一、高效抗虫基因PinⅡ转化水稻的研究（论文文献综述）
李健英[1]（2019）在《棉花响应烟粉虱胁迫的分子机制及棉花体细胞胚胎表观基因组学研究》文中研究表明棉花作为全球三大转基因作物之一,其纤维品质和产量受到农业害虫的影响。随着转Bt基因棉花推广,鳞翅目害虫棉铃虫、红铃虫得到控制,但其抗性逐渐丧失。烟粉虱（Bemisia tabaci）等刺吸式口器害虫对全球棉花生产造成了巨大的危害,但关于棉花如何感知和防御烟粉虱的信息是非常有限的。本研究以棉花与烟粉虱互作为模型,利用RNA-Seq和sRNA-Seq数据挖掘棉花内源的抗虫机制,构建棉花响应烟粉虱非编码RNA共表达调控网络。在全基因组水平上,利用全基因关联分析（GWAS）挖掘棉花抗性位点。为了更好地进行棉花遗传转化,拓展棉花遗传转化的受体范围,我们建立了连续再生驯化体系,获得了高转化效率棉花受体材料-Jin668,同时系统解析棉花再生和体细胞胚胎发生表观遗传调控机制。因此本研究分两大部分内容,分别探讨棉花内源的抗虫基因鉴定和功能分析以及棉花再生DNA甲基化图谱。主要结果如下:1.棉花-烟粉虱互作转录组分析利用RNA-Seq比较了烟粉虱强抗性品种（HR）和敏感性品种（ZS）在不同侵染时间点转录组差异。功能富集分析表明棉花对烟粉虱侵染的转录反应涉及编码蛋白激酶、转录因子、代谢物合成和植物激素信号的基因。结合GO和KEGG富集分析,HR和ZS感染烟粉虱后抗性基因的转录水平不同。RNA-Seq数据集构建的加权基因共表达网络显示WRKY40和铜转运蛋白是棉花响应烟粉虱侵染的枢纽基因。通过病毒诱导的基因沉默（VIGS）研究GhMPK3,抑制了MPK-WRKY-JA通路,增强烟粉虱的易感性。本研究为棉花防御烟粉虱响应提供了全面见解,并鉴定了几类控制韧皮部害虫的候选基因。2.棉花响应烟粉虱非编码RNA分子机制解析本研究我们构建了抗性材料（HR）和易感材料（ZS）在烟粉虱侵染下小RNA和降解组测序。总共鉴定出260个miRNA家族和241个靶标。定量PCR分析显示几种miRNA及其相应的靶标呈现出动态的时空表达模式。在RNA-Seq数据集鉴定了2,365个基因间区长链非编码RNA（lincRNAs）。进一步分析发现29个lincRNA转录本中产生17个miRNA前体。全基因组分析鉴定出85个同相位干扰小RNA（phasiRNA）位点,9个PHAS基因由6个miRNA触发,包括编码富含亮氨酸重复序列（LRR）的抗病蛋白,生长素响应因子（ARF）和MYB转录因子。通过构建模型和实验数据,我们探索和扩展了miR390-tasiARF在棉花响应烟粉虱侵染转录调控机制。VIGS沉默ARF8增加了生长素和茉莉酸,导致对烟粉虱侵染耐受性增加。通过对不同的非编码RNA进行综合分析,为植虫互作提供了有用的转录组数据资源。3.关联分析挖掘棉花抗虫位点本研究收集了269份陆地棉材料组成的自然群体,鉴定了2.88百万SNPs并进行群体进化树,群体结构,PCA分析和连锁不平衡分析。269份棉花材料在三个环境中进行棉花四个抗虫指数调查,叶片危害率（LDR）,整体植株危害率（PDR）,感抗等级（SRL）以及盲蝽蟓指数（MI）。我们在三个环境下鉴定了7个LDR,PDR和SRL显着候选位点,其中有一个位点共定位。结合LD分析,整合转录组数据,筛选了一个铜转运子CRC1候选基因。4.多组学数据揭示棉花再生和体细胞胚发育表观基因组学基础本研究通过连续再生驯化（SRA）策略,从母体自交系Y668中选育出具有高再生能力的优质棉花Jin668。我们构建了体细胞胚胎发育过程中的非胚性愈伤组织（NEC）,胚性愈伤组织（EC）,体细胞胚（SE）以及再生后代植株的叶片全基因组单碱基分辨率甲基化图谱。结果表明,Jin668显示出低DNA甲基化,再生后代中整体甲基化呈下降趋势。在NEC到EC中DNA甲基化上升由RNA介导的DNA甲基化（RdDM）和H3K9me2途径协同调控。在EC到SE中DNA甲基化下降,24-nt siRNA和H3K9me2丰度不变,进一步分析发现DNA去甲基化酶ROS1和DME显着上调,该过程可能依赖于DNA去甲基化途径。整合RNA-Seq和差异甲基化区域（DMR）,体细胞胚胎发生过程中低CHH-DMR激活了生长素和WUSCHEL相关基因表达。在NEC中添加DNA甲基化抑制剂增加了胚胎的数量。我们多组学数据为植物组织培养和再生后代植物中DNA甲基化的动态提供了新的见解。该研究还表明诱导的低甲基化可以更好的促进植物再生能力并优化母本遗传栽培品种。
