一、华支睾吸虫病流行区流行病学研究（论文文献综述）
郑金鑫[1]（2021）在《中国与湄公河地区血吸虫病及肝吸虫病传播风险预测研究》文中研究说明随着中国“一带一路”倡议的不断推进、中国与东南亚地区交流与合作不断加深,各国间的卫生交流合作得到了进一步的加强,澜沧江-湄公河区域的社会经济发展也逐渐受到各国的重视。然而,血吸虫病与肝吸虫病在这一区域的流行仍是一个重要的公共卫生问题,对社会经济发展有着重大影响。世界卫生组织被忽略热带病专家咨询委员会认为,血吸虫病是一种通过努力可以达到消除的疾病,而肝吸虫病是一种可通过干预达到有效控制的疾病。从区域整体角度对血吸虫病与肝吸虫病传播特征和传播风险进行研究,可为疾病的控制与消除提供具有重要参考价值的科学依据。本研究为了解和掌握长江流域日本血吸虫病、湄公河流域湄公血吸虫病、中国广西及越南北部地区华支睾吸虫病、湄公河地区麝猫后睾吸虫病的流行特征与传播风险,建立血吸虫病与肝吸虫病的流行病学数据库,并从生态学及气候变化角度分析影响上述两种疾病流行与传播的因素。本研究以构建的机器学习模型对不同区域血吸虫病与肝吸虫病传播风险进行预测评估,同时探究日本血吸虫中间宿主钉螺与肝吸虫病不同监测点选取对预测其风险范围的影响,旨在为有效控制和消除血吸虫病与肝吸虫病提供科学依据。第一部分长江流域与湄公河流域血吸虫病传播特征与风险预测研究目的:探索长江流域日本血吸虫病、湄公河流域湄公血吸虫病传播风险的预测方法,在评估不同模型预测疾病传播风险的同时,筛选影响两种血吸虫病传播风险的关键因素,为亚洲血吸虫病消除策略的制定提供科学依据。方法:（1）长江流域日本血吸虫病数据库的构建。主要包括2018年长江流域县级水平钉螺有无的调查数据、2008～2018年长江流域191个气象站点气象数据,以及对应区域的环境、气候、社会人文等数据。（2）湄公河流域湄公血吸虫病数据库的构建。主要通过文献综述的方法收集整理2000～2018年老挝、柬埔寨乡镇水平上的血吸虫病时点感染率信息,同时收集对应位置上的环境、气候、社会人文等数据。（3）日本血吸虫病的传播特征研究及风险预测。一、通过建立6个的机器学习模型,根据环境等变量预测钉螺的孳生范围;二、根据气象数据计算血吸虫传播指数（AMSI）,预测日本血吸虫病传播风险;三、利用钉螺的生存概率结合环境等数据,分析不同的机器学习模型预测AMSI的准确性,筛选出最优模型;四、通过变量重要性与边际效应探索影响AMSI的关键因素,及这些因素与血吸虫传播指数之间的关系。（4）湄公血吸虫病的传播特征研究及风险预测。一、通过构建多个机器学习模型,根据环境等变量预测血吸虫病感染率;二、在评估不同预测模型的准确性的基础上,找出影响血吸虫病感染率的关键因素,以及这些关键因素与感染率之间的关系;三、以关键因素为依i据,预测湄公血吸虫病的传播风险区域。结果:（1）2018年在湖南、湖北、江西、安徽、江苏等省长江流域2369处监测点进行钉螺调查,结果显示钉螺检出率为21.6%（511/2369）;（2）通过不同机器学习模型比较,最终发现RF模型（AUC=0.922）最优,提示钉螺适宜生存区沿长江水系分布,主要集中在安徽中南部、湖北中部、江西北部等地区;（3）191个气象站点AMSI值均在48.89-2611.43之间,其中血吸虫病低风险（0<AMSI≤900）站点69个（占36.1%）,中风险（900<AMSI≤2000）站点116个（占60.7%）,高风险（AMSI>2000）站点6个（占3.1%）,提示长江流域大部分地区属于血吸虫病中低风险区域;（4）建立环境等变量与AMSI的机器学习模型,结果显示RF模型拟合效果最好（RMSE=160.33,R2=0.863）,影响AMSI最主要的因素有季节降雨量变异系数（100%）、钉螺生存概率（98.5%）与人类足迹指数（95.5%）,其中AMSI与季节降雨量变异系数（r=-0.29,P<0.01）、钉螺生存概率（r=0.13,P=0.03）均呈显着的线性相关关系;（2）结果显示,湄公河流域的湄公血吸虫病主要集中在老挝南部的Champasack省,以及柬埔寨北部的Strung Treng、Kratie省,2000～2018年感染率为为1.1%,范围在0～40.9%之间,;RF模型的拟合与预测能力最优（RMSE=0.037,R2=0.743）,影响血吸虫病感染率最主要的因素有暖季降雨量（100%）、海拔高度（88.1%）与季节降雨量变异系数（76.9%）,上述指标与湄公血吸虫病感染率之间均呈非线性关系;RF预测湄公血吸虫病传播风险集中在老挝 Champasack省的南部沿湄公河流域分布,模型预测血吸虫病感染率最高为30%,出现低估现象。结论:分布于长江流域的日本血吸虫病呈低度流行水平,可以利用血吸虫传播指数和钉螺生存概率共同评估血吸虫病在长江流域的传播风险;利用机器学习模型不但可估计钉螺的孳生范围,还可探索影响血吸虫传播指数的关键因素,季节降雨量变异系数及钉螺生存概率对日本血吸虫病传播程度影响较大。湄公血吸虫病流行范围具有一定局限性,其感染率较低,通过机器学习模型结合环境等变量估计传播风险可知,影响湄公血吸虫病传播的主要因素为暖季降雨量及海拔高度。第二部分大湄公河次区域肝吸虫病传播特征与风险预测研究目的:研究中国广西与越南北部地区华支睾吸虫病、湄公河流域麝猫后睾吸虫病的传播特征,从生态学角度分析影响这2种肝吸虫病流行的主要因素,同时探索华支睾吸虫病与麝猫后睾吸虫病的地理隔离问题。方法:（1）华支睾吸虫病数据库的构建与分析。从2014～2016年中国第三次全国寄生虫病调查数据库中获取广西地区人体华支睾吸虫感染的地理位置信息、县级水平居民是否有吃鱼生习惯等信息;通过文献综述收集2000～2018年越南地区乡镇水平人体华支睾吸虫感染地理位置及是否有吃鱼生等饮食习惯等信息。此外,收集研究区域环境、气候、社会人文等数据,构建华支睾吸虫病数据库。（2）麝猫后睾吸虫病数据库的构建及分析:通过文献综述收集2000～2018年泰国、老挝、柬埔寨及越南地区乡镇水平人体感染麝猫后睾吸虫的地理位置、吃鱼生等饮食习惯信息,结合湄公河区域环境、气候、社会人文等数据,构建麝猫后睾吸虫病数据库;利用物种分布原理,构建机器学习模型,估计麝猫后睾吸虫感染概率,根据模型准确性筛选出最优模型,找出影响麝猫后睾吸虫感染的关键因素。（3）构建可对华支睾吸虫病、麝猫后睾吸虫病进行分类识别的机器学习分类模型,探索影响该2种肝吸虫病分布的主要因素,筛选出最优模型后进行2种肝吸虫病分界范围的预测。结果:（1）2014～2016年期间,中国广西地区共有85个村镇进行了寄生虫病流行病学调查,其中33个村镇检出人体华支睾吸虫感染者（33/85=38.8%）,广西全部市级行政区中有61个（占54.9%）有吃鱼生的习惯。2000～2018年期间,共检索获得153条越南地区相关文献,结果发现有51个地点出现人体感染华支睾吸虫感染,且集中在越南北部地区;有31.7%（20/63）的市级行政区存在吃鱼生饮食习惯;其中,LM模型拟合和预测发生华支睾吸虫感染效果最优（AUCtraining=0.959,AUCtesting=0.941）,华支睾吸虫感染最主要的影响因素为吃鱼生饮食习惯（100%）,结果显示吃鱼生人群发生华支睾吸虫感染的概率是不吃鱼生人群的13倍。