一、血管内皮生长因子对内皮细胞产生基质金属蛋白酶2的影响（论文文献综述）
尹倩茹[1]（2021）在《内皮和胃癌来源的ADAM28对胃癌细胞凋亡的调控作用及机制研究》文中认为去整合素和金属蛋白酶28（ADAM28）是解联蛋白和金属蛋白酶结构域（ADAM）家族成员之一。ADAM28具有细胞黏附和蛋白水解酶的多种功能,与体内多种恶性肿瘤的生长和转移有关,但其在胃癌中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨胃癌来源和内皮来源ADAM28对胃癌细胞的影响及其相关机制。在这项研究中,我们发现ADAM28在胃癌细胞系中表达上调。ADAM28高表达患者的生存期明显短于ADAM28低表达患者。过表达/敲低胃癌细胞ADAM28的表达可体外调节细胞增殖、凋亡和迁移能力。除此之外,在内皮细胞和胃癌细胞共培养体系中,通过过表达/敲低Transwell上室中人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的ADAM28,可以调节下室胃癌细胞的凋亡。此外,我们发现胃癌来源和内皮来源的ADAM28都是通过切割血管性血友病因子（vWF）,消除了 vWF通过整合素β3以及TP53磷酸化和CASP3激活引起的胃癌细胞凋亡。总之,我们的研究结果提供了实验证据,证明内皮来源和胃癌来源的ADAM28可能通过切割vWF,从而消除vWF诱导的胃癌细胞凋亡,从而起到促转移的作用。
樊飞燕,张运克[2]（2021）在《益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制》文中进行了进一步梳理背景:骨髓间充质干细胞具有促进血管新生的作用,治疗缺血性脑卒中效果良好,益气活血类中药在促进血管新生方面亦存在显着疗效。目的:综述益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的机制,以期为缺血性脑卒中的研究及治疗提供参考。方法:以"bone marrow mesenchymal stem cells,angiogenesis,ischemic stroke,traditional chinese medicine"为英文关键词,以"骨髓间充质干细胞,血管新生,缺血性脑卒中,中药"为中文关键词,检索2009至2020年期间收录在PubMed、中国知网、万方数据库中的文献,纳入血管新生相关机制及中药联合骨髓间充质干细胞促进血管新生相关的文献,排除重复与相关性弱的文献,对145篇文献进行总结分析。结果与结论:（1）梳理了骨髓间充质干细胞、血管新生的定义及血管新生的机制;（2）总结了益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞促进血管新生的相关因子及信号通路,如血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子、缺氧诱导因子1α、血管生成素、整合素αvβ3、基质金属蛋白酶9及Wnt信号通路、Notch信号通路、PI3K/Akt信号通路和SDF-1/CXCR4信号轴;（3）总结发现益气活血类中药与骨髓间充质干细胞联合应用能增强血管新生作用,提升缺血性脑卒中的治疗效果。
施家佳[3]（2021）在《硫酸肝素蛋白多糖复合碱性成纤维细胞生长因子促进心梗修复的研究》文中认为心肌梗死（Myocardial infarction,MI）是目前发病率和致死率较高的全球范围性疾病,也是形成慢性心衰的主要原因,严重影响了患病者的生活质量。各种原因引起的心肌梗死主要是通过阻碍心脏冠脉循环,引起心脏组织内部供血不足而造成的心肌细胞梗死、进而引起心脏功能减弱甚至消失。目前临床治疗主要采用物理介入的手段,通过移植心脏支架、搭建旁支人工血管等方法恢复冠脉循环的正常运行。然而这些介入手段并不适合所有心脏病患者,尤其是已经接受多次心脏搭桥手术的病患。因此,研究拓展不同心脏病患者的治疗手段迫在眉睫。细胞外基质（ECM）是一类非细胞成分,分布在各个组织、器官内。除了作为必需的结构成分外,细胞外基质分子还在关键细胞事件中发挥重要作用。许多疾病的发生和发展都与细胞外基质成分的变化密切相关,尤其是心血管疾病。研究发现,在心梗发生后,心脏组织内部发生心肌细胞凋亡、细胞外基质降解,胶原分子沉积形成非收缩性瘢痕组织,这些引起心脏组织的形态、结构和功能的非适应性改变。为了深入研究心肌梗死后组织微环境的变化,本研究采用转录组测序的方法研究心梗对心脏细胞外基质基因表达水平上的影响。研究发现心梗后细胞外基质分子的基因表达出现不同程度的增加,但由于胶原等结构外基质分子基因表达水平大量提高,导致了硫酸肝素蛋白多糖（HSPG）在心脏外基质中所占比例由正常组织的8.8%降低到约1%,使得HSPG的基因表达情况仍然远远低于正常水平。HSPG是细胞外基质的主要成分,可以和多种细胞外基质分子结合,也可以有效结合各种生长因子并促进生长因子与受体高效结合及信号转导。因此,如果心肌损伤后微环境中HSPG不足,将导致内源或外源的生长因子作用效率低下,不利于组织损伤修复。众所周知,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）促进各种损伤后的血管生成,但由于bFGF在体内容易扩散、被各种生物酶解以及单独与共受体的结合时结合能力较弱降低了其生物功能的有效发挥。研究发现HSPG可以充当bFGF的共受体并影响其生物活性来调节广泛的细胞功能和生物过程。