一、植物基因表达诱导剂（论文文献综述）
郝嘉翼,李乐天,张和平,陈永福,金宁一,王茂鹏,李昌[1]（2021）在《表达猪δ冠状病毒S1蛋白植物乳杆菌的构建及验证》文中提出本研究拟构建猪δ冠状病毒（PDCoV）S1蛋白的重组植物乳杆菌。通过PCR方法扩增含1320信号肽和DCpep优化的PDCoV S1基因,利用无缝克隆技术将扩增片段克隆至植物乳杆菌表达载体pSIP411,并将pSIP411电转至宿主乳酸乳球菌NZ3900,扩增后提取质粒并验证,获得重组质粒NZ3900:pSIP411-PDCoV S1。将重组质粒电转入植物乳杆菌LP18,获得重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1,对诱导时间、诱导剂质量浓度、诱导温度等表达条件进行优化,以获得最佳表达条件。结果显示,成功扩增出1 939 bp经过修饰和优化的目的基因PDCoV S1,成功构建了重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1。Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法表明重组蛋白能够在重组植物乳杆菌中表达,最佳表达条件:诱导时间为6 h、诱导剂质量浓度为150μg/L、诱导温度为33℃。本试验成功构建了1株高表达PDCoV S1蛋白的植物乳杆菌,为PDCoV口服候选疫苗的研制奠定基础。
王棚[2]（2021）在《1,4-二恶烷污染地下水共代谢生物修复及机理研究》文中指出1,4-二恶烷在工业活动中常被广泛用于油漆、化妆品、除臭剂和清洁剂等的溶剂,以及氯化溶剂的稳定剂。历史上不当的储存和管理导致二恶烷大规模泄漏到地下水、地表水和垃圾渗滤液等水环境中,然而由于其高度的水溶性和化学稳定性导致其在水环境中持久存在。二恶烷已被美国环保局（USEPA）归类为可能的人类致癌物,并且在2016年“有毒物质控制法”修正案中被列为“高优先级”污染物。共代谢生物修复技术由于其不依赖污染物的浓度和较高的二恶烷去除效率,并最终能达到足够的二恶烷清理目标等特点,可能在去除二恶烷时发挥重要作用。因此,开发基于共代谢生物降解二恶烷的处理技术具有重要意义。四氢呋喃（THF）具有低毒、可生物降解和常与二恶烷共污染等特点,因此开发共代谢生物降解THF与二恶烷的修复技术以处理它们共污染的问题可能是有利的;而糖蜜由于其使用安全、碳源丰富和成本低等特点,可作为一种优良的辅助底物来广泛用于处理被二恶烷污染的地下水。本论文尝试分离分别能以THF或糖蜜为辅助底物降解二恶烷的菌株,并分别探究其对二恶烷的生物降解性能及机理,针对THF与二恶烷共污染和二恶烷污染地下水的生物修复提供有价值的参考菌株,得出以下主要结论:（1）新型Arthrobacter sp.WN18展现出有效共代谢降解THF和二恶烷的性能:（1）分离到一株能共代谢降解二恶烷和THF的短杆状菌株Arthrobacter sp.WN18。在优化的THF与二恶烷的比例（3:1）下,该菌株对二恶烷具有较高的耐受性。此外,WN18在较宽的p H、温度和盐度范围内均能共代谢降解THF和二恶烷。与其他节杆菌属一样,WN18表现出在大气中固氮的能力。此外,WN18在三氯乙烯（TCE）的抑制作用下仍表现出较强的生物活性。（2）鉴定出菌株WN18中编码THF单加氧酶（THF MO/THM）完整的thm基因簇,与先前在假单胞菌和红球菌中报道的thm基因簇具有高度的序列同源性。此外,THF诱导WN18中thm A基因表达的丰度与二恶烷的降解速率呈正相关。结合衍生和酸化方法,质谱分析显示γ-丁内酯和2-羟基乙氧基乙酸（HEAA）分别是THF和二恶烷的关键代谢产物。微宇宙结果表明,THF能有效刺激土着微生物去除地下水中的二恶烷,生物强化菌株WN18的加入进一步增强了二恶烷的去除。综上所述,WN18展现出共代谢生物修复二恶烷污染地下水,尤其是与THF共污染情况下有效性。（2）糖蜜上生长的Acinetobacter sp.M21展现出共代谢降解二恶烷的性能（1）本研究中分离出一株以糖蜜为辅助底物有效降解二恶烷的细菌Acinetobacter sp.M21,而无明显的二恶烷降解滞后现象。在优化的0.3%糖蜜诱导下,M21可耐受高达1,000 mg/L的二恶烷。在较宽的环境条件（p H、温度和盐度）下,菌株M21均能有效降解二恶烷。持续培养M21去除二恶烷的试验表明,缺乏作为诱导剂的糖蜜和细胞衰老可能是导致M21的二恶烷降解活性降低的重要因素。（2）鉴定出在糖蜜诱导下菌株M21中负责二恶烷初始环裂解的thm基因簇,并证实其编码的二恶烷代谢酶主要分泌到胞内降解二恶烷。通过对二恶烷关键代谢产物HEAA的检测,提出了二恶烷的降解途径。微宇宙结果表明,糖蜜能增强土着微生物对二恶烷的去除,M21的注入进一步增强了微宇宙样品中的二恶烷去除效率。这些结果表明,糖蜜和无机营养素的结合可能是一种优良的二恶烷生物修复刺激剂,并在此条件下Acinetobacter sp.M21是一种在原位生物修复二恶烷污染地下水中有前景的和可靠的接种菌。
刚利萍[3]（2021）在《产高效木聚糖酶细菌的筛选及木聚糖酶基因的克隆与表达》文中进行了进一步梳理目前,木聚糖酶广泛应用于各种工业生产中。但该酶在应用过程中也受到了一些因素限制,例如:酶活性较低、耐酸碱性差、热稳定性差等。本文主要通过筛选出产木聚糖酶耐碱菌株,同时利用基因工程方法获得高酶活、适碱性木聚糖酶。该研究主要从以下几个方面:1、主要利用烟草秸秆废弃物作为原材料,从其内筛选出能够高效降解木聚糖菌株,对其进行分离纯化,筛选出四株能够降解木聚糖的菌株,通过刚果红染色透明圈法,发现有2株菌株（1号、4号）的透明圈明显较大,进而可以说明这两株菌株具有高效降解木聚糖的能力,对其进行形态学观察和分子生物学的鉴定,实验结果知:一号菌株是平流层芽孢杆菌（Bacillus stratosphericus）简称为SG-1、四号菌株是沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）简称为SG-4。通过DNS酶活测定,分别对两株菌株降解木聚糖能力强弱做了进一步的探究,也就是对筛选出高效木聚糖降解细菌（SG-1、SG-4）产木聚糖酶活性培养条件的最优筛选,主要是从微生物菌株的生长环境进行探究。利用单因素变量法分别通过从发酵七天、不同温度（℃）、初始p H的不同、不同碳源、不同氮源等方面进行实验探究。实验结果发现菌株SG-1、SG-4产木聚糖酶最佳筛选条件基本上相同,但酶活力存在着不同,结果如下:菌株SG-1、SG-4最佳发酵时间为三天;最佳温度为37℃;最佳C源为木聚糖;最佳N源为蛋白胨;最佳初始p H为11.0;即菌株SG-4具有较高的耐碱性。在最佳条件下,经比较菌株SG-4酶活性最大为640.71 U/m L。2、克隆得到的内切木聚糖酶基因Xyn43,BLAST分析,该木聚糖酶基因全长1538 bp,512个氨基酸序列。经信息学分析该木聚糖酶属于木聚糖酶家族GH43的内切木聚糖酶,该酶理论等电点p I为7.77、分子量54 k Da、蛋白结构比较稳定、属于亲水性蛋白、磷酸化位点有16个。3、通过将重组木聚糖酶基因Xyn43转入到大肠杆菌（E.coli TOP10）中进行高效表达,然而诱导剂浓度不同及诱导时间长短对其表达都有影响,发现在诱导剂浓度0.2 mmol/L,诱导6 h时,表达效果较好。用Ni-NTA亲核层析柱纯化和SDS-PAEG检测。能够得到单一的蛋白条带,经分析与我们预想的结果相同,证明表达成功。通过对重组木聚糖酶酶学性质研究,发现重组木聚糖酶在温度40℃、p H在4-8之间,木聚糖酶活性较好。在金属离子Cu2+下有一定的促进作用,Ba2+下有一定的抑制作用。与不同底物结合时发现对甘蔗渣木聚糖有高效的特异性。
李旭[4]（2021）在《glms与gna1基因协同表达机制研究》文中研究说明氨基葡萄糖（GlcN）和乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）存在范围较广,是各种动植物以及微生物不可或缺的功能糖,还是壳聚糖、甲壳素以及细胞壁的重要组成成分。两者在人们的日常生活中主要应用于保健品以及化妆品中,其市场价值和潜力巨大。目前其工业上的生产方法存在弊端较多,因此利用微生物发酵的方法生产GlcN和GlcNAc成为主流方法。本文中主要探索了氨基葡萄糖合成酶（Glm S）和乙酰氨基葡萄糖合成酶（Gna1）的最佳协同催化比例,利用启动子工程技术实现Glm S和Gna1的协调表达。主要体现在以下几个方面:（1）构建绿色荧光蛋白及Gna1的融合表达质粒pET28a-egfp-gna1,质粒的主要特点是可以利用绿色荧光蛋白的荧光强度作为指示单位分析Gna1的最适表达条件。然后构建了两个含有不同启动子强度的工程质粒p BAD33-glms、pET28a-gna1,将两个质粒共转化同一株菌后,优化以及固定Gna1的最适表达条件后,通过诱导剂浓度调节Glm S蛋白的表达量,结合乙酰氨基葡萄糖的产量以及聚丙烯酰胺凝胶电泳条带浓度关系确定Glm S和Gna1的最适比例为2:5。（2）构建绿色荧光蛋白及GlmS融合表达菌株E.coli pET28a-egfp-glms,利用绿色荧光蛋白荧光强度指示Glm S的表达情况,根据Glm S和Gna1的最适比例,为降低Glm S的表达水平,选取T7启动子中-10区的C-12G-11A-10三个碱基,通过定点饱和突变的技术,构建启动子随机突变库,使用流式细胞仪对突变的菌株筛选,分选不同荧光强度的菌株共74株进行发酵培养,并将荧光强度分别减弱60%、50%、40%等的T7启动子突变菌株测序。（3）构建GlmS和Gna1双启动子协同共表达质粒pRSFDuet-1-glms-gna1。转化到E.coli BL21（DE3）后,构建工程菌株E.coli BL21 pRSFDuet-1-glms-gna1。为了实现Glm S和Gna1两个蛋白之间的协调表达,结合两个蛋白之间协调的比例关系、T7启动子强度对应的碱基序列关系,将工程质粒pRSFDuet-1-glms-gna1中控制Glm S表达的T7启动子序列C-12G-11A-10替换为碱基序列T-12G-11G-10,最终构建质粒pRSFDuet-1-glms-gna1-mutant2,转化到E.coli BL21（DE3）的感受态后,构建双酶协同表达菌株E.coli BL21 pRSFDuet-1-glms-gna1-mutant2,结果发现在最适的发酵条件下,E.coli BL21 pRSFDuet-1-glms-gna1-mutant2的GlcNAc的产量达到1.53 g/L,是未优化菌株以及原始菌株的1.77和36.4倍。
