一、IMMUNITY TO COCCIDIOSIS:ACTION OF LIVE VACCINES（论文文献综述）
雷廷,Stefanie Kadykalo[1]（2021）在《抗球虫药对全球家禽可持续生产的价值(综述)》文中进行了进一步梳理球虫病是一种自限性疾病,普遍存在于家禽生产中,会对家禽肠道造成广泛的损害。每年全球由球虫病造成的经济损失估计为30亿美元。在饲料中添加抗球虫药一直是球虫病控制的主要手段。然而,由于抗微生物药物耐药性的广泛出现,人们对抗球虫药的安全性以及其对人和动物的健康和对环境的潜在影响提高了关注。为了研究抗球虫药的益处、风险和替代产品,本文对近期文献进行了全面回顾。市场上有几种球虫活疫苗,它们与抗球虫药联合使用时能恢复球虫对药物的敏感性,但是以下因素限制了它们的使用:成本增加,会增加家禽对细菌性肠炎的易感性,难以进行均匀一致的免疫,免疫力产生缓慢。目前,市场上也有多种替代产品,但它们没有直接的抗球虫作用,而且很少有研究证明这些产品具有稳定的田间功效。抗球虫药对消费者和环境的安全性由政府机构进行持续监控和评估。此外,目前缺乏证据表明抗球虫药的耐药性会引起公共卫生关注。本综述研究表明,在缺乏有效替代产品的情况下,抗球虫药的使用可以优化家禽生产,从而有益于生产可持续性的三个支柱,包括社会（家禽健康、福利和食品安全）、经济（生产效率）和环境。
华恩玉[2]（2020）在《堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究》文中研究表明鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的寄生原虫病,据不完全统计每年球虫病给家禽养殖业造成的经济损失超过30亿美元。长期以来,鸡球虫病的防控主要依赖药物。但随着球虫耐药性的不断增强以及药物残留危害食品安全,鸡球虫病的防控措施由药物防治转向疫苗免疫预防。目前,用于临床的鸡球虫病疫苗主要是活虫苗,亚单位疫苗仅见有一种,即由分离于巨型艾美耳球虫（Eimeriamaxima）配子体的3种蛋白研制而成。堆型艾美耳球虫（E.acervulina）是养鸡场流行最广泛的鸡球虫之一,可引起鸡的亚临床球虫病,影响鸡的生长发育,降低饲料利用率。迄今,国内外对堆型艾美耳球虫配子体蛋白及其基因少有报道,其重组蛋白的免疫保护力也尚无见有报道。为此,本文对堆型艾美耳球虫配子体蛋白56基因（Eagam56）与82基因（Eagam82）进行了克隆和序列分析,分别构建了 2个基因的原核表达质粒,诱导表达后鉴定了重组蛋白的免疫原性,并经动物免疫保护试验评价了重组蛋白对堆型艾美耳球虫的免疫保护力,研究结果将为研制重组配子体抗原亚单位疫苗奠定基础。1.堆型艾美耳球虫Eagam56基因的克隆表达与免疫原性分析提取堆型艾美耳球虫（扬州株）卵囊的基因组DNA,PCR扩增Eagam56基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体;经测序、密码子优化后连接至pET-28a（+）质粒,构建pET-28a（+）-Eagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后进行诱导表达,表达产物分别进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定以及免疫原性分析。结果显示,克隆的Eagam56基因全长为1323 bp,具有一个大小为1323 bp的完整开放阅读框,编码440个氨基酸;与Genbank上的Eagam56基因序列对比,其同源性为99.9%;用在线软件对该基因编码区抗原性进行预测,发现Eagam56基因含有10个抗原决定簇,其中3个位于酪氨酸、脯氨酸富集区;重组蛋白大小约49 kDa,以可溶蛋白形式居多,可被HIS单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫（E.necatrix）、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）感染的鸡阳性血清特异性识别,显示重组蛋白EaGAM56具有良好的免疫原性和交叉抗原性。2.堆型艾美耳球虫Eagam82基因的克隆表达与免疫原性分析提取堆型艾美耳球虫（扬州株）卵囊的基因组DNA,PCR扩增Eagam82基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体;经测序、密码子优化后连接至pET-28a（+）质粒,构建pET-28a（+）-Eagam82表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后,对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定以及免疫原性分析。结果显示,克隆的Eagam82基因全长为1704bp,具有一个大小为1704bp的完整开放阅读框,编码568个氨基酸;与Genbank上的Eagam8基因序列对比,其同源性为99.4%;用在线软件对该基因编码区抗原性进行预测,发现Eagam82基因含有15个抗原决定簇,其中2个位于酪氨酸、脯氨酸富集区;重组蛋白大小约82 kDa,以可溶蛋白形式为多;可被HIS单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫感染的鸡阳性血清特异性识别,显示重组蛋白EaGAM82具有良好免疫原性和交叉抗原性。3.重组蛋白rEaGAM56和rEaGAM82及其联合免疫对堆型艾美耳球虫的免疫保护力以黄羽肉鸡为试验动物,以鸡的增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分、抗球虫指数（ACI）以及血清抗体水平等为评价指标,评价重组蛋白rEaGAM56、rEaGAM82以及2种重组蛋白联合应用的免疫保护效果。结果显示,rEaGAM56与rEaGAM82高（200 μg/鸡）、中（100 μg/鸡）剂量免疫组以及联合免疫组,鸡临床症状减轻。随着免疫剂量的增加,鸡的相对增重率与卵囊减少率增加,平均肠道病变记分减少。联合免疫高剂量组（各100 μg/鸡重组蛋白）的相对增重率与卵囊减少率达73.74%和74.27%。rEaGAM56、rEaGAM82、联合免疫高剂量组的 ACI 分别为 148.24、143.92 和 148.74。rEaGAM56的免疫保护力较rEaGAM82的强,rEaGAM56和rEaGAM82免疫鸡后均能产生血清抗体。结论:两种重组蛋白免疫均能产生一定的免疫保护力。
余水兰[3]（2020）在《柔嫩艾美耳球虫免疫增强剂筛选与早熟株相关基因研究》文中研究表明鸡球虫病是由艾美耳属球虫感染引起的一种家禽传染性寄生虫病。由于使用药物防治球虫病会产生耐药性及药物残留的问题,因此迫切需要免疫预防替代药物成为球虫病控制的主导途径。由早熟株卵囊组成的减毒活疫苗是目前应用最广泛的球虫病疫苗,但球虫活疫苗对免疫鸡的生长具有潜在不良影响。研究发现免疫增强剂不仅可增强球虫活疫苗的免疫效果,同时也可降低接种疫苗带来的不良影响。与母株相比,球虫早熟株具有潜在期明显缩短、致病性减弱、繁殖能力降低等独特的生物学特性,但其早熟的分子机制不明。为此,本研究一方面通过笼养试验和平养试验研究盐酸左旋咪唑、黄芪多糖、壳寡糖、地衣芽孢杆菌、酵母多糖等对柔嫩艾美耳球虫的免疫增强效果和免疫鸡增重的影响,以筛选获得每种免疫增强剂的有效剂量,为筛选球虫活疫苗的免疫增强剂奠定基础;另一面通过RNA-seq技术筛选柔嫩艾美耳球虫早熟株与母株孢子化卵囊的转录组差异,并对其中两个差异表达基因——柔嫩艾美耳球虫颈部蛋白2和3（EtRON2和EtRON3）的功能和特性进行初步分析,为探讨早熟性状产生的分子机制奠定基础。1.五种免疫增强剂对柔嫩艾美耳球虫免疫增强效果的评价——笼养试验通过笼养试验评价盐酸左旋咪唑、黄芪多糖、壳寡糖、地衣芽孢杆菌、酵母多糖的不同剂量对柔嫩艾美耳球虫早熟株卵囊的免疫增强效果,以筛选每种免疫增强剂的有效剂量。3日龄雏鸡进行首次免疫并服用免疫增强剂,10日龄时仅用卵囊进行二免,17日龄时用柔嫩艾美耳球虫野毒株进行攻虫,以免疫期间体重、攻虫后的抗球虫指数（ACI）以及试验期间血清IgG和IgM抗体水平等作为评判指标。