但是,HSPG对心肌梗死后bFGF功能的影响尚不清楚。本研究将外源HSPG与bFGF一起注入大鼠心脏,以递送血管生成生长因子用于诱发心肌梗塞后缺血性心脏修复。通过结合释放曲线测定进一步研究了 HSPG与bFGF结合的亲和能力,证实了HSPG与bFGF蛋白的特异性结合,比bFGF与肝素的结合强约6倍;并且可以在体内和体外观察到bFGF从HSPG持续释放。而对bFGF和基质金属蛋白酶2（MMP2）活性的测定表明,HSPG促进bFGF在血管生成中的生物活性,并且可以部分抑制基质金属蛋白2的蛋白水解活性,从而保护bFGF免受酶解。使用HSPG培养心肌细胞时可以提高细胞的粘附性。此外,HSPG与bFGF结合可增加血管生成和促进心肌细胞存活,并在诱发心肌梗塞后恢复心脏功能的恢复。我们的结果表明,HSPG可以作为肝素结合型生长因子的载药材料具有潜在的临床应用价值。这可能是促进心脏病中血管生成的安全方法。因此,天然的细胞外基质生物支架HSPG可以促进bFGF的活性,帮助缺血性心脏修复。
章萌[4]（2020）在《促红细胞生成素导致腹主动脉瘤形成的作用及分子机制研究》文中研究表明研究背景腹主动脉瘤（abdominal aortic aneurysm,AAA）是一种潜在的致命性血管疾病,其定义为腹主动脉局部扩张,直径大于3cm或超过正常主动脉直径50%。AAA主要累及肾动脉分支以下的腹主动脉,患者通常没有症状,即使医生查体也难以触及扩张的腹主动脉,患者常由于其他临床指征行腹部超声或CT检查时偶然发现AAA,因此早期发现极为困难。一旦发生AAA破裂,死亡率高达85%-90%,几乎是不治之症。如何发现AAA的发病原因和快速膨胀因素并进行有效的抑制,是临床医学界面临的重大难题。尽管在AAA发病机制的研究领域已取得了巨大进展,但目前尚无有效的临床预测因子或药物治疗来降低AAA的发病风险或限制其进展。当男性和女性患者的AAA内径分别大于55mm和50mm时,可实施外科矫正术或血管内介入手术,术后存活率超过95%。因此,对于预防AAA破裂,手术矫正和支架介入是唯一有效的方法,但这些操作均有创伤性和并发症。大力研发可抑制AAA发生和发展的新药,已成为AAA研究领域中的当务之急。促红细胞生成素（EPO）由165个氨基酸和4条分子量为34kd的紧密球状结构的碳水化合物侧链组成。EPO对正常红细胞的产生至关重要,主要由胎儿肝脏及成年人肾脏合成。EPO主要通过刺激造血系统中的促红细胞生成素受体（EPOR）起到促进红细胞生成的作用。EPO可在缺氧时由肾小管间质细胞产生,通过促进红细胞生成和抑制红细胞祖细胞的凋亡而增加红细胞数量。此外,EPO潜在的造血外功能也备受关注。研究表明,EPO可由肾脏以外组织产生,且EPORs在红系祖细胞以外的其他组织中亦有广泛分布。肾脏以外产生的EPO是通过旁分泌/自分泌的途径而发挥作用,而非造血功能中的激素样作用。在创伤和炎症反应中,EPO及其受体表达明显增加,从而触发创伤组织和器官中的关键保护反应。EPO的组织保护作用已在多个动物的疾病模型中得到证实,包括局灶性脑缺血、栓塞性卒中、创伤性脑损伤、心肌缺血、急性肾损伤、肢体缺血、组织创伤等。临床研究表明,在严重创伤患者中给予EPO治疗可降低患者的死亡率。最近的研究发现,EPO可通过促进内皮细胞增殖迁移和基质金属蛋白酶2（MMP2）表达促进血管新生。接受腹主动脉腔内修复的AAA患者有三分之一患有贫血,其血红蛋白水平与AAA的大小呈独立负相关,但其机制并不明确。最近一项高脂血症小鼠中输注血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）的实验研究发现,抑制缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）减弱了 AAA的进展。众所周知,慢性贫血和HIF可增加EPO的生成,而最近的证据表明,Ang Ⅱ可直接刺激造血祖细胞的受体或间接调节EPO的基因表达来影响造血功能。有罕见病例报道,一位长期进行血液透析并应用重组人EPO治疗的患者,无明显原因地对重组人EPO产生了耐药性,并CT检测发现了 AAA。这些临床和实验研究强烈提示EPO和AAA之间可能存在着某种联系,主动脉壁新生血管的形成,也被称为血管新生,是实验和临床AAAs的病理标志。有证据表明,主动脉瘤管壁内的血管新生可能在动脉瘤的进展和破裂中起关键作用。在人动脉瘤组织中,尤其是在邻近破裂区域和被白细胞浸润的区域,血管新生更为普遍。抑制实验性AAA进展的药物,也会减少动脉壁血管新生。基质金属蛋白酶（MMPs）家族密切参与新血管形成的过程,并发挥关键的促血管生成作用,而MMPs与动脉管壁的降解和破裂有关。缺氧和炎症是刺激血管新生的两个关键因素。HIF-1α及其靶基因在人类和实验性AAAs中表达增加。抑制HIF-1a治疗可以阻止实验性AAA进展,并减轻管壁白细胞浸润、血管新生和MMPs的过度表达。炎症和免疫相关疾病与血管新生相关,因为大多数白细胞能够产生一系列促血管生成因子,如血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生生长因子（b-FGF）、碱性成纤维细胞生长因子（b-FGF）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）以及蛋白酶,如糜蛋白酶、胰蛋白酶、MMPs。