,为2181.24±112.24 mg/L。CS12菌株在添加1.5%的MSG的培养基GABA产量最高,为1987.98±35.52 mg/L。磷酸吡哆醛（pyridoxal-5’-phosphate,PLP）是合成GABA关键酶GAD的辅助因子,可有效地促进MSG转化为GABA。CS19在添加150μM的PLP的培养基中发酵72 h时GABA含量达到最高,为10898.43±310.79 mg/L;CS9在添加50μM的PLP的培养基中发酵120 h,GABA含量达到1183.08±76.43 mg/L。嗜热链球菌CS11、CS12、CS17、CS19均含有prtS基因。然而,CS9和CS22没有prtS基因。通过系统发育树的构建,结果表明,PrtS与Prt B有密切的亲缘关系。PrtS与菌株的蛋白水解能力密切相关,是蛋白水解的关键酶。实验表明,在发酵牛奶时,含有prtS基因的菌株CS12和CS19比没有prtS菌株CS9的生长能力强;说明与CS9相比,CS19和CS12具有更强的蛋白水解系统。本研究表明,PrtS有利于菌株对蛋白质的水解,但对GABA的合成没有显着影响。今后应进一步延长发酵时间,提高MSG含量,研究prtS基因在不同菌株中对GABA产生的作用。
Dong-Qin Zhao,Hua Xue,Hai-Ji Sun[7]（2020）在《Nervous mechanisms of restraint water-immersion stress-induced gastric mucosal lesion》文中提出Stress-induced gastric mucosal lesion（SGML） is one of the most common visceral complications after trauma. Exploring the nervous mechanisms of SGML has become a research hotspot. Restraint water-immersion stress（RWIS） can induce GML and has been widely used to elucidate the nervous mechanisms of SGML. It is believed that RWIS-induced GML is mainly caused by the enhanced activity of vagal parasympathetic nerves. Many central nuclei, such as the dorsal motor nucleus of the vagus, nucleus of the solitary tract, supraoptic nucleus and paraventricular nucleus of the hypothalamus, mediodorsal nucleus of the thalamus, central nucleus of the amygdala and medial prefrontal cortex, are involved in the formation of SGML in varying degrees.Neurotransmitters/neuromodulators, such as nitric oxide, hydrogen sulfide,vasoactive intestinal peptide, calcitonin gene-related peptide, substance P,enkephalin, 5-hydroxytryptamine, acetylcholine, catecholamine, glutamate, γ-aminobutyric acid, oxytocin and arginine vasopressin, can participate in the regulation of stress. However, inconsistent and even contradictory results have been obtained regarding the actual roles of each nucleus in the nervous mechanism of RWIS-induced GML, such as the involvement of different nuclei with the time of RWIS, the different levels of involvement of the sub-regions of the same nucleus, and the diverse signalling molecules, remain to be further elucidated.
范伟[8]（2020）在《二甲双胍通过胰高血糖素样肽-1受体抑制吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的作用及机制》文中认为阿片类药物是临床上广泛使用的镇痛药物,长期使用可导致成瘾。阿片类药物成瘾一直是临床医学面临的一个难以解决的问题。阿片类药物,如吗啡成瘾的具体机制仍不十分清楚。吗啡成瘾是一种慢性脑病,与大脑多个闹区有密切联系,其中包括中脑腹侧被盖区（ventral tegmental area,VTA）、伏隔核（nucleus accumbens,NAc）、前额叶皮质（prefrontal cortex,PFC）和海马（hippocampus,Hip）。二甲双胍（Metformin）是现在临床上用于治疗2型糖尿病（diabetes mellitus,type 2,T2DM）最常用的处方药,主要通过降低体内肝糖异生和促进外周葡萄糖利用而发挥的降糖效应。研究证明,二甲双胍除了广泛用于T2DM的治疗,对多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）、非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）、小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）和胰腺癌（pancreatic cancer,PC）等恶性肿瘤也有较为显着的治疗作用。胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）是生物体内的回肠内分泌细胞分泌的一种脑肠肽物质,由胰高血糖素或前胰高血糖素基因（pre-proglucagon gene,GCG）编码形成的,促进体内合成胰岛素。GLP-1主要通过GLP-1R发挥作用。研究证明GLP-1R是二甲双胍的作用靶点,GLP-1R也是T2DM的药物的作用靶点。实验前期的结果显示,小鼠在吗啡诱导的条件性位置偏爱（conditioned place preference,CPP）形成后,GCG基因的表达发生改变,这一结果表明,GLP-1或GLP-1R可能在吗啡-CPP形成过程中起到关键性作用。Exendin-（9-39）是一种特异性竞争性的GLP-1R的抑制剂,能够依赖性地降低GLP-1的促胰岛素作用,可以影响神经元的存活。硫氧还蛋白-1（Thioredoxin-1,Trx-1）是一种氧化还原调节蛋白,能够通过其活性中心调节多种氧化还原反应。课题组前期研究发现:Trx-1高表达转基因小鼠抵抗吗啡、甲基苯丙胺所致的CPP形成。本文研究目的是:研究二甲双胍吗啡-CPP的形成抑制作用,明确二甲双胍通过诱导GLP-1R表达升高,抑制吗啡成瘾相关分子的蛋白表达的作用机制。利用小鼠吗啡腹腔注射给药技术,构建吗啡-CPP模型。在诱导吗啡-CPP形成之前,给予二甲双胍胃灌一周,随后构建小鼠的吗啡-CPP模型,并比较对照组、吗啡组、吗啡+二甲双胍组和二甲双胍组的CPP得分差异。其次使用GLP-1R抑制剂药物Exendin-（9-39）,研究GLP-1R在二甲双胍抑制吗啡-CPP中的作用。将小鼠分成对照组、吗啡组、吗啡+二甲双胍组、吗啡+二甲双胍+抑制剂组和吗啡+抑制剂组进行实验,吗啡组与吗啡+二甲双胍组,比较小鼠的CPP得分差异。用蛋白质免疫印迹（western blot,WB）检测VTA区中成瘾相关蛋白分子的表达变化。我们的研究发现,二甲双胍降低了吗啡诱导小鼠的CPP得分。VTA区中,吗啡降低GLP-1R和γ-氨基丁酸受体B受体（γ-aminobutyric receptor B,GABABR）的表达,而二甲双胍恢复了吗啡诱导的GLP-1R和GABABR的表达降低;吗啡诱导磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）激活、D1和Trx-1的表达水平上升,二甲双胍则抑制了p-AMPK-α、D1R和Trx-1的表达水平增加。在给予了Exendin-（9-39）后,吗啡+二甲双胍+抑制剂组比吗啡+甲双胍组小鼠的CPP得分显着升高,Exendin-（9-39）抑制了二甲双胍对吗啡-CPP的作用,并且Exendin-（9-39）抑制了二甲双胍在VTA区对以上的成瘾相关蛋白分子的调节作用。总结:本研究结果表明二甲双胍抑制吗啡诱导的CPP,二甲双胍通过调节VTA区中GLP-1R表达,抵消了吗啡诱导的CPP的形成。该研究可为二甲双胍作为吗啡成瘾药物治疗提供新的思路和作用靶点。