王亚南[2]（2017）在《Bt水稻组织中Cry蛋白的表达及在残体中的降解动态》文中研究说明转基因抗虫水稻的培育和利用为控制水稻害虫提供了一条经济、安全、有效的新途径。中国在转基因抗虫水稻方面的研究处于世界领先水平,已创制出大量的转基因水稻新材料、新品系。有不少品系显示出了很好的商业化应用潜力。但产业化应用前,严格、充分地做好安全性评价尤为重要。评价Bt水稻的环境安全性,一个重要的方面是其产生的Cry蛋白对农田环境中非靶标生物如天敌昆虫、土壤动物、水生生物等的潜在风险。因此,明确Cry蛋白在Bt水稻生长期不同组织中的含量和杀虫活性及收获后在植株残体中的降解动态是系统评价Bt水稻所产生外源Cry蛋白环境风险的重要基础。本研究以无标记转cry1Ab基因水稻mfb-MH86和其非转基因亲本对照MH86为材料,通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）和敏感昆虫生测研究了Cry1Ab蛋白在不同生长时期不同组织中的表达动态及抗虫性;以转基因水稻T1C-19（表达Cry1C）和T2A-1（表达Cry2A）及它们的非转基因亲本对照MH63为材料,通过ELISA技术监测了其残体组织中Bt蛋白的降解动态,以期为系统评价Bt水稻的环境风险奠定基础。具体研究结果如下:1)mfb-MH86 Cry1Ab蛋白的表达及对二化螟的抗性:mfb-MH86 Cry1Ab蛋白的表达情况为在叶片中的表达量最高（9.7134.09μg/g干重（DW））,茎中次之（7.6618.51μg/g DW）,根中最低（1.9513.40μg/g DW）。在所有测定的水稻组织中,Cry1Ab蛋白量在苗期和分蘖期最高。生物测定试验显示,二化螟取食mfb-MH86水稻不同生长期的茎秆6天后,死亡率均达到100%;而取食相应的非转基因对照MH86茎秆的二化螟死亡率为15.038.3%。说明,mfb-MH86水稻茎中Cry1Ab蛋白的表达水平足以使整个生长季的水稻得到保护,免受靶标害虫二化螟的危害。2)Cry蛋白在水稻残体组织中的降解动态:（1）Cry蛋白在根茬中的残留量在不同水稻品系、不同组织类型和不同降解时间之间呈显着差异。T2A-1根茬中Cry蛋白的初始含量显着高于T1C-19的,并且两种水稻茎秆残体中的含量通常都高于根残体中的。在整个采样监测期内,T2A-1根茬中的Cry2A残留量大体上先经过短时间的升高,然后进入逐步下降的趋势,地上茎秆残体中Cry2A的降解速度明显快于地下根残体中的。在11个月后试验结束时根茬残体中的Cry2A蛋白还能检测到。T1C-19根茬中Cry1C残留量的降解动态则呈不同的模式,从收割后到采样结束整体呈下降趋势,中间会出现短暂回升,经8个月降解后,茎秆和根残体中均检测不到Cry1C的存在。（2）Cry蛋白在叶片中的残留量也因水稻品系、处理方式或降解时间不同而差异显着。一般,T2A-1叶残体中Cry蛋白的含量高于T1C-19的。经前期快速大量降解后,7月份后残留量检测不到或处于很低水平,在前6次采样时间段地表覆盖和埋入土壤两种处理对Bt蛋白残留有差异显着性影响。T2A-1叶中Cry2A在地表覆盖处理下前3个月就快速降解到初始含量的15.62%,而埋入土壤的处理则是先经3个月的升高再下降,结束时分别约为初始含量的0.03%和0.09%。相比,T1C-19叶片中的蛋白则无论哪种处理都整体呈逐步下降的趋势,经7个月后就达到几乎检测不到的水平。不过,埋入土壤更利于T1C-19叶片中Cry1C的降解。田间两水稻残体中Bt蛋白的降解还会受到气温和降水量等多种因素的复合作用而带有季节性的特点,经春夏快速降解,秋季到来前已至检测不到或很低水平。而具体结合不同残体中Bt蛋白的降解动态,为减少残留量,认为T1C-19水稻收割后宜进行翻耕将残体埋入土中,而T2A-1收割后则宜将残体暴露于地表。
姚丽,刘家勇,吴转娣,刘洪博,苏火生,吴才文[3]（2013）在《禾本科主要农作物抗虫转基因研究进展》文中提出本文主要综述了水稻、玉米、小麦及甘蔗等4种禾本科主要农作物的抗虫转基因研究进展,分析了其存在的主要问题及解决途径,并对其研究前景作了展望。