（2）2000～2018年,泰国地区有425个报道了人体麝猫后睾吸虫感染的地点,全国约67.5%（52/77）的市级行政区有吃鱼生的习惯;老挝有144个人体麝猫后睾吸虫感染地,44%（11/25）的市级行政区有吃鱼生的习惯;柬埔寨有134个人体麝猫后睾吸虫感染地,83.3%（15/18）的市级行政区有吃鱼生的习惯;越南地区有18个人体麝猫后睾吸虫感染地。湄公河流域麝猫后睾吸虫感染概率拟合与预测效果最优的模型为RF模型（AUCtraining=1,AUCtesting=0.824）,影响麝猫后睾吸虫感染的最主要因素是吃鱼生饮食习惯（100%）,吃鱼生者发生麝猫后睾吸虫感染的概率是不吃鱼生者的3.3倍。（3）2种肝吸虫病流行地区生态环境差异显着,如华支睾吸虫病流行区平均海拔高度为35.44 m,麝猫后睾吸虫病流行地区平均海拔高度则约为160m。LM、RF、GBM、DT、XGBOOST机器学习模型对华支睾吸虫病与麝猫后睾吸虫病的分类准确性为1;变量重要性分析中发现,对2种肝吸虫病分类贡献率均超过75%的因素有雨季均温、年平均温度、年均温占年温较差百分比、温度季节变化方差;除NNET模型外,其余模型均能预测2种肝吸虫病的分界范围,其中DT、GBM与XGBOOST可预测出中国广西西部地区发生麝猫后睾吸虫病潜在风险,但是仅LM模型能预测出2种肝吸虫病可同时出现在越南西北部4个省份、中南部2个省份及老挝北部省份,而同时出现有华支睾吸虫病和麝猫后睾吸虫病分布的地区,为2种肝吸虫病的复合流行区。结论:本研究通过生态环境数据结合机器学习模型预测了人体华支睾吸虫和麝猫后睾吸虫感染的风险区域,并揭示吃鱼生饮食习惯对华支睾吸虫或麝猫后睾吸虫感染影响。2种肝吸虫病流行地区的生态环境差异显着,可通过机器学习模型和生态环境指标对其分布进行分类。模型结果显示,2种肝吸虫病复合感染区集中在越南西北部4个省、中北部2个省及老挝北部省份,对两种肝吸虫分类影响最主要因素为气候因素中的温度变化。第三部分钉螺和麝猫后睾吸虫病监测调查的空间距离重采样效应研究目的:探索如何运用RF模型在保持长江流域钉螺孳生地分布和湄公河流域麝猫后睾吸虫病分布区域预测正确度的基础上,可最大限度地减少监测点数量,为完善血吸虫病与肝吸虫病监测体系提供科学依据。方法:首先,利用前期构建血吸虫病与肝吸虫病数据库中的数据,设定多个等面积六边形,对长江流域和湄公河流域进行区域划分;假设每个网格代表一个生态区,从中随机抽取一个监测点,对血吸虫病或肝吸虫病流行区空间分布进行校正;通过改变相邻六边形的空间距离,控制研究区域六边形大小,可减少重新抽样的样本量。第二步,通过机器学习模型对重新抽样后的数据进行模型拟合与预测,评估不同空间距离下模型的预测效果,筛选出监测点设置数量最少时的空间距离。最后,依次对长江流域钉螺分布、湄公河流域麝猫后睾吸虫病分布进行不同场景下的敏感性评价。结果:长江流域钉螺RF模型预测结果显示,当分别设定六边形生态区空间距离为0km、5km、10km、50km、100km、150km时,六边形网格数量依次为0、1258、578、126、62、29 个,模型预测的 AUC 分别为 0.886、0.889、0.832、0.723、0.815、0.857,Kappa值一致性逐渐降低（从0.647降低至-0.682）。其中空间距离为5km时,模型预测结果最佳（与原数据的一致性相近似）;湄公河流域RF模型预测人体麝猫后睾吸虫感染概率结果显示,当分别设定空间距离为0km、5km、10km、50km、100km、150km 时,六边形网格数量依次为 0、1318、1257、603、287、122,模型预测的 AUC 分别为 0.823、0.784、0.824、0.682、0.609、0.736,Kappa值分别为0.454、0.429、0.903、0.816、0.963、0.176。其中空间距离为 10km时,模型预测结果最佳（与原数据的一致性相近似）。结论:以生态区为概念设定六边形网格,就日本血吸虫中间宿主钉螺分布和麝猫后睾吸虫病分布进行重新抽样,该方法可以对钉螺监测点和麝猫后睾吸虫病监测点的空间偏倚进行校正,从而获得以最少监测点数量获得有效监测效果的监测策略。长江流域钉螺的监测点可按相邻六边形生态区5 km范围进行布点,将原监测点从2161减少至1338;而湄公河流域的麝猫后睾吸虫病监测可按相邻六边形生态区10 km范围进行布点,只需设置1257个监测点;该监测策略可在减少监测点数量的情况下,达到有效监测钉螺分布、预测麝猫后睾吸虫病传播风险的效果。
何婷[2]（2021）在《食源性吸虫的分子鉴定与快速诊断试条的研制及评价》文中提出一、广西南宁地区片形吸虫的分子鉴定及遗传多态性分析目的:本研究选取核糖体内转录间隔区（ITS+）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基Ⅰ（NAD Ⅰ）、线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ（COX Ⅰ）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（pepck）这4个遗传分子标记,采用分子生物学的方法与技术鉴定广西南宁地区的片形吸虫种类,并分析其种群遗传多态性。方法:从南宁某屠宰场收集11头感染了片形吸虫的水牛的肝脏,分离获得151条片形吸虫成虫,并孵育获得其虫卵。提取片形吸虫成虫的基因组DNA,PCR扩增ITS+、NAD Ⅰ和COX Ⅰ序列并测序,所得序列经NCBI在线BLAST做同源性分析,构建线粒体基因NADⅠ和COXⅠ单倍型网络图及系统进化树,结合pepck基因多重PCR的结果鉴定虫种;提取部分片形吸虫虫卵的基因组DNA,PCR扩增ITS+序列并测序;用BioEdit软件做多序列比对分析,掌握片形吸虫亲代及子一代的遗传变异情况。结果:共获得151条片形吸虫成虫,lTS+序列扩增产物长度约964bp,仅NN20-2样本是Fh型,与GcnBank中肝片形吸虫瑞士样本（登录号:MK321602）完全同源;NN17-11、NN20-9和NN20-14等三个样本携带巨片形吸虫和肝片形吸虫的双重序列特征,属于Fg/Fh杂合型,序列图谱上特定变异位点出现双峰,个体间双峰比值存在差异,NN17-11 为 Fg:Fh=1:1,NN20-9 和 NN20-14 为 Fg:Fh=1:5;其余147个样本是Fg型,可细分为19个亚型,其中NN4-1等100个样本与GenBank中巨片形吸虫越南样本（登录号:MN970009）完全同源,其余样品中共出现14个变异位点,多为双峰。线粒体基因NAD Ⅰ序列扩增产物长约535bp,有34个变异位点,细分为28种单倍型;COX Ⅰ序列扩增产物长约438bp,有22个变异位点,细分为21种单倍型,所有样本的NAD Ⅰ和COX Ⅰ均属于巨片形吸虫类群。pepck电泳结果显示NN17-11、NN20-2、NN20-9和NN20-14等4个样本出现巨片形吸虫和肝片形吸虫的双重条带,其它样本只有巨片形吸虫的单一条带。虫卵的ITS+序列检测结果显示,ITS-Fh型片形吸虫NN20-2成虫有1个虫卵（1/30）转变为Fg/Fh型;巨片形吸虫NN20-3成虫有5个虫卵（5/30）呈现Fg/Fh型,其余虫卵与母体基本一致。结论:广西南宁的片形吸虫种群以纯种巨片形吸虫为主,同时存在少量的杂合型片形吸虫;结合多个遗传标记进行分析,能够更加准确可靠地鉴定南宁片形吸虫虫种。