刘秀秀[9]（2020）在《脑血管内皮源性Cdk5信号缺失通过CXCL1/CXCR2介导癫痫的病理机制及调控研究》文中研究表明研究背景:癫痫是最常见的慢性神经系统性疾病,具有显着的发病率和死亡率。在中国,癫痫已经成为仅次于“偏头痛”的第二类神经系统性疾病。癫痫的一个临床特点是源于癫痫灶神经元的异常放电,进而传播到大脑的其它区域。针对癫痫起源的灶点和癫痫作用的机制,目前临床上对癫痫的治疗主要分为手术治疗和药物治疗。手术治疗相对彻底,但癫痫灶的位置难以固定并且波及范围广,给手术治疗带来一定的难度。所以目前对于癫痫的治疗多以药物治疗为主。目前临床上比较常用的抗癫痫药包括苯妥英钠、苯巴比妥、地西泮以及丙戊酸钠。抗癫痫药的作用机制分为两类,一类作用于突触以平衡神经元的兴奋和抑制,另一类作用在某些电压门控性的离子通道以降低神经元的兴奋性。但这些药物的作用机制主要靶向癫痫发作的症状,即缓解神经元兴奋与抑制的失衡而不能有效的作用在癫痫发作的根本原因。因此,三分之一的癫痫患者对于抗癫痫药物治疗产生了耐药性。所以,阐述癫痫发生的潜在机制有助于寻找和开发治疗癫痫的新的药物靶点,为更好的治疗癫痫提供新的思路。Cyclin-dependent kinase5（Cdk5）,属于细胞周期蛋白家族的一员。相比较于其它细胞周期蛋白家族,Cdk5的主要功能不在于其对细胞周期的调控。迄今为止,Cdk5在神经元中的功能研究的相对较多,在神经元中可以通过与其上游的p35/p39形成复合物,活化以后通过磷酸化下游的蛋白发挥相应的作用并参与到某些神经退行性疾病中,但是Cdk5在其它细胞类型中的研究相对较少。我们前期调研发现,内皮细胞中的Cdk5可以参与到某些生物学过程中,包括内皮细胞的迁移、增殖和芽生,但是这些生物学过程是否与某些神经系统性疾病相关我们并不清楚。由此,我们采用血管内皮细胞特异性敲除Cdk5的小鼠深入探究内皮细胞中Cdk5蛋白在癫痫中的功能,有望进一步认识血管系统在癫痫调控中的作用,这种调控作用的阐述可能为治疗癫痫的药物开发提供新的候选靶点。本课题的研究内容主要包含以下4个部分:1.血管内皮细胞特异性敲除Cdk5诱导自发性癫痫的产生目的:考察血管内皮细胞特异性Cdk5敲除后是否会导致某些神经系统性疾病的发生。这种神经系统性疾病是否与Cdk5敲除影响了小鼠的发育或者与外周血管系统Cdk5敲除有关。方法和结果:利用Cre-loxp系统,繁殖得到内皮细胞特异性敲除Cdk5的小鼠(Cdh5-Cre;Cdk5f/f)。通过24小时的视频监控以及脑电图的记录发现,Cdh5-Cre;Cdk5f/f小鼠在2月龄的时候即出现自发性癫痫（8.3%）,6月龄的敲除小鼠癫痫发作率达到了80%,但是1月龄的敲除小鼠没有明显的癫痫的发作。接下来,通过腹腔注射PTZ发现,1月龄的敲除小鼠PTZ诱导的癫痫易感性显着增加。进一步的,为了排除发育期的影响以及外周系统的影响,我们采用他莫昔芬诱导性敲除以及腺相关病毒（AAV-BR1-iCre）将Cre重组酶表达于1月龄Cdk5 floxed(Cdk5f/f)小鼠的脑血管内皮细胞上,通过24小时的视频监控以及脑电图的记录发现脑微血管内皮细胞Cdk5缺失的小鼠同样出现自发性癫痫的表型。结论:血管内皮细胞中Cdk5的缺失,在2月龄或以上的敲除小鼠中会导致自发性癫痫的产生,癫痫灶主要起始于海马;无自发性癫痫的1月龄敲除小鼠对PTZ诱导的癫痫易感性增加。血管内皮细胞中Cdk5的缺失导致的自发性癫痫与发育期和外周血管系统Cdk5无关联性。2.Cdk5特异性敲除导致神经元的兴奋性以及星形胶质细胞的功能发生变化目的:以海马区锥体神经元为研究对象,考察神经元的活性以及胶质细胞的功能变化,即研究血管内皮细胞中Cdk5的特异性敲除是否会影响神经元的活性以及胶质细胞的功能。方法和结果:首先利用微透析技术检测敲除小鼠和对照小鼠中海马区谷氨酸的浓度。结果显示,特异性敲除内皮细胞中的Cdk5以后,1月龄和4月龄的敲除小鼠海马区谷氨酸的浓度均显着增高。电生理膜片钳技术分别考察海马区和皮层中锥体神经元的兴奋性,发现血管内皮细胞中Cdk5敲除后,海马区锥体神经元动作电位的发放频率以及兴奋性突触传递的频率均显着增加,但神经元的基本膜特性以及抑制性的突触传递不受影响,并且皮层中锥体神经元的兴奋性没有显着变化。药理学手段阻断兴奋性的突触后受体以后,发现敲除小鼠和对照小鼠的动作电位的发放频率趋于一致。上述结果提示敲除小鼠谷氨酸的浓度升高,通过作用于兴奋性的突触后受体,引起兴奋性的突触传递以及动作电位的发放频率增加,最终导致神经元的兴奋性增加以及癫痫的产生。利用免疫组化技术考察海马区和皮层中胶质细胞的形态变化,发现内皮细胞Cdk5敲除后,海马区星形胶质细胞数量和形态发生了明显的变化,1月龄的敲除小鼠即可引起星形胶质细胞产生明显的增生和激活,但皮层中的星形胶质细胞以及海马区的小胶质细胞的形态没有发生明显的改变。基于海马区星形胶质细胞的形态变化,利用电生理膜片钳技术记录1月龄Cdk5敲除小鼠海马区星形胶质细胞的功能。结果提示:血管内皮细胞敲除Cdk5以后,GLT1转运体介导的电流显着降低,GLAST转运体介导的电流无明显变化。进一步利用β-内酰胺类的抗生素头孢曲松特异性激活GLT1以及病毒注射的方法在海马区过表达GLT1,膜片钳记录发现GLT1激动剂能显着降低Cdk5敲除小鼠中锥体神经元放电频率、提高GLT1转运体介导的电流以及降低PTZ诱导的癫痫易感性。上述结果提示功能受损的GLT1通道介导的突触间隙谷氨酸浓度的增加是导致海马区锥体神经元兴奋性增加以及癫痫发生的根本原因。结论:血管内皮细胞特异性敲除Cdk5引起星形胶质细胞形态变化及谷氨酸转运体GLT1功能障碍,导致海马区谷氨酸浓度增加,最终使得锥体神经元兴奋性异常升高。采用药理学手段和病毒介导的过表达手段调控GLT1后,可以有效的降低锥体神经元的兴奋性以及癫痫表型。3.Cdk5缺失诱导CXCL1信号异常参与癫痫的病理机制及调控研究目的:探究血管内皮细胞特异性敲除Cdk5引起星形胶质细胞增生和激活介导癫痫发生的机制。方法与结果:利用伊文思蓝结合免疫荧光染色方法探究1月龄和4月龄敲除小鼠BBB的通透性。结果显示:1月龄敲除小鼠和对照小鼠之间BBB的通透性没有显着差异;4月龄的敲除小鼠呈现出伊文思蓝的渗透并且集中在活化的星形胶质细胞上。采用不同分子量的内源性和外源性示踪分子结合透射电镜以及免疫印迹实验进一步证实了1月龄Cdk5敲除小鼠BBB是相对完整的。利用1月龄对照小鼠和敲除小鼠的脑微血管内皮细胞原代培养结合转录组学进行分析。结果提示:Cdk5敲除小鼠的脑微血管内皮细胞大部分基因上调,并参与内皮细胞激活相关的信号通路,且炎性因子CXCL1的表达显着增加,但CXCL16的表达没有明显变化。利用实时定量PCR（qRT-PCR）以及酶联免疫吸附实验（ELISA）进一步证实了CXCL1转录水平以及蛋白水平的增加。脑片原位杂交实验亦证实CXCL1的增加主要位于微血管内皮细胞。随后在细胞水平,利用CXCL1的重组蛋白（20 ng）处理培养的原代星形胶质细胞(来自3周左右的Cdk5f/f小鼠)6小时后,采用免疫荧光染色以及膜片钳技术检测,结果提示CXCL1重组蛋白增加星形胶质细胞的增生和激活,并且使GLT1转运体介导的功能发生紊乱。在动物整体水平上,我们在1月龄Cdh5-Cre;Cdk5f/f和Cdk5f/f小鼠海马脑区,采用套管给药给予CXCL1的中和抗体,或者一次性海马脑区注射AAV-BR1-shCXCL1病毒。上述处理后进行PTZ诱导的癫痫易感性的行为学分析和离体脑片的电生理记录。结果提示:不论是采用腺病毒特异性沉默内皮细胞中的CXCL1还是采用CXCL1的中和抗体给药,都可以显着降低1月龄敲除小鼠PTZ诱导的癫痫易感性,同时也显着降低星形胶质细胞的增生和激活、GLT1介导的谷氨酸转运体功能障碍以及神经元的兴奋性。结论:血管内皮细胞特异性Cdk5敲除对1月龄小鼠BBB通透性无影响,但是会引起内皮细胞分泌的CXCL1增加,进而引起星形胶质细胞的增生和激活、GLT1谷氨酸转运体电流下降。这一系列的变化与神经元的兴奋性以及癫痫的发生密切相关。4.基于CXCL1/CXCR2信号交互的GLT1功能障碍参与介导癫痫发作机制及调控研究目的:探究神经元和星形胶质细胞上CXCR2的功能。即研究内皮细胞分泌的CXCL1对神经元和星形胶质细胞的影响是否通过与其受体CXCR2的结合发挥作用。方法与结果:将依赖Cre重组酶的sh-CXCR2以及GFAP-Cre/CaMKIIα-Cre腺相关病毒,注射到1月龄的Cdh5-Cre;Cdk5f/f和Cdk5f/f小鼠的海马区,3周后进行行为学的考察以及免疫组化和电生理水平的验证。结果提示:特异性的沉默星形胶质细胞上的CXCR2,显着改善敲除小鼠PTZ诱导的癫痫易感性、星形胶质细胞的活化和GLT1介导的转运体功能障碍以及海马区锥体神经元的兴奋性的增加。但是特异性沉默锥体神经元上的CXCR2对以上的表型没有明显的改变。结论:靶向抑制星形胶质细胞CXCR2可降低Cdk5敲除小鼠神经元的兴奋性,显着改善PTZ诱导的癫痫易感性。