周甜甜[5]（2021）在《高活性Thaxtomin衍生物的异源高效合成》文中进行了进一步梳理世界性的杂草泛滥问题影响许多国家的农业决策,如果不加控制,杂草会使世界粮食产量减少20-40%。尽管世界各地作物生产的性质差异很大,但除草剂还是成为大多数地区控制杂草的主要工具。自上世纪五六十年代合成除草剂应用以来,已经观察到抗除草剂杂草。除草剂的过度使用逐渐成为全世界环境和健康的主要问题。微生物中的天然产物一直是新型药物和生物农药的重要来源,在医疗和农业领域中具有广泛的应用。Thaxtomin化合物是一类具有独特化学结构和良好除草活性的天然产物,来源于多种致病性链霉菌,如疮痂病链霉菌、酸性疮痂病链霉菌、甘薯链霉菌等,具有独特的2,5-二酮哌嗪结构。至今为止,共分离和表征了 thaxtomin家族的11个成员,其中最主要的化合物是thaxtomin A,它是生物除草剂的主要活性成分。纳摩尔浓度的thaxtomin A会导致植物细胞肥大,还会影响正常细胞伸长,其主要作用机制是抑制纤维素生物合成,表现出不低于商业除草剂的植物毒性。目前已经完成thaxtomin A及其衍生物的化学全合成。通过对其除草活性和作物选择性的比较,发现thaxtomin C和des-N-methylthaxtomin C两个衍生物对于单子叶杂草的除草活性明显优于thaxtomin A和已商用的除草剂敌草腈;对小麦和棉花作物几乎无伤害,对花生伤害也相对更低。但其化学合成存在产率较低且存在有害废物等问题,原始产生菌又属于植物病原菌,大规模生产可能会造成不必要的污染,产量较低也限制了其在农业生产中的应用。因此需要定向的产生高活性的衍生物,用于后续的生物农药研发。本研究利用基因簇克隆修饰、合理突变结合异源表达,在安全异源宿主白色链霉菌中实现高活性衍生物thaxtomin C和des-N-methylthaxtomin C的特异性定向高效生产。主要研究结果如下:1、Thaxtomin生物合成基因簇的直接克隆、异源表达及产量提高从Streptomyces 87.22中直接克隆18 kb的thaxtomin生物合成基因簇,并在白色链霉菌J1074中成功异源表达,获得多个产物峰。通过保留时间对比,推测其中在10.5 min的峰为thaxtomin A化合物,产量提高了 14%;在11.3 min的峰为thaxotomin C,产量提高了 1～2倍。通过插入强启动子对调控基因txtR基因进行三种不同修饰,最终发现用双向强启动子kasOp*-57p替换正调控因子txtR基因产量提升最多。相较于未修饰的异源表达菌株,thaxtomin A的产量提升了12%,thaxtomin C的产量提升了 40%;相较于原始菌,thaxtomin A的产量提高了 27%,thaxtomin C的产量则提高了 1.8～3.2倍。而培养基中的纤维二糖是txtR基因表达的诱导剂。在未添加纤维二糖的培养基中,原始菌和直接克隆菌株均不表达,修饰后的菌株则不受纤维二糖控制,产物产量基本不发生变化。2、Thaxtomin高活性衍生物的异源高效合成为了定向高产高活性的 thaxtomin 衍生物 thaxtomin C 和des-N-methylthaxtomin C,在充分认识化合物的生物合成途径的前提下,设计和改造thaxtomin的生物合成途径,先敲除txtC基因,再点突变失活txtA、txtB基因中的甲基转移酶结构域的活性中心。最终,点突变txtA菌株中只产生了thaxtomin C,点突变txtB菌株中则产生了 一个可能的新衍生物des-12-N-methylthaxtomin D 和 des-N-methylthaxtomin C,txtAB基因的菌株成功产生了 des-N-methylthaxtomin C。其中点突变txtA基因的菌株和点突变txtAB基因的菌株均仅有单一产物峰,无杂峰出现。相较于未修饰的异源表达菌株中thaxtominC的产量,点突变txtA基因的菌株中的thaxtomin C产量提高30%。点突变txtB基因的菌株和点突变txtAB基因的菌株中des-N-methylthaxtomin C的产量相当。有无诱导剂对点突变txtB基因的菌株影响较大,有上下25%的产量变化幅度,对点突变txtA基因的菌株和点突变txtAB基因的菌株则无明显影响。3、分离类似thaxtomin生物合成的中间产物发现一个产量较高的原始菌发酵差异峰,有可能影响目标衍生物产量。提取该化合物并解析其结构,发现其与1995年发表的某种无植物毒性、高极性、黄色化合物N-乙酰基-4-硝基色氨酸结构相似,但未确定其构型,推测其可能作为生物合成的旁路中间体,由于L-4硝基色氨酸大量存在且有一定毒性,不能完全被TxtA和TxtB利用,进而发生了乙酰化。后续可以通过协调L-4硝基色氨酸的生物合成水平,提高thaxtomin化合物的产量。Thaxtomin作为纤维素的有效抑制剂,代表了一类新颖有前途的天然除草剂。本研究一定程度提高了化合物的产量,且不再受诱导剂纤维二糖的影响,为后续大量发酵研究提供了依据;点突变NRPS基因中的MT结构域的活性中心获得新型衍生物,且在突变菌株中均为单一峰,有利于高活性衍生物的高效分离纯化,有效推进生物除草剂的开发进展。
沈家琪[6]（2021）在《‘翠冠’梨单性结实诱导剂筛选及赤霉素诱导单性结实坐果分子机理研究》文中研究指明单性结实（Parthenocarpy）是指不经过受精就能发育成果实的现象,且所得到的果实通常无籽,是一项重要的农艺性状。梨树作为我国重要温带果树,在全国各地广泛栽培。但大部分梨树具有自交不亲和性,在生产中需要配置授粉树或者采用人工授粉的方式来保证其产量;其次,梨树开花较早,易遭受春季寒潮影响,导致授粉不良。前人研究表明,外源植物激素或者植物生长调节剂处理能够有效诱导梨单性结实。但是单一施用植物激素如赤霉素会导致果形变长,萼片宿存,在一定程度上影响商品性,因此需改良原有诱导剂配方或开发新型诱导剂。此外,目前对于单性结实的研究仍多集中于幼果膨大后的生理变化及分子机理,对于坐果早期的分子机理及调控模式研究甚少。因此,本研究以浙江地区广泛栽培的‘翠冠’梨为试验材料,进行了大田诱导剂的筛选研究,初步构建了基于幼果转录组数据的早期坐果调控网络,挖掘了参与调控早期坐果的核心基因及转录因子。研究结果如下:1)多胺及硫酸铜处理能够诱导‘翠冠’单性结实,且乙烯抑制剂与赤霉素处理组合能够缓解果形拉长问题。赤霉素与多种乙烯抑制剂的处理组合均能够在一定程度上减小果形指数,缓解果形拉长;且GA4+7与亚精胺处理组合能够在保持较高坐果率的前提下,增加单性结实梨果的可溶性糖含量、可溶性固形物含量;多胺类物质（腐胺、亚精胺）及硫酸铜处理均能够诱导‘翠冠’产生单性结实,且腐胺及硫酸铜处理后得到的单性结实梨果实萼片自然脱落。2)通过转录组分析,初步构建GA4+7诱导的‘翠冠’梨单性结实坐果早期调控网络。转录组测序共获得219.8Gb原始数据,使用‘翠冠’梨作为参考基因组且平均比对率高达87.76%。共有32512个基因发生表达,筛选后得到了26108个差异表达基因。WGCNA分析共得到了26个不同表达趋势的模块,将其分为GA上调类模块及清水对照上调类模块。通过KEGG通路富集分析得到:GA上调类模块基因主要富集在遗传信息传递、RNA转运、蛋白酶体过程、三羧酸循环（TCA-cycle）、氨基酸生物合成、糖酸代谢等过程。清水对照上调类模块中差异表达基因则主要富集在泛素化降解过程、转录过程、质膜转运、多种酶的生物合成过程等。初步构建了基于GO富集通路的‘翠冠’梨单性结实早期坐果调控网络及筛选了坐果早期上调模块中的核心基因。3)分析鉴定可能参与调控GA4+7诱导的‘翠冠’梨单性结实坐果早期的核心转录因子。共鉴定得到了2005个差异表达转录因子,其中成员数目最多的转录因子家族依次为AP2/ERF、MYB、bHLH、NAC和C2H2。清水处理第14天时占绝对优势的转录因子家族数量最多。我们共鉴定得到了包括植物激素合成与信号转导、细胞周期及细胞膨大、细胞壁水解及重构、光合作用及糖类合成转运在内的10条坐果相关调控通路的关键基因,并通过MEME在线工具富集并预测了这些通路中关键基因启动子上的转录因子结合位点,结合WGCNA手段分析得到了如HB-BELL、MADS-box等可能参与调控单性结实坐果早期的关键转录因子。