徐秀秀,韩兰芝,彭于发,侯茂林[4]（2013）在《转基因抗虫水稻的研发与应用及在我国的发展策略》文中指出转基因抗虫水稻的研发和应用为害虫的防治提供了新策略。目前,全球已培育出近50个转基因抗虫水稻品系,大部分均已进入田间试验阶段,鉴于其环境安全性及食品安全性,还未进行商业化种植。本文在对全球转基因抗虫水稻研发和应用现状综述的基础上,分析了我国转基因抗虫水稻发展面临的机遇及所存在的问题,并结合我国水稻生产的实际情况,提出了目前我国转基因抗虫水稻的发展策略,以期为转基因抗虫水稻的研发、应用及安全监管提供科学依据。
唐丽,谭炎宁,韩小霞,孙志忠,段美娟[5]（2011）在《抗虫转基因水稻研究进展及发展趋势》文中研究表明评述了几大类抗虫基因的抗虫机理及其在转基因水稻中的应用,分析了抗虫转基因水稻研究存在的问题和发展趋势。
李聪[6]（2011）在《双价抗虫转基因水稻的育成和鉴定》文中研究表明水稻是世界上最重要的粮食作物之一,随着人口的增加和耕地面积的减少,进一步提高水稻产量有极其重要的意义。虫害是限制水稻增产的主要原因之一,利用转基因技术培育抗虫水稻可以有效解决水稻虫害问题。近年来,水稻抗虫基因工程取得了很大的进展,相继获得了一系列抗虫基因工程植株。但随着抗虫转基因植物的大规模种植,抗虫谱相对狭窄及害虫易产生抗性等问题也越来越受到人们的关注。因此,转双价或多价抗虫基因植物成为植物抗虫基因工程研究的热点之一本论文主要包括如下工作：1.采用根癌农杆菌介导法将两个抗虫基因sbk和sck转入水稻品种Dular中。通过常规PCR检测,获得18份去选择标记的转基因阳性植株。Southern杂交分析结果表明,其中15份为单拷贝插入。对这15份单拷贝转基因植株进行RT-PCR分析,结果表明,抗虫基因都能正常表达。同时利用Dular本身的广亲和基因（S5-n）标记和抗条纹叶枯病基因（qSTV-11b和qSTV-11c）标记进行分子检测,结果表明,这15份单拷贝转基因植株都具有广亲和基因和抗条纹基因的特征带；与不同籼稻及粳稻配组,杂种F1的结实率和条纹叶枯病及抗虫性在田间自然发病状况下的调查结果表明,这些单拷贝植株不但保留了广亲和性与抗水稻条纹叶枯病能力,而且抗螟虫能力显着提高。将抗虫基因与广亲和基因及抗条纹叶枯病基因聚合在一起,为抗病虫杂交稻育种提供资源基础。2.用含有双价抗虫质粒的农杆菌感染南粳45的愈伤组织,再生获得植株,通过对56个再生植株的PCR分析,筛选到去选择标记且具有双价抗虫基因的阳性单株42株。通过Southern杂交分析,发现其中38株为单拷贝插入,3株为2个拷贝,1株为3个拷贝。对单拷贝的单株进行RT-PCR、Bt基因检测试纸条鉴定表明,外源基因能正常表达。人工接虫结果也表明,转基因株对螟虫的毒杀效果达97%一100%。通过转入sbk和sck双价抗虫基因,大大提高了南粳45的抗虫能力。筛选出T45-2、T45-11和T45-14优良株系。不但为粳稻抗虫育种提供了有利资源,也为粳稻的大面积生产提供了优良品种储备。
饶玉春,苏长青,钱前,曾大力[7]（2010）在《转基因抗虫水稻的生态风险和治理对策》文中进行了进一步梳理本文综述了转基因抗虫水稻外源抗虫基因的种类和作用机制,探讨了种植转基因抗虫水稻潜在的生态风险,主要包括基因漂移和杂草化、对靶标害虫抗性的影响、对非靶标生物的影响以及对土壤微生态系统的影响,并提出一些相关的治理对策。
陈浩,林拥军,张启发[8]（2009）在《转基因水稻研究的回顾与展望》文中研究表明水稻作为世界上超过一半人口的主食,是最重要的粮食作物之一.在过去的半个多世纪里,水稻育种取得了巨大的成功.水稻的单位产量实现了翻番,部分地方甚至提高至3倍,这为保障世界粮食安全作出了巨大的贡献.但近十几年来水稻的产量停滞不前,这一方面是由于在育种技术上没有新的突破以及遗传多样性在栽培品种中的逐步变窄,另一方面也是因为频繁发生的病虫害以及旱灾等自然灾害使得水稻生产损失惨重.然而,世界人口的持续增长以及社会经济的快速发展导致对粮食的需求不断增加.针对这些问题,我国学者提出了培育绿色超级稻的设想,围绕水稻抗病虫、抗旱、营养高效利用、优质、高产等五大重要性状,对水稻品种进行全面改良以实现农业的可持续发展.而转基因技术作为一种新兴的育种手段,在实现绿色超级稻目标上将发挥重要作用.水稻的转基因研究始于20世纪80年代末期,迄今已有大量的转基因水稻研究被报道,其中大部分的研究内容与绿色超级稻所要实现的目标一致.本文首先回顾水稻遗传转化技术的发展,再以抗病虫、抗旱、营养高效利用、优质、高产、外加抗除草剂等几大主要性状为主线对转基因水稻取得的主要研究成果进行逐一阐述,最后对转基因水稻的发展进行展望.