结果显示,0.05 mg～0.1 mg盐酸左旋咪唑、2.5 mg～5 mg黄芪多糖、2.5 mg～7.5 mg壳寡糖、1.25 mg酵母多糖以及10 mg地衣芽孢杆菌对柔嫩艾美耳球虫感染鸡具有免疫增强和促生长双重作用。2.五种免疫增强剂对柔嫩艾美耳球虫的免疫增强研究——平养试验通过平养试验对笼养试验中所获得的5种免疫增强剂的有效剂量进一步验证。3日龄雏鸡用柔嫩艾美耳球虫早熟株卵囊进行免疫并服用免疫增强剂,24日龄用柔嫩艾美耳球虫野毒株进行攻虫,以免疫期间体重、攻虫后的抗球虫指数（ACI）以及试验期间血清IgG和IgM抗体、CD4和CD8分子、细胞因子（TNF-α、TGF-β1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10）水平等作为评价指标。结果显示,0.1 mg盐酸左旋咪唑可明显促进鸡CD4、CD8因子的增殖和TNF-α、IL-2的分泌,明显提高柔嫩艾美耳球虫的免疫效果,且有促生长的作用。2 mg和6 mg地衣芽孢杆菌、5 mg和7.5 mg壳寡糖、2.5 mg酵母多糖均可明显促进鸡CD8分子的增殖和TNF-α的分泌,具有免疫增强和促生长的作用。5 mg黄芪多糖对柔嫩艾美耳球虫感染鸡具有促生长作用,但免疫增强效果不显着,黄芪多糖对球虫具有免疫增强作用的有效剂量仍需进一步研究。3.柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株孢子化卵囊的转录组分析继续对本实验室前期获得的柔嫩艾美耳球虫早熟株进行早熟选育,经过11次的早熟株选育,潜在期由126 h缩短到107 h,缩短了19 h,与同源母株的潜在期141 h相比,缩短了34 h。通过RNA-seq技术比较了该早熟株与母株之间孢子化卵囊的转录组差异,筛选两个虫株之间的差异表达基因。结果共鉴定出差异表达基因6602个,早熟株上调表达基因3888个,下调表达基因2714个。这些差异基因主要与阳离子结合、未折叠蛋白结合、磷酸酯水解酶活性等功能相关,参与细胞内吞作用、泛素介导的蛋白水解、谷胱甘肽代谢、内质网蛋白加工等通路。利用qPCR对转录组数据分析获得的22个差异表达基因和5个非差异表达基因进行验证,结果显示27个基因的mRNA转录水平均与RNA-seq结果一致。研究结果为探索球虫早熟性状产生的分子机制奠定基础。4.柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2和3特性与功能初步分析根据转录组学结果,选取两个早熟株下调基因——柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2和3（EtRON2和EtRON3）进行特性和功能的初步研究。结果显示,EtRON2的mRNA转录水平在孢子化卵囊中最高,未孢子化卵囊和第二代裂殖子次之,子孢子最低;蛋白主要分布在游离的子孢子、胞内子孢子和第二代裂殖子顶端棒状体的位置,以及未成熟裂殖体的细胞质中;其抗体对子孢子入侵DF-1细胞具有显着的抑制作用。EtRON3转录水平在孢子化卵囊阶段转录水平最高,未孢子化卵囊阶段次之,第二代裂殖子和子孢子最低;蛋白主要分布在游离的子孢子和胞内子孢子顶端棒状体的位置,第二代裂殖子的胞质以及未成熟裂殖体的表面;其抗体对子孢子入侵DF-1细胞具有显着的抑制作用。EtRON2和EtRON3在早熟株孢子化卵囊中转录水平均明显低于母株,与转录组学分析的结果一致,这提示EtRON2和EtRON3与早熟性状的产生有着一定的关系。但是EtRON2和EtRON3在球虫入侵以及发育调节中的作用仍需深入研究。
胡伟高[4]（2019）在《堆型艾美耳球虫涓滴免疫与脉冲免疫保护效果对比研究》文中研究指明鸡球虫病是严重危害鸡群健康的重大疾病之一,世界公认的鸡球虫种类有7个种,其中堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）在7种鸡球虫中最为流行,也是我国常见的鸡球虫种类之一。本论文对堆型艾美耳球虫早熟疫苗株的不同免疫方式和免疫剂量进行免疫效果比较,为了解鸡抗球虫免疫力建立过程提供依据。第一部分研究为观察堆型艾美耳球虫河源株早熟系（PAHY）涓滴免疫与脉冲免疫接种鸡后的卵囊排泄规律。低剂量涓滴免疫组鸡于1日龄开始每天接种20个卵囊/羽,连续免疫接种21天;高剂量涓滴免疫组鸡于1～7日龄时每天接种20个卵囊/羽,之后于8～21日龄时每天接种1710个卵囊/羽。低剂量脉冲免疫组于3日龄、10日龄、17日龄时分别每只鸡免疫140个卵囊/羽,共免疫接种3次;高剂量脉冲免疫组鸡于3日龄时每只鸡免疫140个卵囊/羽,之后于10日龄和17日龄时每羽鸡再分别接种1710个卵囊/羽,共免疫接种3次。两个涓滴免疫组于4日龄开始连续采集粪便监测、记录卵囊排泄数据,两个脉冲免疫组于6～8日龄、13～15日龄、20～22日龄时采集粪便监测、记录卵囊排泄数据。结果表明,涓滴免疫组第一周龄期间出现排卵囊高峰期,4日龄到6日龄间排卵囊量逐步增加,在6日龄到达到高峰期,之后逐渐减少。相比脉冲免疫组排卵囊高峰期,涓滴免疫组排卵囊高峰期有所延迟,比脉冲免疫组排卵囊高峰期延后1天。低剂量涓滴免疫组第2周龄期间没有出现明显的排卵囊高峰期,高剂量涓滴免疫组第2周龄期间仍会出现排卵高峰期,但没有脉冲免疫组的高峰期明显。低剂量脉冲免疫组与高剂量脉冲免疫组均出现明显的卵囊排出高峰期,而且都在免疫接种后4天出现。经过两周的涓滴免疫和两次脉冲免疫接种后,由于鸡群产生一定的抗球虫免疫力,各免疫组在第3周龄或第三次脉冲免疫之后卵囊排出量均出现大幅下降。第二部分研究为攻虫免疫保护试验。分别于脉冲免疫的每一次免疫接种后的第7天进行攻虫试验,观察和比较堆型艾美耳球虫河源株早熟系（PAHY）涓滴免疫与脉冲免疫的免疫效果。随机抽取每个免疫组的10羽鸡进行攻虫,分析攻虫后鸡的肠道病变记分、相对增重率、卵囊减少率等指标。涓滴免疫组与脉冲免疫组经过第一次免疫周期后,进行攻虫,鸡肠道病变记分分别为:涓滴免疫攻虫组肠道病变记分3,脉冲免疫攻虫组肠道病变记分2.75,阳性对照组肠道病变记分2.75,阴性对照组肠道病变记分0。各组相对增重率分别为:涓滴免疫攻虫组94.7%,脉冲免疫攻虫组93.9%,阳性对照组89.7%,阴性对照组100%。试验结果表明,涓滴免疫组与脉冲免疫组经过第一个免疫周期均不能建立坚强的免疫保护力。鸡群经过第二次免疫周期后,进行攻虫,鸡肠道病变记分为:阳性对照组肠道病变记分（2.9）>低剂量涓滴免疫攻虫组肠道病变记分（2.15）>高剂量脉冲免疫攻虫组肠道病变记分（1.47）>低剂量脉冲免疫攻虫组肠道病变记分（0.72）>高剂量涓滴免疫攻虫组肠道病变记分（0.17）;各组相对增重率为:低剂量涓滴免疫攻虫组的相对增重率（83.3%）>高剂量脉冲免疫攻虫组（79.5%）>低剂量脉冲免疫攻虫组（74%）>高剂量涓滴免疫攻虫组（72.2%）>阳性对照攻虫组（66.2%）,各免疫组相对增重率明显高于阳性组;各组卵囊减少率为:低剂量脉冲免疫攻虫组卵囊减少率（68.3%）>高剂量脉冲免疫攻虫组卵囊减少率（13.3%）>高剂量涓滴免疫攻虫组卵囊减少率（-54.3%）>低剂量涓滴免疫攻虫组卵囊减少率（-63.4%）。经过两次免疫周期后,从试验鸡群的肠道病变记分、相对增重率、卵囊减少率等数据可以得出,各免疫组均建立了有效的免疫保护力,其中高剂量免疫组保护力较好。鸡群经过第三次免疫周期后,进行攻虫,鸡肠道病变记分为:阳性对照组肠道病变记分（2.9）>高剂量涓滴免疫攻虫组肠道病变记分（1.63）>高剂量脉冲免疫攻虫组肠道病变记分（1.4）>低剂量脉冲免疫攻虫组肠道病变记分（1.35）>低剂量涓滴免疫攻虫组肠道病变记分（1.24）;各组相对增重率为:高剂量涓滴免疫攻虫组相对增重率（77.4%）>低剂量涓滴免疫攻虫组相对增重率（76.3%）>低剂量脉冲免疫攻虫组相对增重率（76.3%）>高剂量脉冲免疫攻虫组相对增重率（74.3%）>阳性对照组相对增重率（63%）;各组卵囊减少率为:低剂量涓滴免疫攻虫组卵囊减少率（90.8%）>高剂量脉冲免疫攻虫组卵囊减少率（70.5%）>高剂量涓滴免疫攻虫组卵囊减少率（65.8%）>低剂量脉冲免疫攻虫组卵囊减少率（29.3%）。经过三次免疫周期后,各免疫组均建立了坚强的免疫保护力。从试验数据可以得出鸡群进行二次免疫周期就可以获得坚强免疫力,为养鸡生产过程中疫苗使用、垫料管理等提供理论基础。本论文分析堆型艾美耳球虫河源株早熟系（PAHY）涓滴免疫和脉冲免疫后卵囊排泄规律,并比较了涓滴免疫与脉冲免疫的免疫效果,为改进堆型艾美耳球虫免疫方法提供依据。