陈秉松[7]（2021）在《姜黄素及其类似物的糖基化衍生物的生物转化》文中研究说明姜黄是常用传统中药,收载于历版《中华人民共和国药典》中,其安全性好,药理作用广泛,在中国乃至亚洲地区有着广泛的应用历史。姜黄的主要成分为姜黄素（curcumin）,现代药理研究表明姜黄素具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、保肝、免疫调节等多方面的药理作用。但是极性小、不溶于水的性质,是姜黄素成药和临床应用的重要限制因素。由于其生物利用度低、吸收差,在体内的代谢产物主要为其Ⅱ相代谢产物葡萄糖醛酸化姜黄素,长久以来姜黄素的体内药效物质形式一直存在争论。因此探究比较姜黄素原型药物和葡萄糖醛酸化姜黄素的药理活性是确定姜黄素体内药效物质形式的重要环节。作为自然界中广泛存在的糖苷类化合物的生源合成途径,葡萄糖醛酸化和葡萄糖基化是增加母体化合物溶解度的有效方法。构建生物转化体系,对姜黄素进行葡萄糖醛酸化和葡萄糖基化生物转化,是研究姜黄素体内药效物质形式、改善理化性质、提高成药性的有效手段。本研究在大肠杆菌、酿酒酵母菌等工程菌中构建外源蛋白表达体系,构建了基于UGT1A8及UGT74An3的葡萄糖醛酸化、葡萄糖基化生物转化菌株,采用全细胞催化、无细胞体系催化等方法,研究姜黄素的葡萄糖醛酸化和葡萄糖基化生物转化条件。具体研究内容和结果如下:1.大肠杆菌中葡萄糖醛酸化体系的构建本章通过选择不同载体,构建葡萄糖醛酸转移酶和UDP葡萄糖脱氢酶表达体系;利用分子伴侣、麦芽糖结合蛋白等辅助手段,帮助亲脂性的人源葡萄糖醛酸转移酶UGT1A8表达、折叠;通过优化蛋白表达条件增加两种目的蛋白在大肠杆菌中的表达量;使用CRISPR-Cas9技术,无痕敲除大肠杆菌染色体上的UDP葡萄糖醛酸脱氢酶基因arn A,优化生物转化底物UDP葡萄糖醛酸的代谢流向,增加糖源供给;使用多种多酚类底物,探究UGT1A8底物谱;尝试多种生物转化条件,利用全细胞催化和无细胞体系催化底物进行葡萄糖醛酸化,排除溶剂、温度、金属离子、底物转运等条件对底物生物转化的影响。最终没有检测出葡萄糖醛酸化产物,可能是由于来源于真核生物、定位于内质网内腔的UGT1A8蛋白不能在缺少必要细胞器的原核生物中正确折叠。2.酿酒酵母中葡萄糖醛酸化体系的构建在酿酒酵母中构建葡萄糖醛酸转移酶和UDP葡萄糖脱氢酶表达体系,以解决真核来源的UGT1A8蛋白在原核生物中不能正确折叠的问题。利用自主复制型质粒,诱导目的蛋白表达,对姜黄素、四氢姜黄素、茜素、伞形酮、白藜芦醇、柚皮素、大黄素、大黄酸等多种底物进行葡萄糖醛酸化生物转化实验。最终检测出葡萄糖醛酸化茜素的产生,表明酵母葡萄糖醛酸化生物转化体系构建成功,但姜黄素的葡萄糖醛酸化产物在该生物转化体系中未检测到。3.葡萄糖基化姜黄素及其类似物的生物转化在大肠杆菌中构建葡萄糖基化生物转化体系,通过异源表达来自长春花的葡萄糖基转移酶,对姜黄素及其还原产物进行葡萄糖基化生物转化。本实验中首次发现酿酒酵母对四氢姜黄素的还原活性,利用酿酒酵母制备六氢姜黄素,为葡萄糖基化生物转化奠定物质基础。在本实验中首次分离并鉴定了葡萄糖基化四氢姜黄素和葡萄糖基化六氢姜黄素,成功制备葡萄糖基化姜黄素,发现构建的生物转化体系对二氢姜黄素、八氢姜黄素也具有葡萄糖基化催化活性。为解决姜黄素水溶性差的问题探索了新的方案,为提高姜黄素的生物利用度、研究葡萄糖基化类姜黄素的药理活性奠定了物质基础。结论:1.在酿酒酵母中异源表达人源葡萄糖醛酸转移酶UGT1A8和鼠源UDP-葡萄糖脱氢酶Ugd,检测到葡萄糖醛酸化茜素的生成,成功在酿酒酵母中构建葡萄糖醛酸化生物转化体系。2.在大肠杆菌中异源表达来自长春花的葡萄糖基转移酶,通过全细胞催化的生物转化,首次制备并分离鉴定葡萄糖基化四氢姜黄素和葡萄糖基化六氢姜黄素。
李秀清[8]（2021）在《重组酵母菌生物合成共轭亚油酸单体的研究》文中进行了进一步梳理共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid,CLA）是一组具有共轭双键的十八碳二烯酸的统称,其中最具生理活性的两种同分异构体为c9,t11-CLA和t10,c12-CLA,且两种同分异构体分别具有不同的生理功能。目前化学合成的CLA多为多种同分异构体的混合物,随着对共轭亚油酸单体的研究逐渐深入,近年来CLA单一异构体的生物合成受到广泛关注。生物合成法中原始菌发酵产量较低且培养条件严格,而利用基因工程将CLA合成相关基因进行异源表达可以解决原始菌发酵存在的一些问题。来源于短双歧杆菌CCFM 683的亚油酸异构酶（Bifidobacterium breve isomerase,BBI）是目前报道的细菌中唯一序列已知的能够通过单酶催化合成c9,t11-CLA的亚油酸异构酶,BBI在异源表达过程中存在表达量过低的问题,为解决上述问题,本文将构建不同的BBI重组菌,探究了BBI表达的宿主菌及表达形式,为生物法合成c9,t11-CLA单体提供了研究基础。来源于痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶（Propionibactereium acnes isomerase,PAI）能够通过单酶催化合成t10,c12-CLA,PAI在异源表达过程中主要存在易形成包涵体、表达量低的问题,本文将构建PAI分泌表达重组菌及可溶性表达重组菌,这为实现PAI的高效表达提供了新的方向。本文的主要研究结果如下:1.为实现BBI的高效表达,分别构建BBI酿酒酵母重组菌及毕赤酵母重组菌。分析各重组菌的蛋白表达水平及酶活水平,确定了BBI最适宿主菌及最适His-tag位置,探究了其静息细胞合成c9,t11-CLA的能力及BBI的粗酶酶学特性。首先,以酿酒酵母为宿主菌,构建了酿酒酵母BBI重组菌,对重组菌进行蛋白表达水平分析,未检测到特异性条带,对重组菌进行活性检测,检测到底物转化率仅为5.12%。说明BBI在酿酒酵母中实现异源表达且具有催化活性,但蛋白表达量极低。其次,以毕赤酵母为宿主菌,成功构建了三株不同形式的毕赤酵母BBI重组菌,分析不同重组菌的蛋白表达水平及酶活水平,发现毕赤酵母适合BBI异源表达,其中C端带有His-tag的重组菌目的蛋白表达量最高且酶活性最高。以毕赤酵母BBI重组菌静息细胞作为催化剂,添加25g/L的亚油酸（Linoleic acid,LA）、反应3 h后,c9,t11-CLA的产量为15.88 g/L,转化率可达63.50%,这是目前研究报道利用静息细胞产c9,t11-CLA单体的最高产量。对毕赤酵母BBI重组菌的粗酶酶学特性进行研究,结果表明BBI的最适反应温度为37℃,最适p H为8.0,而不同温度条件下,酶稳定性有明显差异;且多数金属离子对酶活存在不同程度的抑制作用。2.为实现PAI的高效表达,以毕赤酵母为宿主菌,分别构建了PAI分泌表达重组菌及可溶性表达重组菌。分析了重组菌蛋白表达水平及酶活水平,得到了一株可溶性表达PAI的重组菌,并进一步优化其蛋白表达水平,探究了重组菌静息细胞催化生成t10,c12-CLA能力。首先,构建了带有α因子信号肽的PAI毕赤酵母分泌表达重组菌株。对重组菌的蛋白表达水平进行分析,发现PAI重组蛋白未表达,对重组菌的蛋白活性进行检测,并未检测到t10,c12-CLA的生成,结果表明PAI未实现在毕赤酵母中的分泌表达。其次,构建了PAI胞内可溶性表达毕赤酵母重组菌,对重组蛋白表达水平及活性进行分析,发现PAI实现了异源表达且具有活性。进一步对重组菌进行蛋白表达水平的优化,得到最佳诱导时间为24 h、最佳诱导剂甲醇体积分数为2%,以重组菌静息细胞作为全细胞催化剂,添加25 g/L的LA、反应40 h后,t10,c12-CLA的产量为8.39 g/L,转化率可达33.56%。
朱国庆[9]（2021）在《细叶百合铁还原氧化酶（FRO）对NaHCO3胁迫的应答》文中研究表明盐碱胁迫作为抑制植物生长发育的主要因素受到广泛关注。细叶百合具有较强耐盐碱能力,是耐盐碱机制研究中比较有研究价值的植物材料。细叶百合鳞茎经过20 mM NaHCO3处理后的转录组测序结果表明,铁还原氧化酶基因的表达量与未处理植株相比显着增加。为了探索铁还原氧化酶对盐碱胁迫的应答,了解铁还原氧化酶基因家族的功能,本研究成功克隆出LpFRO7和LpFRO8两个基因,进行了同源序列比对和进化树分析。利用qPCR技术分析了LpFRO7和LpFRO8基因在不同盐碱胁迫下的表达模式。分别构建LpFRO7和LpFRO8的蛋白表达载体,探索出两个蛋白的最佳诱导条件并纯化蛋白;分析了蛋白被诱导表达的菌液在多个NaHCO3处理浓度下的表达模式。构建LpFRO7、LpFRO8基因的植物表达载体,分别获得了这两个基因的转基因烟草和过表达的细叶百合植株,测定转基因植株铁还原氧化酶活性、叶绿素含量、呼吸速率、铁含量等生理指标,观察不同生长时期的表型变化和气孔大小。所有研究结果表明,LpFRO7、LpFRO8基因在植物中的表达增加了植物对NaHCO3的耐受性。具体研究结果如下:1.根据细叶百合转录组的测序结果,在细叶百合鳞茎中成功克隆出LpFRO7和LpFRO8基因。比较不同物种间FRO氨基酸序列发现,LpFRO7和LpFRO8与其他物种FRO蛋白的相似性较高;构建系统发育进化树表明,LpFRO7蛋白与小果野蕉FRO7亲缘关系较近,LpFRO8蛋白与芦笋FRO8亲缘关系较近。2.qPCR结果显示LpFRO7和LpFRO8基因均在细叶百合的叶片中表达量最高。在不同胁迫处理情况下,LpFRO7和LpFRO8基因表达量受处理时间变化明显,在NaHCO3处理24h和NaCl处理12 h时,LpFRO7和LpFRO8基因表达量达到最高值;而LpFRO7基因在H2O2处理24 h时表达量最高,LpFRO8在H2O2处理12 h时表达量最高。3.构建pQE-LpFRO7和pQE-LpFRO8蛋白表达载体,结果显示LpFRO7蛋白在1 mM IPTG作诱导剂,诱导温度为28℃时表达量最高;LpFRO8蛋白在1 mM IPTG时被大量诱导表达,在18-37℃之间受温度影响较小;两个蛋白被诱导表达的菌液在NaHCO3处理下,菌体生长与对照相比均表现出更好的NaHCO3耐受性。分别纯化出LpFRO7和LpFRO8蛋白,为下一步实验奠定基础。4.构建pBI121-LpFRO7和pBI1R21-LpFO8植物表达载体,利用农杆菌介导的遗传转化技术,经过筛选和鉴定得到LpFRO7、LpFRO8转基因烟草和过表达的细叶百合植株。测定NaHCO3处理下转基因植株铁还原氧化酶活性、叶绿素含量、呼吸速率和铁含量,以及观察转基因烟草气孔和不同生长时期植物表型的变化,结果表明两个基因的转基因植株与野生型相比均具有更好的NaHCO3耐受性。