有报道称肥大细胞特异性的糜蛋白酶和胰蛋白酶诱导内皮细胞（ECs）表达粘附分子和趋化因子,其利用趋化因子受体2（CCR2）作为募集趋化因子的受体,降解基质蛋白,促进血管新生,诱导平滑肌细胞凋亡。AAA发生和发展过程涉及了多种病理过程,比如血管新生、炎症浸润、氧化应激和平滑肌细胞凋亡等,在本研究中,我们提出如下科学假说,在ApoE-/-小鼠或野生型小鼠中,EPO可以剂量依赖性地导致AAA的发生,并且EPO通过促进血管新生,增加炎症浸润,诱导平滑肌凋亡,导致AAA的发生,为了验证这一假说,我们精心设计并进行了一系列的体内外实验。研究目的1.探讨EPO是否可在ApoE-/-小鼠和野生型小鼠中导致AAA的产生及其剂量效应;2.探讨EPO对小鼠AAA的影响是否受高脂喂养和高脂血症的影响;3.探讨EPO通过何种类型受体发挥作用对AAA产生影响;4.探讨EPO引起小鼠AAA的病理生理机制;5.探讨EPO对血管壁三种细胞（内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞）的作用及其机制。6.探讨在AAA临床患者中,血清EPO与AAA的发生有无关联。研究方法1.动物模型的建立和分组（1）雄性ApoE-/-小鼠60只,全程给予高脂饲料喂养,随机分为4组,每组15只;分别给予生理盐水、EPO 2,500 IU/kg/day、EPO 5,000 IU/kg/day 和 EPO 10,000 IU/kg/day腹腔注射,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（2）雄性ApoE-/-小鼠60只,全程给予普通饲料喂养,随机分为4组,每组15只;分别给予生理盐水、EPO 2,500 IU/kg/day、EPO 5,000 IU/kg/day 和 EPO 10,000 IU/kg/day腹腔注射,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（3）雄性野生型小鼠60只,全程给予普通饲料喂养,随机分为4组,每组15只;分别给予生理盐水、EPO2,500 IU/kg/day、EPO 5,000 IU/kg/day 和 EPO 10,000 IU/kg/day腹腔注射,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（4）雌性APoE-/-小鼠30只,全程给予高脂饲料喂养,随机分为2组,每组15只;雌性野生型小鼠30只,全程给予普通饲料喂养,随机分为2组,每组15只;分别给予生理盐水和EPO5,000IU/kg/day腹腔注射,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（5）雄性ApoE-/-小鼠45只,全程给予高脂饲料喂养,随机分为3组,每组15只;雄性野生型小鼠45只,全程给予普通饲料喂养,随机分为3组,每组15只;分别给予生理盐水、焦谷氨酸螺旋B表面肽（pHBSP）30 mg/kg/day和pHBSP 300mg/kg/day持续泵入,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（6）雄性ApoE-/-小鼠或野生型小鼠各30只,随机分为两组,每组15只;对照组给予生理盐水持续泵入,实验组给予Ang Ⅱ（1.44mg/kg/day）持续泵入,全程给予高脂高胆固醇喂养或普通饲料喂养,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。2.鼠尾血压测量应用小动物鼠尾血压计测量所有小鼠的血压,测量部位为小鼠尾动脉,每只小鼠检测3次,取其平均值作为最终数值。3.组织取材小鼠取材前饥饿6-8小时,麻醉小鼠后取材,留取全血、血清、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、脂肪组织和主动脉;各组织一部分放入液氮速冻,-80℃冰箱保存,一部分置于4%多聚甲醛中固定,以备后续实验。4.血脂血常规、肝肾功检测检测各组小鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐和尿素氮的水平;检测各组小鼠全血红细胞计数、血红蛋白含量和红细胞压积。5.血管组织全基因组测序分析接受EPO中剂量注射的ApoE-/-小鼠3只,正常对照组3只,取出其主动脉组织,加入RNAlater液氮速冻,送至北京诺禾致源生物科技有限公司进行RNA测序。6.病理学检测腹主动脉组织或肝肾组织制备石蜡切片,主要进行H&E染色、Verhoff弹力纤维染色和 Masson 染色。对 Endomucin、MMP2、MMP9、MT1-MMP、CD68、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α等指标进行免疫组织化学染色,对 CD68、IL-6、IL-1β、MCP-1、TNF-α、CD144 和 Ki67 等指标进行组织免疫双荧光染色。7.蛋白免疫印迹实验提取腹主动脉段血管组织蛋白和各种细胞总蛋白,进行BCA蛋白浓度测定。配制SDS-PAGE凝胶,通过蛋白免疫印迹检测胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、MMP2、MMP9、MT1-MMP、VEGF、TGF-β1、KDR、Tie2、CD68、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α的蛋白含量。