郝飞飞[5]（2019）在《鸡球虫病活疫苗基因佐剂IL-2、IL-4实验室效力和安全性研究》文中研究指明为探讨基因佐剂IL-2、IL-4对鸡球虫病活疫苗的免疫增强效果和安全性,本试验使用SPF雏鸡,以基因佐剂pCI-chIL-4-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP和pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP配合鸡球虫病三价四株活疫苗对雏鸡进行免疫攻毒,对基因佐剂的免疫增效作用进行检验;同时对基因佐剂的实验室安全性和体内分布表达情况进行研究。结果表明:（1）各佐剂接种组均能达到疫苗效力检验标准;随给药剂量的增加,免疫攻毒后鸡只的相对增重率（RWG）、抗球虫指数（ACI）升高;但剂量超过250μg/只时,其ACI、RWG反而下降;100μg/只pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP单独给药,50μg/只pCI-chIL-2-EGFP和200μg/只pCI-chIL-4-EGFP联合给药时,ACI值均达到高效。表明pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP单独给药、pCI-chIL-2-EGFP和pCI-chIL-4-EGFP联合给药剂量分别为100μg/只、50μg/只和200μg/只。（2）球虫疫苗免疫同时肌注100μg/只pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP,免疫间隔时间佐剂添加组≥6 d、免疫攻毒组≥7 d时,均可达到良好免疫效果,符合效力检验标准。表明pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP可使鸡球虫病活疫苗免疫间隔缩短1 d。（3）口服组（100300μg/只）ACI随接种剂量增加而升高。其中当口服给药为300μg/只时,其ACI（188.41）与肌注100μg/只ACI（190.49）接近,达到高效。表明鸡口服pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP可以起到免疫增效作用,但给药剂量为肌注的3倍。（4）佐剂添加组在二免后≥5 d和免疫攻毒组≥6 d攻毒时,符合效力检验标准。表明球虫疫苗配合接种100μg/只pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP时,免疫产生期缩短1 d。（5）pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP一次单剂量（100μg/只）、重复单剂量、一次超剂量（10倍）肌注组均无鸡死亡;鸡体温均在39.640.7℃之间,符合健康鸡正常体温;实验组平均增重与空白组差异不显着（p>0.05）;各组鸡未见眼观和镜检病变,基因佐剂未在体内的微生物中进行转移整合。表明该佐剂的安全性符合兽用生物制品的要求。（6）以100μg/只pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP肌注和口服给药鸡,接种部位最先检测到质粒;其次是血液和心脏;肝、脾、肾和肺在最后。其中肌注部位肌肉最长可达21 d;并可从注射后8 h持续表达到14 d。表明基因佐剂通过肌注途径接种可以在体内存在21d,佐剂肌注在体内分布和表达的时间长于口服。
黄金华[6]（2019）在《抗球虫中药的筛选及姜黄素复方制剂的研究》文中研究表明鸡球虫病是一种常见的寄生性原虫病,该病给世界养禽业带来了巨大的经济损失。鸡的艾美耳球虫公认的有七种,其中柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）是临床发病最多、危害最大的鸡球虫之一。鸡球虫病的防治仍主要依靠化学药物,但随着化学药物的广泛使用,耐药虫株不断产生、动物源食品中兽药残留等问题越来越多,临床球虫病的防治日益困难。中兽药多来自天然植物,绿色安全,组分多样,不易产生耐药性,是鸡球虫病防治研究新方向。本论文筛选出了对鸡柔嫩艾美尔球虫有显着抑制作用的单味药材,组成高效的复方制剂,并对复方制剂的抗球虫效果进行了全面评估。首先开展了20种单味中药的体外球虫卵囊抑制试验,结果显示姜黄素及仙鹤草、青蒿、常山、苦参这四种中药提取液对鸡柔嫩艾美尔球虫卵囊孢子化呈明显抑制作用,在球虫卵囊体外孵育6 d后其卵囊孢子化率仅34.32%～47.76%。开展了五种对球虫卵囊有较好抑制作用的药材组合筛选,以姜黄素和仙鹤草为固定组方,建立了三种不同的复方,并开展了三个复方对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊抑制试验,结果显示添加三种复方药液的球虫卵囊体外孢子化率分别为29.15%、42.74%、44.56%,而地克珠利对照组的球虫卵囊孢子化率为27.69%,筛选出方剂一为最佳组方。选取40只健康小鼠,均分为五组,分别以50、40、30、20、10 m L/kg体重的剂量灌胃方剂一药液,每天一次,连续两天,测定方剂一药液的半数致死量（LD50）。结果显示方剂一药液对小鼠的半数致死量大于50 m L/kg体重。在安全性试验中,40只健康小鼠以30 m L/kg的剂量连续7天,每天灌胃两次方剂一药液观察小鼠的临床与解剖特征。结果显示实验小鼠未出现毒性反应,剖检各脏器也无异常病变,说明筛选的方剂一药液安全性较高。开展了以姜黄素为主的中药复方制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻虫防治试验。120只14日龄的鸡,分为六组,四组为试验组,分别在口服柔嫩艾美耳球虫后一天,饲料中给予10、15、20 g/kg剂量的中药方剂一和0.2 g/kg剂量的0.5%地克珠利预混剂,评价抗球虫效果,另外两组分别为空白对照组和阳性对照组。结果显示中药方剂一不同的添加量均有一定的抗球虫效果,其中以20 g/kg剂量添加时,抗球虫效果最佳,其抗球虫指数为163.71,而对照化药地克珠利组的抗球虫指数为173.15。表明筛选的中药复方具有良好的抗球虫效果。最后本研究对筛选的以姜黄素为主的中药复方制剂进行了预防鸡球虫病的田间扩大试验。将600只1日龄矮脚黄鸡随机均分成三组,分别为方剂一给药组,给药剂量为20 g/kg饲料,连续添加至上市;同时设置化药对照组,每公斤饲料中添加1%的马杜霉素铵预混剂0.45 g,添加至上市前5天;另外一组为空白对照组。结果显示在饲料连续添加20 g/kg方剂一,能够促进矮脚黄鸡的生长,降低料重比,且抗球虫效果不亚于常规预防性抗球虫药马杜霉素。
贡鑫[7]（2018）在《鸡IL-2与IL-4融合基因表达载体的构建、表达及体外生物学活性研究》文中研究指明为了提高鸡球虫病活疫苗免疫效果,增强免疫保护力,降低活疫苗副作用,缩短免疫产生期,通过以鸡白介素4（chIL-4）和鸡白介素2（chIL-2）为研究对象,构建新型细胞因子免疫佐剂chIL-4和chIL-2融合基因表达载体,研究该融合基因的佐剂作用。试验结果表明:（1）采用基因合成与双酶切连接技术,经测序鉴定成功构建携带鸡白介素4、鸡白介素2以及二者融合基因的重组真核表达载体pCI-chIL-4-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP和pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP。（2）采用HilyMax脂质体介导方法转染小鼠成肌细胞C2C12,对转染条件进行优化,在荧光显微镜下观察,通过IPP软件分析其累计光密度值。结果表明,重组载体pCI-chIL-2-EGFP能在小鼠成肌细胞内正确表达,DNA与Hilymax脂质体比例为1:3时细胞转染率最高（29.65%±2.58%）,转染72h后蛋白表达量达到最高。