牛莉[10]（2020）在《胆碱能抗炎通路介导右美托咪定对脑缺血再灌注损伤的保护作用》文中认为随着人口老龄化的增加,脑血管疾病在我国发病率越来越高。脑组织对缺血敏感性较高,一旦发生缺血,会迅速出现病理改变,很快进入不可逆损伤状态,而血流恢复后又容易引发一系列复杂级联反应,出现神经细胞凋亡、坏死以及延迟性的神经功能障碍,即为缺血再灌注损伤（I/RI）。氧自由基大量释放、钙超载、NO过度释放、兴奋性氨基酸、炎症因子释放均可参与脑缺血再灌注的损伤。缺血再灌注损伤后容易引起远期神经系统功能障碍,学习、记忆和认知都会受到影响。临床上短暂性脑缺血再灌注损伤,一般发生在急救措施之后,如心肺复苏术,心脏骤停和休克患者的抢救后,神经外科手术围术期以及体外循环后也易出现。胆碱能抗炎通路（Cholinergic anti-inflammatory pathway,CAP）是一条神经免疫调节通路,它的激活可有效减少促炎因子的释放,具有明显的炎症抑制作用。它是一种内源性神经反馈调节机制:当中枢神经系统受到免疫刺激后,投射到迷走神经核团,激活中枢迷走神经,使外周神经末梢释放乙酰胆碱,与网状内皮细胞上的α7亚单位的N型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptorsα7,α7nAChR）特异性结合,通过细胞内的信号传导通路,参与众多生物学过程,如增殖、分化、黏附、迁移和凋亡等。细胞凋亡是细胞的一种程序性死亡,主要包括信号转导、基因调控和凋亡效应的执行三个阶段,而信号转导过程的激活则是细胞凋亡的启动者。p38MAPK/NF-κB是细胞内重要的信号转导通路,在细胞的增殖及凋亡过程中发挥着重要作用。丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen activated protein kinases,MAPKs）为丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶,参与细胞生长、增殖、分化、凋亡等多种生理过程。p38MAPK主要介导炎症反应、创伤以及应激等信号传递,在调节炎症反应、神经退行性改变和神经细胞凋亡过程中发挥作用,p38通路过度激活能够抑制细胞生长甚至凋亡。右美托咪定（Dex）是临床常用的一种镇静药物,同时也有镇痛和抗焦虑的作用,主要作用于α2受体。近年来研究证实:右美托咪定可激活丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）来防御大鼠蛛网膜下腔出血诱导的脑损伤,抑制促炎因子的释放以及减少钙超载;预防缺血再灌注损伤引起的心肌、肝、肠,肺、肾脏以及脑损伤。同时还可抑制线粒体凋亡,氧糖剥夺,钙超载,来保持线粒体的功能稳定。以上研究显示右美托咪定具有抗凋亡、抗炎、脑保护作用,但是右美托咪定使用剂量差别很大且既往没有进行比较。据此,我们提出假设,右美托咪定对于脑缺血再灌注损伤具有保护作用,且保护作用呈剂量相关性。右美托咪定能够抑制交感神经,间接兴奋副交感神经,减慢心率,和迷走神经作用类似,本文拟从胆碱能抗炎通路方面探讨右美托咪定的脑保护作用。本研究包括以下两个方面:1、右美托咪定对减轻脑缺血再灌注损伤,抑制海马神经元细胞的凋亡是否有剂量相关性。2、探讨胆碱能抗炎通路是否参与右美托咪定的脑保护作用。第一部分:不同剂量右美托咪定对缺血再灌注损伤大鼠海马神经元细胞的作用目的:本研究通过建立大鼠大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,采用不同剂量右美托咪定进行干预,观察不同剂量右美托咪定对缺血再灌注大鼠海马神经元细胞的影响。方法:40只大鼠随机分为5组,每组8只,分别为假手术组（S）、缺血再灌注组（I/R）、Dex高剂量组（DH）、Dex中剂量组（DM）、Dex低剂量组（DL）。S组只对大鼠进行血管分离,不进行插线栓;I/R组和Dex组采用右侧大脑中动脉闭塞2h后再灌注24h建立脑缺血再灌注动物模型,I/R组不进行药物干预,Dex高剂量组（DH,60μg/kg）、Dex中剂量组（DM,6μg/kg）、Dex低剂量组（DL,0.6μg/kg）在缺血前给予不同剂量的Dex进行干预。用2,5,3,5-三苯基四氯化钴（TTC）染色检测神经损伤,采用湿-干加权法和HPLC-质谱仪分别检测脑组织中水和γ-氨基丁酸的含量,TUNEL染色和流式细胞术检测海马神经元凋亡。此外,通过实时定量PCR和Western blot检测酶切caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表达。结果:1.不同剂量右美托咪定对I/R大鼠神经功能评分的影响与假手术组相比,I/R组大鼠神经功能评分明显降低;与I/R组相比,DM、DH组大鼠神经功能评分明显升高;与DM组相比,DL组大鼠神经功能评分明显降低,DH组大鼠神经功能评分明显升高;差异具有统计学意义（P<0.05）。2.不同剂量右美托咪定对I/R大鼠脑梗死面积和含水量的影响与假手术组相比,I/R组大鼠脑梗死面积及含水量明显增加;与I/R组相比,DM、DH组大鼠脑梗死面积和含水量明显减少;与DM组相比,DL组大鼠脑梗死面积及含水量明显增加,DH组大鼠脑梗死面积及含水量明显减少;差异具有统计学意义（P<0.05）。3.不同剂量右美托咪定对I/R大鼠脑组织γ-氨基丁酸含量的影响与假手术组相比,I/R组大鼠海马组织Y-氨基丁酸含量明显降低;与I/R组相比,DM、DH组大鼠海马组织γ-氨基丁酸含量明显升高;与DM组相比,DL组大鼠海马组织γ-氨基丁酸含量明显降低,DH组大鼠海马组织γ-氨基丁酸含量明显升高;差异具有统计学意义（P<0.05）。4.不同剂量右美托咪定对I/R大鼠海马神经细胞凋亡的影响与假手术组相比,I/R组大鼠海马神经细胞凋亡明显增多;与I/R组相比,DM、DH组大鼠海马神经细胞凋亡明显减少;与DM组相比,DL组大鼠海马神经细胞凋亡明显增多,DH组大鼠海马神经凋亡明显减少;差异具有统计学意义（P<0.05）。5.不同剂量右美托咪定对I/R大鼠海马组织Caspase-3蛋白的影响与假手术组相比,I/R组大鼠海马组织caspase-3蛋白水平显着升高;与I/R组相比,DM、DH组大鼠海马组织caspase-3蛋白水平显着降低;与DM组相比,DL组大鼠海马组织caspase-3蛋白水平显着升高,DH组大鼠海马组织caspase-3蛋白水平显着降低;差异具有统计学意义（P<0.05）。6.不同剂量右美托咪定对I/R大鼠海马组织Bcl-2/Bax mRNA含量和蛋白表达水平的影响与假手术组相比,I/R组大鼠海马组织Bcl-2/Bax mRNA含量和蛋白水平显着降低;与I/R组相比,DM、DH组大鼠海马组织Bcl-2/Bax mRNA含量和蛋白水平显着升高;与DM组相比,DL组大鼠海马组织Bcl-2/Bax mRNA含量和蛋白水平显着降低,DH组大鼠海马组织Bcl-2/Bax mRNA含量蛋白水平显着升高;差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.右美托咪定能够减轻I/R大鼠神经功能损伤,减少脑梗死面积。2.右美托咪定可以上调Bcl-2/Bax蛋白表达,对I/R大鼠海马神经元细胞具有明显保护作用;3.右美托咪定的脑保护作用具有剂量依赖性,随剂量增加,保护作用增强。第二部分:胆碱能抗炎通路介导右美托咪定对缺血再灌注大鼠海马神经细胞的保护机制目的:1.探讨右美托咪定对I/R大鼠海马神经细胞的保护作用是否与迷走神经有关。2.阐明胆碱能抗炎通路是否介导右美托咪定对I/R大鼠海马神经元细胞的保护作用。实验一:方法:40只大鼠随机分为5组,每组8只,分别为假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）、右美托咪定组（Dex组）、Dex+迷走神经切断组（D+V组）和迷走神经切断组（V组）。所有大鼠均进行模型建立干预,S组大鼠不插入线栓,正常缝合;I/R组大鼠缺血2小时后去除线栓;Dex组在制备MCAO前静脉输注剂量为Dex（6ug/kg）,D+V组给与Dex（6ug/kg）前切断迷走神经,迷走神经切断组在制备模型前切断迷走神经。所有大鼠均在灌注24h后处死,测定各组大鼠神经功能评分、脑组织含水量及梗死面积,检测炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平,测定海马神经细胞凋亡率和NF-κBp65、Bcl-2、Bax、Caspase-3、CytC及p-p38的蛋白表达。结果:1.迷走神经切断对I/R大鼠含水量、脑梗死面积及神经功能评分影响与假手术组相比,I/R组大鼠脑组织含水量、脑梗死面积及神经功能评分均显着增加;与I/R组相比,右美托咪定组大鼠脑组织含水量、脑梗死面积及神经功能评分均显着降低;与右美托咪定组相比,D+V组脑组织含水量、脑梗死面积及神经功能评分均显着提高,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.迷走神经切断对I/R大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响与假手术组相比,I/R组大鼠脑组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显着增加;与I/R组相比,右美托咪定组大鼠脑组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显着减少;与右美托咪定组相比,D+V组大鼠脑组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显着提高,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.迷走神经切断对I/R大鼠海马神经元细胞凋亡率的影响与假手术组相比,I/R组海马细胞凋亡率明显升高;与I/R组相比,右美托咪定组凋亡率明显降低;与右美托咪定组相比,D+V组凋亡率明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.迷走神经切断对I/R大鼠海马细胞凋亡蛋白表达水平的影响与假手术组相比,I/R组海马组织中Bax、Caspase-3的蛋白表达显着升高,Bcl-2蛋白表达显着降低;与I/R组相比,右美托咪定组海马组织中Bax、Caspase-3的蛋白表达显着降低,Bcl-2蛋白表达显着升高;与右美托咪定组相比,D+V组海马组织中Bax、Caspase-3的蛋白表达显着升高,Bcl-2蛋白表达显着降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.