杨波[10]（2021）在《重组大肠杆菌全细胞合成覆盆子酮的研究》文中研究说明覆盆子酮是覆盆子果中的主要香气成分,是一种重要的香精香料单体,在食用香精、化妆品、农业杀虫剂、医药等方面有着广泛的应用。目前覆盆子酮的生产主要采用化学法,随着人们对天然香精香料的日益青睐,通过生物技术法合成覆盆子酮深受关注。本文研究了在大肠杆菌中共表达姜油酮合成酶（RiRZS1）和葡萄糖脱氢酶（SyGDH）,利用全细胞催化合成覆盆子酮,并对合成覆盆子酮的直接前体对羟基亚苄基丙酮的生物合成做了初步研究。具体内容如下:（1）构建共表达RiRZS1与SyGDH的重组大肠杆菌,将来源于悬钩子（Rubus idaeus）的覆盆子酮/姜油酮合成酶Ri RZS1和来源于嗜酸热原体（Thermoplasma acidophilum）的葡萄糖脱氢酶SyGDH基因进行密码子优化,构建不同的共表达质粒,并分别导入宿主E.coliBL21（DE3）中,构建不同的重组菌YB-1～YB-10,以重组菌作为全细胞催化剂,在底物（对羟基亚苄基丙酮）浓度为10 g·L-1,辅底物（葡萄糖）浓度为9 g·L-1的条件下进行催化反应,其中YB-9（E.coli BL21/p RSF-sygdh-rirzs1）产覆盆子酮浓度最高,达到3.15 g·L-1。（2）优化重组菌YB-9合成覆盆子酮的工艺条件。单因素实验得出:YB-9的培养诱导条件为:当OD600为0.6-0.9时,加入终浓度为0.8 mmol·L-1的诱导剂IPTG,20℃,220 r·min-1的摇床中培养至OD600为14左右时离心收集细胞。全细胞催化的反应条件为:菌体用量5%（m/v,dcw）,底物与辅底物摩尔比为1:2.5,含5 mmol·L-1金属离子Mg2+的p H 5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,40℃反应2-3 h。其中,当底物为10 g·L-1,辅底物为27 g·L-1时,覆盆子酮浓度最高达到9.89 g·L-1,转化率为97.6%,时空转化效率为4.94 g·（L·h）-1。（3）对催化反应的产物进行提取鉴定。底物完全转化的反应液离心去除细胞后,上清液用乙酸乙酯萃取,40℃真空浓缩,并用水重结晶,得到的晶体经HPLC测定其纯度达到95%,经核磁共振氢谱鉴定,确定提取物为覆盆子酮。（4）对底物对羟基亚苄基丙酮的生物合成进行初步研究。过表达大肠杆菌来源的醛缩酶基因deo C,构建重组大肠杆菌YB-11（E.coli BL21/p RSF-deo C-rirzs1）,在添加底物对羟基苯甲醛和丙酮的TB培养基中发酵,可检测到42 mg·L-1覆盆子酮生成。此外,在利用黑曲霉（Aspergillus niger）来源的脂肪酶A为催化剂以对羟基苯甲醛和丙酮为底物,在水相体系40℃下脂肪酶催化反应可获得75.96 mg·L-1对羟基亚苄基丙酮,而在正丙醇/水体系中获得了589 mg·L-1对羟基亚苄基丙酮。说明底物对羟基亚苄基丙酮可以用生物法合成。上述研究结果为利用生物法合成覆盆子酮开辟了新的途径。
二、植物基因表达诱导剂（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、植物基因表达诱导剂（论文提纲范文）
（1）表达猪δ冠状病毒S1蛋白植物乳杆菌的构建及验证（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 质粒及菌株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 目的基因的设计 |
| 1.4 引物的设计及合成 |
| 1.5 PDCoV S1基因扩增 |
| 1.6 重组乳杆菌表达质粒的构建及鉴定 |
| 1.7 重组乳杆菌的诱导表达 |
| 1.8 外源基因表达的Western blot鉴定 |
| 1.9 外源基因表达的间接免疫荧光检测 |
| 1.10 外源基因表达的流式细胞分析 |
| 1.11 重组乳杆菌表达PDCoV S1蛋白优化 |
| 2 结果 |
| 2.1 目的基因的设计与合成 |
| 2.2 目的基因的扩增 |
| 2.3 重组表达质粒的构建与鉴定 |
| 2.4 外源基因表达的Western blot 鉴定 |
| 2.5 外源基因表达的免疫荧光分析 |
| 2.6 外源基因表达的流式细胞分析 |
| 2.7 重组乳杆菌表达条件的优化 |
| 3 讨论 |
（2）1,4-二恶烷污染地下水共代谢生物修复及机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 1,4-二恶烷(二恶烷)的理化特性及应用 |
| 1.2 二恶烷的污染现状、危害及国内外应对策略 |
| 1.2.1 二恶烷的污染现状 |
| 1.2.2 二恶烷的危害 |
| 1.2.3 国内外管控标准 |
| 1.3 二恶烷处理技术的研究现状 |
| 1.3.1 物理处理 |
| 1.3.2 化学处理 |
| 1.3.3 生物修复 |
| 1.4 二恶烷降解酶及其产物 |
| 1.4.1 单加氧酶(MO)催化二恶烷的降解 |
| 1.4.2 生物降解产物 |
| 1.5 生物去除二恶烷的检测、评价技术 |
| 1.5.1 检测方法 |
| 1.5.2 荧光定量PCR |
| 1.5.3 群落结构分析 |
| 1.5.4 其他评价技术 |
| 1.6 研究目的意义 |
| 1.7 研究内容与技术路线、创新点 |
| 1.7.1 研究内容 |
| 1.7.2 技术路线 |
| 1.7.3 创新点 |
| 第2章 共代谢THF和二恶烷降解菌的分离鉴定及降解特性 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料与仪器 |
| 2.2.2 菌株的富集与分离 |
| 2.2.3 菌株的表征与鉴定 |
| 2.2.4 菌株的降解稳定性 |
| 2.2.5 THF浓度对二恶烷降解效率的影响 |
| 2.2.6 菌株WN18的二恶烷浓度耐受性 |
| 2.2.7 TCE对WN18降解THF和二恶烷的影响 |
| 2.2.8 菌株WN18的捕氮能力 |
| 2.2.9 菌株WN18的环境适应性 |
| 2.2.10 菌株的底物生长谱 |
| 2.2.11 检测方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 菌株的分离与鉴定 |
| 2.3.2 WN18持续共代谢降解THF和二恶烷的能力 |
| 2.3.3 THF浓度对WN18降解二恶烷的影响 |
| 2.3.4 菌株对二恶烷浓度的耐受力 |
| 2.3.5 TCE对THF和二恶烷生物降解效率的影响 |
| 2.3.6 菌株WN18的固氮能力 |
| 2.3.7 菌株WN18的环境适应性 |
| 2.3.8 菌株WN18的底物生长谱 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 共代谢THF和二恶烷降解的机理及微宇宙研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验仪器与试剂 |
| 3.2.2 THF/二恶烷降解基因分析 |
| 3.2.3 THF调节thm基因簇的表达 |
| 3.2.4 二恶烷和THF的中间产物分析 |
| 3.2.5 生物修复二恶烷微宇宙研究 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 WN18中负责THF和二恶烷降解的基因结构 |
| 3.3.2 THF诱导thm基因降解二恶烷 |
| 3.3.3 THF和二恶烷代谢途径 |
| 3.3.4 二恶烷的生物修复效果 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 糖蜜诱导二恶烷降解菌株的分离鉴定及降解特性 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂耗材 |
| 4.2.2 菌株的筛选与鉴定 |
| 4.2.3 二恶烷浓度耐受性及其在不同糖蜜浓度下的降解 |
| 4.2.4 二恶烷连续降解的抑制因素 |
| 4.2.5 分离菌在不同条件下的适应性 |
| 4.2.6 分离菌的底物生长谱 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 菌株的分离鉴定 |
| 4.3.2 糖蜜浓度对二恶烷生物降解的影响 |
| 4.3.3 二恶烷的浓度耐受性 |
| 4.3.4 影响二恶烷持续降解的因素 |
| 4.3.5 M21的环境适应性 |
