一、姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿时SOD及MDA的影响及机制（论文文献综述）
刘丹丹[1]（2021）在《基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点》文中指出实验目的:本研究从细胞水平和动物水平,基于合成的雷公藤红素探针（celastrol-prob,cel-p）,联合串联质谱标签（Tandem Mass Tag,TMT）标记、细胞热转变分析（Cellular Thermal Shift Assay,CETSA）、免疫荧光（immunofluorescence,IF）、蛋白免疫印迹（western blotting,WB）等实验技术研究了活性天然产物雷公藤红素（celastrol,cel）对体内外脑缺血再灌注（ischemic-reperfusion,I/R）损伤的神经保护作用,并探索了其可能的靶点及机制,为合理开发利用天然产物celastrol提供了有力的科学支撑。实验方法:细胞水平1.提取原代新生Sprague-Dawley大鼠皮层神经元细胞体外培养并通过IF方法检测其纯度。建立原代神经元细胞氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）模型体外模拟脑I/R损伤,并用cell counting kit-8（CCK-8）方法确立OGD模型的最佳造模时间。采用CCK-8方法确认celastrol及合成的cel-p对神经元细胞的半数抑制浓度（50%inhibiting concentration,IC50）、是否具有体外神经保护性、最佳给药剂量及给药时间。2.采用 SDS polyacrylamide gel electrophoresis（SDS-PAGE）凝胶电泳方法,研究cel-p对原代神经元细胞的蛋白质组反应谱和生物结合效率,并验证是否与母体化合物celastrol竞争性结合位点相同。采用IF和cel-p点击化学（click chemistry reaction）实验方法,研究cel-p在原代神经元细胞中随时间的定位。3.基于TMT标记,采用亲和标签的pull-down实验和液相色谱-串联质谱（Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS/MS）的实验方法检测 cel-p在原代神经元细胞上结合的以及被竞争掉的靶蛋白。对cel-p结合的靶蛋白进行分析,分析celastrol作用于原代神经元细胞发挥神经保护性的可能靶点。4.根据分析结果,选取可信度较高的HMGB1蛋白进行验证。采用pull-down及SDS-PAGE凝胶电泳方法,研究celastrol是否可以与cel-p竞争性结合HMGB1蛋白。采用CETSA实验,研究celastrol是否可以增强HMGB1蛋白的热稳定性。5.采用WB和IF实验方法,研究建立原代神经元OGD模型后,celastrol对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白表达的影响。通过检测细胞培养上清中的HMGB1蛋白,研究模型组HMGB1蛋白随时间延长分泌的变化以及celastrol对HMGB1蛋白的分泌量的影响。6.采用重组人HMGB1、HMGB1 A box和B box蛋白,结合SDS-PAGE凝胶电泳方法和click chemistry reaction研究cel-p是否结合了 HMGB1蛋白的半胱氨酸位点。cel-p 是否减少了 B box 与 Toll 样受体 4（Toll like receptor4,TLR4）、晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products,RAGE）的结合,从而使其失去致炎作用。cel-p是否通过结合HMGB1蛋白抑制了其升高小鼠巨噬细胞样细胞系RAW 264.7细胞TNF-α分泌的能力。动物水平1.采用线栓法建立雄性成年Sprague-Dawley大鼠大脑中动脉阻断（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型体内模拟脑I/R损伤,以依达拉奉注射剂（edaravone injection,eda,6 mg/kg）为阳性对照,确认 celastrol（1 mg/kg）是否具有体内神经保护性。在MCAO模型1.5 h后拔出线栓进行再灌注,再灌注后Sham组及Model组腹腔注射1 mL生理盐水,M+cel组腹腔注射celastrol（lmg/kg）,M+eda 组尾静脉注射 edaravone（6 mg/kg）,然后分别于 24 h、48 h各给药一次,共三次。24 h、48 h、72 h进行Zea-Longa法行为学评分,72 h后取出大鼠脑组织进行 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色。2.在72 h后,每组取四只大鼠,经PBS、4%多聚甲醛灌流后取脑组织进行脱水、石蜡包埋,切片后对皮层组织神经元进行尼氏染色分析,对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白进行IF分析。每组取四只大鼠,分离患侧大脑中皮层组织对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白进行WB分析,进一步体内验证celastrol发挥神经保护性的靶点和机制。实验结果:细胞水平1.提取的原代神经元细胞纯度大于90%,可用于其他的实验研究。CCK-8方法确立OGD模型的最佳造模时间为缺糖缺氧4 h,celastrol与cel-p的IC50相近（celastrol IC50=2.06±0.52 μM,cel-p IC50=2.24±0.59 μM）,均具有明显的神经保护性。最佳给药剂量为0.1-0.8 μM,最佳给药时间为OGD模型后立即连续给药48 h。因此,合成的cel-p与母体化合物celastrol具有等效性,可代替原药用于后续靶点研究。2.采用SDS-PAGE凝胶电泳方法证实,对于原代神经元细胞,cel-p具有较高的生物结合效率,在低至0.8μM浓度下产生明显可见的条带,并与原药celastrol 8 ×（6.4 μM）竞争条件下具有相同的结合位点。采用IF方法和click chemistry reaction实验证实,cel-p可以在4 h内从细胞胞浆进入胞核,因此可用于标记胞浆和胞核的蛋白。3.采用TMT标记、pull-down和LC-MS/MS的方法检测cel-p在原代神经元细胞上结合的以及被竞争掉的靶蛋白。对cel-p结合的靶蛋白进行分析,发现共鉴定蛋白1405个,其中为高可信度的蛋白120个。4.根据分析结果,选取可信度较高的HMGB1蛋白进行验证。采用pull-down及SDS-PAGE凝胶电泳方法,证实celastrol可以与cel-p竞争性结合HMGB1蛋白,因此可进一步展开生物学实验以探究celastrol在细胞水平的作用靶点。采用CETSA实验,证实celastrol与HMGB1结合明显增强了 HMGB1的热稳定性。5.采用WB实验方法,证实建立原代神经元细胞OGD模型后,celastrol不能影响HMGB1的整体表达以及胞浆胞核的表达,明显升高了 HSP70的表达,降低了 NF-κB p65的表达。采用IF技术,证实cel-p与HMGB1蛋白具有共定位现象,对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响趋势与WB结果一致。通过检测OGD模型组细胞培养上清中的HMGB1蛋白发现,模型组HMGB1蛋白随时间延长逐渐分泌出去到培养基中,在24 h以后达到高峰。而celastrol在OGD模型后给药48 h并没有减少培养基中HMGB1蛋白的分泌量。由以上结论我们推测,celastrol可能无法影响HMGB1蛋白的出入核和分泌,而是通过直接结合HMGB1蛋白使其失去致炎活性。6.采用重组人HMGB1蛋白,证实cel-p可以结合HMGB1蛋白,并且可以竞争性抑制已知的HMGB1蛋白抑制剂（甘草次酸、二甲双胍）与HMGB1的结合。N-Hex-5-ynyl-2-iodoacetamide（IAA-yne）与二硫键型 HMGB1 蛋白的结合可以被celastrol几乎全部抑制,用Dithiothreitol（DTT）还原HMGB1二硫键后,celastrol同样可以几乎全部抑制IAA-yne与HMGB1蛋白的结合。由此可知,celastrol可以结合二硫键型HMGB1蛋白的106位半胱氨酸,也可以结合全还原型HMGB1蛋白的23、45、106位半胱氨酸。采用重组人A box和B box蛋白,证实cel-p与Abox、B box的结合几乎不能被2-iodoacetamide（IAA）抑制,而IAA-yne与A box、B box的结合可以被celastrol几乎全部抑制。因此,celastrol除了结合HMGB1蛋白的半胱氨酸,还有其他的结合位点。Celastrol明显抑制了HMGB1引起的RAW 264.7细胞TNF-α分泌。此外,celastrol可明显抑制HMGB1 B box与TLR4、RAGE受体的结合,因此使其失去致炎活性。动物水平1.各组大鼠在MCAO后72 h进行TTC染色病理学分析显示,M+cel和M+eda组的大鼠脑组织损伤侧梗死体积相较于Model组显着降低（p<0.05）。神经功能缺损评分（Zea-Longa）显示,M+cel和M+eda的大鼠在MCAO 24 h、48 h和72 h时间点均显着降低神经功能缺损评分,改善运动功能和行为。因此,TTC染色、Zea-Longa法行为学评分结果表明,celastrol 1 mg/kg体内同样具有神经保护性。2.尼氏染色结果显示,相较于Model组大鼠,M+cel和M+eda组大鼠皮层神经元细胞尼氏小体数量显着增多,排列紧密。WB和IF实验结果表明,celastrol几乎不能影响HMGB1的表达水平,但是明显升高了 HSP70的表达,降低了 NF-κB p65,结果与体外实验趋势一致。因此,celastrol通过作用于HSP70和NF-κB p65在体内发挥抗炎作用和神经保护性。结论:由以上可知,celastrol对体内外脑缺血再灌注损伤均具有明显的神经保护性,一是通过直接结合HMGB1蛋白,使其不能与TLR4、RAGE受体结合,从而失去致炎作用,二是提高细胞或者组织HSP70的表达,降低NF-κB p65的表达而发挥抗炎作用。