迷走神经切断对I/R大鼠p-p38、CytC和p65蛋白表达水平的影响与假手术组相比,I/R组p-p38、CytC和p65蛋白表达明显升高;与I/R组相比,右美托咪定组p-p38、CytC和p65蛋白表达明显降低;与右美托咪定组相比,D+V组p-p38、CytC和p65蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。实验二:方法:40只大鼠随机分为5组,每组8只,分别为假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）、右美托咪定组（Dex组）、Dex+α-银环蛇毒素组（D+G组）和α-银环蛇毒素组（G组）。所有大鼠均进行模型建立干预,S组大鼠不插入线栓,正常缝合;I/R组大鼠缺血2小时后去除线栓;Dex组在制备MCAO前静脉输注剂量为 Dex（6ug/kg）,D+G 组给与 Dex（6ug/kg）前给 α-GBT（1ug/kg）,G 组在制备模型前给与α-GBT（1ug/kg）。所有大鼠均在灌注24h之后处死,测定各组大鼠的神经功能评分、脑组织含水量以及脑梗死面积,检测炎性因子TNF-α、IL-6 和 IL-1β 水平,测定脑细胞凋亡率和 NF-κBp65、Bcl-2、Bax、Caspase-3、p-p38及CytC的蛋白表达。结果:1.α7nAChR抑制剂对I/R大鼠含水量、脑梗死面积及神经功能评分影响与假手术组相比,I/R组大鼠脑组织含水量、脑梗死面积及神经功能评分均显着增加;与I/R组相比,右美托咪定组大鼠脑组织含水量、脑梗死面积及神经功能评分均显着降低;与右美托咪定组相比,D+G组大鼠脑组织含水量、脑梗死面积及神经功能评分均显着提高;差异具有统计学意义（P<0.05）。2.α7nAChR抑制剂对I/R大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响与假手术组相比,I/R组大鼠脑组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显着增加;与I/R组相比,右美托咪定组大鼠脑组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显着减少;与右美托咪定组相比,D+G组大鼠脑组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显着提高;差异具有统计学意义（P<0.05）。3.α7nAChR抑制剂对I/R大鼠海马神经元细胞凋亡率的影响与假手术组相比,I/R组大鼠海马神经元细胞凋亡率明显升高;与I/R组相比,右美托咪定组凋亡率明显降低;与右美托咪定组相比,D+G组凋亡率明显升高;差异具有统计学意义（P<0.05）。4.α7nAChR抑制剂对I/R大鼠海马细胞凋亡蛋白表达水平的影响与假手术组相比,I/R组大鼠海马组织中Bax、Caspase-3的蛋白表达显着升高,Bcl-2蛋白表达显着降低;与I/R组相比,右美托咪定组海马组织中Bax、Caspase-3的蛋白表达显着降低,Bcl-2蛋白表达显着升高;与右美托咪定组相比,D+G组海马组织中Bax、Caspase-3的蛋白表达显着升高,Bcl-2蛋白表达显着降低;差异具有统计学意义（P<0.05）。5.α7nAChR抑制剂对I/R大鼠p-p38、CytC和p65蛋白表达水平的影响与假手术组相比,I/R组p-p38、CytC和p65蛋白表达显着升高;与I/R组相比,右美托咪定组p-p38、CytC和p65蛋白表达显着降低;与右美托咪定组相比,D+G组p-p38、CytC和p65蛋白表达显着升高;差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.右美托咪定发挥脑保护作用依赖迷走神经的完整性。2.胆碱能抗炎通路介导了右美托咪定对脑缺血再灌注损伤的保护作用。3.右美托咪定脑保护作用的实现可能与p38MAPK受体介导的凋亡有关。
二、Effect of Thiopental Sodium on the Release of Glutamate and γ-aminobutyric Acid from Rats Prefrontal Cortical Synaptosomes（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Effect of Thiopental Sodium on the Release of Glutamate and γ-aminobutyric Acid from Rats Prefrontal Cortical Synaptosomes（论文提纲范文）
（1）Transcranial magnetic stimulation in animal models of neurodegeneration（论文提纲范文）
| Introduction |
| Database Search Strategy |
| What Is Transcranial Magnetic Stimulation? |
| Paired-pulse TMS |
| Repetitive TMS |
| The Molecular Mechanism Behind the Therapeutic Effects of Transcranial Magnetic Stimulation |
| TMS inhibits apoptotic cell death,prevents neuronal death,and promotes neuronal survival |
| TMS regulates neurotransmitters,neurotrophic factors,and exerts neuroprotective effects |
| TMS modulates non-neuronal cells (oligodendrocytes,astrocytes,microglia,and adult neural stem cells) and exerts therapeutic effects |
| Effects of TMS on oligodendrocytes |
| Effects of TMS on astrocytes |
| Effects of TMS on microglial cells |
| Effects of TMS on NSCs |
| TMS affects calcium ions (Ca2+) currents/signaling and promotes neural regeneration and neuroplasticity |
| Animal Models for Studying TMS |
| Significance of animal models for studying TMS |
| Transcranial Magnetic Stimulation Applications in Animal Models |
| Neurodegenerative disorder models |
| Huntington’s disease model |
| Alzheimer’s disease model |
| Parkinson’s disease |
| Depression |
| Potential Side Effects of Transcranial Magnetic Stimulation in Humans |
| Discussion |
| Conclusions |
（2）Glutamate and depression:Reflecting a deepening knowledge of the gut and brain effects of a ubiquitous molecule（论文提纲范文）
| INTRODUCTION |
| GLUTAMATE AND DEPRESSION |
| Dietary glutamate and depression |
| Endogenous brain glutamate and depression |
| The gut-brain axis and glutamate |
| Gut-brain axis and depression |
| Is there a dietary glutamate-gut-endogenous glutamate-brain axis and how can it impact depression pathogenesis? |
| GLUTAMATE AND DEPRESSION MANAGEMENT |
| GLUTAMATE-BASED THERAPIES IN DEPRESSION |
| NMDA antagonists |
| Other glutamate receptors |
| CAN THE RELATIONSHIP BETWEEN GLUTAMATE AND THE GUT-BRAIN AXIS BE OF THERAPEUTIC BENEFIT IN DEPRESSION? |
| CONCLUSION |
（3）电针调控miR-219a促进血管性认知障碍大鼠内嗅-海马CA1神经环路突触可塑性的机制（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 电针可有效改善血管性认知障碍,但其机制尚未完全阐明 |