8.明胶酶谱实验配制含1%明胶的SDS-PAGE凝胶,提取腹主动脉段血管组织蛋白和各种细胞总蛋白,并进行BCA蛋白浓度测定。使用明胶酶谱试剂盒检测MMP2和MMP9的蛋白酶活性。9.RNA 提取、mRNA 逆转录、RT-PCR提取腹主动脉段血管组织RNA和各种细胞总RNA,应用TaKaRa#RR047A逆转录试剂盒进行mRNA逆转录。通过实时荧光定量PCR,得出循环阈值Ct值,通过公式2-ΔΔCT计算出cDNA的相对表达水平。10.细胞培养和信号通路（1）根据EPO浓度梯度预实验,5 IU/mL EPO刺激HUVEC 24小时,所表达的MMP2和MMP9酶活性最高,因此接下来的细胞实验选用EPO 5 IU/mL刺激24小时,作为实验组条件;（2）HUVEC、HAEC、HASMC和巨噬细胞:实验组加入5IU/mLEPO,对照组加入等体积1x PBS,刺激24小时,收集细胞和上清;（3）HUVEC实验组加入5 IU/mL EPO,对照组加入等体积1x PBS,刺激24小时,收集上清;加入预先种好板的HASMC中,刺激24小时,收集细胞和上清;（4）HUVEC实验组加入5 IU/mL EPO,对照组加入等体积1x PBS,刺激24小时,收集上清;加入预先种好板的巨噬细胞中,分别刺激0、2、4、6、8和10小时,收集细胞和上清;（5）HUVEC实验组加入10mg/L pHBSP,对照组加入等体积1xPBS,刺激24小时,收集细胞和上清;（6）实验分为4组:对照组加入DMSO（作为溶剂对照）,EPO组加入EPO（5 IU/mL）+DMSO,JAK2 抑制剂组加入 EPO（5 IU/mL）+TG101348（1 μM）[49,50],STAT5 抑制剂组加入 EPO（5IU/mL）+CAS285986-31-4（50μg/mL）,刺激24小时,收集细胞或者观察拍照。11.EDU细胞增殖实验使用EDU试剂盒检测HUVEC或HASMC的增殖能力。12.内皮细胞迁移实验通过划痕实验和Transwell小室细胞迁移实验,检测HUVEC和HAEC在EPO作用下的迁移能力。13.体外小管生成实验利用低生长因子Matrigel基质胶观察HUVEC和HAEC在EPO作用下体外小管生成能力。14.主动脉环出芽实验取野生型小鼠胸主动脉段,将血管剪成长约1mm的小段,置于Matrigel基质胶中,加入相应的药物刺激,每天观察拍照,软件分析计算主动脉出芽数量和长度。15.单核-内皮细胞粘附实验将HUVEC给予EPO刺激24小时;用BCECF-AM（pH荧光探针）标记THP-1细胞悬液;取1x105/mL THP-1混悬液加入到上述HUVEC细胞培养板中,孵育至少1小时;4%多聚甲醛固定细胞。16.TUNEL细胞凋亡检测给予HASMC EPO或者EPO处理过的HUVEC上清干预,使用TUNEL试剂盒检测HASMC的凋亡情况。17.腹腔巨噬细胞的提取选取8-12周雄性野生型小鼠,提前3天给予腹腔注射6%淀粉溶液1mL;小鼠脱颈处死,撕开皮肤,充分暴露腹膜;用无菌注射器注入DMEM于腹腔中,回抽液体至新的50mL离心管中;冲洗腹腔3次,直至DMEM变澄清,得到腹腔巨噬细胞混悬液。18.体内基质胶塞血管新生实验使用高浓度Matrigel基质胶,配制基质胶与药物混合液,取0.7mL基质胶混合液,注入小鼠皮下。14天后,切除基质胶塞;4%多聚甲醛固定过夜,观察基质胶塞大体形态颜色;石蜡包埋,切片,进行常规染色和免疫组化。19.酶联免疫吸附实验使用ELISA方法检测血清中EPO的水平。20.腹主动脉瘤病人血清收集我们纳入40例AAA患者,在患者住院24小时内采集血样。患有贫血、心衰、慢性呼吸系统疾病和肾功能衰竭的病人排除入组。纳入45例健康志愿者的血清作为正常对照组。21.数据统计分析所有数据均以均数±标准误来表示,两组计量资料采用独立样本t检验,多组计量资料采用单因素方差分析LSD事后检验;计数资料采用卡方检验;生存分析采用Log-Rank检验;P<0.05认为有统计学差异。研究结果1.EPO剂量依赖性地诱导ApoE-/-小鼠和野生型小鼠AAA的发生腹腔注射高中低剂量EPO4周后,发现EPO剂量依赖的增加了小鼠AAA的发生率,腹主动脉直径明显增加;同时,小鼠死亡率也呈剂量依赖性增加。EPO高剂量组诱导ApoE-/-小鼠AAA发生率与Ang Ⅱ相当,而EPO高剂量组诱导野生型小鼠AAA发生率明显高于Ang Ⅱ。2.EPO导致ApoE-/-小鼠和野生型小鼠腹主动脉管壁增厚弹力板断裂结果显示注射低中高剂量EPO后,动脉管壁明显增厚,弹力纤维断裂,管腔内可伴有血栓形成。3.EPO不影响ApoE-/-、鼠和野生型小鼠血压和血脂的变化EPO注射4周后,与对照组相比,EPO低中高剂量组血压并无显着差异;同样,EPO注射后没有影响小鼠血脂水平变化。由此推断,EPO注射4周,对小鼠的血压和血脂无显着影响。4.EPO不影响ApoE-/-小鼠和野生型小鼠肝功和肾功的变化EPO注射四周后,与对照组相比,EPO低中高剂量组的指标没有明显变化;取对照组和EPO高剂量组小鼠的肝脏和肾脏进行H&E染色,组织形态亦没有明显差别。由此,从药物毒理学角度推测,EPO注射4周,并没有引起肝脏和肾脏的功能障碍。5.高脂饮食不影响EPO对ApoE-/-小鼠AAA形成的剂量效应在全程普通饲料喂养过程中,发现EPO剂量依赖的增加了 ApoE/-小鼠AAA的发生率,且与高脂喂养模型的发生率无显着差异;同时,高脂喂养与否,EPO高剂量组小鼠的死亡率无明显统计学意义。