吴子健[2]（2021）在《通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究》文中指出目的 本次研究结合急性脊髓损伤（acute spinal cord injury,ASCI）的研究现状和热点,基于导师的临床经验,以通过抑制水通道蛋白4（aquaporin 4,AQP4）的表达从而减轻ASCI后脊髓水肿为切入点,旨在探讨通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减治疗ASCI的可能作用机制,以期为推广通腑逐瘀法治疗ASCI提供理论依据。方法 第一部分:10周龄SD大鼠30只,按随机数字表法随机分为假手术组（A组）、自制打击器2cm组（B1组）、自制打击器4cm组（B2组）、NYU组1.25cm组（C1组）、NYU组2.5cm组（C2组）,每组各6只。除Sham组外,其余各组采用改良Allen’s法造模。B1、B2组将9g打击杆分别从2cm、4cm处自由坠落撞击T10脊髓,C1、C2组使用NYU打击器分别从1.25cm、2.5cm处撞击T10脊髓。各组造模完成后分别于1、3、5、7d进行BBB评分和Reuter评分,7d后行灌注取材,石蜡包埋切片,尼氏染色,观察各组组织受损程度和神经元存活率。第二部分:10周龄SD大鼠60只按随机分配方法随机分为假手术组（Sham）、模型组（Model）、抵当汤组（DDD）、TGN-020组（TGN-020）和抵当汤联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,每组各12只。Sham组仅打开椎板暴露脊髓但不损伤脊髓;其余各组均采用自制脊髓打击器从40mm高度对脊髓进行打击。Sham组和Model组术后不予任何治疗措施干预,DDD组于术后3d予以抵当汤加减每日灌胃,持续3d,根据大鼠与人用药剂量体表面积换算法,DDD组大鼠每日用药剂量为5.04g/kg,采用蒸馏水进行稀释一定比例配制后予以灌胃处理,每日早晚各1次。TGN-020组处理方法:腹腔注射给药,每日用药剂量为5mg/kg,给药时间为3d。DDD+TGN-020组处理方法:予TGN-020腹腔注射给药,随后给予DDD灌胃处理。干预结束后进行行为学评价（BBB评分、斜板实验及Reuter评分）观察大鼠神经功能恢复情况,取材后进行脊髓组织大体观察和含水率检测、HE染色观察组织受损程度,尼氏染色观察神经元形态,免疫荧光检测各组脊髓组织AQP4、GFAP共表达的阳性细胞个数,Western Blot法检测各组脊髓组织中AQP4、GFAP、CSPG、PCNA、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,q PCR法检测各组脊髓组织中CSPG、PCNA基因的表达量,电镜下观察各组髓鞘和神经元组织形态,高尔基染色观察树突和树突棘形态。第三部分:8周龄SD大鼠40只随机分为空白血清组和含药血清组,含药血清组给予5.04g/kg DDD灌胃,持续3d,空白血清组予等剂量超纯水灌胃,持续3d,干预结束后提取血清备用。每次取胚胎大鼠8-12只,通过机械-酶消化法提取星形胶质细胞（Astrocytes,AS）,细胞采用10%的高糖培养基培养,观察细胞传代至第3代进行后续实验。首先,免疫荧光鉴定细胞中GFAP含量,随后进行实验分组:空白组（Control group,CG）、模型组（Model group,MG）、空白血清组（Blank serum group,BSG）、DDD含药血清组（DDD）、TGN-020干预组（TGN-020）、DDD联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,除MG外,其余各组均以划痕法进行造模,造模完成后DDD予以含药血清干预,BSG予以等剂量空白血清干预,TGN-020予以100nm TGN-020干预,DDD+TGN-020先予TGN-020干预后再予DDD干预。MTT法检测DDD含药血清干预AS的安全干预浓度、最佳干预时间和干预浓度,MTT法检测各组对RAS活性的影响,免疫荧光染色法检测RAS中AQP4和GFAP共表达的细胞数,Western Blot法检测各组RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,镜下观察DDD含药血清对RAS迁移率的影响。统计学方法:实验所得数据均使用SPSS21.0软件进行统计学处理,计量资料以均值±标准误（`X±S）表示,所得数据均经过正态性分布检测,若符合正态分布,则采用单因素方差分析,方差齐则采用LSD法,方差不齐则采用Games-Howell法;若不符合正态分布,则采用非参检验。以P<0.05提示差异具有统计学意义。结果 第一部分:自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究1.各组脊髓外观形态比较A组T10节段处硬脊膜完整,脊髓组织呈均匀乳白色,形态饱满圆润;B1、B2、C1、C2组T10节段处硬脊膜均完整,颜色呈不同程度的鲜红色或暗红色,损伤处可见水肿、瘀血及瘢痕组织增生,相对于B1、C1组,B2、C2组水肿更严重、瘀血范围更广、颜色更深、瘢痕组织更多。2.行为学评分比较BBB评分结果显示,A组术后除因手术致运动量减少外,未出现双下肢功能异常的表现,评分为21分;其余各组均出现不同程度的运动功能障碍,具体表现为:B2与B1、C2与C1相比,BBB评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）;B1与C1、B2与C2相比,BBB评分无显着差异（P>0.05）。Reuter评分结果显示,A组术后未发现感觉功能异常现象;其余各组术后均出现不同程度的感觉功能异常现象,具体表现为B2、C2组术后1d牵张反射消失,肌力、肌张力减弱或消失,疼痛回缩反射迟钝,背部感觉存在或消失;B1、C1组术后1d除肌力消失外,牵张反射、肌张力、疼痛回缩反射、背部感觉均存在,术后3d肌力开始恢复。B2与B1、C2与C1相比,Reuter评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）。B1与C1、B2与C2相比,Reuter评分无显着差异（P>0.05）。3.尼氏染色尼氏染色结果显示,A组脊髓组织结构完整,灰白质边界清晰,神经元细胞形态规则、胞核大、核仁清晰可见、数量多,胞质内可见斑块样尼氏体。相比A组,其余各组结构破坏更严重,灰白质结构不清,组织空白间隙更大,损伤处可见细胞呈空泡样改变或细胞皱缩、体积减小,神经元数量减少,尼氏体模糊或消失。4.脊髓受损面积比结果表明,A组未见受损区域,比值为0,其余各组均高于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2损伤面积比值明显升高,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2损伤面积比值差异不具有统计意义（P>0.05）。5.各组脊髓前、后角神经元损伤程度比较通过分析前、后角神经元阳性细胞数结果显示,A组神经元数目多,尼氏体含量多,其余各组均少于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2神经元阳性细胞数明显减少,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2神经元阳性细胞数差异不具有统计意义（P>0.05）。第二部分:抵当汤加减调节AQP4表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究1.各组脊髓组织的大体观察从大体观察上来看,Sham组脊髓组织颜色鲜白,组织完整,未见瘀血部位和水肿;Model组在打击损伤部位可见明显的瘀血区域,瘀血颜色深红,瘀血范围较大,并可见明显脊髓水肿;DDD组在打击损伤部位可见较小的瘀血区域,瘀血部位颜色淡红,可见轻度水肿;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组大体观察相似,肉眼见无显着差异。2.各组脊髓组织含水率与Sham组相比,其余各组脊髓组织含水率均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓组织含水率均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较,脊髓组织含水率没有显着差异（P>0.05）。3.行为学观察结果各组大鼠BBB评分、斜板实验结果以及Reuter评分显示,与Sham组相比,其余各组BBB评分和斜板实验得分均显着降低（P<0.05）,Reuter评分均显着升高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组BBB评分均显着升高（P<0.05）,Reuter评分均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。4.HE染色Sham组组织结构完整,神经元等细胞形态结构良好,未见瘢痕组织或空洞形成,未见瘀血区域或炎性物质渗出。Model组损伤部位可见组织结构离乱,大量瘢痕组织和脊髓空洞的形成,可见明显的瘀血区域,并伴有大量的炎性细胞浸润,神经元等细胞皱缩,数量减少。其余三组可见组织形态结构较完整,可见少量脊髓空洞的形成,瘀血区域范围较小,炎性细胞清润较少,神经元等细胞形态结构较完整。使用Image J软件对各组空洞面积进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组脊髓空洞面积显着增加（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓空洞面积显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓空洞面积组间比较不具有显着差异（P>0.05）。5.尼氏染色观察各组神经元形态Sham组脊髓形态结构完整,灰质呈蝴蝶状,灰白质界限清晰,可见较多的神经元分布,神经元胞质内可见染色清晰的斑块状尼氏体,神经元胞体饱满,细胞核大,核仁明显。Model组脊髓组织破坏严重,结构不完整,灰、白质界限不清,可见大量的炎性细胞浸润,神经元皱缩、液化、坏死,形成较多的空泡,尼氏体较小或消失。相对Model组,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓结构较完整,隐约可见灰白质界限,神经元仍可见,数量较多,空泡样改变减少,尼氏体数量较多、较饱满。但相对于Sham组,神经元仍存在固缩,胞浆减少,核变小,尼氏体减少等病理改变。6.