| 2 内嗅皮层-海马CA1区神经环路突触可塑性介导空间记忆编码 |
| 3 miR-219a在NMDAR介导的突触可塑性中发挥了重要调控作用 |
| 4 电针可调节内嗅皮层-海马突触可塑性改善VCI空间记忆障碍 |
| 5 研究假说 |
| 实验材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验设备耗材及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及VCI模型建立 |
| 2.2 过表达miR-219a腺相关病毒注射 |
| 2.3 干预措施 |
| 2.4 小动物磁共振3D-TOF检测 |
| 2.5 干预前后空间学习记忆能力测试 |
| 2.6 高尔基染色检测 |
| 2.7 小动物核磁波谱检测神经物质代谢含量 |
| 2.8 RT-qPCR检测miR-219a表达水平 |
| 2.9 电生理膜片钳检测 |
| 2.10 激光共聚焦观察内嗅皮层-海马CA1区miR-219a定位情况 |
| 3 统计方法 |
| 4 技术路线图 |
| 实验结果 |
| 1 VCI大鼠模型检验 |
| 2 电针调控miR-219a对VCI模型大鼠空间学习记忆功能的影响 |
| 3 电针调控miR-219a对VCI模型大鼠内嗅皮层、海马CA1区神经物质代谢的影响 |
| 4 电针调控miR-219a改善VCI模型大鼠内嗅皮层和海马CA1区突触形态 |
| 5 电针调控miR-219a改善VCI模型大鼠内嗅皮层-海马CA1神经环路场电位 |
| 6 电针调控miR-219a影响VCI模型大鼠内嗅皮层、海马CA1区锥体神经元放电模式 |
| 7 电针介导miR-219a调控VCI模型大鼠空间记忆相关NMDAR离子通道电流强度 |
| 8 电针对内嗅皮层、海马CA1区miR-219a表达影响 |
| 9 内嗅皮层-海马CA1神经环路投射情况 |
| 讨论 |
| 1 空间记忆障碍是血管性认知障碍主要症状之一 |
| 2 电针可改善VCI大鼠空间学习记忆 |
| 3 电针可改善VCI大鼠内嗅皮层、海马CA1区兴奋/抑制平衡 |
| 4 电针调控miR-219a改善血管性认知障碍模型大鼠内嗅皮层-海马神经环路突触可塑性 |
| 5 电针调控miR-219a影响VCI模型大鼠内嗅皮层-海马CA1区突触可塑性的电生理机制 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 电针改善血管性认知障碍的电生理机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（4）未定带-伏隔核GABA神经通路对大鼠胃功能和摄食的影响及潜在机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 主要试验仪器 |
| 3 主要实验药品 |
| 4 试剂配制 |
| 5 实验设计 |
| 5.1 未定带-伏隔核GABA神经通路构成 |
| 5.2 NAc微量注射GABA对 GLP-1/GD神经元放电活动的影响 |
| 5.3 电刺激ZI对 GLP-1/GD神经元放电活动的影响 |
| 5.4 ZI-NAc GABA能通路对大鼠胃运动、胃酸分泌、摄食量调控 |
| 6 逆行追踪及免疫组织化学染色 |
| 7 电生理实验 |
| 7.1 胃部及头部手术 |
| 7.2 细胞外放电记录 |
| 8 核团置管 |
| 9 核团药物注射和核团电刺激 |
| 10 NAc微量注射GABA对大鼠胃功能的影响 |
| 10.1 NAc微量注射GABA对清醒大鼠胃运动的影响 |
| 10.2 NAc微量注射GABA对麻醉大鼠胃运动及NAc神经元放电活动的影响 |
| 10.3 NAc微量注射GABA对大鼠胃酸分泌的影响 |
| 11 NAc微量注射GABA对大鼠0-2 小时摄食量的影响 |
| 12 电刺激ZI对大鼠胃功能的影响 |
| 12.1 电刺激ZI对清醒大鼠胃运动的影响 |
| 12.2 电刺激ZI对大鼠胃酸分泌的影响 |
| 13 电刺激ZI对大鼠0-2小时摄食量的影响 |
| 14 组织学检验 |
| 15 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 从ZI向 NAc投射GABA免疫反应神经元 |
| 2 GABA对大鼠NAc内 GD神经元放电活动影响 |
| 3 电刺激ZI对大鼠NAc内 GD神经元放电活动的影响 |
| 4 NAc微量注射GABA对大鼠胃功能及的影响 |
| 4.1 NAc微量注射GABA对大鼠在体胃运动的影响 |
| 4.2 NAc微量注射GABA对麻醉大鼠胃运动及神经元放电活动的影响 |
| 4.3 NAc微量注射GABA对大鼠胃酸分泌的影响 |
| 5 NAc微量注射GABA对大鼠0-2 小时累计摄食量的影响 |
| 6 NAc注射Bic对电刺激ZI诱导大鼠胃动力和胃酸分泌的影响 |
| 6.1 电刺激ZI对大鼠在体胃运动的影响 |
| 6.2 电刺激ZI对大鼠胃酸分泌的影响 |
| 7 电刺激ZI对大鼠0-2小时摄食的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（5）TRIM32基因敲除对小鼠海马突触可塑性的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| INTRODUCTION |
| 1.1 Background |
| 1.1.1 Synaptic plasticity |
| 1.1.2 Biochemical Mechanism |
| 1.1.3 Short term plasticity |
| 1.1.4 Long term plasticity |
| 1.2 Long Term Potentiation(LTP) |
| 1.3 Glutamate Receptors |
| 1.3.1 AMPA Receptors(AMPAR) |
| 1.3.2 NMDA Receptors |
| 1.4 Gamma-Aminobutyric acid(GABA)Receptors |
| 1.5 Excitotoxicity |
| 1.6 Notch Signaling in brief |
| 1.6.1 Notch in the Brain |
| 1.6.2 Notch and Plasticity |
| 1.7 Research Questions |
| 1.8 Objectives |
| 1.9 Justification of the study |
| 1.10 Hypothesis |
| MATERIALS AND METHODS |
| 2.1 Materials |
| 2.2 Methods |
| 2.2.1 Experimental animals |
| 2.2.2 Genotyping of TRIM32 mice |
| 2.2.3 LTP |
| 2.2.4 I/O curves |
| 2.2.5 PPF |
| 2.2.6 Nissl staining |
| 2.2.7 Golgi staining and analysis |
| 2.2.8 Primary Neuron Culture and inhibitor treatments |
| 2.2.9 RNA Extraction |
| 2.2.10 Reverse-transcription reaction preparation |
| 2.2.11 q RT-PCR analysis |
| 2.2.12 Protein extraction procedure |
| 2.2.13 Tissue lysates concentration and immunoblotting |
| 2.2.14 Immunofluorescence staining |
| 2.2.15 Surgery and Electrophysiological Neural Data acquisition |
| 2.2.16 Sorting and Analysis of Neural Data |
| 2.2.17 Statistical analysis |
| RESULTS |
| 3.1 LTP decreased in hippocampal slices of TRIM32 KO mice |
| 3.2 Input-Output Curve did not change significantly in TRIM32KO |
| 3.3 Paired Pulse Facilitation(PPF)did not change in TRIMKO in short term |
| 3.4 TRIM32 KO mice showed decreased Dendritic spine density and altered spine characteristics |
| 3.5 Synaptic Proteins are down-regulated in TRIM32 KO mice |
| 3.6 AMPA Receptors decreased in TRIM32 deficiency mice |
| 3.7 TRIM32 deficiency decreases expression levels of GABAA receptors |