二、快速诊断华支睾吸虫病的胶体金免疫层析试条研制与效果评价目的:研制特异性抗原Cs4快速诊断华支睾吸虫病的胶体金免疫层析试条,其次结合G蛋白与抗原同时双标金的方法进行改良,评价并比较两种试条的检测效果。方法:构让pET28b-Cs4重组表达载体,IPTG诱导Cs4重组蛋白（rCs4）的表达,使用组氨酸标签亲和纯化柱纯化rCs4;分别将SPA与rCs4包被在硝酸纤维素膜的合适位置,作为质控线和检测线,G蛋白单标记胶体金、G蛋白和Cs4抗原同时双标记胶体金分别作为检测探针,制备检测抗rCs4特异性抗体的单标金和双标金免疫层析试条。两种试条同时险测华支睾吸虫病（42份）、囊虫病（18份）、裂头蚴病（10份）、卫氏并殖吸虫病（17份）、日本血吸虫病（10份）和片形吸虫病（13份）患者以及健康者（42份）的血清,评价和比较两者的诊断价值。结果:单标金试条的敏感性为97.6%（41/42）,特异性为93.6%（103/110）,总符合率为94.7%（144/152）,双标金试条的敏感性为90.5%（38/42）,特异性为88.2%（97/110）,总符合率为88.8%（135/152）,两种试条的敏感性（P>0.25）、特异性（P>0.10）和总符合率（P>0.05）之间的差异均无统计学意义,但双标金试条的交叉反应略高。此外,用6μl血清即可检测,10-15min内观察试条的检测结果。结论:用Cs4抗原研制的胶体金免疫层析试条可以快速诊断华支睾吸虫病,且具有较高的诊断价值。
王丽萍[3]（2021）在《基于LFD-RPA的主要肠道血吸虫核酸快速可视化检测方法的建立及初步评价》文中指出当前我国正处于消除血吸虫病的攻坚阶段,日本血吸虫病疫情整体处于极低水平,但境外输入性病例时有报道,迫切需要更加快捷、敏感的检测方法,用于病例诊断或风险识别。目的:结合侧流层析试纸条（Lateral flow dipstick,LFD）和重组酶聚合酶扩增（Recombinase polymerase amplification,RPA）方法,建立能简单、快速识别日本血吸虫、曼氏血吸虫核酸的可视化检测技术,初步评价其对血吸虫中间宿主或终宿主感染早期的检测价值,并通过试剂、时间的折算,分析成本投入情况。方法:以日本血吸虫SjR2和SjG55A作为靶基因,结合Primer Premier 5软件及手工辅助设计引物,通过简易检出限、特异性确定引物序列,初步建立RPA检测方法。以RPA检测为基础,设计探针,确定最佳反应条件,初步建立LFD-RPA检测方法。以PCR方法为平行对照,评价建立检测方法的最低检出限、敏感性、特异性及不同终止方式检测结果。制备不同比例混合的阳性钉螺和阴性钉螺基因组,评价LFD-RPA方法的最低检出混合度。分别取毛蚴感染后不同时期钉螺样本,用解剖镜检法判断钉螺感染情况,提取钉螺样本DNA,评价LFD-RPA方法对钉螺不同感染阶段的血吸虫核酸检测能力,进行RPA、PCR的平行检测。LFD-RPA方法检测现场采集的钉螺样本,RPA、PCR为平行对照,评价LFD-RPA方法的检测效果。以曼氏血吸虫SmCOX1为靶基因,结合Primer Premier 5软件、手工辅助设计筛选引物,确定最终引物序列,初步建立RPA检测方法。以RPA检测为基础,设计探针,确定最佳反应条件,初步建立LFD-RPA检测方法。以文献中针对曼氏血吸虫Sm1-7基因设计的引物为基础,设计特异性探针,探索最佳反应温度及时间,建立LFD-RPA检测方法。以PCR为平行对照,评价建立方法的最低检出限及与特异性。建立40尾、80尾曼氏血吸虫尾蚴梯度感染小鼠的动物模型（简称“40尾组”、“80尾组”）,并于感染后不同时间收集小鼠粪便及血清,提取DNA,用PCR、RPA、LFD-RPA方法进行平行检测,全面评价LFD-RPA方法检测曼氏血吸虫早期感染的效能。随后,收集本实验室常用的血吸虫核酸检测生物学技术的基础数据,包括需要的试剂盒或主要试剂的具体名称、单盒价格、单盒反应次数以及来源。计算不同检测方法的每个样本投入成本,包括每个样本检测所需的试剂成本、劳动力成本。以每个样本投入试剂成本、劳动力成本为基础,在设置阴参、阳参的单个样本检测情况下,计算每次检测投入试剂成本、劳动力成本。同时,将96个反应作为不同检测方法批量检测总量。计算批量检测情况下,每个样本检测投入试剂成本、劳动力成本。并按照实验所需仪器数量将每种方法的技术要求划分为简单、一般、复杂、极复杂四个等级,对LFD-RPA和其他核酸检测方法的成本和技术要求进行比较分析。结果:成功建立了以日本血吸虫SjR2、SjG55A为靶基因的LFD-RPA检测方法以及以曼氏血吸虫SmCOX1、Sm1-7为靶基因的LFD-RPA检测方法,各方法的最优反应参数均为39℃、20min。冰上静置、滴加DNA提取液或酚氯仿三种终止LFD-RPA反应的方式对检测结果无影响。以SjR2、SjG55A为靶基因建立的LFD-RPA方法对含有日本血吸虫靶基因的质粒和成虫基因组最低检出限分别为1copies/μl、102copies/μl和1fg/μl、10fg/μl,SjR2-LFD-RPA更佳,优于对应RPA、PCR方法。SjG55A-LFD-RPA方法与曼氏血吸虫、阳性双脐螺、埃及血吸虫、华支睾吸虫、大片吸虫、卫氏并殖吸虫基因组DNA均无交叉反应。SjR2-LFD-RPA方法和埃及血吸虫、华支睾吸虫、大片吸虫、卫氏并殖吸虫基因组DNA无交叉反应,但可检出曼氏血吸虫、阳性双脐螺,提示与曼氏血吸虫有交叉反应。SjR2-LFD-RPA、SjG55A-LFD-RPA分别能最低检出2000只、1500只阴性钉螺中的1只阳性钉螺,最低检出混合度均高于对应RPA、PCR。SjR2-LFD-RPA、SjR2-RPA、PCR方法均可检出20组1:50的混合阳性钉螺,3中方法的敏感性均为100%。检测日本血吸虫实验室感染钉螺发现,血吸虫感染前6w的钉螺均镜检阴性,自7w出现镜检阳性钉螺,7～11w钉螺镜检阳性率分别为10%、30%、20%、40%、30%;SjR2-RPA在钉螺感染后的1d、3d、5d、1～11w 的检测阳性率分别为 90%、70%、50%、70%、60%、70%、60%、50%、20%、30%、70%、50%、50%、50%。SjR2-LFD-RPA 在钉螺感染后的1d、3d、5d、1～11w 的检测阳性率分别为 90%、80%、70%、70%、60%、60%、70%、70%、30%、30%、70%、50%、50%、50%。经统计学分析发现,SjR2-LFD-RPA、PCR、RPA的总检出率高于解剖镜检法。对现场采集共1550只钉螺的31管钉螺混合DNA的检测结果显示,SjR2-LFD-RPA的检出率为12.90%,其他方法均为阴性。建立的SmCOX1-LFD-RPA对质粒、曼氏血吸虫成虫基因组DNA检出限达到 10copies/μl、1fg/μl,均高于对应 RPA 及 PCR。建立的 Sm1-7-LFD-RPA 对质粒、成虫基因组DNA的检出限更高,达到1copies/μl、1fg/μlSmCOX1-LFD-RPA、Sm1-7-LFD-RPA对曼氏血吸虫、阳性双脐螺特异,与埃及血吸虫、日本血吸虫、阳性钉螺、华支睾吸虫、大片吸虫、卫氏并殖吸虫无交叉反应。检测曼氏血吸虫尾蚴感染小鼠模型的样本发现,不管是40尾组还是80尾组,SmCOX1-RPA和PCR对感染后1～8w的混合血样、混合粪样均无阳性结果出现。