（3）将构建的 pCI-chIL-4-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP 和 pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP 三种重组质粒转染鸡胚盲肠上皮细胞、鸡胚成纤维细胞,24h-96hmRNA表达量均先升高后降低,48h极显着（P<0.01）高于其他时间段,达到峰值;累积光密度值先升高后降低,72h显着（P<0.05）或极显着（P<0.01）高于24h和48h,达到峰值,到96h已检测不到;细胞上清液荧光强度先升高后降低,72h极显着（P<0.01）高于其余三个时间段,达到峰值。转染小鼠成肌细胞24h-96h,mRNA和蛋白表达量均先升高后降低,mRNA 48h和蛋白72h极显着高于其他时间段,达到峰值;细胞上清液荧光强度先升高后降低,72h极显着（P<0.01）高于其余三个时间段,达到峰值,表明三种重组质粒均能在三种细胞中进行表达,并能持续72h以上,三种重组蛋白均能分泌到细胞外,并在72h达峰值。（4）pCI-chIL-4-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP 和 pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP 三种重组质粒转染鸡胚盲肠上皮细胞、鸡胚成纤维细胞和小鼠成肌细胞三种细胞24h-96h的上清液均能极显着（P<0.01）促进鸡脾淋巴细胞的增殖,刺激指数均先升高后降低,72h达峰值,表明三种重组蛋白都具有生物学活性;而pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP重组质粒转染细胞的上清液对鸡脾淋巴细胞的增殖极显着（P<0.01）高于另外两种重组质粒,表明chIL-4-chIL-2融合蛋白的生物学活性显着高于chIL-4重组蛋白或chIL-2重组蛋白。
梁正鹏[8]（2018）在《毒害艾美耳球虫疫苗株重复免疫剂量和交叉免疫保护研究》文中认为鸡球虫有7个种,其中毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）致病力较强,引起急性型小肠球虫病,影响鸡体对营养物质的吸收且常伴发坏死肠炎。本论文以毒害艾美耳球虫为研究对象,比较其早熟疫苗株不同免疫剂量和免疫次数的免疫效果,以及免疫鸡群是否对其它种的鸡艾美耳球虫有交叉免疫保护,为鸡球虫病活疫苗的推广应用提供依据。首先对6种鸡艾美耳球虫的实验虫株进行毒力测定,为后期种间交叉保护摸索出各虫株最佳攻虫剂量。确定了毒害艾美耳球虫贺州株（NHZ）感染剂量为1.5×104个/只、柔嫩艾美耳球虫梅州株（TMZ）感染剂量为5×104个/只、堆型艾美耳球虫河源株（AHY）感染剂量为6×104个/只、巨型艾美耳球虫莱阳株（MLY）感染剂量为1.0×105个/只、布氏艾美耳球虫保定株（BBD）感染剂量为1.2×105个/只以及和缓艾美耳球虫保定株（MiBD）感染剂量为3.0×105个/只。第二部分研究内容通过鸡体免疫接种不同剂量与免疫次数的毒害艾美耳球虫早熟疫苗株（PNHZ）,评价免疫鸡群免疫保护效果并选出最佳免疫剂量与免疫次数。在1×105个毒害艾美耳球虫贺州株强毒孢子化卵囊（NHZ）攻击下,首免300个PNHZ株,二免剂量分别为9000个、15000个PNHZ株的免疫组均能抵抗而二免剂量为3000个组不能抵抗强毒攻击。三免剂量分别为3000个、9000个和15000个的免疫组均能抵抗1.3×105个毒害艾美耳球虫贺州株强毒孢子化卵囊的攻击（NHZ）。二免9000个PNHZ为最佳免疫剂量,且三免接种优于二免接种,建议临床应用可选择二免9000个PNHZ株。第三部分对已经建立了毒害艾美耳球虫免疫保护力的鸡群用毒害艾美耳球虫等6种不同种鸡艾美耳球虫强毒株攻虫,观察免疫交叉保护效果。结果表明,毒害艾美耳球虫免疫具有虫种特异性的,已免疫鸡群仅对毒害艾美耳球虫强毒株有保护力,对其他5种鸡球虫不具保护交叉免疫保护作用。
朱晓波[9]（2014）在《球虫疫苗稀释剂的制备及其对疫苗免疫效果的影响》文中进行了进一步梳理为了解决鸡球虫疫苗饮水免疫时,疫苗剂量加倍,免疫不均匀,导致的疫苗成本增加,免疫效果差的问题,进行如下试验：（1）依据混悬液悬浮机理、球虫免疫机理及佐剂作用机制进行组方,采用静态沉降试验,筛选能使球虫在水中均匀悬浮的球虫助悬剂；（2）一免攻毒试验,筛选具有良好免疫效果的球虫疫苗佐剂；（3）一免产生期、二免产生期试验检验球虫疫苗稀释剂免疫效果；（4）球虫疫苗稀释剂溶解等一系列试验,研制出了具有低成本,使用方便,溶解速度快的增效速溶球虫疫苗悬浮稀释剂。试验结果表明：（1）球虫疫苗助悬剂的筛选在助悬剂的筛选试验中,卡波姆和羟丙甲基纤维素（HPMC）两种助悬剂浓度越大,助悬效果越好,流动性越差。2因素4水平正交试验发现,卡波姆极差为93.34,HPMC极差为29.59,表明卡波姆较HPMC对助悬效果的影响大；综合助悬效果、粘壁性和价格,卡波姆和HPMC以A3B4浓度组合成配方的性价比高,助悬效果符合中国药典要求,可使球虫6h沉降率3.33%,粘壁率1.61%。（2）球虫疫苗佐剂的筛选一免攻毒试验中,佐剂（黄芪多糖、壳聚糖、葡萄糖）免疫组相对增重率、病变记分减少率（RLS）、卵囊减少率均高于免疫对照组,平均病变记分低于免疫对照组,三种佐剂对相对增重的影响从大到小依次是黄芪多糖（极差R3.25%）、壳聚糖（极差R2.23%）、葡萄糖（极差R0.16%）；对卵囊减少率的影响从大到小依次是黄芪多糖（极差R17.31%）、葡萄糖（极差R7.91%）、壳聚糖（极差R2.13%）；对病变记分影响从大到小依次是黄芪多糖（极差R0.4）、壳聚糖（极差R0.16）、葡萄糖（极差R0.04）,经过对比分析,最终确定佐剂黄芪多糖、壳聚糖、葡萄糖以A2B2C2浓度组合,免疫增效作用最佳。（3）将筛选出的A3B4浓度的卡波姆和HPMC与A2B2C2浓度的黄芪多糖、壳聚糖、葡萄糖复配成球虫疫苗稀释剂。通过4h饮水试验,测得球虫疫苗稀释剂组相对饮水对照组的相对饮水率为105.89%,对雏鸡饮水并无明显影响。（4）疫苗稀释剂对球虫疫苗免疫产生期的影响研究一次免疫产生期试验中,一免后第8天攻毒,球虫疫苗稀释剂组相对增重率77.9%,平均病变记分1.2,卵囊减少率69.5%,病变记分减少率（RLS）66.7%优于免疫对照组相对增重率74.9%,平均病变记分1.6,卵囊减少率65.1%,RLS55.6%；一免后第9天攻毒,佐剂免疫组相对增重率78.2%,平均病变记分1.1,卵囊减少率72.8%,RLS68.4%优于免疫对照组相对增重率76.2%,平均病变记分1.5,卵囊减少率68.7%,RLS58.3%,佐剂免疫组和免疫对照组鸡群平均病变记分、相对增重均明显低于攻毒对照组,差异极显着（P<0.01）,已能对大剂量强毒株攻击产生保护力,但平均病变记分均≥1,相对增重率未达到80%,未达到良好免疫效果。二次免疫产生期试验中,佐剂免疫攻毒组于二免后第6天攻毒相对增重率85.0%,平均病变记分1.0,RLS71.4%,卵囊减少率83.4%,产生良好免疫保护,免疫对照组于二免后第7天攻毒,对增重率89.2%,平均病变记分1.0,RLS77.8%,卵囊减少率88.7%,达到良好免疫效果,添加佐剂后使球虫疫苗免疫产生期缩短了一天。（5）球虫疫苗稀释剂中加入20%的表面活性剂泊洛沙姆188可使其溶解时间缩短到4min。同时,球虫6h沉降率维持在3.33%；预溶解时,球虫疫苗稀释剂用10%、20%、30%的水5～7min可溶解,溶解后呈稀糊状,随液体量的增加,糊状液体的流动性增大；用40%、50%、100%的水4～7min内可溶解,溶解后呈透明浅棕色液体。用不低于20%的水溶解时,5min可溶解,同时其流动性较好,便于倾倒；适宜球虫疫苗稀释剂溶解的水温为17-31℃,溶解时间5～6min。