| 3.8 TRIM32KO increased expression levels of NMDA receptors |
| 3.9 TRIM32 KO causes an imbalance in excitation and inhibition transporters |
| 3.10 TRIM32 KO increased the frequency of spikes |
| 3.11 Overexcitation is associated with decreased neuronal numbers in TRIM32 KO mice |
| 3.12 Local Field Potentials are reduced in TRIM32 KO |
| 3.13 The network activity at specific oscillatory frequency bands are impaired in TRIM32 KO |
| 3.14 TRIM32 relates with Notch pathway and inhibition with DAPT in-vitro downregulate notch and downstream genes |
| 3.15 Inhibition of notch with DAPT reduces the glutamatergic phenotypes to improve synaptic function |
| DISCUSSION AND CONCLUSION |
| 4.0 Discussion |
| 4.1 LTP decrease in hippocampal slices of TRIM32 KO mice |
| 4.2 TRIM32 deficiency decreases hippocampal dendritic spine density |
| 4.3 TRIM32 deficiency resulted in downregulation of synaptic proteins |
| 4.4 TRIM32 deficiency reduces AMPA receptors in the hippocampus |
| 4.5 Deficiency in TRIM32 downregulated the expression of GABAA Receptors |
| 4.6 Deficiency in TRIM32 increased expression levels of NDMA Receptors |
| 4.7 TRIM32 KO causes an excitatory-inhibitory imbalance |
| 4.8 Spike frequency is increased in TRIM32KO mice |
| 4.9 Overexcitation is associated with the decreased neuronal numbers in the absence of TRIM32 |
| 4.10 Local Field Potentials are reduced in TRIM32 KO |
| 4.11 TRIM32 influences EEG wave oscillations |
| 4.12 TRIM32 KO activates Notch signaling and inhibition of notch(with DAPT)influences the mechanisms contributing to impaired synaptic plasticity |
| 4.13 Inhibition of notch with DAPT reduces the glutamatergic phenotypes to improve synaptic function |
| Conclusion |
| REFERENCES |
| LITERATURE REVIEW |
| 5.0 Introduction |
| 5.1 Background |
| 5.1.1 The phenomenon of Neurogenesis |
| 5.1.2 The role of TRIM32 in neurogenesis |
| 5.1.3 The Role of TRIM32 mutation in disease pathologies |
| 5.1.4.Linking Neurogenesis to Synaptic plasticity |
| 5.1.5 The importance of receptors in synaptic plasticity |
| 5.1.5.1 NMDA Receptors |
| 5.1.5.2 NMDARs in learning and memory |
| 5.1.6 AMPA Receptors |
| 5.1.6.1 AMPA Receptors and Synaptic plasticity |
| 5.1.7 Synaptic proteins and their role in synaptic plasticity |
| 5.1.7.1 Synapsin |
| 5.1.7.2 Growth associated protein43 |
| 5.1.7.3 Synaptophysin |
| 5.1.7.4 Post Synaptic Density95 |
| 5.1.8 Neural Function in Learning and Memory |
| 5.1.8.1 Local Field Potentials |
| 5.1.9 Electroencephalogram(EEG)Measurements |
| 5.1.10 Notch in the development of the brain |
| 5.1.10.1 Role of Notch in NSC cell division |
| 5.1.10.2 Notch modulates NSC behavior |
| 5.1.10.3 Role of notch in the adult brain |
| 5.1.10.4 The Role of Notch in Brain disorders |
| REFERENCES |
| APPENDIX |
| ACKNOWLEDGEMENT |
| LIST OF PUBLICATIONS |
（6）嗜热链球菌产GABA发酵条件优化及prtS基因对GABA合成的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| Chapter1 Introduction |
| 1.1 Research background and significance |
| 1.2 Gamma-aminobutyric acid |
| 1.3 Biofunctionalities and biosynthesis of GABA |
| 1.3.1 Biofunctionalities of GABA for human |
| 1.3.2 GABA for the producing GABA plants |
| 1.3.3 GABA for the producing GABA microbe |
| 1.3.4 Biosynthesis of GABA |
| 1.4 GABA production |
| 1.4.1 Production of GABA by lactic acid bacteria |
| 1.4.2 Production of GABA by other microorganisms |
| 1.4.3 Production of GABA by plant |
| 1.5 Improvement of the production of GABA of lactic acid bacteria |
| 1.5.1 Culture condition |
| 1.5.2 Genetic engineering techniques |
| 1.5.3 Co-culture of different strains |
| 1.6 GABA-producing Streptococcus thermophilus |
| 1.7 GABA and PrtS gene of S.thermophilus |
| 1.8 Main research contents of this study |
| 1.8.1 Evaluation of GABA-producing S. thermophilus |
| 1.8.2 Optimization of GABA production of strains in skimmed milk |
| 1.8.3 The effect of Prt S protease in the GABA production |
| Chapter2 Materials and method |
| 2.1 Material and instruments |
| 2.1.1 Microorganism use in an experiment |
| 2.1.2 Chemical reagents |
| 2.1.3 Equipment |
| 2.1.4 Preparation of common reagents in experiment |