由此得出,高脂饮食不影响EPO对ApoE-/-小鼠AAA形成的剂量效应。6.EPO可诱导雌性ApoE-/-小鼠和野生型小鼠AAA的发生结果显示,在中剂量EPO刺激下雌性ApoE-/-小鼠和雌性野生型小鼠均有AAA发生,但都略低于雄性小鼠发生率,这符合人类AAA发病率中,男性高于女性的特征。7.pHBSP不能剂量依赖性的诱导小鼠AAA的发生结果显示pHBSP不能诱导两种基因型的小鼠发生AAA,因此推断EPO可能通过同源二聚体受体发挥作用,导致AAA。8.AAA患者血清EPO水平明显增高两组之间在年龄、性别、肾功能和药物治疗方面没有显着差异,但吸烟者在AAA组比正常对照组更常见。通过分析显示,年龄在>65岁和≤65岁之间、男性和女性之间、吸烟者和非吸烟者之间的腹主动脉直径没有显着差异,这表明在这组患者中,AAA直径不受传统动脉粥样硬化危险因素的影响。与健康对照组相比,AAA患者的血清EPO水平显着升高,这表明该组患者分泌了更多的EPO于循环血液中。9.基因测序分析EPO对ApoE-/-小鼠主动脉组织mRNA表达谱的影响基因本体论分析发现,两组间差异基因主要富集在血管形态发生、血管新生、细胞周期和迁移、炎症反应、白细胞浸润、和细胞外基质重塑中。10.血管新生和胶原代谢参与EPO诱导AAA的过程结果显示,与对照组相比,EPO组腹主动脉管壁胶原显着减少,尤其是胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达。MMPs蛋白表达和活性明显高于对照组。EPO组腹主动脉管壁微血管密度明显增加,VEGF、TGF-β1、KDR和Tie2蛋白表达明显增高。11.炎症反应参与EPO诱导AAA的过程结果显示,EPO组腹主动脉CD68阳性细胞浸润动脉壁的程度明显高于对照组。同时 ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β、MCP-1 和 TNF-α 等炎症因子 mRNA水平和蛋白水平表达明显多于对照组。CD68阳性细胞来源的炎症因子明显增高。MSD检测发现,血清炎症因子水平也明显高于对照组小鼠。12.EPO对小鼠红细胞、白细胞和血小板数量的影响给予小鼠EPO注射4周后,结果显示与对照组相比,EPO组红细胞计数、血红蛋白和红细胞压积明显增高。而白细胞计数、单核细胞计数、淋巴细胞计数、粒细胞计数和血小板计数在两组之间无显着性差别。13.三种细胞中内皮细胞EPOR mRNA表达水平最高与平滑肌细胞和巨噬细胞相比,内皮细胞的EPOR表达最高,提示EPO可能主要以内皮细胞为靶点发挥作用。14.EPO促进内皮细胞的增殖和迁移通过EDU实验可以观察到EPO促进HUVEC增殖。通过划痕实验和Transwell小室细胞迁移实验观察到EPO促进HUVEC和HAEC迁移。15.EPO促进内皮细胞体外小管形成和小鼠主动脉环出芽结果显示EPO组内皮细胞更容易形成闭合的管状结构。小鼠胸主动脉环种植于Matrigel基质胶中,在EPO刺激下,主动脉环比对照组更容易出芽,出芽的数量和出芽长度明显增加。16.EPO促进内皮细胞血管新生相关蛋白的表达结果显示,给予EPO刺激后HUVEC或HAEC的MMPs蛋白表达水平和活性明显高于对照组。EPO组细胞的KDR和Tie2表达明显增高。17.pHBSP不能促进HUVEC迁移、体外小管形成和MMPs的表达结果显示,对照组和pHBSP组细胞迁移数量无明显差别,形成小管数量和小管总长度无显着差异。给予pHBSP刺激后HUVEC的MMPs蛋白表达水平和酶活性与对照组无明显差别。18.EPO促进内皮-单核细胞间的粘附作用结果显示,与对照组相比,EPO组粘附的单核细胞数明显增多,由此得出,EPO能够促进内皮-单核细胞间的粘附作用。19.EPO对巨噬细胞炎症因子表达的影响直接给予EPO刺激,巨噬细胞炎症因子的表达无意义;溶剂对照或EPO刺激HUVEC 24小时后,取细胞培养液来刺激巨噬细胞,结果显示,IL-6、IL-1β和TNF-α在6小时明显增高,MCP-1在8小时明显增高,由此得出,内皮细胞参与是EPO诱导巨噬细胞炎症因子上调的关键环节。20.EPO对巨噬细胞MMPs表达的影响溶剂对照或EPO刺激巨噬细胞24小时后,两组MMP2和MMP9的蛋白表达和酶活性无明显差别。溶剂对照或EPO刺激HUVEC 24小时后,取细胞培养液来刺激巨噬细胞,结果发现,两组MMP2和MMP9的蛋白表达和酶活性依然没有明显差别。由此推断,EPO并不能影响巨噬细胞MMPs的表达。21.EPO对平滑肌细胞胶原蛋白、MMPs和凋亡相关蛋白表达的影响给予浓度梯度的EPO刺激HASMC后,其胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、MMP2和MMP9表达没有明显变化。EPO组HASMC表达BCL2和BAX与对照组也没有明显差异。溶剂对照或EPO刺激HUVEC 24小时后,取细胞培养液来刺激平滑肌细胞,结果显示,EPO组HASMC表达胶原Ⅰ和胶原Ⅲ明显减少,而MMP2和MMP9蛋白表达和酶活性明显增加。EPO组表达抗凋亡蛋白BCL2明显少于对照组,而表达促凋亡蛋白BAX明显多于对照组。22.EPO对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响结果显示直接给予EPO刺激,诱导的HASMC增殖和凋亡的数量与对照组无明显差别。溶剂对照或EPO刺激HUVEC 24小时后,取细胞培养液来刺激HASMC,结果显示EPO组TUNEL 阳性细胞比例明显高于对照组,而EDU 阳性细胞比例明显低于对照组。