免疫荧光检测各组AQP4、GFAP的阳性细胞表达量AQP4阳性细胞表达呈绿色,GFAP阳性细胞表达呈红色,DAPI染色呈深蓝色,AQP4+/GFAP+细胞表达呈黄色树枝状,各组染色背景干净,表达清晰,细胞核数量无显着差异（P>0.05）,具有可比性。Sham组少见或未见明显的AQP4+/GFAP+细胞,Model组可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,且细胞亮度高,胞体肿胀程度严重。与模型组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组细胞数量较少,亮度较低,细胞肿胀程度减轻。对各组的AQP4+/GFAP+细胞进行计数和统计,与Sham组相比,其余各组AQP4与GFAP的阳性细胞占比均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4与GFAP的阳性细胞占比显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组间相比较,AQP4与GFAP的阳性细胞占比无显着差异（P>0.05）。7.Western Blot法检测各组AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43的蛋白表达量各组蛋白条带背景清晰,无杂带现象,蛋白表达量趋势明显,具有可比性。与Sham组相比,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值差异不具有统计学意义（P>0.05）。8.各组脊髓组织中PCNA和CSPG基因表达量各组基因检测的扩增曲线变化平稳,溶解曲线为平滑的单峰形态,说明引物设计好,模板未见污染,实验结果具有可比性。各组目的基因相对表达量结果显示,与Sham组相比,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量差异不具有统计学意义（P>0.05）。9.透射电子显微镜观察髓鞘和神经元组织形态Sham组脊髓组织在透射电镜下可见髓鞘外形规则,厚薄均一,形似同心圆状,结构完整,未见破裂、缺失等改变,板层结构均匀致密,胞内线粒体丰富,胞浆饱满,清晰可见。Model组髓鞘结构不规则,部分髓鞘断裂缺失,厚薄不一,局部可见褶皱卷曲,板层结构松散、融合,线粒体肿胀,甚至部分溶解消失;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见髓鞘结构较完整,形态部分不规则但较Model组改善,部分髓鞘可见卷曲、厚薄不一,板层结构较均匀,虽有部分缺失,但松散程度相对Model组较轻,仍可见清晰的线粒体,但数量较Sham组少,胞体较小。10.电镜观察树突和树突棘形态各组脊髓经高尔基染色后结果显示:Sham组脊髓树突结构完整、形态规则、长度较长,树突上密布树突棘,树突棘分布整齐、均匀致密、数量较多;Model组脊髓树突形态不规则,部分断裂缺失,长度较短,较为纤细,树突棘数量少,稀疏分布,排列紊乱;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓树突形态有所改善、树突较长、结构较完整、周经较粗,树突棘数量较多,排列更为规则、整齐。对各组脊髓树突长度及树突棘进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组树突长度明显降低（P<0.05）,树突棘数量明显减少（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组树突长度明显增加（P<0.05）,树突棘数量显着增多（P<0.05）;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组组间相比,差异不具有统计学意义（P>0.05）。第三部分:抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用1.原代AS镜下观察原代细胞培养2d,镜下可见AS细胞呈不规则形状散在分布,部分细胞形似星形,细胞核大、呈椭圆形,细胞胞浆丰富,从胞体向四周发出长而有分支的突起;将原代细胞传代至第三代可见细胞生长状态良好,适宜进行后续实验。2.AS鉴定免疫荧光染色结果显示,GFAP染色呈阳性,阴性对照组未见任何阳性染色,提示GFAP呈特异性表达,所提取的细胞为AS。3.DDD含药血清对AS的安全干预浓度,以及干预RAS的最佳干预时间和最佳干预浓度DDD含药血清干预AS的安全浓度范围为:0-15%,DDD含药血清干预RAS最佳的干预浓度为10%,最佳干预时间为48h。4.DDD含药血清对RAS活性的影响MTT结果显示,与CG组相比,其余各组RAS活性均降低（P<0.05）;与MG相比,BSG组RAS活性无显着差异（P>0.05）,DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组RAS活性均显着下降（P<0.05）;DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组间比较无显着差异（P>0.05）。5.DDD含药血清对RAS迁移率的影响损伤24h后,各组RAS与对侧细胞完全分离,中间形成一条空白的划痕区域,划痕区未见或少见RAS;48h后部分细胞开始向对侧延伸突触,划痕区域出现部分肥大的RAS,细胞胞浆丰富,胞体呈球形,发亮,细胞加速分裂;72h后划痕区域缩小,部分RAS与对侧RAS突触交织,划痕开始愈合。在整个愈合过程中,24h各组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）;自48h开始,与MG组相比,BSG划痕区域面积比无显着差异,其余各组均明显较大（P<0.05）。DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。72h后,MG组与BSG组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）。与MG组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组划痕区域面积比明显较大（P<0.05）,组间比较无显着差异（P>0.05）。以上划痕区域面积比的改变反映了RAS在损伤发生后向受损区域的迁移速率。6.各组对RAS中AQP4、GFAP荧光表达量的影响使用免疫荧光染色法对RAS中AQP4、GFAP和细胞核进行了标记。染色结果显示,AQP4+细胞呈绿色,GFAP+细胞呈红色,细胞核呈蓝色,荧光双标的细胞呈黄色的不规则树枝状。其中,CG组仅见12个零星分布的AQP4+/GFAP+细胞;MG组和BSG可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较高,细胞肿胀程度严重;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见较少的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较低,细胞肿胀程度较轻。对AQP4+/GFAP+细胞进行计数统计,结果表明,与CG相比,其他各组阳性细胞占比显着增多（P<0.05）;与MG相比,除BSG组无显着差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比显着减少（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比组间相比无显着差异（P>0.05）。7.各组对RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量的影响结果显示,与CG组相比,其余各组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着降低（P<0.05）;与MG组相比,除BSG组无明显差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,3组组间比较无显着差异（P>0.05）。结论 1.自制简易脊髓打击器从20mm、40mm高处垂直撞击脊髓组织具有和NYU打击器从12.5mm、25mm处打击脊髓损伤程度相似的脊髓损伤动物模型,自制简易脊髓打击器安全性高,稳定性好,操作简便,价格低廉,可供科研工作者参考。2.通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减可有效消除SCI大鼠损伤处水肿,促进神经功能康复。其具体的作用机制为:通过抑制AQP4的表达可抑制反应性星形胶质细胞活化,减少胶质瘢痕形成,提高神经营养因子、神经生长因子及细胞膜生长相关蛋白的表达,促进神经功能康复。3.DDD含药血清能通过抑制AQP4的表达,有效减轻RAS水肿,减少RAS活化和减缓RAS迁移,促进RAS中神经营养因子的分泌。
康晓文[3]（2021）在《“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响》文中认为目的:观察“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤后血脑屏障通透性的调控作用,并探讨其作用机制,为“醒脑开窍”针法治疗脑血管病提供理论依据。方法:SPF级雄性SD大鼠88只,按体重随机分为空白组（N=8）,假手术组（N=8）,模型组（N=24）,中风膏组（N=24）,针刺+中风膏组（N=24）,除空白组和假手术组外,其它3组每组组内再进一步分为4h,3d和15d三个亚组,每个亚组8只。空白组不予处理,假手术组予以生理盐水灌胃,2次/日,中风膏组予以中风膏混悬液灌胃,2次/日,针刺+中风膏组在中风膏灌胃的基础上予以“醒脑开窍”针法,1次/日。干预后通过Zea-longa评分方法检测各组实验大鼠的神经功能缺损评分;采用伊文斯蓝测定法评价各组实验大鼠的血脑屏障通透性;用实时定量聚合酶链反应检测缺血脑组织ICAM-1、MMPs-9的基因相对表达。结果:1.大鼠神经功能缺损评分缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组神经功能缺损评分均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组神经功能缺损评分几乎无变化,针刺+中风膏组神经功能缺损评分降低（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组神经功能缺损评分均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组下降更显着（P>0.05）。