SmCOX1-LFD-RPA、Sm1-7-LFD-RPA检测40尾组混合血样和混合粪样时,均是自感染后3w开始出现较浅条带,随着感染时间的增加检测条带越来越明显,分别在感染后第8w和第6～8w时条带颜色达到最深;检测80尾组混合血样和混合粪样时,SmCOX1-LFD-RPA、Sm1-7-LFD-RPA均是自1w开始出现较浅条带,1～8w期间条带颜色逐渐变深,感染后第6～8w的条带颜色达到最深。总体上,Sm1-7-LFD-RPA的条带颜色要比SmCOX1-LFD-RPA的明显清晰一些。不同检测方法的成本比较及分析中,计算每次检测总成本后发现,PCR（453 RMB/次检测）>LFD-RPA（400RMB/次检测）>冻干粉态RPA（330RMB/次检测）>LAMP（300RMB/次检测）、液态RPA（300RMB/次检测）。每次检测时间排序为:PCR（2～2.5 h/次检测）>RPA（0.8～1 h/次检测）>LAMP（0.5～1 h/次检测）>LFD-RPA（0.4～0.6h/次检测）。以96个反应为一批量检测,计算不同检测方法的每批检测时间为:PCR（2～2.5 h/批检测）>RPA（3.2～4 h/批检测）>LAMP（2～4h/批检测）>LFD-RPA（1.6～2.4h/批检测）。批量检测情况下,每个样本检测投入总成本情况:LFD-RPA（112.77 RMB/批量每个样本）>冻干粉态RPA（61.92 RMB/批量每个样本）>LAMP（60.64 RMB/批量每个样本）>液态RPA（51.06 RMB/批量每个样本）>PCR（5.81 RMB/批量每个样本）。按是否需要特殊仪器设备分析实验操作人员技术要求,PCR检测方法和RPA归为“复杂”,而LAMP检测方法和LFD-RPA检测方法“简单”。结论:本研究建立了日本血吸虫、曼氏血吸虫核酸检测LFD-RPA技术,具有较低检出限,该方法操作简单,结果获取方式直接。SjG55A-LFD-RPA可用于日本血吸虫感染混合钉螺的检测,SjR2-LFD-RPA对曼氏血吸虫有交叉反应。基于SmCOX1、Sm1-7靶基因建立的LFD-RPA检测方法具有较低检出限,和其他虫种无交叉反应,有望用于曼氏血吸虫早期感染宿主识别。LFD-RPA作为较新的核酸检测技术,目前检测成本较高,但由于操作简便、敏感性高、特异性强,今后用于血吸虫病现场检测及风险监测有广阔的应用前景。
黄继磊,王耀,周霞[4]（2021）在《我国常见食源性寄生虫病流行现状与防治进展》文中研究表明食源性寄生虫病包括肉源性、鱼源性、植物源性、水源性、软体动物源性及淡水甲壳动物源性寄生虫病等。本文主要就华支睾吸虫病、并殖吸虫病、猪带绦虫病、弓形虫病、旋毛虫病和广州管圆线虫病等6种我国主要食源性寄生虫病流行现状及防治进展作一综述,旨在提高对食源性寄生虫病的认识、为制定食源性寄生虫病防控策略提供参考。食源性寄生虫病流行多与饮食有关,不生食、不半生食是预防食源性寄生虫病发生的最有效措施。
钱门宝,陈颖丹,朱慧慧,刘亨辉,周长海,诸廷俊,许隆祺,李石柱,周晓农[5]（2021）在《2014—2015年全国人体重点寄生虫病现状调查的抽样设计及解读》文中研究说明我国于2014—2015年开展了全国人体重点寄生虫病现状调查。本次调查覆盖31个省（自治区、直辖市）,采用多阶段随机整群抽样。调查分为农村和城镇两部分,农村地区抽样依据土源性线虫病流行水平,分层因素包括省份、生态区和经济因素。城镇地区抽样依据华支睾吸虫病流行水平,将全国分为5类,其中4个重点流行省份根据各自流行水平进行分层抽样。本次调查抽样设计充分考虑病种和人群特征差异,以最大实现样本的代表性。
周鸿让[6]（2020）在《重组酶介导的核酸等温扩增技术快速检测棘球绦虫的研究》文中进行了进一步梳理棘球蚴病（Echinococcosis）又称包虫病（Hydatidosis）,是一种可引起严重疾病负担并影响全球公共卫生安全和畜牧业发展的慢性人兽共患寄生虫病[1],可造成严重的医疗、社会和经济负担及后果[2-5]。所以早期、准确的诊断和检测,实时监测各类宿主的感染情况,对该病的防控具有重要意义[1,6]。本研究针对棘球绦虫的鉴别与棘球蚴病诊断方法的可操作性、检测灵敏度以及特异性,并依据重组酶介导的等温扩增方法（Recombinase-aided isothermal amplification,RAA）的原理,建立了检测细粒棘球绦虫G1和多房棘球绦虫的核酸等温扩增技术,具体开展以下三部分研究工作,以期为棘球绦虫的检测以及棘球蚴病的诊断提供可选择的检测方法:一、重组酶介导的等温核酸扩增技术检测细粒棘球绦虫G1方法的建立与初步应用评价本部分以细粒棘球绦虫G1（EgG1）线粒体基因序列（GenBankTM No.AF297617）作为靶序列,根据RAA反应原理设计合成6对引物。经筛选获取最佳引物,并从温度、引物及醋酸镁3个方面以优比RAA反应体系。以PCR作为平行对照,分别以不同稀释浓度的基因组DNA及梯度稀释的含目的基因片段不同拷贝数的pMD19-T（Simple）克隆质粒进行RAA灵敏度扩增检测,同时以多房棘球绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、贾第鞭毛虫、肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA为模板进行RAA扩增用于特异性评价。此外,分别对不同样本（感染EgG1的动物组织样本（10份）、模拟现场阳性犬粪样本（3份）以及现场阳性犬粪样本（5份））进行检测,以验证所建立的RAA检测方法的可靠性和实用性。本研究建立的RAA法可在40 min内特异性扩增EgG1的目的基因片段。经优化确立最佳温度为37℃,最佳引物（10μmol/L）用量为2μL,即反应浓度为0.4μmol/L,最佳醋酸镁（280mmol/L）用量为2.5μL,即反应浓度为14 mmol/L的反应体系。灵敏度方面,RAA法最低可检测到10 pg基因组DNA以及104个拷贝数的质粒;特异性方面,以其他寄生虫基因组DNA为模板的扩增结果均为阴性。感染EgG1样本检测结果均为阳性,且与PCR检测结果一致。二、重组酶介导的等温核酸扩增技术检测多房棘球绦虫方法的建立及初步应用评价本部分以多房棘球绦虫（Em）线粒体基因序列（GenBankTM No.AB01 8440）作为靶序列,根据RAA反应原理设计合成5对引物。经筛选获取最佳引物后,再从温度、引物及醋酸镁3个方面以优化RAA反应体系。以PCR作为平行对照,分别以不同稀释浓度的基因组DNA及梯度稀释的质粒进行RAA扩增,以评价RAA检测方法的灵敏度;同时以其他寄生虫基因组DNA为模板进行RAA扩增用于特异性评价。此外,分别对不同样本（感染Em的动物组织样本（9份）、模拟现场阳性犬粪样本（3份）以及现场阳性犬粪样本（2份））进行检测,以验证所建立的RAA检测技术的可靠性和实用性。本研究建立的RAA法可在40 min内特异性扩增Em的目的基因片段。经优化确立最佳温度为37℃,最佳引物（10μmol/L）用量为2μL,即反应浓度为0.4μmol/L,最佳醋酸镁（280mmol/L）用量为2.5μL,即反应浓度为14 mmol/L的反应体系。灵敏度方面,RAA法最低可检测到10 pg基因组DNA以及104个拷贝数的质粒;特异性方面,以其他寄生虫基因组DNA为模板的扩增结果均为阴性。