23.EPO在体内水平促进血管新生和炎症浸润14天后从小鼠体内取出基质胶塞显示:混有溶剂对照的基质胶塞呈清晰的黄色,而含有EPO的基质胶塞呈红色,说明基质胶塞内形成了血管。EPO组侵袭的细胞和血管数量明显增多。EPO组CD144和Ki67阳性细胞数量明显高于对照组,说明EPO促进内皮细胞的增殖和迁移。并且EPO组切片CD68阳性细胞浸润程度和炎症因子表达明显高于对照组,这表明EPO促进炎症细胞入侵和炎症因子的表达。24.EPO通过JAK2/STAT5通路诱导血管新生结果显示,EPO明显增强了 JAK2和STAT5的磷酸化水平,而JAK2抑制剂明显抑制了 JAK2和STAT5的磷酸化水平,STAT5抑制剂只抑制了 STAT5的磷酸化水平,并没有影响JAK2的磷酸化水平。加入JAK2抑制剂和STAT5抑制剂后明显抑制了内皮细胞闭合管状结构的形成。通过以上结果可知,EPO通过JAK2/STAT5通路促进内皮细胞形成新生血管。25.EPO诱导AAA形成和发展的机制通过以上体内体外实验,我们基本得出EPO诱导AAA形成和发展的机制为:EPO刺激血管内皮细胞,激活JAK2/STAT5通路,促进血管新生、基质金属蛋白分泌、平滑肌细胞凋亡,抑制平滑肌细胞合成胶原蛋白,增强炎性细胞聚集和炎症因子释放,导致AAA的形成和发展。实验结论1.EPO剂量依赖性地促进了 ApoE-/-小鼠和野生型小鼠AAA的形成,EPO导致ApoE-/-小鼠AAA发生率与Ang Ⅱ相当,EPO导致野生型小鼠AAA发生率明显高于Ang Ⅱ;2.EPO是通过（EPOR）2同型二聚体发挥作用促进AAA的形成;3.EPO通过引起血管新生、炎症反应和胶原降解而导致AAA的形成;4.EPO通过内皮细胞的介导诱导巨噬细胞表达炎症因子,抑制HASMC胶原分泌,促进HASMC凋亡。研究背景在腹主动脉瘤（AAA）发生发展过程中,由于AAA常与主动脉壁严重动脉粥样硬化损伤相关,因此传统认为AAA是动脉粥样硬化的结果。但这一传统观点近年来受到越来越多的挑战。与不合并动脉粥样硬化性心血管疾病的人群相比,合并冠心病、周围血管疾病、颈动脉疾病、脑血管疾病的患者发生AAA的OR值分别为1.72、1.59、1.51和1.18。在6446例接受颈动脉、股动脉和腹主动脉超声检查的Troms0研究中,斑块负荷与AAA发生率之间无量效关系,提示动脉粥样硬化与AAA可能是伴随关系而非因果关系。糖尿病是动脉粥样硬化的重要危险因素,但却是AAA的保护性因素,在美国310万人AAA流行病学调查中,与非糖尿病患者相比,糖尿病患者发生AAA的OR值为0.75,提示糖尿病可使AAA风险减少25%。这一反常现象提示,动脉粥样硬化与AAA可能是两个互相独立的疾病。吸烟与AAA的发生有很强的临床联系。吸烟人群中AAA的患病率是终身不吸烟人群的四倍以上。一份比较慢性吸烟者罹患不同疾病的相对风险的报告显示,罹患AAA的风险比罹患冠状动脉疾病的风险高出三倍,比罹患脑血管疾病的风险高出近五倍。2011年在瑞典进行的26256例65岁以上老年男性超声检查结果表明,AAA的发病率已下降至2.2%,其主要原因可能是吸烟人群的减少,提示控制吸烟可能是一个预防AAA的有效策略。基于这些临床观察,慢性吸烟可能是AAA发生发展的最重要的环境危险因素。除了吸烟外,其他危险因素还包括男性、年龄、高血压、慢性阻塞性肺疾病、高脂血症和家族病史。动物模型是一种强有力的工具,可以提供AAA发生和发展机制的理解。目前,AngⅡ注射模型是最常用的AAA动物模型。在高脂喂养的ApoE-/-或LDLR-/-小鼠皮下埋置微量渗透泵,持续注射大剂量Ang Ⅱ,可导致AAA,因此目前有关AAA发生和发展的细胞和分子机制主要来自于这类模型的研究。已提出的AAA发病机制包括:氧化应激机制:AAA患者或小鼠模型中促氧化剂增多,而抗氧化剂减少,从而导致ROS水平的上升,氧化应激增加,刺激血管紧张素转换酶（ACE）表达,内源性Ang Ⅱ增多,炎症反应增强。肾素-血管紧张素激活机制:持续滴注AngⅡ首先导致腹主动脉的炎症反应,继之出现弹性蛋白降解、血管中层断裂和管腔扩张,这些作用通过AT1R所介导,使用ACEI、ARB和ACE2过表达等方法以减少Ang Ⅱ的产生和作用,均可减轻小鼠AAA病变。AMPKa2激活机制:尼古丁和Ang Ⅱ可通过激活细胞膜表面的G蛋白偶联受体增加胞内的活性氧水平,活性氧可激活AMPK,形成AMPKa2/AP-2o/MMP2级联反应,从而活化MMP2的基因转录,最终导致血管壁细胞外基质的降解加速,引发AAA。胶原代谢机制:炎性因子不仅通过刺激MMPs表达而增加细胞外间质的降解,而且使得胶原合成障碍,加速AAA的形成。由于AAA是一个病因不明、病程迁延、病变发展、治疗有限、预后险恶的多因素疾病,且所得出的干预靶点在临床试验中尚无成功的先例,因此,对于AAA发生和发展机制的研究,我们仍处于早期阶段。Ang Ⅱ可以促进特定造血细胞系的増殖,而且Ang Ⅱ也参与了EPO在体内的调控。对健康志愿者的临床研究表明,Ang Ⅱ通过激活AT1R使血清EPO浓度升高约35%或更高。此外,在另一项对健康志愿者的研究中,ACEI类药物卡托普利和依那普利显着降低了血浆EPO水平,降幅高达20-30%。这些发现表明Ang Ⅱ在体内通过受体依赖信号调节EPO的产生,但EPO是否介导了Ang Ⅱ在体内的生物学作用,且引起AAA产生尚无报道。