| 4.3.6 M21的底物生长谱 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 糖蜜诱导二恶烷生物降解的机理及微宇宙研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 功能基因的鉴定 |
| 5.2.2 降解酶的定位 |
| 5.2.3 厌氧降解实验 |
| 5.2.4 中间产物分析 |
| 5.2.5 微宇宙分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 关键代谢基因的鉴定 |
| 5.3.2 二恶烷降解酶的定位 |
| 5.3.3 厌氧条件下的二恶烷降解能力 |
| 5.3.4 二恶烷的降解途径 |
| 5.3.5 微宇宙中的二恶烷去除效果 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 结论与建议 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 建议 |
| 参考文献 |
| 附录1:M21中thm基因簇核苷酸序列测序结果 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）产高效木聚糖酶细菌的筛选及木聚糖酶基因的克隆与表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 引言 |
| 1.1 半纤维素和木聚糖 |
| 1.1.1 半纤维素及其组成 |
| 1.1.2 木聚糖 |
| 1.2 木聚糖酶 |
| 1.2.1 木聚糖酶概述 |
| 1.2.2 木聚糖酶酶系 |
| 1.2.3 木聚糖酶的分类 |
| 1.2.4 木聚糖酶结构 |
| 1.2.5 木聚糖酶性质 |
| 1.2.6 木聚糖酶催化机制 |
| 1.2.7 木聚糖酶的应用 |
| 1.2.8 木聚糖酶的来源 |
| 1.2.9 木聚糖酶基因的克隆及表达 |
| 1.3 本研究的背景及目的 |
| 1.3.1 木聚糖酶国内外的研究现状 |
| 1.3.2 研究目的、意义及创新点 |
| 1.4 研究技术路线 |
| 第2章 木聚糖酶高效降解菌的筛选与鉴定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌种来源 |
| 2.1.2 仪器(见附录一) |
| 2.1.3 培养基 |
| 2.1.4 主要试剂及试剂配制方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 富集培养 |
| 2.2.2 高效木聚糖降解菌的初筛 |
| 2.2.3 高效木聚糖降解菌鉴定 |
| 2.2.4 DNS法测定木聚糖酶活性 |
| 2.3 实验结果分析 |
| 2.3.1 高效木聚糖降解菌的初筛 |
| 2.3.2 木糖标准曲线 |
| 2.3.3 两株菌株 DNS 法测定木聚糖酶活结果与分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 木聚糖酶基因的分析 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.1.1 木聚糖酶基因序列分析 |
| 3.1.2 木聚糖酶的亲水性/疏水性分析 |
| 3.1.3 木聚糖酶的磷酸化位点预测 |
| 3.1.4 木聚糖酶的糖基化分析 |
| 3.1.5 木聚糖酶的信号肽预测 |
| 3.1.6 木聚糖酶的二级和三级结构的预测 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 木聚糖酶基因序列分析 |
| 3.2.2 木聚糖酶的亲水性/疏水性 |
| 3.2.3 木聚糖酶的磷酸化位点预测 |
| 3.2.4 木聚糖酶的糖基化分析 |
| 3.2.5 木聚糖酶的信号肽预测 |
| 3.2.6 木聚糖酶的跨膜区域的预测 |
| 3.2.7 木聚糖酶结构的预测 |
| 3.3 本章小结 |
| 第4章 木聚糖酶基因的克隆表达及重组酶的性质研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验菌株、质粒及表达宿主菌种 |
| 4.1.2 引物合成及测序 |
| 4.1.3 实验试剂与药品 |
| 4.1.4 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 木聚糖降解酶相关部分序列的克隆 |
| 4.2.2 重组质粒的构建 |
| 4.2.3 重组菌的生长研究 |
| 4.2.4 木聚糖酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 |
| 4.2.5 诱导时间不同对重组蛋白表达量的影响 |
| 4.2.6 诱导剂IPTG浓度对重组蛋白表达量的影响 |
| 4.2.7 重组蛋白的分离纯化 |
| 4.2.8 重组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳检测 |
| 4.2.9 Bradford法蛋白浓度测定 |
| 4.2.10 重组蛋白的木聚糖酶的酶学性质研究 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 木聚糖酶基因克隆 |
| 4.3.2 重组木聚糖菌株生长状况 |
| 4.3.3 重组菌株诱导表达及其酶活测定 |
| 4.3.4 重组木聚糖酶蛋白分离纯化 |
| 4.3.5 蛋白含量测定(卡马斯亮蓝法) |
| 4.4 小结与讨论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 实验展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在校期间公开发表论文及着作情况 |
（4）glms与gna1基因协同表达机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 概述 |
| 1.1.1 氨基葡萄糖简介 |
| 1.1.2 国内外研究现状 |
| 1.1.3 应用领域 |
| 1.2 氨基葡萄糖生产代谢途径 |
| 1.3 GlmS和 Gna1 介绍 |
| 1.4 启动子的改造 |
| 1.4.1 启动子的结构功能 |
| 1.4.2 启动子的应用 |
| 1.4.3 启动子的改造策略 |
| 1.5 研究背景及内容 |
| 1.5.1 研究背景 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第2章 glms与 gna1 基因诱导及分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 菌株与质粒 |
| 2.2.2 仪器 |
| 2.2.3 试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 基因组与质粒的获得 |
| 2.3.2 工程质粒pET28a-gna1 的构建 |
| 2.3.3 工程质粒pBAD33-glms的构建 |
| 2.3.4 工程质粒pBAD33-ebfp-gna1 的构建 |
| 2.3.5 工程质粒pET28a-egfp-gna1 的构建 |
| 2.3.6 工程质粒的转化以及验证 |
| 2.3.7 诱导表达荧光蛋白 |
| 2.3.8 双质粒最适诱导条件搭配 |
| 2.3.9 乙酰氨基葡萄糖检测方法 |
| 2.3.10 蛋白的诱导表达 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 质粒构建方案以及基因组的提取 |
| 2.4.2 提取pET28a和 pBAD33 质粒 |
| 2.4.3 构建pET28a-gna1 |
| 2.4.4 构建pBAD33-glms |
| 2.4.5 构建pBAD33-ebfp-gna1 |
| 2.4.6 构建pET28a-egfp-gna1 |
| 2.4.7 荧光蛋白诱导表达及表征结果 |
| 2.4.8 双质粒转化验测序及表达 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 不同强度T7 启动子筛选研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 菌株与质粒 |
| 3.2.2 试剂 |
| 3.2.3 仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 工程质粒pET28a-egfp-glms的构建 |
| 3.3.2 T7 突变体的构建 |
| 3.3.3 流式细胞仪高通量筛选 |
| 3.3.4 突变菌株的荧光检测 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 构建pET28a-egfp-glms |
| 3.4.2 T7 突变体的验证 |
| 3.4.3 流式细胞仪的高通量筛选 |
| 3.4.4 突变菌株的荧光检测 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 Glm S-Gna1 协同表达及发酵优化 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 菌株与质粒 |