感染的样本检测结果均为阳性,且与PCR检测结果一致。三、重组酶介导的多重核酸等温扩增法鉴别细粒棘球绦虫G1和多房棘球绦虫技术的建立与初步应用评价本部分利用第一与第二部分所设计的引物（专利申请号:20191116433 7.5）建立了可在40 min内特异性扩增EgG1与Em目的基因片段的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法（Multiplex recombinase-aided isothermal amplification,mRAA）。实验分别从温度、引物及醋酸镁3个方面进行多重RAA反应体系的优化。以mPCR作为平行对照,应用mRAA方法扩增不同稀释浓度的基因组DNA及梯度稀释的质粒,以评价RAA检测方法的灵敏度;同时检测多种寄生虫的基因组DNA,以评价其特异性。对所建立的方法优化后,应用于样本（感染棘球绦虫的动物组织样本19份（Eg,10份;Em,9份）、模拟现场阳性犬粪样本3份（含Eg与Em混合样本,3份）以及现场阳性犬粪样本7份（Eg,5份;Em,2份））的检测,以验证所建立的mRAA检测技术的可靠性和实用性。本研究经优化确立了最佳温度为37℃,EgG1正、反向引物（10μmol/L）最佳用量各为1μL,即反应浓度为0.2μmol/L,Em正、反向引物（10μmol/L）各为1.5μL,即反应浓度为0.3 μmol/L,醋酸镁（280mmol/L）最佳用量为2.5 μL,即反应浓度为14 mmol/L的反应体系。在灵敏度检测方面,mRAA最低可检测出0.1 ng的基因组DNA以及104个拷贝数的质粒;在特异性检测方面,以其他寄生虫基因组DNA为模板的扩增结果均为阴性。感染样本mRAA检测结果均为阳性,且与mPCR检测结果一致。本研究建立的RAA以及mRAA检测方法较常规PCR快速,检测灵敏度和特异性均较高,其在EgG1与Em虫种的鉴定方面以及棘球蚴病基因诊断方面具有重要价值,为快速检测提供一种新的敏感和特异的工具。有望为棘球蚴病的现场防治工作提供高效、快速的技术支撑。
蒋智华,杨益超[7]（2020）在《华支睾吸虫病和麝猫后睾吸虫病的流行和防控现状》文中研究表明肝吸虫流行范围广、感染率高,是目前我国和部分东南亚国家重要的公共卫生问题。可引起人类肝吸虫病的肝吸虫包括华支睾吸虫、麝猫后睾吸虫和猫后睾吸虫,流行于我国的华支睾吸虫感染人数最多,流行于湄公河流域的麝猫后睾吸虫次之,两者都与胆管癌的发生有关。尽管政府对肝吸虫防控工作投入了大量的人力、物力和财力,但是我国部分省肝吸虫感染率有随时间增高趋势,说明肝吸虫防控工作任重道远。本文针对华支睾吸虫病和麝猫后睾吸虫病的病原学检测和诊断、传播和流行、以及防控等现状进行综述,指出了未来肝吸虫病防控工作的重点和难点。
王盛琳[8]（2020）在《重组酶聚合酶扩增（RPA）技术检测日本血吸虫核酸方法的建立与初步评价》文中研究指明目的:系统评价各种日本血吸虫核酸检测技术的诊断价值,并采用综合评价较高的重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）技术,建立一种特异、敏感、快捷的日本血吸虫核酸检测方法,并初步评价其应用于感染早期检测的潜在价值。方法:计算机检索1990年1月-2019年6月中国知网、万方、ScienceDirect和PubMed数据库中公开发表的与日本血吸虫核酸检测相关的文献,并结合手工检索和参考文献追溯法以最大程度地保证文章的查全。严格按照纳入与排除标准对文献进行筛选,纳入符合条件的文献并提取其中相关数据,采用Meta分析法对各种核酸检测技术的诊断价值进行综合评价。选择日本血吸虫Sj28S基因片段为靶序列,应用手工筛选法并辅以Primer Premier 5软件设计引物,进行温度、时间的优化以确定最佳反应条件,构建基于基础反应体系的RPA检测方法。提取日本血吸虫及其他寄生虫基因组DNA评价所建立方法的特异性。评价方法的敏感性,并与PCR和LAMP法的敏感性进行比较。此外,评价方法对血吸虫不同虫期基因组DNA的检出性能。制备血吸虫阳性钉螺及阴性钉螺不同混合比例的DNA样本,评价RPA方法的最低检出混合度和稳定性。建立5条、10条、20条、40条尾蚴梯度感染小鼠的动物模型（不同组别分别简称为“5尾组”、“10尾组”、“20尾组”、“40尾组”）,并于感染后第3d、lw、2 w、3 w、4 w、5 w、6 w收集小鼠粪便及血清样本,编号后进行冷冻保存。毛蚴攻击感染钉螺,于感染后第1 d、3 d、5 d、1 w、2w、3w、4w、5w、6w、7w、8w、9w、10 w、11 w分别收集10只钉螺样本,解剖镜检后进行冷冻保存。提取小鼠和钉螺样本的DNA,进行PRA与PCR两种方法的平行检测,综合评价RPA方法检出血吸虫早期感染的效能。结果:Meta分析共纳入19篇文献,其中中文文献5篇、英文文献14篇;共24组研究,其中17组研究涉及变温扩增技术与金标准的比较、7组研究涉及等温扩增技术与金标准的比较。文献质量评价结果表明,所纳入文献总体偏倚较小;Deek漏斗图提示变温扩增技术相关文献可能存在发表偏倚。变温扩增技术各研究之间存在非阂值效应引起的异质性,采用随机效应模型对合并效应量进行分析,结果显示:检测日本血吸虫病的综合灵敏度为0.81（95%CI:0.79-0.83）、特异度为0.73（95%CI:0.7]-0.74）、SROC曲线下面积为0.944 3。等温扩增技术各研究之间不存在异质性,采用固定效应模型对合并效应量进行分析,结果显示:检测日本血吸虫病的综合灵敏度为 0.96（95%CI:0.94-0.98）、特异度为 0.95（95%CI:0.94-0.97）、SROC 曲线下面积为0.989 9。构建的RPA方法可成功地扩增出日本血吸虫216 bp大小的目的基因片段。RPA的最佳反应条件最终选择为390C、20 min。该方法与曼氏血吸虫、埃及血吸虫、单尾尾蚴感染钉螺、华支睾吸虫、大片吸虫、卫氏并殖吸虫和牛带绦虫及阴性钉螺基因组DNA均无交叉反应。RPA法对于日本血吸虫成虫基因组的最低检出限为100 fg/μl,针对重组质粒的最低检出限为100拷贝/μl,且敏感性高于普通PCR和LAMP法。RPA法对日本血吸虫不同发育阶段的基因组DNA样本进行检测,各虫期均能被准确检出。应用建立的RPA方法检测阳性钉螺及阴性钉螺不同混合比例的DNA样本,结果显示,最低检出比例为1:1000。重复性试验结果显示,该方法重复性好且准确性高。动物模型结果显示,RPA法对20尾组小鼠可在第4 w检出粪便DNA阳性,10尾组和40尾组均可在第5 w检出粪便DNA 阳性,5尾组的低感染组仅在第6 w检出阳性。PCR方法对10尾组、20尾组、40尾组小鼠均可在第5 w检出粪便DNA阳性,5尾组仅可在第6 w检出粪便DNA阳性。针对小鼠血清样本的检测结果如下,RPA方法检测5尾组小鼠血清时于第5 w、6 w检出阳性结果,10尾小鼠血清于第2w、4w、6w检出阳性结果,20尾组小鼠血清于第3w、4w、5w、6w检出阳性结果,40尾组小鼠血清于第3d、lw、2 w、4 w、5 w、6 w均检出阳性结果。PCR法检测5尾组、10尾组小鼠血清时未检出阳性结果,20尾组小鼠血清于第4 w检出阳性结果,40尾组于第6 w检出阳性结果。钉螺的试验结果显示,压碎镜检法在感染第6w及之前均未观察到阳性结果,于感染第7w开始观察到血吸虫的子胞蚴结构。压碎镜检法对钉螺每个时间点检出的阳性率分别为:0%、0%、0%、0%、0%、0%、0%、0%、0%、10%、30%、20%、40%、30%;RPA 法的阳性率分别为:80%、60%、50%、60%、40%、60%、60%、50%、20%、20%、80%、50%、50%、50%;PCR 法的阳性率分别为:60%、70%、60%、50%、20%、0%、30%、0%、20%、0%、10%、30%、50%、50%。其中,压碎镜检阳性的钉螺共有13只,经RPA检测结果均为阳性,PCR方法仅将其中9只（69%）检出阳性,未能将镜检阳性钉螺全部检出。结论:变温扩增技术和等温扩增技术均对日本血吸虫病有较高诊断价值,其中等温扩增技术诊断准确性相对更高。本研究应用等温扩增RPA技术构建了一种日本血吸虫核酸检测方法,该方法敏感性高、特异性好、简便快速,有望用于血吸虫感染的快速检测及风险监测,具有较好的应用前景。