结合本研究论文I和论文Ⅱ的结论,EPO能够导致AAA的产生,因此我们假设在ApoE-/-小鼠中,EPO介导了Ang Ⅱ诱导的AAA的发生和发展,因此我们设计了一系列体内体外实验以验证此假说。研究目的1.探讨EPO/EPOR信号通路在Ang Ⅱ诱导AAA过程中起到的作用;2.探讨Ang Ⅱ诱导野生型小鼠AAA发生率较低的原因;3.探讨Ang Ⅱ作用于EPO的分子机制。研究方法1.动物模型的建立和分组（1）雄性ApoE-/-小鼠60只,随机分为4组:其中对照组给予生理盐水持续泵入+生理盐水尾静脉注射,Ang Ⅱ组给予Ang Ⅱ持续泵入+生理盐水尾静脉注射,Ang Ⅱ+IgG2a组给予Ang Ⅱ持续泵入+EPO尾静脉注射,Ang Ⅱ+EPO中和抗体组给予Ang Ⅱ持续泵入+EPO中和抗体尾静脉注射,4周后小鼠给予安乐死。（2）实验组为EPOR+/-ApoE-/-双敲小鼠,对照组为同窝ApoE-/-小鼠,同时给予Ang Ⅱ持续栗入,4周后小鼠给予安乐死。（3）雄性野生型小鼠30只,随机分为两组,每组15只;对照组给予生理盐水持续栗入,实验组给予Ang Ⅱ持续泵入,全程给予普通饲料喂养,4周后小鼠给予安乐死。2.细胞培养和分组（1）实验分为四组:对照组（溶剂对照）,Ang Ⅱ（50μM）组,Ang Ⅱ+替米沙坦（lμM）组,AngII+PD123319（50μM）组,刺激12小时,收集细胞;（2）实验分为四组:对照组（溶剂对照）,Ang Ⅱ（50μM）组,Ang 11+替米沙坦（lμM）组,AngII+U0126（50μM）组,刺激12小时,收集细胞。3.鼠尾血压测量在给予药物干预4周末,应用小动物鼠尾血压计测量所有小鼠的血压,测量部位为小鼠尾动脉,每只小鼠检测3次,取其平均值作为最终数值。4.组织取材步骤小鼠取材前饥饿6-8小时,麻醉小鼠后取材,留取全血、血清、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、脂肪组织和主动脉;各组织一部分放入液氮速冻,-80℃冰箱保存,一部分置于4%多聚甲醛中固定,以备后续实验。5.血常规检测使用兽用全自动血液细胞分析仪检测各组小鼠全血红细胞计数,血红蛋白含量和红细胞压积。6.免疫组织化学染色腹主动脉组织制备石蜡切片,对IL-6、IL-lβ、MCP-1和TNF-α进行免疫组织化学染色。7.蛋白免疫印迹实验提取腹主动脉段血管姐织蛋白和各种细胞总蛋白,进行BCA蛋白浓度测定。配制SDS-PAGE凝胶,通过蛋白免疫印迹检测EPO、EPOR、ERK1/2的蛋白含量。8.RNA提取、mRNA逆转录、RT-PCR提取腹主动脉段血管组织RNA和各种细胞总RNA,应用TaKaRa#RR047A逆转录试剂盒进行mRNA逆转录。通过实时荧光定量PCR,得出循环阈值Ct值,通过公式2-△△CT计算出cDNA的相对表达水平。9.酶联免疫吸附实验使用ELISA方法检测血清中EPO的水平。10.数据统计分析所有数据均以均数±标准误来表示,两组计量资料采用独立样本t检验,多组计量资料采用单因素方差分析LSD事后检验;不符合正态分布的数据采用秩和检验;计数资料采用卡方检验;生存分析采用Log-Rank检验;户<0.05认为有统计学差异。研究结果1.EPO在Ang Ⅱ诱导ApoE-/-小鼠发生AAA的过程中起到重要作用结果显示,Ang Ⅱ组和Ang Ⅱ+IgG2a组AAA发生率明显增高;Ang Ⅱ组和Ang Ⅱ+IgG2a组之间无显着性差异,而Ang Ⅱ+EP0中和抗体组AAA发生率降为20%。Ang Ⅱ+EP0中和抗体组腹主动脉直径明显降低,死亡率明显下降。2.EPOR在Ang Ⅱ诱导ApoE-/-小鼠发生AAA的过程中起到重要作用由于EPOR-/-纯合小鼠致死,故我们只能获得EPOR+/-杂合小鼠。给予Ang Ⅱ埋泵4周后,结果显示与ApoE+小鼠组相比,EPOR+/-ApoE-/-双敲小鼠组AAA发生率明显降低,且腹主动脉直径明显降低,死亡率降低至0。3.EPOR敲除抑制Ang Ⅱ诱导ApoE-/-小鼠AAA中炎症因子的表达EPOR+/-ApoE-/-双敲小鼠组腹主动脉管壁IL-6、IL-lp、MCP-1、TNF-a的表达明显少于ApoE-/-小鼠组。4.各组小鼠血清EPO水平比较ApoE-/-小鼠和野生型小鼠给予Ang Ⅱ千预后,Ang Ⅱ组的血清EPO水平比对照组高出2倍以上。同样给予Ang Ⅱ干预的ApoE-/-小鼠的血清EPO水平显着高于野生型小鼠的血清EPO水平。在野生型小鼠中,EPO注射组导致的血清EPO水平远高于Ang Ⅱ干预组。在Ang Ⅱ和EPO诱导的ApoE-/-小鼠和野生型小鼠AAA发病机制中EPO起了至关重要的作用。5.EPO介导了Ang Ⅱ诱导ApoE-/-小鼠的脾肿大和造血增加解剖小鼠后发现,与对照组相比,Angll组小鼠有明显的脾肿大现象,且脾脏重量明显高于对照组。EPO中和抗体治疗后,脾脏的大小和重量明显减少,且可显着抑制Ang Ⅱ诱导的RBC、HGB和HCT的增加。而EPOR+/-ApoE-/-小鼠与ApoE-/-小鼠相比,经Ang Ⅱ干预后造血表型无明显改变。6.Ang Ⅱ上调EPO表达的机制与对照组相比,Ang Ⅱ组表达EPO水平明显增高,Ang 11+替米沙坦组表达EPO水平显着低于Ang Ⅱ组,Ang Ⅱ+PD123319组表达EPO水平与Ang Ⅱ组无明显差异。Ang Ⅱ+U0126组表达EPO含量明显低于Ang Ⅱ组。Ang Ⅱ对786-0和HASMC有同样的作用。实验结论1.EPO/EPOR信号通路在Ang Ⅱ诱导AAA过程中起到关键性作用;2.血清EPO水平在Ang Ⅱ和EPO诱导的ApoE-/-和野生型小鼠AAA发病机制中起到关键作用;3.Ang Ⅱ通过AT1R/ERK1/2通路上调肾脏细胞和平滑肌细胞EPO表达,分别增加循环EPO水平和局部组织EPO水平。