与4 h、3d相比:针刺+中风膏组15d神经功能缺损评分显着降低（P<0.05）。2.大鼠EB含量测定缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组EB含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组的EB含量均降低（P<0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组相比较,差异无统计学意义（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组EB含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组的EB含量高于中风膏组（P<0.05）。与4h相比:针刺+中风膏组3d时EB含量增高,15d时EB含量降低。3.大鼠脑组织ICAM-1mRNA的含量测定缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组的ICAM-1mRNA含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组的ICAM-1mRNA含量均降低（P>0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组相比较无统计学差异（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组ICAM-1mRNA含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组ICAM-1mRNA含量下降更显着（P<0.05）。针刺+中风膏组ICAM-1mRNA含量在4h、3d、15d各个时相依次降低。4.大鼠脑组织MMPs-9含量检测缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组MMPs-9含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组MMPs-9含量均下降（P<0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组比较差异无统计学差异（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组MMPs-9含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组下降更显着（P<0.05）。与4h相比:针刺+中风膏组3d时MMPs-9含量增高,15d时MMPs-9含量降低。结论:1.“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性具有双向调控作用。在脑缺血再灌注3d时“醒脑开窍”针法可以降低血脑屏障的通透性,在15d时“醒脑开窍”针法可以增加血脑屏障的通透性。2.此种双向调控作用可能是通过针刺调节缺血再灌注大鼠脑组织中ICAM-1含量和MMPs-9含量来实现的。
叶任之[4]（2020）在《清达颗粒通过调控p38MAPK/Nrf2/HO-1通路减轻脂多糖诱导的小胶质细胞氧化应激反应》文中研究指明目的研究清达颗粒（QDG）对脂多糖（LPS）诱导活化的BV-2小胶质细胞抗氧化作用,并探讨其对p38MAPK/Nrf2/HO-1抗氧化信号转导通路活化是否存在影响。方法1体外培育BV-2小胶质细胞,采用LPS（1μg/mL）诱导氧化应激模型,MTT法确定合适的QDG干预浓度范围,在此浓度范围内不对细胞造成毒性,以及二者联合使用时合适的干预浓度范围。之后将实验分为五组,分别为对照组,LPS组,LPS+QDG组,LPS+QDG组设置31.25,62.5,125μg/mL 3个浓度。2.检测各组细胞中一氧化氮（NO）及活性氧（ROS）的荧光强度,细胞上清液中丙二醛（MDA）的含量以及细胞上清液中超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力。3.Elisa法检测各组细胞上清液中TNF-α的浓度。4.Western Blot法检测p38MAPK（p38）、磷酸化p38MAPK（p-p38）、转录因子Nrf2、细胞核内Nrf2、血红素加氧酶-1（HO-1）的蛋白表达情况以及p38MAP激酶抑制剂（LY2228820）与QDG联合干预下LPS诱导的BV-2细胞中HO-1蛋白的表达情况。结果1.清达颗粒浓度处于125μg/mL及以下时对BV-2细胞不造成毒性。LPS（1μg/mL）与QDG（125μg/mL及以下）共同干预时对BV-2细胞不造成毒性。2.LPS+QDG组可显着降低活化的小胶质细胞内ROS、NO的荧光强度以及细胞上清液中MDA的含量,提升了细胞上清液中GSH-Px、SOD两种抗氧化酶的活力。3.LPS+QDG组可显着降低活化的小胶质细胞上清液中TNF-α的浓度4.LPS+QDG组显着升高活化的小胶质细胞中p-p38、HO-1蛋白的表达,显着升高细胞核内Nrf2蛋白的表达。LY2228820+LPS+QDG组与LPS+QDG组相比小胶质细胞中HO-1蛋白的表达显着下降。而LY2228820+LPS+QDG组与LY2228820+LPS组相比小胶质细胞中HO-1蛋白的表达水平仍显着升高。结论1.清达颗粒可有效减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞氧化应激反应。2.清达颗粒可能通过调控p38MAPK/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路从而减轻LPS诱导的小胶质细胞氧化应激反应。
韩齐[5]（2020）在《基于RIP/MLKL通路探究氨气暴露导致鸡肾脏炎症损伤的机理》文中研究表明氨气是畜禽舍中的一种环境污染物,过量氨气对畜禽和饲养人员的健康有不利影响。肾脏是机体最重要的排泄器官。已有研究表明,氨气暴露能损伤肾脏的组织结构,但氨气诱导肾脏损伤的分子机制尚不明确。本研究拟建立肉鸡氨气暴露模型,采集肾脏组织,进行显微结构和超微结构观察,使用检测试剂盒测定氧化应激指标和ATP酶活性,通过q RT-PCR和Western blot测定线粒体动力学相关基因、程序性坏死相关基因、DAMPs、细胞因子、炎症因子、mi R-6615-5p和Smad7的m RNA和蛋白表达,以探究氨气暴露诱导鸡肾脏炎症损伤的机理。将108只1日龄Ross308肉鸡随机分为三组:对照组、氨气组1和氨气组2。对照组氨气浓度控制在5 mg/m3以内。氨气组1和氨气组2的舍内氨气浓度在0-21日龄分别为10±0.5 mg/m3和20±0.5 mg/m3,在22到42日龄分别为15±0.5 mg/m3和45±0.5 mg/m3。在第14、28和42天,采集肾脏组织样品。使用光学显微镜和透射电子显微镜观察鸡肾脏组织的显微结构和超微结构。使用检测试剂盒测定氧化应激指标（SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC活性和H2O2、MDA含量）、ATP酶(Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性)以及炎症因子（i NOS活性和NO含量）。使用q RT-PCR和Western blot检测线粒体动力学相关基因（drp1、opa1、mfn1、mfn2、mff）、程序性坏死相关基因（TNF-α、RIP1、RIP3、MLKL、JNK）、DAMPs（HMGB1、HSP70和HSP90）、细胞因子（IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12β、IL-17、IFN-γ、TGF-β1）、mi R-6615-5p和Smad7、炎症因子（IκBα、NF-κB、COX-2、PGEs、i NOS）的表达。试验结果显示:（1）氨气暴露后,鸡肾脏组织显微结构显示,肾间质出现大量红细胞,肾小球和肾间质炎性细胞浸润,肾小管颗粒管型形成,证实氨气暴露能诱导鸡肾脏组织损伤。鸡肾脏细胞超微结构呈现典型的坏死特征,包括线粒体肿胀、线粒体嵴断裂、细胞膜破裂和细胞内容物流出,证实氨气暴露能导致鸡肾脏细胞坏死。（2）氨气暴露能抑制抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px和T-AOC的活性,促进H2O2和MDA的产生,造成鸡肾脏组织发生氧化应激。线粒体动力学相关基因drp1和mff显着上调,opa1、mfn1和mfn2显着下调,ATP酶的活性降低,鸡肾脏细胞发生线粒体功能障碍。程序性坏死相关基因TNF-α、RIP1、RIP3和MLKL表达增加,鸡肾脏细胞发生的坏死类型为程序性坏死。上述结果表明:氧化应激和线粒体功能障碍参与了氨气暴露诱导的鸡肾脏细胞程序性坏死。（3）随氨气暴露时间和浓度的增加,HMGB1、HSP70和HSP90的表达显着上调,表明DAMPs的分泌增加。Th2和Th17细胞因子显着上调,而Th1和Treg细胞因子显着下调,鸡肾脏组织发生Th1/Th2和Th17/Treg失衡。NF-κB被激活,炎症因子COX-2、PGEs、i NOS和NO的表达增加,证实鸡肾脏组织发生炎症反应。上述结果表明:氨气暴露通过诱导DAMPs的分泌和免疫失衡,激活NF-κB通路,引起鸡肾脏组织炎症损伤。（4）通过对Smad7和mi R-6615-5p的检测与分析,初步证实Smad7是mi R-6615-5p的靶基因,揭示mi R-6615-5p/Smad7轴参与了氨气诱导鸡肾脏炎症损伤。综上所述,氨气暴露能引起鸡肾脏组织氧化应激和线粒体功能障碍,激活RIP/MLKL通路,造成鸡肾脏细胞程序性坏死;促进DAMPs的分泌,诱导Th1/Th2和Th17/Treg失衡,激活NF-κB通路,调控mi R-6615-5p和Smad7的表达,导致鸡肾脏组织发生炎症损伤。本研究有助于了解氨气的肾毒性机制,为探究氨气的毒性作用提供新的思路,对家禽健康和饲养人员职业安全具有一定意义。