颜静蕊[10]（2013）在《鸡E.necatrix早熟株疫苗的免疫效力研究》文中研究说明为鸡E.necatrix早熟株疫苗临床试验提供依据,按照农业部《兽用生物制品试验研究技术指导原则》要求,以相对增重率、平均病变记分、卵囊减少率、病变记分减少率（RLS）和抗球虫指数（ACI）为指标,进行了最小免疫剂量和免疫程序试验、靶动物接种效力试验、免疫产生期试验、疫苗的稳定性和安全性试验等基础性研究,研究表明：（1）以不同剂量E.necatrix早熟株对雏鸡分别于4日龄进行了一次免疫效力试验和4日龄、14日龄二次免疫效力试验,结果表明：①免疫剂量越大,对雏鸡体增重的不良影响也越大；②一次免疫剂量为100个／只时即可产生免疫保护,200个／只时平均病变记分和血便记分分别为0.83和1,未见死亡,确定为一次免疫最小免疫剂量；③二次免疫时,首免剂量200个／只和二免剂量400个／只时,平均病变记分和血便记分分别为0.60和0,相对增重率为80.44%,保护率达100%,确定疫苗二次免疫最小免疫剂量为首免200个／只,二免400个／只；④按照免疫程序,以最小免疫剂量分别对雏鸡进行一次免疫和二次免疫,雏鸡于一次免疫后第9d、二次免疫后第3d即可产生完全保护,能够抵抗E.necatrix强毒攻击。（2）按最小免疫剂量,分别于1、4、6日龄对雏鸡进行首免,10天后进行二免,攻毒后随着免疫日龄的增加,平均病变记分减小,相对增重率和抗球虫指数增加,免疫组未见鸡只死亡,平均病变记分和血便记分均≤1,达到疫苗免疫效力判定标准；雏鸡于4日龄进行首免,分别间隔3、5、7、10d进行二免,攻毒后随着间隔时间的增加,相对增重率、卵囊减少率、RLS、ACI呈上升趋势,平均病变记分呈下降,两次免疫间隔为7d、10d组平均病变记分和血便记分均≤1,ACI均在175以上；提示疫苗在1～6日龄进行首免,间隔7～10d进行二免,均能产生良好的免疫效果。（3）网上平养和地面平养两种饲养方式下的免疫效力试验表明,血便记分≤1,平均病变记分≤1,保护率为100%,相对增重率均在90%以上,表明在这两种饲养方式下,疫苗的安全性和免疫效力不受饲养方式的影响。（4）不同免疫方法（灌胃、滴口、饮水、拌料）的免疫效力试验表明,灌胃组、滴口组、饮水倍量免疫组平均病变记分和血便记分均小于1,ACI均在170以上,达到疫苗效力检验标准。（5）对2-8℃避光保存17个月以内的疫苗进行效力检验,结果表明：随保存期延长,鸡群相对增重率、卵囊减少率、RLS、ACI呈下降趋势,平均病变记分呈上升趋势；保存10个月以内的疫苗,平均病变记分均小于1,粪便记分均为0,未见鸡只死亡,ACI均在175以上,达到疫苗效力检验标准；但保存超过10个月,疫苗的保护力明显下降,免疫攻毒后第5天出现少量血便,个别鸡只死亡,平均病变记分超过1,ACI小于160,不能达到疫苗效力检验标准。（6）一次单剂量接种安全试验、单剂量重复接种安全试验和一次超剂量接种安全试验证实疫苗达到了安全性检验标准。
二、IMMUNITY TO COCCIDIOSIS:ACTION OF LIVE VACCINES（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、IMMUNITY TO COCCIDIOSIS:ACTION OF LIVE VACCINES（论文提纲范文）
（1）抗球虫药对全球家禽可持续生产的价值(综述)（论文提纲范文）
| 1 球虫病及其防控措施 |
| 1.1 球虫病的特性 |
| 1.2 球虫病的发病率 |
| 1.3 球虫病的危害 |
| 1.4 抗球虫药 |
| 1.4.1 化学合成类抗球虫药 |
| 1.4.2 离子载体类抗球虫药 |
| 1.4.3 抗球虫药的应用 |
| 1.5 疫苗 |
| 1.6 替代产品和策略 |
| 2 法规情况 |
| 2.1 加强对抗球虫药的兽医监督 |
| 3 抗球虫药的安全性 |
| 3.1 安全保证和可追溯性 |
| 3.2 肉制品中的化学药物残留和消费者健康 |
| 3.3 监管机构和药残监测 |
| 3.4 微生物耐药性 |
| 3.4.1 寄生虫耐药性 |
| 3.4.2 细菌耐药性 |
| 3.5 环境 |
| 4 抗球虫药对家禽可持续生产的价值 |
| 4.1 社会可持续性 |
| 4.1.1 动物健康和福利 |
| 4.1.2 无抗生素生产 |
| 4.2 经济的可持续性 |
| 4.3 环境的可持续性 |
| 5 总结和建议 |
（2）堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 文献综述 鸡球虫病防治研究进展 |
| 1 鸡球虫的生物学特征 |
| 2 鸡球虫病的诊断与防治 |
| 3 鸡球虫病的免疫预防 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 第一章 堆型艾美耳球虫配子体蛋白gam56基因的克隆与表达及其免疫原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 堆型艾美耳球虫配子体蛋白gam82基因的克隆与表达及其免疫原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三章 重组蛋白rEaGAM56和rEaGAM82及其联合免疫对堆型艾美耳球虫的免疫保护力 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（3）柔嫩艾美耳球虫免疫增强剂筛选与早熟株相关基因研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鸡球虫病 |
| 1.1.1 鸡球虫病原 |
| 1.1.2 鸡球虫病的防治 |
| 1.2 鸡球虫疫苗研究进展 |
| 1.2.1 活疫苗 |
| 1.2.2 DNA疫苗 |
| 1.2.3 亚单位疫苗 |
| 1.2.4 活载体疫苗 |
| 1.3 禽用免疫增强剂研究进展 |
| 1.3.1 微生态制剂类免疫增强剂 |
| 1.3.2 生物制剂类免疫增强剂 |
| 1.3.3 中草药及多糖类免疫增强剂 |
| 1.3.4 化学合成小分子类免疫增强剂 |
| 1.4 展望 |
| 第二章 五种免疫增强剂对柔嫩艾美耳球虫免疫增强效果的评价——笼养试验 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验虫株 |
| 2.2.3 实验试剂和仪器 |
| 2.2.4 柔嫩艾美耳球虫免疫用和攻毒用卵囊制备 |
| 2.2.5 免疫增强剂的配制 |
| 2.2.6 实验动物分组 |
| 2.2.7 免疫攻虫程序 |
| 2.2.8 主要观察指标 |
| 2.2.9 数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 免疫期间动物体重变化 |
| 2.3.2 免疫增强剂对攻虫后免疫效果的影响 |
| 2.3.3 血清抗体水平检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 五种免疫增强剂对柔嫩艾美耳球虫的免疫增强研究——平养试验 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验虫株 |
| 3.2.3 实验试剂和仪器 |
| 3.2.4 柔嫩艾美耳球虫免疫用和攻毒用卵囊制备 |
| 3.2.5 免疫增强剂的制备 |
| 3.2.6 实验动物分组 |
| 3.2.7 免疫攻虫程序 |
| 3.2.8 主要观测指标 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 免疫增强剂对免疫期间动物体重变化 |
| 3.3.2 免疫增强剂对攻虫后免疫效果的影响 |
| 3.3.3 免疫增强剂对鸡群抗体和细胞因子水平的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株孢子化卵囊的转录组分析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验虫株 |
| 4.2.3 实验试剂和仪器 |
| 4.2.4 继续对柔嫩艾美耳球虫早熟株进行早熟选育 |
| 4.2.5 柔嫩艾美耳球虫母株卵囊的收集和纯化 |
| 4.2.6 柔嫩艾美耳球虫早熟株卵囊的繁殖和纯化 |
| 4.2.7 柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株孢子化卵囊的转录组测序 |
| 4.2.8 荧光定量PCR验证转录组差异表达基因 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 继续对柔嫩艾美耳球虫早熟株的早熟选育结果 |