曾黎琼,段玉云,张云孙,程在全,黄兴奇[9]（2009）在《云南转基因农作物研究与产业化:现状及其发展》文中研究指明基因转化在农作物新品种培育中发挥着重要的作用.综述云南在农作物基因转化研究和产业化发展方面所做的工作,并提出了今后开展此项工作的设想和建议.
邓力华[10]（2008）在《抗除草剂和多价抗虫基因导入水稻光温敏核不育系的研究》文中研究指明杂草和害虫的危害是导致水稻减产的重要原因,每年由此给全球水稻生产造成的损失高达数百亿美元。为了提高杂交水稻的抗虫性、方便直播制种和除草,避免人们对抗生素筛选标记的安全性顾虑,我们开展了抗除草剂、抗虫植物表达载体的构建和水稻光温敏核不育系的转化研究。抗除草剂、抗虫光温敏核不育系水稻培育成功,将有望在抗除草剂和抗虫杂交水稻培育、杂交水稻直播栽培和草害防治、杂交稻机械化制种中发挥重要作用。本文构建了包含抗除草剂基因Epsps和3个抗虫基因（马铃薯蛋白酶抑制剂基因Pin-II、苏云金杆菌毒蛋白基因Bt cryI（A）及雪花莲外源凝集素基因GNA）的植物表达载体。其中,除草剂基因Epsps不仅在实验中作为筛选标记基因方便进行筛选,而且可以使作物获得除草剂抗性而方便除草、直播和机械化制种。基因枪法和农杆菌介导转化法将连锁在一起的4个基因转化水稻光温敏核不育系7001S。通过基因枪转化法轰击1160块的愈伤组织得到167株再生植株,转化率17.4%。通过农杆菌介导转化法侵染270块的愈伤组织,获得6株再生植株,转化率2.2%。转基因再生植株的分子生物学鉴定表明,抗除草剂基因Epsps和抗虫基因已经整合到水稻基因组中,其拷贝数为1-2个。除出只有1～3个基因检出的植株,选出81个含有4个基因的转基因植株。部份植株中只含其中1～3个基因,可能是由于基因枪转化中部分片段发生丢失造成的。利用除草剂草甘膦处理含4个基因的转基因植株,它们表现出对草甘膦具有不同的抗性,推测是由于抗除草剂基因在不同个体中表达强弱不同所致。通过除草剂处理筛选,共获得具有草甘膦抗性且结实正常的转基因再生植株53株。
二、高效抗虫基因PinⅡ转化水稻的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、高效抗虫基因PinⅡ转化水稻的研究（论文提纲范文）
（1）棉花响应烟粉虱胁迫的分子机制及棉花体细胞胚胎表观基因组学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 植物与害虫互作研究综述 |
| 1.1.1 转基因抗虫作物研究概况 |
| 1.1.2 植物—昆虫互作分子机制 |
| 1.2 植物抗虫基因挖掘手段 |
| 1.2.1 Bt毒蛋白杀虫 |
| 1.2.2 来源于植物抗虫基因 |
| 1.2.3 RNAi在植物抗虫中的应用 |
| 1.2.4 组学技术挖掘植物抗虫基因 |
| 1.2.5 正向遗传学挖掘植物抗虫基因 |
| 1.3 植物非编码RNA研究进展 |
| 1.3.1 非编码RNA研究概述 |
| 1.3.2 非编码RNA在植物抗病虫研究进展 |
| 1.4 植物表观基因组研究进展 |
| 1.4.1 主要表观修饰因子 |
| 1.4.2 DNA甲基化表观遗传机制 |
| 1.4.3 DNA甲基化与植物有性生殖 |
| 1.4.5 DNA甲基化与杂种优势 |
| 1.4.6 DNA甲基化与群体遗传学 |
| 1.5 植物再生研究进展 |
| 1.5.1 棉花再生研究进展 |
| 1.5.2 植物再生表观调控 |
| 1.6 本研究目的和意义 |
| 第二章 棉花响应烟粉虱侵染的转录组分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 棉花材料 |
| 2.1.2 昆虫来源 |
| 2.1.3 棉花接虫方法 |
| 2.1.4 棉花抗烟粉虱指标统计 |
| 2.1.5 棉花RNA提取和测序 |
| 2.1.6 数据质控和比对 |
| 2.1.7 差异表达基因分析 |
| 2.1.8 共表达网络分析 |
| 2.1.9 RT-PCR和 qPCR-PCR |
| 2.1.10 VIGS载体构建和侵染 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 烟粉虱侵染棉花表型统计 |
| 2.2.2 烟粉虱侵染抗感棉花材料转录谱构建 |
| 2.2.3 烟粉虱侵染棉花转录谱全局变化 |
| 2.2.4 差异表达基因分析 |
| 2.2.5 差异表达基因功能富集分析 |
| 2.2.6 差异表达基因的共表达网络构建 |
| 2.2.7 重要基因表达分析 |
| 2.2.8 VIGS验证候选基因 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 棉花响应烟粉虱非编码RNA分子机制解析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 长链非编码RNA鉴定 |