林铭[6]（2020）在《三氧预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响》文中提出[目的]观察三氧预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞的形态学及其功能的影响。[方法]将30只SD大鼠（雌雄混合,400-500g）随机分为3组:三氧预处理组（O3+I/R组,n=10）、缺血再灌注组（I/R组,n=10）和假手术组（S组,n=10）。三氧预处理组每天固定时间点行腹腔注射医用三氧气体（三氧浓度为50ug/ml,1mg/kg/d）,连续注射7天。缺血再灌注组和假手术组于对应时间注射体积相同（ml）的氧气。所有实验大鼠麻醉后,颈部气管插管,接呼吸机,开胸后,分离左肺门,假手术组游离肺门后仅穿线不结扎,不再进行多余操作。O3+I/R、I/R组:游离肺门后,用4-0丝线双活结结扎肺门40 min,再灌注100 min。灌注完成后,心脏放血法处死大鼠。用注射器抽取预冷至4℃的PBS缓冲液,进行肺泡灌洗,缓慢、反复灌洗2-3次,间隔不超过2分钟,待回抽得到肺泡灌洗液,完成建模。实验结束后,取出大鼠肺组织,取2*2*2mm肺组织置于锇酸保存液中固定用于电镜观察,取部分肺组织用于测定肺湿干比重、elisa法测量ros浓度,检测LDH活性,pink1基因的表达,剩余部分放置入冰箱中冷冻保存。[结果]与假手术组相比,三氧预处理组、缺血再灌注组W/D值均较大（P<0.05）;其中,三氧预处理组、缺血再灌注组相比,缺血再灌注组的W/D值,明显大于三氧预处理组（P<0.05）。与假手术组进行比较,缺血再灌注组、三氧预处理组ROS含量明显升高（P<0.05）;缺血再灌注组与三氧预处理组相比ROS含量升高（P<0.05）。与假手术组进行比较,缺血再灌注组、三氧预处理组LDH活性明显升高（P<0.05）;缺血再灌注组与三氧预处理组相比LDH活性升高（P<0.05）。缺血再灌注组中,组织细胞的线粒体部分嵴消失,体积增大,部分细胞呈空泡样变,微绒毛减少较多,且细胞内存在大量自噬小体,部分上皮细胞溶解,缺血再灌注组中,组织细胞的线粒体部分嵴消失,体积增大,部分细胞呈空泡样变,微绒毛减少较多,且细胞内存在大量自噬小体,部分上皮细胞溶解,空泡样改变的细胞明显较少,,与假手术组相比,三氧预处理组、缺血再灌注组总rna值均较大（P<0.05）;用2-△CT法分析Q-PCR的结果三氧预处理组、缺血再灌注组相比>1,其中三氧预处理组、缺血再灌注组相比,缺血预处理组的总rna值较大,但P=0.64>0.05,无统计学意义。可能与灌注时间的长短有关,需进一步完善实验。[结论]三氧预处理能明显减轻肺缺血再灌注损伤对肺组织的损伤,其机制可能是将机体暴露于短暂、多次的氧化应激反应中,预先激活机体抗氧化应激系统,当机体遭遇氧化应激反应时,通过清除机体过多的ROS,从而减轻炎症反应。三氧预处理可以通过预先激活机体抗氧化应激系统从而对大鼠缺血再灌注损伤组织起保护作用。三氧预处理可以减轻缺血再灌注的肺组织的炎症程度、水肿情况。三氧预处理可以改善缺氧情况.
董瑞雪,樊会芳,李晓晖,王群,陈文武[7]（2019）在《植物多酚在脑缺血再灌注损伤中神经保护作用的研究进展》文中认为植物多酚是植物体内带有多个酚基的有机化合物,它表现出多种生物化学活性和药理学活性,近年来关于它的研究主要集中于其抗氧化、抗炎、抗动脉粥样硬化、抗细胞增殖活性等功能,而其对缺血再灌注发挥保护作用可能是通过减少活性氧（reactive oxygen species,ROS）生成,抑制脂质过氧化,降低再灌注期间固定白细胞数量以及减少补体激活从而减少炎症反应等机制发挥作用;除此之外,植物多酚也影响和调控一些细胞层面的活动比如信号转导、增殖、凋亡等。本文主要综述有关植物多酚在脑缺血/再灌注模型损伤中对神经元保护作用的研究进展。
王好好[8]（2019）在《橙皮苷对缺氧/复氧大鼠视网膜的干预效应研究》文中指出目的:探讨缺氧/复氧对大鼠视网膜的影响以及橙皮苷的干预作用及可能机制研究。方法:将成年雄性SD大鼠（200-250g）126只,随机分成常氧对照组、缺氧组、缺氧/复氧24h组、缺氧/复氧48h组与缺氧+橙皮苷（Hesperidin;HDN）干预组、缺氧/复氧24h+HDN干预组、缺氧/复氧48h+HDN干预组各18只。常氧组大鼠在常氧环境（西宁,海拔2,260m）喂养,缺氧组及缺氧+HDN干预组、缺氧/复氧组及缺氧/复氧+HDN干预组放置氧舱喂养（模拟高原5,000m环境,低压氧舱）,其中缺氧组氧舱内正常喂养,缺氧干预组以及缺氧/复氧+HDN干预组给予HDN悬浊液（40mg/kg,每日一次）灌胃,缺氧及缺氧+HDN干预组7天后处死并取视网膜;缺氧/复氧及缺氧/复氧+HDN干预组7天出氧舱后放置常氧环境24h、48h后取大鼠眼球,并剥离完整视网膜,光镜下观察视网膜组织学变化,水溶性四唑盐（WST-1）法测定大鼠视网膜中超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase SOD）含量、硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（Malondialdehyde MDA）含量、酶联免疫吸附测定法（Enzyme linked immunosorbent assay ELISA）测定NO的浓度、RT-PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）法检测脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor BDNF）mRNA表达。免疫组化检测caspase3、caspase9的表达。结果:缺氧/复氧组与正常组比较,视网膜细胞发生明显水肿,且视网膜中caspase3、caspase9阳性细胞表达增多,SOD活性降低,MDA活性升高,NO浓度升高,BDNFmRNA表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧/复氧24h组与缺氧组比较,复氧24h视网膜细胞水肿程度降低,且视网膜中caspase3、caspase9表达减少;SOD活性降低,差异有统计学意义（P<0.05）,MDA、NO、BDNF mRNA变化无统计学意义（P>0.05）;复氧48h水肿程度较复氧24h稍增强,且视网膜中caspase3、caspase9阳性细胞增多,缺氧/复氧48h时SOD活性升高,差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧+HDN干预组,MDA含量降低,SOD活力升高,NO浓度降低,且差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧/复氧24h+HDN干预组各基因变化均无统计学意义（P>0.05）。缺氧/复氧48h+HDN干预组视网膜细胞水肿程度较缺氧组减轻,视网膜中caspase3、caspase9阳性表达较缺氧组减弱,SOD活力升高,NO含量降低,升高BDNFmRNA表达差异有统计学意义（P<0.05）。结论:在缺氧/复氧环境下,大鼠视网膜发生组织学变化。缺氧/复氧可通过增加大鼠视网膜中MDA含量,降低SOD活力,升高NO浓度,抑制BDNFmRNA的表达,促进细胞凋亡,起到对视网膜损伤的作用。缺氧/复氧24h时,视网膜损伤减轻;复氧48h时,视网膜损伤程度稍有增强。橙皮苷可通过降低缺氧大鼠视网膜中MDA含量,升高SOD活力,降低NO浓度;增加缺氧/复氧48h组大鼠视网膜SOD活力,降低NO浓度、升高BDNFmRNA活力;抑制视网膜细胞凋亡,从而起到保护视网膜的作用。
王春丽[9]（2018）在《蒲葵子总黄酮对LPS/D-Galn致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究》文中认为背景:病毒性肝炎作为临床上一种常见病症,其危害极其严重。在研究病毒性肝炎常用的模型—LPS/D-Galn诱导的小鼠急性肝炎模型中,NF-кB信号途径参与LPS/TLR4下游级联反应,且其作为调控炎症因子表达的关键途径,核转录相关因子Nrf2是调节抗氧化应激反应的重要转录因子,TLR4/NF-кB和Nrf2信号通路共同参与了LPS/D-Galn诱导的小鼠急性肝炎的调控,对影响肝损伤的进程具有重要作用。中药蒲葵子（Livistona chinensis R.Br.）属于棕榈科蒲葵属植物,在民间广泛使用,具有治疗肝炎和癌症的作用,本课题组前期研究发现蒲葵子乙酸乙酯部位可以明显改善ConA造成的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抗氧化损伤有关;UPLC-MS法分析蒲葵子乙酸乙酯部位,发现其主要含有黄酮类化学成分,因此对蒲葵子总黄酮进行研究,对明确蒲葵子保肝的药效物质和蒲葵子的进一步开发利用具有重要作用。目的:为考察蒲葵子总黄酮（The total flavone of Livistona chinensis fruits,FLCF）药理作用及其机制,本实验采用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型和LPS/D-Galn致小鼠急性肝损伤模型,考察FLCF的药理作用并探讨其可能的作用机制。方法:1.先后利用大孔树脂、聚酰胺纯化FLCF,并利用紫外可见分光光度计检测其含量,利用HPLC鉴定FLCF中黄酮的组成成分。2.在体外实验中,利用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,评价FLCF的毒性;ELISA试剂盒测定细胞上清液TNF-α、IL-6和NO;试剂盒检测细胞ROS的表达情况;免疫荧光法检测Nrf2的表达情况;Western Blot检测FLCF对LPS诱导TLR4/NF-кB和Nrf2/HO-1通路的影响,从细胞、分子以及信号转导等层面对FLCF体外作用机制进行研究。3.在体内实验中分两部分实验,第一部分将70只Babl/c小鼠随机分为7组:正常对照组（NC）、LPS/D-Galn组（L/D）、FLCF（100 mg/kg）+L/D组（L/D+L-FLCF）、FLCF（200mg/kg）+L/D组（L/D+M-FLCF）、FLCF（400mg/kg）+L/D组（L/D+H-FLCF）、水飞蓟素（100mg/kg）+L/D组（L/D+SYM）、FLCF（400 mg/kg）（H-FLCF）组,每组10只。FLCF组灌胃给予FLCF（400mg/kg）,FLCF+L/D组分别灌胃不同剂量的FLCF预处理7天,正常对照组和L/D组仅给予0.3%的羧甲基纤维素钠（CMC-Na）预处。在第七天,正常给药1h后,正常对照组和H-FLCF组腹腔注射生理盐水,其余5组分别腹腔注射D-Galn（700 mg/kg）/LPS（1μg/kg）,建立急性肝损伤小鼠模型。观察造模后24h内各组小鼠的生存情况,绘制小鼠生存曲线图。第二部分将70只Babl/c小鼠随机分为7组（同上）,每组10只。