| 2.2 Preparation and analysis method |
| 2.2.1 Screening of GABA producing LAB |
| 2.2.1.1 The cultivation of strains |
| 2.2.1.2 GABA analysis by paper-layer chromatography(PLC) |
| 2.2.1.3 GABA analysis by high-performance liquid Chromatography |
| 2.2.1.4 Quantification of GABA production in fermented milk sample |
| 2.2.1.5 Determination of cell numbers in fermented milk |
| 2.2.2 Detection of GAD and Prt S gene in GABA producing LAB |
| 2.2.2.1 DNA extraction |
| 2.2.2.2 Polymerase chain reaction(PCR)protocol and a PCR step |
| 2.2.2.3 Gel electrophoresis |
| 2.2.2.4 Detection of gad gene |
| 2.2.2.5 Examination of the presence prt S gene |
| 2.2.3 Effects of different parameters on GABA production in skim milk |
| 2.2.3.1 Effect of MSG on GABA production in skim milk |
| 2.2.3.2 Effect of p H on GABA production in skim milk |
| 2.2.3.3 Effect of PLP supplement on GABA production in skim milk |
| 2.2.3.4 Effect of temperature on GABA production in skim milk |
| 2.2.3.5 Study effectively converted MSG to GABA by CS19 |
| 2.2.4 Phylogenetic analysis |
| Chapter3 Evaluation of GABA production and Prt S of S.thermophilus strains |
| 3.1 Preface |
| 3.2 Evaluation of GABA production ability of different S.thermophilus strains |
| 3.2.1 Check the morphology of microorganisms |
| 3.2.2 Examination of the presence of gad gene in S.thermophilus strains |
| 3.2.3 GABA production of S.thermophilus strains in M17 medium |
| 3.3 Selection of the removting protein method from fermented milk |
| 3.4 Examination of the presence’s Prt S protease in six S.thermophilus strains |
| 3.5 Phylogenetic of cell envelope proteinases |
| 3.6 Summary |
| Chapter4 Optimization of GABA production |
| 4.1 Preface |
| 4.2 Optimization of GABA production of CS9,CS12,and CS19 in skim milk |
| 4.2.1 Effect of MSG on GABA production |
| 4.2.1.1 The effect of MSG concentrations on the GABA production of CS |
| 4.2.1.2 The effect of MSG concentrations on the GABA production of CS |
| 4.2.1.3 The effect of MSG concentrations on the GABA production of CS |
| 4.2.1.4 Relationship between MSG and the physiological of fermented milk |
| 4.2.2 Effect of initial p H on GABA production |
| 4.2.2.1 The effect of initial p H on the GABA production of CS |
| 4.2.2.2 The effect of initial p H on the GABA production of CS12 |
| 4.2.2.3 The effect of initial p H on the GABA production of CS19 |
| 4.2.3 Effect of initial adjusting PLP on GABA production |
| 4.2.3.1 The effect of PLP on the GABA production of CS9 |
| 4.2.3.2 The effect of PLP on the GABA production of CS12 |
| 4.2.3.3 The effect of PLP on the GABA production of CS19 |
| 4.3 Summary |
| Conclusion |
| Reference |
| Papers and other achievements published |
| Acknowledgements |
| Personal resume |
（8）二甲双胍通过胰高血糖素样肽-1受体抑制吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语索引 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 吗啡成瘾 |
| 1.1.1 吗啡 |
| 1.1.2 吗啡成瘾介绍 |
| 1.1.3 吗啡成瘾机制 |
| 1.1.4 吗啡成瘾的危害 |
| 1.1.5 吗啡成瘾的相关治疗 |
| 1.2 阿片受体 |
| 1.2.1 μ阿片受体 |
| 1.2.2 κ阿片受体 |
| 1.2.3 δ阿片受体 |
| 1.3 吗啡诱导条件性位置偏好的形成 |
| 1.4 成瘾相关脑区介绍 |
| 1.4.1 VTA与吗啡-CPP的关系 |
| 1.4.2 NAc与吗啡-CPP的关系 |
| 1.4.3 Hip与吗啡-CPP的关系 |
| 1.4.4 PFC与吗啡-CPP的关系 |
| 1.5 诱导吗啡-CPP形成的主要相关分子 |
| 1.5.1 多巴胺受体 |
| 1.5.2 AMPK |
| 1.5.3 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 |
| 1.5.4 γ-氨基丁酸 |
| 1.5.5硫氧还蛋白-1 |
| 1.6 GLP-1 |
| 1.6.1 GLP-1的简介 |
| 1.6.2 GLP-1的生物学功能 |
| 1.6.3 GLP-1受体途径 |
| 1.7 本论文的研究目的、意义和方案 |
| 1.7.1 研究目的 |
| 1.7.2 研究意义 |
| 1.7.3 研究方案 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 2.1 实验方案 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验药品 |
| 2.1.3 实验所需仪器及设备 |
| 2.1.4 实验用试剂 |
| 2.1.5 试剂配制方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 条件性位置偏爱实验 |
| 2.2.2 小鼠脑组织取材及保存 |
| 2.2.3 蛋白质免疫印迹 |
| 2.2.4 统计学分析 |
| 第三章 二甲双胍抑制吗啡诱导的小鼠CPP表达中的调节作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验方案 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 二甲双胍给药对吗啡-CPP表达的影响 |
| 3.3.2 二甲双胍给药对吗啡-CPP形成后VTA区中GLP-1R表达的影响 |
| 3.3.3 二甲双胍给药对吗啡-CPP形成后VTA区中p-AMPK-α表达的影响 |
| 3.3.4 二甲双胍给药对吗啡-CPP形成后VTA区中GABABR表达的影响 |
| 3.3.5 二甲双胍给药对吗啡-CPP形成后VTA区中Trx-1 表达的影响 |
| 3.4 本章讨论 |