姚甲凯,戴建荣[9]（2020）在《华支睾吸虫病的流行及治疗现状》文中进行了进一步梳理进入新世纪以来,我国的食源性寄生虫病呈逐年上升的趋势,尤其是华支睾吸虫病,已经成为我国当前最严重的食源性寄生虫病。为了给华支睾吸虫病的预防、治疗以及预后提供科学的依据,本文综合了最近几年来华支睾吸虫病的最新治疗现状以及我国当前的流行情况。
张鹭,苏明华[10]（2019）在《广西华支睾吸虫病流行病学及防治状况分析》文中进行了进一步梳理华支睾吸虫病是广西目前较为严重的食源性寄生虫病,流行形势严峻,对其防治的相关科学研究相对滞后。此文综述了华支睾吸虫病在广西的流行及防治情况,以及影响疾病扩散传播的相关因素,以期为本地区制定华支睾吸虫病防治策略提供依据。
二、华支睾吸虫病流行区流行病学研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、华支睾吸虫病流行区流行病学研究（论文提纲范文）
（1）中国与湄公河地区血吸虫病及肝吸虫病传播风险预测研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究目的 |
| 3 研究内容 |
| 4 研究路线 |
| 参考文献 |
| 第一部分 两种血吸虫病的传播特征与风险预测研究 |
| 第一章 日本血吸虫中间宿主钉螺在长江流域分布的预测研究 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 日本血吸虫病在长江流域的传播特征与风险预测研究 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 湄公血吸虫病在湄公河流域的传播特征与风险预测研究 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第一部分 小结 |
| 第二部分 两种肝吸虫病的传播特征与风险预测研究 |
| 第四章 大湄公河次流域华支睾吸虫病的传播特征与风险预测研究 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 湄公河流域麝猫后睾吸虫病的传播特征与风险预测研究 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第六章 华支睾吸虫病与麝猫后睾吸虫病间分布隔离的地理因素分析研究 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 小结 |
| 第三部分 钉螺和麝猫后睾吸虫病监测调查的空间距离重采样效应研究 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 研究总结 |
| 附录 |
| 致谢 |
（2）食源性吸虫的分子鉴定与快速诊断试条的研制及评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 背景 |
| 第一部分 广西南宁地区片形吸虫的分子鉴定及遗传多态性分析 |
| 前言 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 试剂与仪器 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 DNA提取 |
| 2.3.2 PCR引物的合成 |
| 2.3.3 目的序列的扩增 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.3.5 DNA序列分析 |
| 2.3.6 单倍型网络图和系统进化树的构建 |
| 3 结果 |
| 3.1 成虫的遗传多态性分析 |
| 3.1.1 PCR结果 |
| 3.1.2 ITS+序列分析 |
| 3.1.3 NAD Ⅰ序列分析 |
| 3.1.4 COX Ⅰ序列分析 |
| 3.1.5 pepck多重PCR分析 |
| 3.1.6 多个分子标记综合分析 |
| 3.2 虫卵ITS+序列分析 |
| 3.3 基于NAD Ⅰ和COXⅠ序列的遗传进化分析 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 快速诊断华支睾吸虫病的胶体金免疫层析试条研制与效果评价 |
| 前言 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 重组蛋白的表达 |
| 2.1.2 试条的研制 |
| 2.1.3 试条的评价 |
| 2.2 试剂与仪器 |
| 2.3. 方法 |
| 2.3.1 质粒的准备 |
| 2.3.2 重组蛋白的表达和纯化 |
| 2.3.3 胶体金免疫层析试条的制备 |
| 2.3.4 试条的使用和判断 |
| 2.3.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 重组蛋白的纯化 |
| 3.1.1 纯化试剂盒的选择 |
| 3.2 试条的制备 |
| 3.2.1 纤维素膜的选择 |
| 3.2.2 rCs4浓度的选择 |
| 3.2.3 胶体金的用量 |
| 3.3 试条检测效果的评价 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 附录1 |
| 附录2 |
（3）基于LFD-RPA的主要肠道血吸虫核酸快速可视化检测方法的建立及初步评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 1.1 血吸虫病流行概况 |
| 1.2 血吸虫病的实验检测技术 |
| 1.3 LFD-RPA检测技术 |
| 2 研究目的 |
| 3 研究内容 |
| 3.1 快速检测日本血吸虫核酸的LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 3.2 快速检测曼氏血吸虫核酸的LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 3.3 LFD-RPA检测方法的成本分析 |
| 4 技术路线图 |