| 4.3.2 早熟株与母株转录组测序结果 |
| 4.3.3 差异基因的筛选 |
| 4.3.4 差异基因功能分类 |
| 4.3.5 转录组差异表达基因的荧光定量验证结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2和3特性与功能初步分析 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 实验虫株和细胞 |
| 5.2.2 实验试剂和仪器 |
| 5.2.3 柔嫩艾美耳球虫四个阶段虫体的纯化以及cDNA制备 |
| 5.2.4 EtRON2和EtRON3 转录水平分析 |
| 5.2.5 DF-1细胞的传代培养 |
| 5.2.6 EtRON2和EtRON3 在不同发育阶段虫体中的分布 |
| 5.2.7 EtRON2和EtRON3 多抗对子孢子入侵DF-1 细胞的影响 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 EtRON2和EtRON3 在早熟株和母株孢子化卵囊的转录水平差异 |
| 5.3.2 EtRON2和EtRON3 在不同发育阶段中转录水平的差异 |
| 5.3.3 EtRON2和EtRON3 在虫体不同发育阶段的分布情况 |
| 5.3.4 EtRON2和EtRON3 多抗对子孢子入侵DF-1 细胞的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（4）堆型艾美耳球虫涓滴免疫与脉冲免疫保护效果对比研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩写对照表 |
| 1 前言 |
| 1.1 病原学 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 生活史 |
| 1.4 致病性 |
| 1.5 防治 |
| 1.6 疫苗研究进展 |
| 1.7 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 堆型艾美耳球虫 |
| 2.1.3 主要试剂和仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 实验分组及处理 |
| 2.2.2 一次脉冲免疫与涓滴免疫的免疫攻虫保护效果测定 |
| 2.2.2.1 攻虫分组 |
| 2.2.2.2 评价指标及标准 |
| 2.2.3 二次脉冲免疫与涓滴免疫的攻虫保护效果测定 |
| 2.2.3.1 二次免疫实验分组及处理 |
| 2.2.3.2 二次免疫攻虫实验设计 |
| 2.2.3.3 二次免疫保护效果评价指标及标准 |
| 2.2.4 三次脉冲免疫与涓滴免疫的攻虫保护效果测定 |
| 2.2.4.1 三次脉冲免疫实验分组与处理 |
| 2.2.4.2 第三次免疫攻虫实验设计 |
| 2.2.4.3 三免保护效果评价指标及标准 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 涓滴免疫组与脉冲免疫组免疫后卵囊排放规律分析 |
| 3.1.1 涓滴免疫组与脉冲免疫组第一次免疫卵囊排放量规律 |
| 3.1.2 涓滴免疫组与脉冲免疫组第二次免疫卵囊排放量规律 |
| 3.1.3 涓滴免疫组与脉冲免疫组第三次免疫卵囊排放量规律 |
| 3.1.4 涓滴免疫组与脉冲免疫组整个免疫期间卵囊排放量规律 |
| 3.2 攻虫免疫保护效果测定结果 |
| 3.2.1 涓滴免疫组与脉冲免疫组第一次攻虫结果 |
| 3.2.1.1 涓滴免疫组与脉冲免疫组第一次攻虫后体重变化情况 |
| 3.2.1.2 涓滴免疫组与脉冲免疫组第一次攻虫后病变记分结果 |
| 3.2.2 涓滴免疫组与脉冲免疫组第二次攻虫结果 |
| 3.2.2.1 第二次攻虫后各组体重变化情况 |
| 3.2.2.2 第二次攻虫后排卵囊量结果 |
| 3.2.2.3 第二次攻虫后病变记分结果 |
| 3.2.3 各组第三次攻虫的体重变化 |
| 3.2.3.1 各组第三次攻虫后排卵囊量结果 |
| 3.2.3.2 各组第三次攻虫后病变记分结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 涓滴免疫组与脉冲免疫组卵囊排放规律 |
| 4.2 涓滴免疫组与脉冲免疫组免疫效果比较 |
| 5 总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（5）鸡球虫病活疫苗基因佐剂IL-2、IL-4实验室效力和安全性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 鸡球虫病研究进展 |
| 1.1 鸡球虫病 |
| 1.2 鸡球虫病免疫机制研究 |
| 1.3 鸡球虫病疫苗研究进展 |
| 2 鸡球虫病基因佐剂研究进展 |
| 2.1 鸡球虫病基因佐剂研究进展 |
| 2.2 鸡球虫病基因佐剂的分类与作用机制 |
| 2.3 细胞因子基因佐剂在鸡球虫病防控中的应用 |
| 2.3.1 鸡白介素2 |
| 2.3.2 鸡白介素4 |
| 3 鸡球虫病基因佐剂免疫效果的主要影响因素 |
| 3.1 免疫途径 |
| 3.2 免疫剂量 |
| 3.3 免疫次数 |
| 4 基因佐剂体内分布研究 |
| 5 安全性评价 |
| 6 本课题的目的和意义 |
| 材料与方法 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 试验菌株及球虫 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 质粒制备 |
| 2.1.1 冻存菌活化 |
| 2.1.2 菌液裂解 |
| 2.1.3 质粒纯化 |
| 2.1.4 纯化质粒检测 |
| 2.2 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂对球虫疫苗的实验室效力试验 |
| 2.2.1 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂接种剂量筛选 |
| 2.2.2 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂对疫苗免疫间隔的影响 |
| 2.2.3 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂口服和肌注免疫增效比较 |
| 2.2.4 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂对疫苗的免疫产生期影响 |
| 2.3 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂实验室安全性试验 |
| 2.4 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂的体内分布及表达鉴定试验 |
| 2.4.1 动物分组及处理 |
| 2.4.2 PCR敏感度测定 |
| 2.4.3 pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP体内分布检测 |
| 2.4.4 pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP体内表达检测 |
| 2.5 检测指标和判定标准 |
| 2.6 数据处理 |
| 试验结果 |
| 1 质粒制备结果 |
| 2 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂对球虫疫苗的实验室效力试验 |
| 2.1 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂接种剂量筛选结果 |
| 2.2 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂对疫苗免疫间隔的影响 |