FLCF预处理及造模同上,于造模6h后处死全部存活的小鼠,取血清标本,检测ALT、AST、NO水平;记录肝脾脏的重量,观察肝脏的大体形态,进行HE染色,分析肝组织病理程度;检测肝组织中GSH、SOD、MDA、TNF-α、IL-6水平;免疫组化法检测TLR4和CD68的表达情况;Western Blot技术检测肝组织TLR4/NF-кB和Nrf2/HO-1信号通路和Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果:1.FLCF中黄酮的含量为71.04%,主要由原儿茶酸、原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、荭草苷、异荭草苷、牡荆素、异牡荆素组成。2.体外实验结果显示,FLCF显着下调LPS诱导的RAW264.7细胞炎性相关因子TNF-α、L-6以及NO的分泌。且FLCF下调LPS诱导的TLR4/NF-кB信号通路,同时上调Nrf2蛋白的表达与核转位,增强下游抗氧化酶HO-1的表达,显着下调ROS的释放,进而发挥抗炎和抗氧化的作用。3.体内实验结果显示,FLCF显着提高小鼠急性肝损伤的生存率,同时显着改善LPS/D-Galn诱导的小鼠肝组织病理变化,降低小鼠血清中ALT、AST的水平,降低TNF-α、IL-6、NO炎性因子的水平,提高小鼠肝组织中抗氧化指标SOD、GSH的水平,降低MDA水平。此外,FLCF也显着下调TLR4/NF-кB信号通路,并且上调Nrf2/HO-1通路和Bcl-2/Bax蛋白的表达。结论:FLCF具有抗炎与抗氧化作用,可能通过调节TLR4/NF-кB、Nrf2/HO-1通路和Bcl-2/Bax蛋白,改善LPS/D-Galn诱导的小鼠急性肝损伤。FLCF有可能作为一种新型的药物来治疗急性肝炎疾病。
王萌[10]（2018）在《中介素对大鼠脑缺血再灌注中氧化应激及自噬相关因子的影响》文中进行了进一步梳理目的探究中介素（intermedin IMD）对大鼠脑缺血再灌注中氧化应激及自噬的影响及其作用机制,为临床预防脑缺血性再灌注提供一种全新的思路。方法SPF级健康SD雄性大鼠160只,6—7周,体重:260±10g,动物饲养单元温度是20-25℃。相对湿度50%-60%;无强光强噪音刺激,给予适量干燥饲料及清洁饮用水,每隔2天更换垫料一次;喂养过程中生存状态良好,未出现伤病及疫情发生。所有大鼠按实验要求随机分为4组,空白组（Sham组）:n=40;模型组（I/R组）:n=40,IMD组（100 mg/kg）:n=40;3-MA（200 nmol）:n=40。Sham组仅分离动脉,不插入线栓。其余各组进行造模并侧脑室注射,在缺血1.5h拔出线栓再灌注24h。24h后对大鼠进行进行Longa评分后取脑,一部分大鼠直接取脑做冰冻切片及电镜所用切片,或者通过2.5%戊二醛固定或心脏灌注甲醛固定液后取脑制作普通石蜡切片或取脑后做脑进行因子检测,运用Elisa法,HE染色法、TTC染色法、TUNEL染色、免疫组织化学法、Western blot免疫印迹分析法、透射显微镜观察法,检测大鼠脑组织的损伤情况、相关因子（SOD、MDA）活性、蛋白表达（LC-3、Beclin-1、P62）及细胞自噬子情况,观察IMD对大鼠脑缺血再灌注后氧化应激及自噬的影响,研究其对脑的保护作用。结果1行为学指标:通过行为学指标评分,确定脑缺血再灌注模型制备成功。2Elisa法检测:大脑SOD的活力显着低于Sham组（P<0.05）,说明脑缺血再灌注后脑组织的抗氧化能力下降,与I/R相比,IMD组的SOD含量增高（P<0.05）,说明IMD使脑缺血再灌注后脑组织中的SOD活力有一定的恢复力,阳性对照组3-MA组对SOD的活力影响高于I/R组,I/R组大脑MDA含量与Sham组相比较有显着升高（P<0.05）,说明脑缺血再灌注后脑组织脂质过氧化反应非常强烈,伴有抗氧化酶活性的降低和脑自由基的聚集;与I/R相比,IMD组和30MA组的MDA含量显着降低（P<0.05,P<0.01）,说明IMD和3-MA对脑缺血再灌注后脑组织脂质过氧化反应的抑制作用强烈。3-MA组作为阳性对照组,与IMD相比没有差异（P>0.05）;3 TTC染色:结果显示IMD组和3-MA组比I/R组梗死面积减少,从大体标本上说明模型制备成功。4 HE染色:研究结果显示IMD组和3-MA组与I/R组相比损伤神经元数量减少及水肿较轻的水肿,表明IMD和3-MA对脑缺血再灌注具有保护作用。5 TUNEL染色:结果为IMD组和3-AM组脑梗死灶体积大于Sham组（P<0.05）但小于I/R组（P<0.05）,说明自噬对脑缺血再灌注损伤有促进作用,IMD对脑缺血再灌注有保护作用。6免疫组化和Western Blot的定性和定量分析显示:IMD组中的Beclin1和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ的表达量明显低于模型组,P62增高,说明IMD可使脑缺血再灌注后24h使可减少脑缺血再灌注的自噬并下调再灌注大鼠海马CA-1区的LC-3,Beclin-1表达,减少脑缺血再灌注导致的脑损伤。7电镜观察:结果显示Sham组细胞和膜完整,各种细胞器形态正常无明显改变,染色质分布均匀,未发现自噬体出现;I/R组显示大量不同时期的自噬体和自噬溶酶体,线粒体出现肿胀,破裂,可见空泡形成,各级溶酶体显着增多,可见大量变形次级溶酶体,出现很多高尔基体分裂,研究结果说明大脑中动脉缺血再灌注时发生严重的自噬反应,各级溶酶体增多,并可见大量变形次级溶酶体;IMD组和3-AM组中可见处于不同时期的自噬体,线粒体肿胀,膜破裂,可见空泡,各级溶酶体显着增多,可见变形次级溶酶体,高尔基体分裂;相比于IMD组和3-AM组,I/R组的自噬体及各级溶酶体数量较多。结论IMD对脑缺血再灌注有保护作用,可以使脑缺血再灌注的损伤程度减弱。免疫组化和Western Blot的定性和定量分析显示IMD组中的Beclin1、和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ的表达量明显低于模型组,P62增高,说明IMD可减少脑缺血再灌注的自噬并下调再灌注大鼠皮质区的LC-3,Beclin-1表达,减少脑缺血再灌注导致的脑损伤。
二、姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿时SOD及MDA的影响及机制（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿时SOD及MDA的影响及机制（论文提纲范文）
（1）基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略语名词对照 |
| 文献综述 雷公藤红素对神经退行性疾病的神经保护作用及主要作用机制 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验一 celastrol发挥体外神经保护作用的靶点和通路 |
| 第一节 celastrol及cel-p的体外神经保护性初步探索 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 新生大鼠原代皮层神经元细胞提取 |
| 1.2.2 定期显微镜下观察神经元形态 |
| 1.2.3 IF鉴定大鼠原代皮层神经元特异性及纯度 |
| 1.2.4 神经元OGD模型条件摸索 |
| 1.2.5 CCK-8法确定celastrol及cel-p的IC_(50) |
| 1.2.6 celastrol及cel-p是否具有体外神经保护作用 |
| 1.2.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 cel-p具有较高的蛋白标记效率 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 cel-p蛋白标记效率探究 |
| 1.2.3 click chemistry reaction及SDS-PAGE凝胶分离 |
| 1.2.4 cel-p细胞成像实验 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三节 TMT标记结合LC-MS/MS确认celastrol的靶蛋白 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 pull-down, TMT标记及LC-MS/MS分析 |
| 1.2.3 cel-p的靶标识别及验证 |
| 1.2.4 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四节 HMGB1是celastrol的直接结合靶蛋白 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 pull-down及WB实验对HMGB1进行验证 |
| 1.2.3 celastrol对HMGB1蛋白热稳定性的影响 |
| 1.2.4 click chemistry reaction荧光实验 |
| 1.2.5 高浓度celastrol和cel-p作用5h对HMGB1蛋白的影响 |
| 1.2.6 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五节 celastrol发挥神经保护性作用的通路 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 celastrol对正常神经元细胞HMGB1蛋白表达的影响 |
| 1.2.3 celastrol对OGD模型后HMGB1蛋白表达的影响 |
| 1.2.4 celastrol对神经元OGD模型HMGB1/HSP70/NF-κB p65的影响 |
| 1.2.5 IF实验观察celastrol对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响 |
| 1.2.6 celastrol是否影响上清中HMGB1蛋白表达 |
| 1.2.7 celastrol是否影响HMGB1蛋白的氧化还原性 |
| 1.2.8 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第六节 celastrol直接结合HMGB1和B box使其失活 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 重组人A box及B box蛋白纯化及表达 |
| 1.2.3 重组人HMGB1蛋白与celastrol及cel-p反应 |