| 4.2.2 试剂与培养基 |
| 4.2.3 仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 E.coli BL21 pRSFDuet-1-glms-gna1 菌株的构建 |
| 4.3.2 E.coli BL21 pRSFDuet-1-glms-gna1-mutant菌株的构建 |
| 4.3.3 碳源、温度、pH、诱导浓度对氨糖发酵的影响 |
| 4.3.4 工程菌株发酵生产 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 E.coli BL21 pRSFDuet-1-glms-gna1 菌株的构建 |
| 4.4.2 E.coli BL21 pRSFDuet-1-glms-gna1-mutant菌株的构建 |
| 4.4.3 碳源、温度、pH对氨糖发酵的影响 |
| 4.4.4 发酵结果 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要科研成果 |
（5）高活性Thaxtomin衍生物的异源高效合成（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 Thaxtomin家族天然产物简介 |
| 1.1.1 Thaxtomin家族研究进展 |
| 1.1.2 Thaxtomin的除草剂活性 |
| 1.1.3 Thaxtomin的合成途径 |
| 1.1.4 新型thaxtomin衍生物生物合成机制 |
| 1.2 立题依据 |
| 1.2.1 立题依据及意义 |
| 1.2.2 研究内容及技术路线 |
| 第二章 Thaxtomin生物合成基因簇的直接克隆、异源表达及产量提高 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株和质粒 |
| 2.1.2 培养基、抗生素及诱导剂 |
| 2.1.3 实验仪器及试剂 |
| 2.1.4 DNA合成及测序 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 Thaxtomin基因簇的直接克隆 |
| 2.2.2 Thaxtomin基因簇的修饰 |
| 2.2.3 Thaxtomin基因簇异源表达 |
| 2.2.4 发酵及化合物提取 |
| 2.3 实验结果与分析 |
| 2.3.1 Thaxtomin基因簇的直接克隆 |
| 2.3.2 Thaxtomin基因簇的修饰 |
| 2.3.3 Thaxtomin基因簇异源表达 |
| 2.4 总结与讨论 |
| 第三章 Thaxtomin高活性衍生物的异源高效合成 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 菌株和质粒 |
| 3.1.2 DNA合成及测序 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 Thaxtomin高活性衍生物的定向合成 |
| 3.2.2 Thaxtomin高活性衍生物的异源表达 |
| 3.2.3 发酵及化合物提取 |
| 3.2.4 产物的分离纯化及结构鉴定 |
| 3.3 实验结果与分析 |
| 3.3.1 Thaxtomin高活性衍生物的定向合成 |
| 3.3.2 Thaxtomin高活性衍生物的异源表达 |
| 3.3.3 产物鉴定 |
| 3.4 总结与讨论 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 总结 |
| 4.2 展望 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学位论文评闽及答辩情况表 |
（6）‘翠冠’梨单性结实诱导剂筛选及赤霉素诱导单性结实坐果分子机理研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 单性结实的定义及其机理 |
| 1.2 单性结实的诱导及生产应用 |
| 1.2.1 植物激素及植物生长调节剂诱导单性结实 |
| 1.2.2 环境因素诱导单性结实 |
| 1.2.3 机械伤诱导单性结实 |
| 1.3 植物生长物质对单性结实的诱导及分子机理研究进展 |
| 1.3.1 赤霉素类对单性结实的诱导及其分子机理研究进展 |
| 1.3.2 生长素类对单性结实的诱导及其分子机理研究进展 |
| 1.3.3 细胞分裂素类对单性结实的诱导及其分子机理研究进展 |
| 1.3.4 乙烯对单性结实的抑制效应及其分子机理研究进展 |
| 1.3.5 多胺类及其它化学物质对单性结实的诱导 |
| 1.3.6 激素间相互作用 |
| 1.4 坐果早期分子机制研究进展 |
| 1.4.1 细胞分裂、细胞扩张与细胞壁重塑调控果实早期发育 |
| 1.4.2 源库代谢与果实早期发育 |
| 1.4.3 转录因子调控单性结实的研究进展 |
| 1.5 立题依据及意义 |
| 2 不同诱导剂对‘翠冠’梨单性结实的诱导效果评价 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料与处理 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.2.1 果实单果重测定 |
| 2.1.2.2 果实横纵径及果心横径测定 |
| 2.1.2.3 果实硬度测定 |
| 2.1.2.4 果实可溶性固形物测定 |
| 2.1.2.5 果实糖酸提取 |
| 2.1.2.6 果实可溶性糖及有机酸测定 |
| 2.1.3 试验数据分析及绘图 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同诱导剂对‘翠冠’坐果率的影响 |
| 2.2.2 不同诱导剂对‘翠冠’果实外观品质的影响 |
| 2.2.2.1 不同诱导剂对‘翠冠’果实形态及种子的影响 |
| 2.2.2.2 不同诱导剂对‘翠冠’果实横纵径及形态的影响 |
| 2.2.2.3 不同诱导剂对‘翠冠’果实单果重的影响 |
| 2.2.3 不同诱导剂对‘翠冠’果实内在品质的影响 |
| 2.2.3.1 不同诱导剂对‘翠冠’果实硬度的影响 |
| 2.2.3.2 不同诱导剂对‘翠冠’果实可溶性固形物的影响 |
| 2.2.3.3 不同诱导剂对‘翠冠’果实可溶性糖的影响 |
| 2.2.3.4 不同诱导剂对‘翠冠’果实有机酸的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 3 GA诱导‘翠冠’梨单性结实早期调控网络的构建与分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.2.1 RNA提取、纯化和质量检测 |
| 3.1.2.2 转录组文库的构建与测序 |
| 3.1.2.3 测序数据比对参考基因组及功能注释 |
| 3.1.2.4 基因表达量、样品相关性分析及差异表达基因识别 |
| 3.1.2.5 PCA主成分分析、GO富集分析及WGCNA网络构建 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 GA诱导的‘翠冠’梨转录组基本情况分析 |
| 3.2.2 GA诱导‘翠冠’梨单性结实转录组中的基因表达情况 |
| 3.2.3 基于GA诱导的‘翠冠’梨单性结实转录本的坐果早期调控网络构建 |
| 3.2.3.1 基于GA诱导的‘翠冠’梨单性结实转录本的WGCNA网络构建 |
| 3.2.3.2 坐果早期模块中差异表达基因KEGG通路分析 |
| 3.2.3.3 GA上调类模块GO富集通路网络的构建及分析 |
| 3.2.3.4 GA上调类模块中核心基因的挖掘 |
| 3.3 讨论 |
| 4 GA诱导‘翠冠’梨单性结实坐果早期的核心转录因子筛选 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.1.2.1 RNA提取、纯化和质量检测 |
| 4.1.2.2 转录组文库的构建与测序 |
| 4.1.2.3 测序数据比对参考基因组及功能注释 |
| 4.1.2.4 差异表达基因中转录因子识别及Mfuzz聚类分析 |
| 4.1.2.5 单性结实坐果有关通路关键基因识别及热图绘制 |
| 4.1.2.6 坐果相关通路基因启动子保守元件富集分析 |
| 4.1.2.7 实时荧光定量PCR(q RT-PCR)试验 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 GA诱导的单性结实‘翠冠’梨转录组中转录因子基本情况 |
| 4.2.1.1 GA诱导的单性结实‘翠冠’梨转录组中转录因子数量分布 |
| 4.2.1.2 GA诱导‘翠冠’梨转录组中转录因子家族动态表达 |
| 4.2.1.3 GA诱导‘翠冠’梨转录组中转录因子表达趋势 |
| 4.2.2 单性结实相关通路基因表达情况 |
| 4.2.2.1 植物激素通路基因表达情况 |
| 4.2.2.2 细胞周期及细胞扩展相关基因表达情况 |
| 4.2.2.3 细胞壁水解重构、光合作用及糖代谢转运途径相关基因表达情况 |
| 4.2.3 转录因子下游通路筛选及关键转录因子调控网络构建 |
| 4.2.3.1 单性结实坐果调控通路基因启动子保守元件富集情况 |
| 4.2.3.2 单性结实坐果过程核心转录因子调控网络初探 |