| 3.1.3 长链非编码RNA功能分析 |
| 3.1.4 sRNA和降解组文库构建 |
| 3.1.5 miRNA鉴定及差异表达分析 |
| 3.1.6 miRNA及其靶标的鉴定 |
| 3.1.7 5'RACE技术验证靶基因切割位点 |
| 3.1.8 茎环PCR定量miRNA表达量 |
| 3.1.9 phasiRNA鉴定 |
| 3.1.10 植物激素测定 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 全基因组鉴定长链非编码RNA |
| 3.2.2 全基因组鉴定miRNA及其前体 |
| 3.2.3 长链非编码RNA功能分析 |
| 3.2.4 miRNA靶基因鉴定和功能分析 |
| 3.2.5 miRNA介导的phasiRNA在棉花响应烟粉虱转录反应 |
| 3.2.6 miR390-tasiARFs参与棉花对烟粉虱转录响应 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 关联分析挖掘棉花响应虫害基因 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 棉花抗感虫表型调查与评价 |
| 4.1.3 基因型检测 |
| 4.1.4 群体结构和连锁不平衡 |
| 4.1.5 关联分析 |
| 4.1.6 候选基因预测 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 基因型和群体结构分析 |
| 4.2.2 表型变异 |
| 4.2.3 抗虫关联分析 |
| 4.2.4 候选基因预测 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 棉花再生和体细胞胚发育表观基因组学图谱 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 受体材料选择 |
| 5.1.2 连续再生棉花转化母体材料 |
| 5.1.3 甲基化抑制剂处理Jin668 愈伤组织 |
| 5.1.4 重亚硫酸氢盐文库构建 |
| 5.1.5 BS-Seq数据分析 |
| 5.1.6 RNA-Seq测序与数据分析 |
| 5.1.7 Small RNA测序与数据分析 |
| 5.1.8 染色质免疫共沉淀(ChIP) |
| 5.1.9 ChIP-Seq数据分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 不同世代棉花再生效率的比较 |
| 5.2.2 SRA不同世代和体细胞胚胎发育过程全基因组DNA甲基化谱 |
| 5.2.3 SRA不同世代与野生型全基因甲基化的比较 |
| 5.2.4 Jin668 体细胞胚胎发生不同阶段甲基化动态变化 |
| 5.2.5 RdDM途径和H3K9me2 途径协同建立CHH甲基化 |
| 5.2.6 DNA甲基化动态变化调控体细胞胚胎发育 |
| 5.2.7 NEC中低甲基化调控重要功能基因表达 |
| 5.2.8 组织培养抑制甲基化激活激素相关基因表达促进胚胎发生 |
| 5.3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间已发表和待发表论文 |
| 致谢 |
（2）Bt水稻组织中Cry蛋白的表达及在残体中的降解动态（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 研究文献发表概况 |
| 1.2 外源抗虫基因在转基因水稻中的应用 |
| 1.2.1 Bt基因 |
| 1.2.2 非Bt基因 |
| 1.3 转基因抗虫水稻的环境安全性 |
| 1.3.1 生存竞争能力 |
| 1.3.2 基因漂移的环境影响 |
| 1.3.3 功能效率评价 |
| 1.3.4 靶标害虫的抗性风险 |
| 1.3.5 对非靶标生物的影响 |
| 1.3.6 对稻田生态系统群落结构和有害生物地位演化的影响 |
| 1.4 研究背景、内容和意义 |
| 1.4.1 研究背景 |
| 1.4.2 研究内容和意义 |
| 第二章 无标记转基因Bt水稻Cry1Ab蛋白的表达及对靶标害虫二化螟的抗性 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 供试昆虫 |
| 2.1.2 供试水稻 |
| 2.1.3 供试试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.1.5 样品采集 |
| 2.1.6 Cry1Ab蛋白含量的检测 |
| 2.1.7 Bt水稻对二化螟的抗性 |
| 2.1.8 统计分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 水稻组织中Cry1Ab蛋白的含量 |