| 第一部分 FD-RPA检测日本血吸虫核酸方法的建立及初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源 |
| 1.2 主要实验试剂与仪器 |
| 1.3 基因组DNA的提取 |
| 1.4 重组质粒的构建及提取 |
| 1.5 RPA方法的建立及初步评价 |
| 1.6 LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 1.7 LFD-RPA方法的检测效能评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 RPA方法的建立及初步评价 |
| 2.2 LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 2.3 LFD-RPA方法的检测效能评价 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 LFD-RPA检测曼氏血吸虫核酸方法的建立及初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源 |
| 1.2 曼氏血吸虫感染小鼠实验模型构建及样本采集 |
| 1.3 主要实验试剂与仪器 |
| 1.4 基因组DNA的提取 |
| 1.5 重组质粒构建及平行PCR对照的建立 |
| 1.6 RPA方法的建立及初步评价 |
| 1.7 LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 1.8 LFD-RPA对曼氏血吸虫感染小鼠模型样本的检测评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 RPA方法的建立及初步评价 |
| 2.2 LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 2.3 感染小鼠样本的检测评价 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 LFD-RPA反应的成本比较及分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 基础数据 |
| 2.2 仪器方面 |
| 2.3 技术要求方面 |
| 2.4 成本方面 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 主要创新点 |
| 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 附表1 主要肠道血吸虫检测方法、特点及成本整理表 |
| 个人简历 |
| 硕士期间申请专利与发表文章 |
| 致谢 |
| 附件 |
（4）我国常见食源性寄生虫病流行现状与防治进展（论文提纲范文）
| 1 华支睾吸虫病 |
| 2 猪带绦虫病和囊尾蚴病 |
| 3 旋毛虫病 |
| 4 并殖吸虫病 |
| 5 弓形虫病 |
| 6 广州管圆线虫病 |
| 7 结语 |
（5）2014—2015年全国人体重点寄生虫病现状调查的抽样设计及解读（论文提纲范文）
| 1 2014—2015年全国人体重点寄生虫病现状调查的抽样设计 |
| 1.1 调查设计 |
| 1.2 农村地区抽样设计 |
| 1.3 城镇地区抽样设计 |
| 2 2014—2015年全国人体重点寄生虫病现状调查抽样设计的解读 |
| 2.1 人群的划分 |
| 2.2 农村地区抽样设计的考虑 |
| 2.3 总体率和感染人数的推算 |
| 2.4 抽样调查各病种准确性 |
| 3 2014—2015年全国人体重点寄生虫病现状调查抽样设计的经验和不足 |
（6）重组酶介导的核酸等温扩增技术快速检测棘球绦虫的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 2 棘球绦虫与棘球蚴病检测技术 |
| 2.1 病原学检查 |
| 2.2 影像学诊断 |
| 2.3 免疫学诊断 |
| 2.4 分子生物学诊断 |
| 3 研究目的和内容 |
| 3.1 研究目的 |
| 3.2 研究内容 |
| 第一部分 重组酶介导的等温核酸扩增技术检测细粒棘球绦虫方法的建立及初步应用评价 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 寄生虫样本及其基因组DNA来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取 |
| 2.2.2 寄生虫材料基因组DNA验证 |
| 2.2.3 引物设计与筛选 |
| 2.2.4 质粒构建 |
| 2.2.5 RAA反应体系的建立 |
| 2.2.6 PCR反应体系的建立 |
| 2.2.7 扩增反应条件的优化 |
| 2.2.8 RAA检测灵敏度评价 |
| 2.2.9 RAA检测特异性评价 |
| 2.2.10 不同种类标本的RAA法检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同寄生虫基因组提取验证 |
| 3.2 EgG1的引物筛选结果 |
| 3.3 RAA反应体系优化 |
| 3.4 PCR反应体系优化 |
| 3.5 RAA检测灵敏度验证 |
| 3.6 RAA检测特异性验证 |
| 3.7 样本检测 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 重组酶介导的等温核酸扩增技术检测多房棘球绦虫方法的建立及初步应用评价 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 寄生虫样本及其基因组DNA来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取 |
| 2.2.2 寄生虫材料基因组DNA验证 |
| 2.2.3 引物设计与筛选 |
| 2.2.4 质粒构建 |
| 2.2.5 RAA反应体系的建立 |
| 2.2.6 PCR反应体系的建立 |
| 2.2.7 扩增反应条件的优化 |
| 2.2.8 RAA检测灵敏度评价 |
| 2.2.9 RAA检测特异性评价 |
| 2.2.10 不同种类标本的RAA法检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同寄生虫基因组提取验证 |
| 3.2 Em的引物筛选结果 |
| 3.3 RAA反应体系优化 |
| 3.4 PCR反应体系优化 |
| 3.5 RAA检测灵敏度验证 |
| 3.6 RAA检测特异性验证 |
| 3.7 样本检测 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 重组酶介导的多重核酸等温扩增法鉴别细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫技术的建立及初步应用评价 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 寄生虫样本及其基因组DNA来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取 |