| 4.3 讨论 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简历 |
（7）姜黄素及其类似物的糖基化衍生物的生物转化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 大肠杆菌中葡萄糖醛酸化姜黄素的生物转化研究 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与仪器 |
| 1.2.1 实验试剂 |
| 1.2.2 培养基及溶液配制 |
| 1.2.3 实验仪器 |
| 1.2.4 实验菌株 |
| 1.2.5 实验载体 |
| 1.2.6 实验引物 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 大肠杆菌的培养和菌种保存 |
| 1.3.2 载体质粒的克隆与转化 |
| 1.3.3 克隆基因的表达和目的蛋白的分析 |
| 1.3.4 大肠杆菌基因敲除 |
| 1.3.5 全细胞生物转化及产物的提取、分析、分离 |
| 1.3.6 无细胞体系催化葡萄糖醛酸化 |
| 1.3.7 目的基因表达体系的构建 |
| 1.3.8 目的基因表达条件的优化 |
| 1.3.9 利用CRISPR-Cas9技术敲除大肠杆菌arn A基因 |
| 1.3.10 姜黄素及多种酚类化合物葡萄糖醛酸化生物转化实验 |
| 1.4 结果与讨论 |
| 1.4.1 外源基因的密码子优化 |
| 1.4.2 目的基因表达载体的构建 |
| 1.4.3 目的基因表达条件的优化 |
| 1.4.4 arnA缺陷型工程菌的构建 |
| 1.4.5 姜黄素及多种酚类化合物葡萄糖醛酸化生物转化 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 本章小结 |
| 第二章 酿酒酵母中葡萄糖醛酸化姜黄素的生物转化研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 培养基及溶液配制 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 实验菌株 |
| 2.2.5 实验载体 |
| 2.2.6 实验引物 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 酿酒酵母的培养和菌种保存 |
| 2.3.2 酿酒酵母感受态细胞的制备 |
| 2.3.3 酿酒酵母感受态细胞的转化 |
| 2.3.4 目的基因表达体系的构建 |
| 2.3.5 酿酒酵母的外源蛋白表达 |
| 2.3.6 全细胞催化葡萄糖醛酸化生物转化实验 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 外源基因的密码子优化 |
| 2.4.2 目的基因表达体系的构建 |
| 2.4.3 酵母工程菌中姜黄素及多种酚类化合物葡萄糖醛酸化生物转化 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 葡萄糖基化类姜黄素的生物转化研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 培养基及溶液配制 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 实验菌株 |
| 3.2.5 实验载体 |
| 3.2.6 实验引物 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 大肠杆菌的培养和菌种保存 |
| 3.3.2 目的基因表达体系的构建 |
| 3.3.3 目的基因表达条件的优化 |
| 3.3.4 微生物发酵法制备六氢姜黄素 |
| 3.3.5 葡萄糖基化生物转化实验 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 外源基因的密码子优化 |
| 3.4.2 构建重组质粒 |
| 3.4.3 蛋白表达及条件优化 |
| 3.4.4 微生物发酵法制备六氢姜黄素 |
| 3.4.5 生物转化制备葡萄糖基类姜黄素 |
| 3.4.6 化合物结构解析 |
| 3.4.7 葡萄糖基化二氢、八氢姜黄素的发现 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述:天然产物葡萄糖醛酸化和葡萄糖基化产物的制备 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）重组酵母菌生物合成共轭亚油酸单体的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 共轭亚油酸及其生理功能 |
| 1.1.1 共轭亚油酸概述 |
| 1.1.2 c9,t11-CLA、t10,c12-CLA的生理功能 |
| 1.2 c9,t11-CLA的合成机理及研究进展 |
| 1.2.1 单酶催化亚油酸异构酶BBI |
| 1.2.2 多酶催化 |
| 1.2.3 c9,t11-CLA的生物合成研究进展 |
| 1.3 t10,c12-CLA的合成机理及研究进展 |
| 1.3.1 单酶催化亚油酸异构酶PAI |
| 1.3.2 t10,c12-CLA的生物合成研究进展 |
| 1.4 酵母表达系统 |
| 1.4.1 酿酒酵母表达系统 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统 |
| 1.5 立题依据及主要研究内容 |
| 1.5.1 立题依据 |
| 1.5.2 主要研究内容 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂及配制 |
| 2.1.4 主要培养基 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 亚油酸异构酶BBI的蛋白结构预测 |
| 2.2.2 不同亚油酸异构酶表达载体的构建 |
| 2.2.3 酿酒酵母感受态细胞制备及化学转化 |
| 2.2.4 毕赤酵母感受态细胞制备及电转化 |
| 2.2.5 重组菌的筛选鉴定 |
| 2.2.6 重组菌的诱导表达 |
| 2.2.7 重组菌中异源蛋白表达水平测定 |
| 2.2.8 酶活检测 |
| 2.2.9 静息细胞催化剂制备及催化 |
| 2.2.10 数据处理及分析方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 亚油酸异构酶BBI重组菌的构建及催化合成c9,t11-CLA的研究 |
| 3.1.1 亚油酸异构酶BBI蛋白结构分析 |
| 3.1.2 酿酒酵母BBI重组菌的构建和筛选验证 |
| 3.1.3 酿酒酵母重组菌蛋白表达水平及酶活水平分析 |
| 3.1.4 毕赤酵母重组菌的构建和筛选验证 |
| 3.1.5 毕赤酵母重组菌蛋白表达水平及酶活水平分析 |
| 3.1.6 His-tag对BBI表达水平及酶活的影响 |
| 3.1.7 不同表达系统中BBI表达水平及酶活的情况比较 |
| 3.1.8 毕赤酵母重组菌静息细胞催化合成c9,t11-CLA的研究 |
| 3.1.9 BBI粗酶酶学特性的研究 |
| 3.2 亚油酸异构酶PAI重组菌的构建及催化合成t10,c12-CLA的研究 |
| 3.2.1 PAI毕赤酵母分泌表达重组菌的构建和筛选验证 |
| 3.2.2 毕赤酵母分泌表达重组菌蛋白表达水平及酶活水平分析 |
| 3.2.3 PAI毕赤酵母胞内可溶性表达重组菌的构建和筛选验证 |
| 3.2.4 毕赤酵母胞内可溶性表达重组菌蛋白表达水平及酶活水平分析 |
| 3.2.5 毕赤酵母胞内可溶性表达重组菌蛋白表达水平优化 |
| 3.2.6 毕赤酵母重组菌静息细胞催化合成t10,c12-CLA的研究 |
| 主要结论与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 附录Ⅱ:部分气相色谱峰图 |
（9）细叶百合铁还原氧化酶（FRO）对NaHCO3胁迫的应答（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 课题背景 |
| 1.2 细叶百合研究进展 |
| 1.2.1 细叶百合形态特征 |
| 1.2.2 细叶百合抗逆性研究进展 |
| 1.3 植物铁吸收机制 |
| 1.3.1 铁对植物的影响 |
| 1.3.2 植物铁吸收的还原型机理 |
| 1.3.3 植物铁吸收的螯合型机理 |
| 1.3.4 植物铁吸收的吞噬机制 |
| 1.4 铁还原氧化酶研究进展 |
| 1.4.1 FRO基因家族的结构及表达特性 |
| 1.4.2 FRO基因家族的功能分析 |
| 1.4.3 FRO基因抗逆境研究进展 |
| 1.5 研究的目的和意义 |
| 2 LpFRO7和LpFRO8基因的克隆及生物信息学分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 LpFRO7和LpFRO8基因的克隆 |
| 2.2.2 生物信息学分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 LpFRO7和LpFRO8基因的克隆 |