| 2.2.2 室内生测中mfb-MH86水稻对二化螟的抗性 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 Bt水稻残体组织中Cry蛋白的降解动态 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 供试水稻 |
| 3.1.2 供试试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 气温和降水量 |
| 3.1.5 根茬中Cry蛋白的田间降解动态 |
| 3.1.6 叶片中Cry蛋白两种处理方式下的田间降解动态 |
| 3.1.7 Cry1C和Cry2A蛋白含量的检测 |
| 3.1.8 统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 根茬中Cry蛋白的降解动态 |
| 3.2.2 叶片中Cry蛋白的降解动态 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）禾本科主要农作物抗虫转基因研究进展（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 禾本科主要农作物抗虫转基因研究概况 |
| 1.1 水稻抗虫转基因研究进展 |
| 1.2 玉米抗虫转基因研究进展 |
| 1.3 小麦抗虫转基因研究进展 |
| 1.4 甘蔗抗虫转基因研究进展 |
| 2 存在的问题与对策 |
| 3 前景及展望 |
（4）转基因抗虫水稻的研发与应用及在我国的发展策略（论文提纲范文）
| 1 转基因抗虫水稻的研发进展 |
| 1.1 Bt水稻 |
| 1.2 非Bt抗虫水稻 |
| 2 转基因抗虫水稻的应用 |
| 3 我国转基因抗虫水稻面临的机遇与挑战 |
| 3.1 我国转基因抗虫水稻发展面临的机遇 |
| 3.2 我国转基因抗虫水稻研发存在的主要问题 |
| 4 我国水稻生产特点及对转基因抗虫水稻种植的要求 |
| 5 转基因抗虫水稻在我国的发展策略 |
| 5.1 我国转基因抗虫水稻的研发策略 |
| 5.2 我国转基因抗虫水稻安全性评价的发展策略 |
| 5.3 政府层面的监管、决策与宣传 |
（5）抗虫转基因水稻研究进展及发展趋势（论文提纲范文）
| 1 几种常用的抗虫基因及其在转基因水稻中的应用 |
| 1.1 Bt抗虫基因 |
| 1.2 蛋白酶抑制剂基因 |
| 1.3 植物外源凝集素基因 |
| 2 抗虫转基因水稻研究存在的问题与发展趋势 |
| 2.1 修饰改造抗虫基因以提高表达量 |
| 2.2 使用组织特异型或诱导型启动子以延缓害虫的抗性进化, 提高食用安全性 |
| 2.3 协同转化多个抗性基因以拓宽抗谱, 延长使用寿命 |
| 2.4 探索稳定、高效、安全的遗传转化技术 |
| 3 展望 |
（6）双价抗虫转基因水稻的育成和鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文对照缩略语表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 基因工程概述 |
| 1.1 基因工程的诞生 |
| 1.2 植物基因工程的发展 |
| 1.3 水稻基因工程的发展 |
| 2 水稻转基因方法概述 |
| 2.1 根癌农杆菌介导转化法(Agrobacterium-mediated transformation) |
| 2.2 基因枪法(Gene gun-mediated transformation) |
| 2.3 花粉管通道法(Pollen tube-pathway transformation) |
| 2.4 聚乙二醇PEG诱导法(PEG-mediated transformation) |
| 2.5 电击(激)法(Electroporation-mediated transformation) |
| 2.6 脂质体转化法(Liposome-mediated transformation) |
| 3 水稻抗虫基因工程研究进展 |
| 3.1 苏云金杆菌杀虫结晶蛋白基因(Bt基因) |
| 3.2 蛋白酶仰制基因(Proteinase inhibitor,PI) |
| 3.3 植物凝集素基因 |
| 4 转双价抗虫基因的研究 |
| 4.1 转双价抗虫基因植物的提出 |
| 4.2 转双价抗虫基因植物的研究现状 |
| 4.3 转双价抗虫水稻的研究 |
| 5 安全型转基因技术的研究进展 |
| 5.1 去除选择标记基因的方法 |
| 5.2 以生物安全标记基因代替抗生素类标记基因 |
| 5.3 以特异型表达启动子代替组成型表达启动子 |
| 6 转基因植株的鉴定 |