| 2.2.2 寄生虫材料基因组DNA验证 |
| 2.2.3 引物设计与筛选 |
| 2.2.4 质粒构建 |
| 2.2.5 多重RAA反应体系的建立 |
| 2.2.6 多重PCR反应体系的建立 |
| 2.2.7 扩增反应条件的优化 |
| 2.2.8 多重RAA检测灵敏度评价 |
| 2.2.9 多重RAA检测特异性评价 |
| 2.2.10 不同种类标本的多重RAA法检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同寄生虫基因组提取验证 |
| 3.2 目的片段的扩增 |
| 3.3 多重RAA反应体系优化 |
| 3.4 PCR反应体系优化 |
| 3.5 多重RAA检测灵敏度验证 |
| 3.6 多重RAA检测特异性验证 |
| 3.7 样本检测 |
| 4 讨论 |
| 研究小结 |
| 1 主要结果 |
| 2 创新点 |
| 3 不足与建议 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 申请专利与发表文章 |
| 附件 |
（7）华支睾吸虫病和麝猫后睾吸虫病的流行和防控现状（论文提纲范文）
| 1 病原学和传播途径 |
| 2 检测与诊断 |
| 3 流行现状 |
| 3.1 华支睾吸虫病 |
| 3.2 麝猫后睾吸虫病 |
| 4 防控策略与措施 |
（8）重组酶聚合酶扩增（RPA）技术检测日本血吸虫核酸方法的建立与初步评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 1.1 血吸虫病流行概况 |
| 1.2 日本血吸虫病诊断技术 |
| 1.3 重组酶聚合酶扩增技术 |
| 2 研究目标 |
| 2.1 总体目标 |
| 2.2 具体目标 |
| 3 研究内容 |
| 3.1 系统评价各种核酸检测技术对日本血吸虫病的诊断价值 |
| 3.2 建立一种快速检测日本血吸虫核酸的RPA方法 |
| 3.3 初步评价RPA方法应用于日本血吸虫早期感染检测的效果 |
| 4 技术路线 |
| 第一部分 不同核酸检测技术对日本血吸虫病诊断价值的Meta分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 文献检索策略 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 1.3 数据提取 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献的一般特征 |
| 2.2 文献质量评价 |
| 2.3 文献发表偏倚 |
| 2.4 Meta分析结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 RPA技术检测日本血吸虫核酸方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源 |
| 1.2 样本的采集 |
| 1.3 主要实验试剂与仪器 |
| 1.4 基因组DNA的提取 |
| 1.5 重组质粒的构建及提取 |
| 1.6 RPA方法的建立 |
| 1.7 RPA方法特异性评价 |
| 1.8 RPA方法敏感性评价 |
| 1.9 日本血吸虫不同虫期基因组DNA的检测 |
| 1.10 混合钉螺样本的检测 |
| 1.11 RPA检测重复性评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 RPA最佳反应条件的确定 |
| 2.2 RPA方法特异性评价 |
| 2.3 RPA方法敏感性评价 |
| 2.4 RPA方法检测日本血吸虫不同虫期样本 |
| 2.5 钉螺混合样本的检测 |
| 2.6 RPA方法的重复性评价 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 RPA技术检测日本血吸虫感染样本效果的初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源 |
| 1.2 材料的采集 |
| 1.3 主要试剂及仪器 |
| 1.4 样本DNA的提取 |
| 1.5 RPA方法 |
| 1.6 PCR方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 小鼠样本的检测 |
| 2.2 钉螺样本的检测 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文小结 |
| 主要创新点 |
| 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 硕士期间申请专利与发表文章 |
| 致谢 |
| 附录 |
（9）华支睾吸虫病的流行及治疗现状（论文提纲范文）
| 1 华支睾吸虫的生活史 |
| 1.1 第一中间宿主 |
| 1.2 第二中间宿主 |
| 1.3 终宿主 |
| 1.4 室内建立华支睾吸虫生活史 |
| 2 我国淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况 |
| 3 我国动物华支睾吸虫感染情况 |
| 4 我国人群华支睾吸虫感染情况 |
| 5 华支睾吸虫病的药物治疗 |
| 5.1 华支睾吸虫的病原学治疗药物 |
| 5.2 华支睾吸虫的病原学治疗方案、效果以及副作用 |
| 6 结语 |
四、华支睾吸虫病流行区流行病学研究（论文参考文献）
- [1]中国与湄公河地区血吸虫病及肝吸虫病传播风险预测研究[D]. 郑金鑫. 中国疾病预防控制中心, 2021
- [2]食源性吸虫的分子鉴定与快速诊断试条的研制及评价[D]. 何婷. 中国疾病预防控制中心, 2021(02)
- [3]基于LFD-RPA的主要肠道血吸虫核酸快速可视化检测方法的建立及初步评价[D]. 王丽萍. 中国疾病预防控制中心, 2021
- [4]我国常见食源性寄生虫病流行现状与防治进展[J]. 黄继磊,王耀,周霞. 中国血吸虫病防治杂志, 2021(04)
- [5]2014—2015年全国人体重点寄生虫病现状调查的抽样设计及解读[J]. 钱门宝,陈颖丹,朱慧慧,刘亨辉,周长海,诸廷俊,许隆祺,李石柱,周晓农. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021(01)
- [6]重组酶介导的核酸等温扩增技术快速检测棘球绦虫的研究[D]. 周鸿让. 中国疾病预防控制中心, 2020
- [7]华支睾吸虫病和麝猫后睾吸虫病的流行和防控现状[J]. 蒋智华,杨益超. 中国热带医学, 2020(06)
- [8]重组酶聚合酶扩增（RPA）技术检测日本血吸虫核酸方法的建立与初步评价[D]. 王盛琳. 中国疾病预防控制中心, 2020
- [9]华支睾吸虫病的流行及治疗现状[J]. 姚甲凯,戴建荣. 中国病原生物学杂志, 2020(03)
- [10]广西华支睾吸虫病流行病学及防治状况分析[J]. 张鹭,苏明华. 国际流行病学传染病学杂志, 2019(05)