| 1.2.4 HMGB1抑制剂与cel-p的竞争性结合 |
| 1.2.5 重组人A box及B box蛋白与celastrol及cel-p反应 |
| 1.2.6 RAW 264.7细胞复苏、培养、传代、冻存 |
| 1.2.7 celastrol对HMGB1、B box引起的TNF-α分泌升高的影响 |
| 1.2.8 celastrol对B box与受体结合的影响 |
| 1.2.9 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 celastrol对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 |
| 第一节 celastrol的体内药效初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验动物MCAO模型制备 |
| 1.2.2 实验动物分组及给药 |
| 1.2.3 Zea-Longa法评估动物的神经行为缺损 |
| 1.2.4 TTC染色观察大鼠的脑梗死情况 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 celastrol通过HMGB1,HSP70,NF-κB p65发挥体内神经保护性 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验动物MCAO模型制备 |
| 1.2.2 实验动物分组及给药 |
| 1.2.3 大鼠灌流,取脑及脱水 |
| 1.2.4 尼氏染色观察celastrol对尼氏小体的影响 |
| 1.2.5 IF实验观察celastrol对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响 |
| 1.2.6 WB检测大鼠中皮层HMGB1、HSP70、NF-κB p65表达 |
| 1.2.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的成果 |
| 致谢 |
| 中医药科技查新报告书 |
（2）通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.不足和展望 |
| 第二部分 抵当汤加减调节AQP4 表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足与展望 |
| 第三部分 抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足和展望 |
| 本研究的创新点 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件1 自制简易打击器与NYU打击器 |
| 附件2 脊髓打击损伤模型 |
| 附录3 BBB评分 |
| 附录4 Reuter评分 |
| 附录5 综述 水通道蛋白在急性脊髓损伤中的作用机制 |
| References |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及饲养条件 |
| 1.2 实验药物及给药方法 |
| 1.3 主要仪器、试剂及其配制方法 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 干预方法 |
| 2.3 实验模型的制备 |
| 2.4 模型评定标准 |
| 2.5 脑组织病理标本的制作 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.7 统计处理 |
| 2.8 技术路线图 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 大鼠神经功能缺损评分 |
| 3.2 大鼠EB定量结果分析 |
| 3.3 RT-qPCR检测不同时相ICAM-1mRNA、MMPs-9mRNA的实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中医病名及发病机制 |
| 4.2 西医发病机制 |
| 4.3 血脑屏障的生理病理变化 |
| 4.4 .针刺对血脑屏障的调控作用 |
| 4.5 醒脑开窍针法在治疗缺血性脑卒中的作用 |
| 4.6 中风膏对治疗缺血性脑卒中的作用 |
| 4.7 实验结果分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 文献综述 缺血性脑卒中时血脑屏障变化及其影响因素 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间获得的科研成果 |
（4）清达颗粒通过调控p38MAPK/Nrf2/HO-1通路减轻脂多糖诱导的小胶质细胞氧化应激反应（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 实验材料与方法 |
| 1 实验细胞 |
| 2 实验药物、试剂耗材、工具及仪器 |
| 2.1 实验药物 |
| 2.2 实验试剂与耗材 |
| 2.3 实验仪器及工具 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 药品制备 |
| 3.2 细胞制备 |
| 3.3 MTT检测 |
| 3.4 ROS含量测定 |
| 3.5 NO表达水平检测 |
| 3.6 MDA含量测定 |
| 3.7 SOD活力测定 |
| 3.8 GSH-Px活力测定 |
| 3.9 ELISA法检测TNF-α浓度 |
| 3.10 Western blot法检测蛋白表达 |
| 4 统计学方法 |
| 实验结果 |
| 1 清达颗粒及脂多糖对BV-2 细胞活力的影响 |
| 1.1 不同浓度清达颗粒对BV-2 细胞活力的影响 |
| 1.2 清达颗粒对LPS诱导的BV-2 细胞活力的影响 |
| 2 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞中氧化应激指标及炎症因子的影响 |
| 2.1 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞中ROS含量检测 |
| 2.2 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞中NO含量检测 |
| 2.3 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞中MDA含量检测 |
| 2.4 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞上清液中SOD活力检测 |
| 2.5 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞上清液中GSH-Px活力检测 |
| 2.6 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞上清液中TNF-α浓度检测 |
| 3 Western blot检测蛋白表达 |
| 3.1 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞的p38、p-p38 蛋白表达的影响 |
| 3.2 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞的Nrf2、细胞核内Nrf2 蛋白表达的影响 |
| 3.3 清达颗粒对LPS干预的BV-2 细胞的HO-1 蛋白表达的影响 |
| 3.4 p38 抑制剂作用下清达颗粒干预LPS诱导的BV-2 细胞HO-1 蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（5）基于RIP/MLKL通路探究氨气暴露导致鸡肾脏炎症损伤的机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 氨气的毒理学研究进展 |
| 1.1.1 畜禽舍氨气的研究进展 |
| 1.1.2 氨气的毒性作用 |
| 1.1.3 氨气毒性机制的研究进展 |
| 1.2 程序性坏死的研究进展 |
| 1.2.1 程序性坏死的概述 |
| 1.2.2 程序性坏死与氧化应激的关系 |
| 1.2.3 程序性坏死与线粒体功能障碍的关系 |
| 1.3 炎症损伤的研究进展 |
| 1.3.1 程序性坏死与炎症损伤的关系 |
| 1.3.2 NF-κB通路与炎症损伤的关系 |
| 1.3.3 miRNA与炎症损伤的关系 |
| 1.4 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 试验动物分组 |
| 2.2.2 样品的采集与处理 |
| 2.2.3 鸡肾脏组织病理结构观察 |
| 2.2.4 鸡肾脏组织氧化应激指标及ATP酶的检测 |
| 2.2.5 RNA的提取及q RT-PCR |
| 2.2.6 蛋白的提取和Western Blot |
| 2.2.7 miRNA-m RNA靶向关系的生物信息学预测 |
| 2.3 试验数据的统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 氨气暴露对鸡肾脏病理学结构的影响 |
| 3.1.1 氨气暴露对鸡肾脏组织显微结构的影响 |
| 3.1.2 氨气暴露对鸡肾脏组织超微结构的影响 |
| 3.2 氨气暴露对鸡肾脏氧化应激的影响 |
| 3.2.1 氨气暴露对鸡肾脏氧化应激指标的影响 |
| 3.2.2 氨气暴露对鸡肾脏氧化应激指标影响的热图分析 |
| 3.3 氨气暴露对鸡肾脏ATP酶活性的影响 |
| 3.4 氨气暴露对鸡肾脏线粒体动力学相关基因表达水平的影响 |
| 3.4.1 氨气暴露对鸡肾脏线粒体动力学相关基因mRNA表达水平的影响 |
| 3.4.2 氨气暴露对鸡肾脏线粒体动力学相关基因蛋白表达水平的影响 |
| 3.5 氨气暴露对鸡肾脏程序性坏死相关基因表达水平的影响 |
| 3.5.1 氨气暴露对鸡肾脏程序性坏死相关基因mRNA表达水平的影响 |
| 3.5.2 氨气暴露对鸡肾脏程序性坏死相关基因蛋白表达水平的影响 |
| 3.6 氨气暴露对鸡肾脏DAMPs和细胞因子表达水平的影响 |
| 3.6.1 氨气暴露对鸡肾脏DAMPs表达水平的影响 |
| 3.6.2 氨气暴露对鸡肾脏细胞因子表达水平的影响 |
| 3.7 氨气暴露对miR-6615-5p和 Smad7 表达水平的影响 |