| 6.1 外源基因整合的鉴定 |
| 6.2 外源基因表达的鉴定 |
| 6.3 转基因性状检测 |
| 7 本研究的目的和意义 |
| 第二章 农杆菌介导法将双价抗虫基因导入水稻Dular |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 转基因受体水稻品种 |
| 1.1.2 载体和菌株 |
| 1.1.3 试剂及工具酶 |
| 1.1.4 培养基 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 质粒的扩繁 |
| 1.2.2 植物表达载体农杆菌的转化 |
| 1.2.3 水稻Dular的遗传转化 |
| 1.2.4 目的基因的检测 |
| 1.2.5 Southern blotting分析 |
| 1.2.6 转基因植株的RT-PCR分析 |
| 1.2.7 离体茎秆人工接虫鉴定 |
| 1.2.8 杂交配组鉴定与抗条鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 再生植株的获得 |
| 2.2 外源基因的表达 |
| 2.3 转基因植株的抗虫性鉴定 |
| 2.4 转基因植株的广亲和性和抗条纹叶枯病的检测 |
| 第三章 农杆菌介导法将双价抗虫基因导入水稻南粳45 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 转基因受体水稻品种 |
| 1.1.2 载体和菌株 |
| 1.1.3 试剂及工具酶 |
| 1.1.4 培养基 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 质粒的扩繁 |
| 1.2.2 植物表达载体农杆菌的转化 |
| 1.2.3 水稻南粳45的遗传转化 |
| 1.2.4 目的基因的检测 |
| 1.2.5 Southern blotting分析 |
| 1.2.6 转基因植株的RT-PCR分析 |
| 1.2.7 转基因植株的Bt基因胶体金试纸条检测 |
| 1.2.8 离体茎秆人工接虫鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 去选择标记抗虫转基因水稻植株的获得 |
| 2.2 外源基因的表达 |
| 2.3 人工接虫鉴定和农艺性状调查 |
| 第四章 讨论 |
| 1 获得转双价抗虫水稻的意义 |
| 2 转基因操作中遇到的问题 |
| 3 后续研究设想 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表(投稿)的论文 |
| 致谢 |
（7）转基因抗虫水稻的生态风险和治理对策（论文提纲范文）
| 1 外源抗虫基因的种类及作用机制 |
| 1.1 Bt基因 |
| 1.2 蛋白酶抑制剂基因 |
| 1.3 植物凝集素基因 |
| 2 转基因抗虫水稻的生态风险 |
| 2.1 基因漂移和杂草化 |
| 2.2 转基因抗虫水稻对稻田生态系统的影响 |
| 2.2.1 对靶标害虫抗性的影响 |
| 2.2.2 对非靶标生物的影响 |
| 2.2.3 对稻田土壤微生态系统的影响 |
| 3 转基因抗虫水稻的风险管理措施 |
| 3.1 害虫的抗性管理 |
| 3.1.1“庇护所”策略 |
| 3.1.2 研制双价或多价抗虫水稻 |
| 3.1.3 特异性、诱导型启动子及其表达研究 |
| 3.2 转基因抗虫稻田害虫的综合治理 |
（8）转基因水稻研究的回顾与展望（论文提纲范文）
| 1 水稻的遗传转化 |
| 1.1 多基因转化 |
| 1.2 组织特异性/诱导性表达 |
| 1.3 叶绿体转化技术 |
| 2 转基因抗虫水稻 |
| 2.1 转Bt基因水稻 |
| 2.2 转植物或动物来源抗虫基因水稻 |
| 3 转基因抗病水稻 |
| 4 转基因抗旱水稻 |
| 5 转基因营养高效利用水稻 |
| 5.1 氮高效利用 |
| 5.2 磷高效利用 |
| 6 转基因优质水稻 |
| 7 转基因高产水稻 |
| 8 转基因抗除草剂水稻 |
| 9 展望 |
（9）云南转基因农作物研究与产业化:现状及其发展（论文提纲范文）
| 1 转基因农作物发展概况 |
| 2 云南转基因农作物研究现状 |
| 2.1 水稻 |
| 2.2 小麦 |
| 2.3 马铃薯 |
| 2.4 番茄 |
| 2.5 烟草 |
| 2.6 油菜 |
| 2.7 非洲菊 |
| 2.8 香石竹 |
| 3 云南转基因农作物的发展设想 |
| 3.1 充分利用资源优势, 分离克隆具有自主知识产权的重要功能基因 |
| 3.2 进一步完善云南农作物基因转化相应平台 |
| 3.3 大力推进云南特色农作物转基因新品种的选育 |
| 3.4 加快云南转基因农作物产业化进程 |