| 2.3 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂口服效果和肌注效果比较 |
| 2.4 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂对疫苗的免疫产生期影响 |
| 3 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂实验室安全性 |
| 4 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂的体内分布及表达试验 |
| 4.1 引物特异性及敏感性测定结果 |
| 4.2 基因佐剂体内分布及代谢鉴定结果 |
| 4.2.1 基因佐剂在体内微生物中的转移情况 |
| 4.2.2 基因佐剂的组织分布结果 |
| 4.3 基因佐剂体内转录鉴定结果 |
| 4.3.1 荧光显微镜观察蛋白表达 |
| 4.3.2 组织中基因佐剂转录结果 |
| 讨论分析 |
| 1 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂对球虫疫苗免疫增效作用研究 |
| 1.1 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂给药剂量筛选 |
| 1.2 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂给药间隔筛选 |
| 1.3 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂口服和肌注效果比较 |
| 1.4 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂对疫苗的免疫产生期影响 |
| 2 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂实验室安全性 |
| 3 鸡重组IL-2、IL-4 基因佐剂的体内分布及表达 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 附图 |
| 致谢 |
（6）抗球虫中药的筛选及姜黄素复方制剂的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 鸡球虫病概述 |
| 1.1.1 鸡球虫病的病原及分类 |
| 1.1.2 鸡球虫病的危害 |
| 1.1.3 鸡球虫病的病理变化 |
| 1.1.3.1 肾脏、肝脏和肠道的变化 |
| 1.1.3.2 法氏囊的变化 |
| 1.2 鸡球虫病的防治 |
| 1.2.1 鸡球虫病的化学药物防治 |
| 1.2.2 鸡球虫病的疫苗防治 |
| 1.2.3 鸡球虫病的中药防治 |
| 1.2.4 中药姜黄的抗寄生虫作用 |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 虫体的样品 |
| 2.1.2 中药 |
| 2.1.3 化学药物 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要仪器 |
| 2.1.6 试验动物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 柔嫩艾美耳球虫的活化 |
| 2.2.2 单味抗球虫中药的筛选 |
| 2.2.2.1 单味中药的筛选 |
| 2.2.2.2 单味中药提取液的制备 |
| 2.2.2.3 单味中药提取液体外卵囊孢子化抑制试验 |
| 2.2.3 抗球虫中药复方制剂的筛选 |
| 2.2.3.1 中药复方的筛选 |
| 2.2.3.2 中药复方药液的制备 |
| 2.2.3.3 中药复方制剂卵囊抑制试验 |
| 2.2.4 中药复方制剂的安全性试验 |
| 2.2.4.1 半数致死量测定 |
| 2.2.4.2 小鼠的安全性试验 |
| 2.2.5 中药复方防治鸡球虫病的临床试验 |
| 2.2.5.1 试验分组及处理 |
| 2.2.5.2 相对增重率 |
| 2.2.5.3 存活率 |
| 2.2.5.4 盲肠病变值 |
| 2.2.5.5 盲肠内卵囊值 |
| 2.2.5.6 抗球虫指数(ACI) |
| 2.2.6 中药复方防治鸡球虫病的田间扩大试验 |
| 2.2.6.1 试验分组及处理 |
| 2.2.6.2 增重和料重比 |
| 2.2.6.3 球虫感染情况 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 单味中药筛选结果 |
| 3.2 中药复方制剂组方筛选结果 |
| 3.3 中药复方的安全性试验结果 |
| 3.3.1 半数致死量测定结果 |
| 3.3.2 小鼠的安全性试验结果与分析 |
| 3.3.2.1 小鼠一般状态变化 |
| 3.3.2.2 各组小鼠体重变化 |
| 3.3.2.3 安全性试验各组小鼠肝脏、肾脏与体重的比值 |
| 3.4 中药复方防治鸡球虫病的临床试验结果与分析 |
| 3.4.1 相对增重率 |
| 3.4.2 存活率 |
| 3.4.3 盲肠病变计分 |
| 3.4.4 盲肠内卵囊值 |
| 3.4.5 ACI指数 |
| 3.5 中药复方防治球虫的田间扩大试验结果与分析 |
| 3.5.1 增重情况与料重比 |
| 3.5.2 球虫感染情况 |
| 4 全文讨论与结论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.1.1 体外抗球虫卵囊试验 |
| 4.1.2 安全性评价 |
| 4.1.3 抗球虫临床试验 |
| 4.1.4 田间扩大试验 |
| 4.2 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（7）鸡IL-2与IL-4融合基因表达载体的构建、表达及体外生物学活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 鸡球虫病的研究概况 |
| 1.1 分类 |
| 1.2 生活史 |
| 1.3 流行特点 |
| 1.4 致病性 |
| 2 鸡球虫病免疫预防研究进展 |
| 2.1 免疫原性 |
| 2.2 免疫应答 |
| 3 鸡球虫疫苗的研究进展 |
| 3.1 强毒活疫苗 |
| 3.2 弱毒活疫苗 |
| 3.3 DNA疫苗 |
| 4 细胞因子免疫佐剂的研究进展 |
| 4.1 宿主免疫应答 |
| 4.2 细胞因子佐剂的作用 |
| 5 细胞因子融合蛋白研究进展 |
| 6 本课题的目的和意义 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 试验菌株与质粒 |
| 1.2 试验细胞、鸡胚和鸡 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP真核表达载体的构建与鉴定 |
| 2.2 阳离子脂质体HilyMax浓度对重组融合蛋白表达质粒转染细胞的影响 |
| 2.3 chIL-4和chIL-2重组真核表达质粒细胞转染和表达效果的测定 |
| 2.4 chIL-4和chIL-2重组真核表达质粒表达分泌蛋白量的测定 |
| 2.5 chIL-4和chIL-2重组真核表达质粒mRNA相对表达量的测定 |
| 2.6 重组融合蛋白分泌活性测定 |
| 2.7 数据处理 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP真核表达载体的构建与鉴定 |
| 3.2 阳离子脂质体HilyMax浓度对重组融合蛋白表达质粒转染细胞的影响 |
| 3.3 chIL-4和chIL-2重组真核表达质粒细胞转染和表达效果 |
| 3.4 重组融合蛋白分泌活性 |
| 4 分析与讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 攻读硕士期间科研情况 |
| 致谢 |
（8）毒害艾美耳球虫疫苗株重复免疫剂量和交叉免疫保护研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩写对照表 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 鸡球虫卵囊 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 实验用饲料 |