| 第四章 GLP-1 抑制剂(Exendin-(9-39))在吗啡诱导的小鼠CPP表达中的调节作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验方案 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 Exendin-(9-39)对吗啡-CPP表达的影响 |
| 4.3.2 Exendin-(9-39)对吗啡-CPP形成后VTA区中GLP-1R表达的影响 |
| 4.3.3 Exendin-(9-39)对吗啡-CPP形成后VTA区中p-AMPK-α表达的影响 |
| 4.3.4 Exendin-(9-39)对吗啡-CPP形成后VTA区中p-CREB表达的影响 |
| 4.3.5 Exendin-(9-39)对吗啡-CPP形成后VTA区中GABABR表达的影响 |
| 4.3.6 Exendin-(9-39)对吗啡-CPP形成后VTA区中Trx-1 表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读硕士学位期间发表的学术论文及参与的科研项目 |
（9）脑血管内皮源性Cdk5信号缺失通过CXCL1/CXCR2介导癫痫的病理机制及调控研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 内皮细胞特异性敲除CDK5诱导自发性癫痫的产生 |
| 1.1 实验材料及仪器 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 溶液配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 qRT-PCR荧光定量分析 |
| 1.2.2 免疫荧光染色 |
| 1.2.3 血管形态成像 |
| 1.2.4 脑电图的记录 |
| 1.2.5 戊四氮诱导癫痫易感性 |
| 1.2.6 诱导性血管内皮细胞Cdk5 条件敲除小鼠的构建 |
| 1.2.7 腺相关病毒注射 |
| 1.2.8 活体双光子成像技术观察血管结构和血流 |
| 1.2.9 数据统计 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 成功构建血管内皮细胞Cdk5 条件敲除小鼠 |
| 1.3.2 内皮细胞特异性敲除Cdk5 小鼠诱导自发性癫痫的产生 |
| 1.3.3 诱导性敲除和靶向脑血管内皮细胞的病毒介导特异性Cdk5 敲除小鼠具有自发性癫痫表型 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二部分 CDK5特异性敲除导致神经元兴奋性以及星形胶质细胞功能发生变化 |
| 2.1 实验材料及仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 微透析实验 |
| 2.2.2 蛋白质的提取和定量 |
| 2.2.3 蛋白质免疫印迹实验 |
| 2.2.4 树突棘染色实验 |
| 2.2.5 急性脑片的制备 |
| 2.2.6 电生理记录 |
| 2.2.7 腺相关病毒海马脑区注射 |
| 2.2.8 药理学调控实验 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 血管内皮细胞Cdk5 敲除导致神经元的兴奋性增加 |
| 2.3.2 血管内皮细胞Cdk5 条件性敲除导致星形胶质细胞激活 |
| 2.3.3 海马脑区星形胶质细胞过表达GLT1 改善Cdk5 敲除小鼠自发性癫痫表型 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三部分 CDK5 缺失诱导CXCL1 表达参与癫痫的病理机制及调控研究 |
| 3.1 实验材料及仪器 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 BBB通透性检测实验 |
| 3.2.2 透射电镜 |
| 3.2.3 冷损伤模型的建立 |
| 3.2.4 双光子检测白细胞粘附性 |
| 3.2.5 原代脑微血管内皮细胞培养 |
| 3.2.6 转录组测序 |
| 3.2.7 ELISA实验 |
| 3.2.8 原位杂交 |
| 3.2.9 星形胶质细胞培养 |
| 3.2.10 腺相关病毒注射 |
| 3.2.11 海马原代神经元培养 |
| 3.2.12 CXCL1 中和抗体调控实验 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 内皮细胞Cdk5 敲除对小鼠BBB的影响 |
| 3.3.2 内皮细胞特异性敲除Cdk5 导致趋化因子CXCL1 的分泌增加 |
| 3.3.3 基于CXCL1 的药理学调控对改善星形胶质细胞的活性以及癫痫发作的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四部分 基于CXCL1/CXCR2 信号交互的星形胶质细胞GLT1 功能障碍参与介导癫痫发作机制及调控研究 |
| 4.1 实验材料及仪器 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.1.4 溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 不同细胞类型的CXCR2 沉默病毒质粒构建 |
| 4.2.2 CXCR2 沉默病毒海马脑区的注射 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 CXCR2 脑内细胞定位研究 |
| 4.3.2 海马区星形胶质细胞特异性CXCR2 沉默改善敲除小鼠的癫痫表型而神经元特异性CXCR2 沉默对癫痫表型无影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间取得的科研成果 |
（10）胆碱能抗炎通路介导右美托咪定对脑缺血再灌注损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 不同剂量右美托咪定对缺血再灌注损伤大鼠海马神经元细胞的作用 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第二部分 胆碱能抗炎通路介导右美托咪定对脑缺血再灌注损伤的作用机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 外文论文Ⅰ |
| 外文论文Ⅱ |
| 学位论文评阅及答辩情况 |
四、Effect of Thiopental Sodium on the Release of Glutamate and γ-aminobutyric Acid from Rats Prefrontal Cortical Synaptosomes（论文参考文献）
- [1]Transcranial magnetic stimulation in animal models of neurodegeneration[J]. Mohammad Uzair,Turki Abualait,Muhammad Arshad,Woo-Kyoung Yoo,Ali Mir,Reem Fahd Bunyan,Shahid Bashir. Neural Regeneration Research, 2022(02)
- [2]Glutamate and depression:Reflecting a deepening knowledge of the gut and brain effects of a ubiquitous molecule[J]. Adejoke Yetunde Onaolapo,Olakunle James Onaolapo. World Journal of Psychiatry, 2021(07)
- [3]电针调控miR-219a促进血管性认知障碍大鼠内嗅-海马CA1神经环路突触可塑性的机制[D]. 戴雅玲. 福建中医药大学, 2021(01)
- [4]未定带-伏隔核GABA神经通路对大鼠胃功能和摄食的影响及潜在机制研究[D]. 王茜. 青岛大学, 2020(01)
- [5]TRIM32基因敲除对小鼠海马突触可塑性的影响及机制研究[D]. Michael Ntim. 大连医科大学, 2020(02)
- [6]嗜热链球菌产GABA发酵条件优化及prtS基因对GABA合成的影响[D]. 尼娅（SIRIPITAKYOTIN NIYAPHORN）. 哈尔滨工业大学, 2020(01)
- [7]Nervous mechanisms of restraint water-immersion stress-induced gastric mucosal lesion[J]. Dong-Qin Zhao,Hua Xue,Hai-Ji Sun. World Journal of Gastroenterology, 2020(20)
- [8]二甲双胍通过胰高血糖素样肽-1受体抑制吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的作用及机制[D]. 范伟. 昆明理工大学, 2020(05)
- [9]脑血管内皮源性Cdk5信号缺失通过CXCL1/CXCR2介导癫痫的病理机制及调控研究[D]. 刘秀秀. 浙江大学, 2020(08)
- [10]胆碱能抗炎通路介导右美托咪定对脑缺血再灌注损伤的保护作用[D]. 牛莉. 山东大学, 2020(12)