（10）抗除草剂和多价抗虫基因导入水稻光温敏核不育系的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 引言 |
| 1.1 水稻抗虫基因工程的研究进展 |
| 1.1.1 苏云金杆菌( Bt) 杀虫晶体蛋白基因 |
| 1.1.2 蛋白酶抑制剂基因 |
| 1.1.3 外源凝集素基因 |
| 1.2 草甘膦及其抗性植物研究进展 |
| 1.2.1 草甘膦的作用机理 |
| 1.2.2 EPSPS合成酶编码基因的研究进展 |
| 1.2.3 利用基因工程方法获得草甘膦抗性植物的研究 |
| 1.2.4 EPSPS酶基因在作物遗传育种上的应用前景 |
| 1.3 多基因转化策略在水稻转化中的研究应用 |
| 1.3.1 多基因抗性表达载体的构建 |
| 1.3.2 多基因转化策略的方法 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 1.4.1 本研究的目的 |
| 1.4.2 本研究的意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 菌株 |
| 2.1.3 质粒 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要仪器 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.2.1 培养基的配制 |
| 2.2.2 常用的缓冲液和试剂成分的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 载体构建 |
| 2.3.2 水稻愈伤组织的遗传转化 |
| 2.3.3 转基因植株的分子检测 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 以Epsps 基因为筛选标记的多价抗虫基因表达载体的构建 |
| 3.1.1 中间载体pCTSM1300 的构建 |
| 3.1.2 中间载体pCT-PinII-1 的构建 |
| 3.1.3 中间载体pCT-Bt-2 的构建 |
| 3.1.4 载体pCTSKC3 的构建 |
| 3.1.5 大分子连接反应中的各组实验方案对比结果分析 |
| 3.2 转抗草甘膦基因和多个抗虫基因水稻植株的获得 |
| 3.2.1 水稻愈伤组织的诱导 |
| 3.2.2 水稻愈伤组织的转化——基因枪法 |
| 3.2.3 水稻愈伤组织的转化——农杆菌介导法 |
| 3.3 转基因植株的分子生物学鉴定 |
| 3.3.1 R0 代转基因植株的PCR 分析 |
| 3.3.2 R0 代转基因植株的PCR-Southern blot 分析 |
| 3.3.3 R0 代转基因植株的Southern blot 分析 |
| 3.4 转基因植株的草甘膦抗性鉴定 |
| 3.4.1 盆栽转基因植株离体叶片的草甘膦抗性试验 |
| 3.4.2 盆栽植株叶片草甘膦涂抹抗性试验分析 |
| 3.4.3 盆栽植株整株喷洒草甘膦抗性试验分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 多基因转化效率与转化方法的研究 |
| 4.2 启动子与基因高效表达的研究 |
| 4.3 转基因植株拷贝数检测方法的探讨 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文的情况 |
四、高效抗虫基因PinⅡ转化水稻的研究（论文参考文献）
- [1]棉花响应烟粉虱胁迫的分子机制及棉花体细胞胚胎表观基因组学研究[D]. 李健英. 华中农业大学, 2019
- [2]Bt水稻组织中Cry蛋白的表达及在残体中的降解动态[D]. 王亚南. 中国农业科学院, 2017(05)
- [3]禾本科主要农作物抗虫转基因研究进展[J]. 姚丽,刘家勇,吴转娣,刘洪博,苏火生,吴才文. 甘蔗糖业, 2013(02)
- [4]转基因抗虫水稻的研发与应用及在我国的发展策略[J]. 徐秀秀,韩兰芝,彭于发,侯茂林. 环境昆虫学报, 2013(02)
- [5]抗虫转基因水稻研究进展及发展趋势[J]. 唐丽,谭炎宁,韩小霞,孙志忠,段美娟. 杂交水稻, 2011(01)
- [6]双价抗虫转基因水稻的育成和鉴定[D]. 李聪. 南京农业大学, 2011(06)
- [7]转基因抗虫水稻的生态风险和治理对策[J]. 饶玉春,苏长青,钱前,曾大力. 中国稻米, 2010(04)
- [8]转基因水稻研究的回顾与展望[J]. 陈浩,林拥军,张启发. 科学通报, 2009(18)
- [9]云南转基因农作物研究与产业化:现状及其发展[J]. 曾黎琼,段玉云,张云孙,程在全,黄兴奇. 云南大学学报(自然科学版), 2009(S2)
- [10]抗除草剂和多价抗虫基因导入水稻光温敏核不育系的研究[D]. 邓力华. 山东农业大学, 2008(02)