| 2.3.2 生物信息学分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 LpFRO7和LpFRO8 mRNA水平的表达特异性分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 LpFRO7和LpFRO8基因组织表达特异性分析 |
| 3.2.2 盐碱胁迫下LpFRO7和LpFRO8基因mRNA水平表达特异性分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 LpFRO7和LpFRO8基因组织表达特异性分析 |
| 3.3.2 盐碱胁迫下LpFRO7和LpFRO8基因mRNA水平表达特异性分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 LpFRO7和LpFRO8蛋白融合表达载体构建及诱导表达条件优化 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 菌株及载体 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 pQE-LpFRO7和pQE-LpFRO8蛋白表达载体的构建 |
| 4.2.2 LpFRO7和LpFRO8蛋白表达条件的优化 |
| 4.2.3 LpFRO7和LpFRO8蛋白大量诱导及纯化 |
| 4.2.4 NaHCO3胁迫下LpFRO7和LpFRO8蛋白表达菌液的抗性分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 pQE-LpFRO7和pQE-LpFRO8蛋白表达载体的构建 |
| 4.3.2 LpFRO7和LpFRO8蛋白表达条件的优化 |
| 4.3.3 LpFRO7和LpFRO8蛋白大量诱导及纯化 |
| 4.3.4 NaHCO_3胁迫下LpFRO7和LpFRO8蛋白表达菌液的抗性分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 LpFRO7和LpFRO8转基因烟草的抗性分析 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 植物材料 |
| 5.1.2 菌株和载体 |
| 5.1.3 培养基配方 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 pBI121-LpFRO7和pBI121-LpFRO8植物表达载体的构建 |
| 5.2.2 LpFRO7和LpFRO8转基因烟草的转化和鉴定 |
| 5.2.3 NaHCO_3胁迫下LpFRO7和LpFRO8转基因烟草的抗性分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 pBI121-LpFRO7和pBI121-LpFRO8植物表达载体的构建 |
| 5.3.2 LpFRO7和LpFRO8转基因烟草的转化和鉴定 |
| 5.3.3 NaHCO_3胁迫下LpFRO7和LpFRO8转基因烟草的抗性分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 LpFRO7和LpFRO8过表达细叶百合的抗性分析 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 植物材料 |
| 6.1.2 菌株和载体 |
| 6.1.3 培养基配方 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 LpFRO7和LpFRO8过表达细叶百合的鉴定 |
| 6.2.2 NaHCO_3胁迫下LpFRO7和LpFRO8过表达细叶百合的抗性分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 LpFRO7和LpFRO8过表达细叶百合的鉴定 |
| 6.3.2 NaHCO_3胁迫下LpFRO7和LpFRO8过表达细叶百合的抗性分析 |
| 6.4 本章小结 |
| 讨论与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 附表 |
（10）重组大肠杆菌全细胞合成覆盆子酮的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 覆盆子酮的简介 |
| 1.1.1 覆盆子酮的结构与性质 |
| 1.1.2 覆盆子酮的应用 |
| 1.2 覆盆子酮的生产方法 |
| 1.2.1 植物提取 |
| 1.2.2 覆盆子酮的化学合成 |
| 1.2.3 生物技术法合成覆盆子酮的研究进展 |
| 1.3 全细胞催化 |
| 1.3.1 全细胞催化的主要优势 |
| 1.3.2 全细胞催化中常用的辅酶再生系统 |
| 1.4 羟醛缩合反应制备底物对羟基亚苄基丙酮 |
| 1.4.1 Aldol反应的化学催化 |
| 1.4.2 Aldol反应的生物催化 |
| 1.5 本课题的研究背景,立题意义与研究内容 |
| 1.5.1 研究背景 |
| 1.5.2 立题意义 |
| 1.5.3 主要研究内容 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌种与质粒 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.1.4 主要培养基及主要溶液 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 目的基因的获取 |
| 2.2.2 引物设计 |
| 2.2.3 大肠杆菌基因组的提取 |
| 2.2.4 大肠杆菌超级感受态的制备及热激转化 |
| 2.2.5 目的基因的克隆 |
| 2.2.6 质粒的提取 |
| 2.2.7 重组质粒的构建 |
| 2.2.8 重组菌株的构建 |
| 2.2.9 细菌的培养、诱导表达及全细胞催化剂的制备 |
| 2.2.10 全细胞催化剂制备条件的优化 |
| 2.2.11 全细胞催化及催化条件的优化 |
| 2.2.12 产物覆盆子酮的分离与鉴定 |
| 2.2.13 底物对羟基亚苄基丙酮的初步合成 |
| 2.2.14 生物量检测 |
| 2.2.15 葡萄糖浓度检测 |
| 2.2.16 高效液相色谱分析 |
| 2.2.17 琼脂糖凝胶电泳和蛋白表达分析 |
| 第三章 结果与讨论 |
| 3.1 重组菌株的构建及其产覆盆子酮能力的对比 |
| 3.1.1 重组菌株的构建 |
| 3.1.2 重组菌株产覆盆子酮能力的对比 |
| 3.2 YB-9的培养及诱导条件的优化 |
| 3.2.1 诱导时机的优化 |
| 3.2.2 诱导剂IPTG浓度的优化 |
| 3.2.3 诱导温度的优化 |
| 3.2.4 诱导时长的优化 |
| 3.3 YB-9的全细胞催化条件的优化 |
| 3.3.1 全细胞催化剂浓度(菌体量)的优化 |
| 3.3.2 底物浓度的优化 |
| 3.3.3 催化体系中底物与辅底物浓度比的优化 |
| 3.3.4 催化反应pH的优化 |
| 3.3.5 催化反应温度的优化 |
| 3.3.6 催化体系中金属离子和EDTA浓度的优化 |
| 3.4 优化条件后的覆盆子酮合成 |
| 3.4.1 摇瓶水平上最佳条件下覆盆子酮产量 |
| 3.4.2 放大至3L发酵罐后的最佳条件下覆盆子酮产量 |
| 3.5 覆盆子酮的初步分离和鉴定 |
| 3.5.1 覆盆子酮产品分离 |
| 3.5.2 覆盆子酮结晶的核磁共振氢谱鉴定 |
| 3.6 底物对羟基亚苄基丙酮的生物合成初步研究 |
| 3.6.1 过表达deoC基因发酵合成对羟基亚苄基丙酮 |
| 3.6.2 利用脂肪酶催化合成覆盆子酮前体对羟基亚苄基丙酮 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A:作者攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 附录B:补充材料 |
| 附录C:分析方法和标准曲线 |
四、植物基因表达诱导剂（论文参考文献）
- [1]表达猪δ冠状病毒S1蛋白植物乳杆菌的构建及验证[J]. 郝嘉翼,李乐天,张和平,陈永福,金宁一,王茂鹏,李昌. 中国兽医学报, 2021(12)
- [2]1,4-二恶烷污染地下水共代谢生物修复及机理研究[D]. 王棚. 吉林大学, 2021(01)
- [3]产高效木聚糖酶细菌的筛选及木聚糖酶基因的克隆与表达[D]. 刚利萍. 阜阳师范大学, 2021(12)
- [4]glms与gna1基因协同表达机制研究[D]. 李旭. 齐鲁工业大学, 2021(10)
- [5]高活性Thaxtomin衍生物的异源高效合成[D]. 周甜甜. 山东大学, 2021(12)
- [6]‘翠冠’梨单性结实诱导剂筛选及赤霉素诱导单性结实坐果分子机理研究[D]. 沈家琪. 浙江大学, 2021(01)
- [7]姜黄素及其类似物的糖基化衍生物的生物转化[D]. 陈秉松. 天津中医药大学, 2021
- [8]重组酵母菌生物合成共轭亚油酸单体的研究[D]. 李秀清. 江南大学, 2021(01)
- [9]细叶百合铁还原氧化酶（FRO）对NaHCO3胁迫的应答[D]. 朱国庆. 东北林业大学, 2021(08)
- [10]重组大肠杆菌全细胞合成覆盆子酮的研究[D]. 杨波. 江南大学, 2021(01)