| 3.7.1 miR-6615-5p与 Smad7 靶向关系的预测结果 |
| 3.7.2 氨气暴露对鸡肾脏miR-6615-5p与 Smad7 的表达水平 |
| 3.7.3 miR-6615-5p与 Smad7 的相关性分析 |
| 3.8 氨气暴露对鸡肾脏炎症因子表达水平的影响 |
| 3.8.1 氨气暴露对鸡肾脏炎症因子mRNA表达水平的影响 |
| 3.8.2 氨气暴露对鸡肾脏炎症因子蛋白表达水平的影响 |
| 3.8.3 氨气暴露对i NOS和 NO表达水平的影响 |
| 3.9 氨气暴露对基因表达水平影响的热图分析 |
| 3.9.1 氨气暴露对基因mRNA表达水平影响的热图分析 |
| 3.9.2 氨气暴露对基因蛋白表达水平影响的热图分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 氨气暴露对鸡肾脏组织结构的影响 |
| 4.2 氨气暴露对鸡肾脏组织氧化应激的影响 |
| 4.3 氨气暴露对鸡肾脏细胞线粒体功能的影响 |
| 4.4 氨气暴露对鸡肾脏细胞程序性坏死的影响 |
| 4.5 氨气暴露对鸡肾脏组织免疫失衡的影响 |
| 4.6 氨气暴露对鸡肾脏组织炎症反应的影响 |
| 4.7 氨气暴露对鸡肾脏组织miR-6615-5p和 Smad7 的影响 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（6）三氧预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 三氧治疗基础研究和临床应用的现状与进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（7）植物多酚在脑缺血再灌注损伤中神经保护作用的研究进展（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 植物多酚的来源、分类、性质 |
| 2 植物多酚在脑缺血模型中的应用 |
| 2.1 葡萄/葡萄酒 |
| 2.2 茶多酚 |
| 2.3 银杏 |
| 2.4 姜黄素 |
| 2.5 罗布麻宁 |
| 2.6 其他植物提取物/多酚 |
（8）橙皮苷对缺氧/复氧大鼠视网膜的干预效应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物及饲料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 分组、造模及干预 |
| 2.2.2 视网膜采集与保存 |
| 2.2.3 视网膜匀浆液的准备 |
| 2.2.4 HE染色 |
| 2.2.5 免疫组织化学染色法检测 |
| 2.2.6 BCA法蛋白测定 |
| 2.2.7 SOD测定 |
| 2.2.8 MDA测定 |
| 2.2.9 NO的测定 |
| 2.2.10 BDNFm RNA表达的测定 |
| 2.3 统计方法 |
| 2.4 技术路线图 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 缺氧/复氧对大鼠视网膜的影响 |
| 3.1.1 各组视网膜HE染色结果 |
| 3.1.2 各组视网膜免疫组化结果 |
| 3.1.3 各组视网膜SOD、MDA、NO、BDNFmRNA表达结果 |
| 3.2 HDN对缺氧/复氧大鼠视网膜的影响 |
| 3.2.1 各组视网膜HE染色结果 |
| 3.2.2 各组视网膜免疫组化结果 |
| 3.2.3 各组视网膜SOD、MDA、NO、BDNFmRNA表达结果 |
| 3.2.3.1 缺氧组大鼠视网膜各基因变化 |
| 3.2.3.2 缺氧/复氧24h组大鼠视网膜各基因变化 |
| 3.2.3.3 缺氧/复氧48h组大鼠视网膜各基因变化 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 缺氧/复氧环境的建立 |
| 4.2 缺氧/复氧以及相关基因研究 |
| 4.3 橙皮苷的药理作用 |
| 4.4 实验结果分析 |
| 4.4.1 缺氧/复氧对大鼠视网膜的影响 |
| 4.4.2 HDN对缺氧/复氧大鼠视网膜的干预作用 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）蒲葵子总黄酮对LPS/D-Galn致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 蒲葵子 |
| 第二节 急性肝损伤的研究进展 |
| 第三节 课题立项依据与研究内容 |
| 第二章 蒲葵子总黄酮的含量测定及成分分析 |
| 第一节 蒲葵子总黄酮的含量测定 |
| 1.实验试剂与仪器 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 第二节 蒲葵子总黄酮的成分分析 |
| 1.实验试剂与仪器 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三章 蒲葵子总黄酮的抗炎作用及其机制研究 |
| 第一节 蒲葵子总黄酮的抗炎作用研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 第二节 蒲葵子总黄酮对LPS诱导的TLR4/NF-кB和Nrf2/HO-1信号通路的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四章 蒲葵子总黄酮对LPS/D-Galn诱导的急性肝损伤的保护作用及其机制研究 |
| 第一节 蒲葵子总黄酮对LPS/D-Galn诱导的急性肝损伤的保护作用 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 第二节 蒲葵子总黄酮对LPS/D-Galn诱导的急性肝损伤的TLR4/NF-кB和Nrf2/HO-1信号通路及Bcl-2/Bax的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.数据处理方法 |
| 4.结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附件 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（10）中介素对大鼠脑缺血再灌注中氧化应激及自噬相关因子的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要药品与试剂 |
| 1.1.3 主要仪器和器材 |
| 1.1.4 实验分组 |
| 1.1.5 建立大鼠中动脉缺血再灌模型 |
| 1.1.6 操作技术 |
| 1.1.7 实验技术 |
| 1.1.8 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 神经功能测评 |
| 1.2.2 Elisa法 |
| 1.2.3 TTC染色结果 |
| 1.2.4 HE检测结果 |
| 1.2.5 TUNEL染色 |
| 1.2.6 免疫组织化学法 |
| 1.2.7 Westernblot免疫印迹分析法 |
| 1.2.8 透射显微镜观察法 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第2章 综述 |
| 2.1 脑缺血再灌注引起自噬 |
| 2.2 大脑缺血再灌注损伤中引起自噬在诱发因素 |
| 2.2.1 氧化应激与自噬 |
| 2.2.2 自噬与兴奋性毒性 |
| 2.3 大脑缺血再灌注损伤中对自噬的调节机制 |
| 2.3.1 mTOR |
| 2.3.2 低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α) |
| 2.3.3 PKC-JNK轴(protein kinaseK-c-JunN-terminal kinase) |
| 2.3.4 P53 |
| 2.3.5 H3R |
| 2.3.6 Malat1-miR-26b-ULK2 |
| 2.3.7 其他因子 |
| 2.4 自噬对脑缺血再灌注的影响 |
| 2.4.1 自噬加剧大脑缺血再灌注损伤 |
| 2.4.2 自噬保护大脑缺血再灌注损伤 |
| 2.5 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 学位论文数据集 |
四、姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿时SOD及MDA的影响及机制（论文参考文献）
- [1]基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点[D]. 刘丹丹. 中国中医科学院, 2021
- [2]通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究[D]. 吴子健. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [3]“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响[D]. 康晓文. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [4]清达颗粒通过调控p38MAPK/Nrf2/HO-1通路减轻脂多糖诱导的小胶质细胞氧化应激反应[D]. 叶任之. 福建中医药大学, 2020(11)
- [5]基于RIP/MLKL通路探究氨气暴露导致鸡肾脏炎症损伤的机理[D]. 韩齐. 东北农业大学, 2020
- [6]三氧预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响[D]. 林铭. 昆明医科大学, 2020(02)
- [7]植物多酚在脑缺血再灌注损伤中神经保护作用的研究进展[J]. 董瑞雪,樊会芳,李晓晖,王群,陈文武. 世界最新医学信息文摘, 2019(35)
- [8]橙皮苷对缺氧/复氧大鼠视网膜的干预效应研究[D]. 王好好. 青海大学, 2019(04)
- [9]蒲葵子总黄酮对LPS/D-Galn致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究[D]. 王春丽. 广州中医药大学, 2018(02)
- [10]中介素对大鼠脑缺血再灌注中氧化应激及自噬相关因子的影响[D]. 王萌. 华北理工大学, 2018(01)