| 2.4 实验基地 |
| 2.5 主要设施设备 |
| 2.6 试剂 |
| 2.7 鸡艾美耳球虫毒力测定 |
| 2.7.1 实验分组与处理 |
| 2.8 不同免疫剂量与免疫次数的免疫效果比较 |
| 2.8.1 实验分组及处理 |
| 2.8.2 首免攻虫免疫保护效果测定 |
| 2.8.3 二免攻虫保护效果测定 |
| 2.8.4 三免攻虫保护效果测定 |
| 2.9 种间交叉免疫保护效果实验 |
| 2.9.1 实验分组及处理 |
| 2.9.2 评价指标及标准 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡艾美耳球虫毒力测定结果 |
| 3.2 首免卵囊OPG值及攻虫结果 |
| 3.2.1 首免卵囊OPG值 |
| 3.2.2 首免攻虫免疫保护效果 |
| 3.3 二免卵囊OPG值及攻虫结果 |
| 3.3.1 二免卵囊OPG值 |
| 3.3.2 二免攻虫免疫保护效果 |
| 3.4 三免卵囊OPG值及攻虫结果 |
| 3.4.1 三免卵囊OPG值 |
| 3.4.2 三免攻虫免疫保护效果 |
| 3.5 种间交叉免疫攻虫结果 |
| 3.5.1 攻柔嫩艾美耳球虫强毒株结果 |
| 3.5.2 攻堆型艾美耳球虫强毒株结果 |
| 3.5.3 攻巨型艾美耳球虫强毒株结果 |
| 3.5.4 攻布氏艾美耳球虫强毒株结果 |
| 3.5.5 攻和缓艾美耳球虫强毒株结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 鸡艾美耳球虫毒力测定 |
| 4.2 不同免疫剂量与免疫次数对免疫效果的影响 |
| 4.3 种间交叉保护 |
| 5 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（9）球虫疫苗稀释剂的制备及其对疫苗免疫效果的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 鸡球虫病的免疫学研究 |
| 2 鸡球虫疫苗研究进展 |
| 3 常用免疫方法 |
| 4 助悬剂概述 |
| 5 免疫佐剂研究进展 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 虫株 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 主要试剂及仪器 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 球虫卵囊助悬剂的配方筛选与配制试验 |
| 2.2 球虫疫苗佐剂筛选试验 |
| 2.3 球虫疫苗稀释剂对雏鸡饮水量影响试验 |
| 2.4 疫苗稀释剂对球虫疫苗免疫产生期的影响研究 |
| 2.5 泊洛沙姆188对球虫疫苗稀释剂溶解速度和悬浮效果的影响 |
| 2.6 溶剂量对速溶球虫疫苗稀释剂溶解速度的影响 |
| 2.7 不同水温对球虫疫苗稀释剂溶解速度的影响 |
| 2.8 检测指标和方法 |
| 2.9 数据处理 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 球虫卵囊助悬剂的配方筛选与配制试验 |
| 3.2 球虫疫苗佐剂筛选试验 |
| 3.3 球虫疫苗稀释剂对雏鸡饮水量影响试验 |
| 3.4 疫苗稀释剂对球虫疫苗免疫产生期的影响研究 |
| 3.5 泊洛沙姆188对球虫疫苗疫苗稀释剂溶解速度和悬浮效果的影响 |
| 3.6 溶剂量对速溶球虫疫苗稀释剂溶解速度的影响 |
| 3.7 不同水温对球虫疫苗稀释剂溶解速度的影响 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 球虫卵囊助悬剂配方的筛选与配制 |
| 4.2 球虫疫苗佐剂筛选 |
| 4.3 球虫疫苗稀释剂对雏鸡饮水量影响 |
| 4.4 球虫疫苗稀释剂对球虫疫苗免疫产生期的影响 |
| 4.5 泊洛沙姆188对球虫疫苗稀释剂溶解速度和悬浮效果的影响 |
| 4.6 溶剂量对速溶球虫疫苗稀释剂溶解速度的影响 |
| 4.7 不同水温对球虫疫苗稀释剂溶解速度的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 致谢 |
（10）鸡E.necatrix早熟株疫苗的免疫效力研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 鸡毒害艾美耳球虫病的发生机理 |
| 2 鸡球虫病的免疫学研究 |
| 3 鸡球虫疫苗研究进展 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 试验虫株 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 主要试剂及仪器 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 最小免疫剂量及免疫程序试验 |
| 2.2 靶动物接种效力试验 |
| 2.3 E.necatrix早熟株最小免疫剂量免疫产生期试验 |
| 2.4 免疫方法对鸡球虫活疫苗免疫效果的影响 |
| 2.5 E.necatrix早熟株稳定性试验 |
| 2.6 E.necatrix早熟株安全性试验 |
| 2.7 检测指标和方法 |
| 2.8 数据处理 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 最小免疫剂量及免疫程序试验 |
| 3.2 靶动物接种效力试验 |
| 3.3 E.ecatrix早熟株最小免疫剂量免疫产生期试验 |
| 3.4 免疫方法对鸡球虫活疫苗免疫效果的影响 |
| 3.5 E.necatrix早熟株稳定性试验 |
| 3.6 E.necatrix早熟株安全性试验 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 最小免疫剂量及免疫程序试验 |
| 4.2 靶动物接种效力试验 |
| 4.3 E.necatrix早熟株最小免疫剂量免疫产生期试验 |
| 4.4 免疫方法对鸡球虫活疫苗免疫效果的影响 |
| 4.5 E.necatrix早熟株稳定性试验 |
| 4.6 E.necatrix早熟株安全性试验 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 附图 |
| 致谢 |
四、IMMUNITY TO COCCIDIOSIS:ACTION OF LIVE VACCINES（论文参考文献）
- [1]抗球虫药对全球家禽可持续生产的价值(综述)[J]. 雷廷,Stefanie Kadykalo. 国外畜牧学(猪与禽), 2021(01)
- [2]堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究[D]. 华恩玉. 扬州大学, 2020
- [3]柔嫩艾美耳球虫免疫增强剂筛选与早熟株相关基因研究[D]. 余水兰. 中国农业科学院, 2020
- [4]堆型艾美耳球虫涓滴免疫与脉冲免疫保护效果对比研究[D]. 胡伟高. 华南农业大学, 2019(02)
- [5]鸡球虫病活疫苗基因佐剂IL-2、IL-4实验室效力和安全性研究[D]. 郝飞飞. 山西农业大学, 2019(07)
- [6]抗球虫中药的筛选及姜黄素复方制剂的研究[D]. 黄金华. 华南农业大学, 2019(02)
- [7]鸡IL-2与IL-4融合基因表达载体的构建、表达及体外生物学活性研究[D]. 贡鑫. 山西农业大学, 2018
- [8]毒害艾美耳球虫疫苗株重复免疫剂量和交叉免疫保护研究[D]. 梁正鹏. 华南农业大学, 2018(08)
- [9]球虫疫苗稀释剂的制备及其对疫苗免疫效果的影响[D]. 朱晓波. 山西农业大学, 2014(02)
- [10]鸡E.necatrix早熟株疫苗的免疫效力研究[D]. 颜静蕊. 山西农业大学, 2013(03)