徐杨[5]（2020）在《MMP-9、VEGF与中风证型相关性研究以及丁苯酞干预后的差异》文中研究表明目的:观察与比较中风病中经络、中脏腑不同分型的患者体内MMP-9浓度、脑梗死体积、NIHSS评分的相关性与差异性;分析比较中风病患者接受常规治疗与常规治疗联合丁苯酞药物干预治疗,治疗前后患者体内MMP9、VEGF浓度的变化趋势及意义。方法:收集2019年1月至2020年1月间,江西省人民医院神经内科收治的急性脑梗死（即中风病）患者70例作为脑梗死组,均符合入组标准。并选取体检中心体检者60例作为对照组。脑梗死组与对照组年龄均在40-80岁之间。按照中风病分型,将脑梗死组分为中经络组共33例、中脏腑组共37例。利用头颅核磁共振DWI像对患者脑梗死体积进行估算、检测患者发病后外周血MMP-9浓度、进行神经功能缺损评分。观察和比较中经络、中脏腑不同分型患者体内MMP-9浓度、梗死体积、NIHSS评分的相关性和差异性;将脑梗死组70例患者按照治疗方案的不同分为丁苯酞治疗组和常规治疗组。所有受试者均取刚入院第1天、未治疗前的静脉血2ml,急性脑梗死患者再于入院治疗第3天、第6天取外周静脉血样2ml,采用ELISA法分别检测MMP-9、VEGF浓度值,并对脑梗死组患者入院第1天与第6天分别进行NIHSS评分。分析不同治疗方案干预后的患者血浆内MMP-9、VEGF水平的变化趋势及意义。结果:1.对照组与脑梗死组基线资料对比:对照组平均年龄为60.8±9.6岁,脑梗死组平均年龄为64.1±9.2岁,两组在年龄、性别上均无统计学差异（P>0.05）,具有可比性。2.对照组与脑梗死组MMP-9、VEGF浓度值比较:对照组与脑梗死组血浆内MMP-9、VEGF浓度分别为:对照组84.18±4.81 ng/ml、249.12±118.82 pg/ml,脑梗死组369.25±13.96 ng/ml、286.14±100.65 pg/ml。脑梗死组血浆内MMP-9、VEGF浓度均高于对照组,结果有明显统计学差异（P<0.05）。3.对脑梗死组患者发病时MMP-9浓度值、NIHSS评分、梗死体积进行相关性分析:脑梗死组患者MMP-9浓度值、脑梗死体积、NIHSS评分相互成正向相关性,结果有统计学意义（P<0.05）。4.中经络组与中脏腑组基线资料对比:中经络组平均年龄为63.6±10.1岁、中脏腑组平均年龄为64.5±8.2岁,两组在年龄、性别上均无统计学差异（P>0.05）,具有可比性。5.对中经络组和中脏腑组患者发病后MMP-9浓度、NIHSS评分、梗死体积进行比较:中经络组患者血浆MMP-9浓度、NIHSS评分、梗死体积分别为:294.81±85.68 ng/ml、3±3分、6.46±9.89 cm3;中脏腑患者血浆MMP-9浓度、NIHSS评分、梗死体积分别为:452.71±87.06 ng/ml、12±6分、44.82±73.39 cm3;中脏腑组患者以上三个指标均高于中经络组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。6.对影响中经络、中脏腑分型的因素进行二元逻辑回归分析:NIHSS评分、梗死体积对中风患者中经络、中脏腑分型有影响作用（P<0.05）;MMP-9浓度值对中风中经络、中脏腑分型不具备影响作用（P>0.05）;其中NIHSS评分对患者的中经络、中脏腑分型判断有正相关的影响,脑梗死体积有负相关影响。7.对常规治疗组与丁苯酞治疗组基线资料比较:常规治疗组平均年龄为63.0±1.0岁,丁苯酞治疗组平均年龄为64.6±8.9岁,两组年龄、性别比较无统计学差异（P>0.05）,具有可比性。8.入院第1、3、6天,对常规治疗组与丁苯酞治疗组的患者进行MMP-9浓度值测定并对前后差值进行比较:入院第1、3天两组患者血浆内MMP-9浓度值无明显差异（P>0.05）;入院第6天丁苯酞治疗组患者血浆内MMP-9浓度值较常规治疗组低,差异具有统计学意义（P<0.05）;常规治疗组与丁苯酞治疗组患者治疗6天,MMP-9浓度下降差值分别为:172.39±77.01ng/ml,243.84±94.05 ng/ml。与常规治疗组相比,丁苯酞治疗组患者入院6天治疗前后血浆内MMP-9浓度值的下降幅度更大（P<0.05）。9.入院第1、3、6天,对常规治疗组与丁苯酞治疗组的患者进行VEGF浓度值测定并对前后差值进行比较:入院第1、3天两组患者血浆内VEGF浓度值无明显差异（P>0.05）;入院第6天丁苯酞治疗组患者血浆内VEGF浓度明显高于常规治疗组,结果具有统计学差异（P<0.05）;常规治疗组与丁苯酞治疗组患者治疗6天,VEGF浓度升高差值分别为:92.98±126.14 pg/ml,154.29±83.55 pg/ml。与常规治疗组相比,丁苯酞治疗组患者入院6天治疗前后,血浆内VEGF浓度上升幅度更大（P<0.05）。10.两组患者治疗前后NIHSS评分比较及疗效评估分析:常规治疗组与丁苯酞治疗组患者入院6天治疗前后,NIHSS评分均明显下降（P<0.05）;两组患者入院第1天、第6天NIHSS评分及治疗前后NIHSS评分下降差值分别为:常规治疗组7±6分、6±7分、1±6分;丁苯酞治疗组9±7分、5±7分、3±6分。两治疗组三方面比较均无明显统计学差异（P>0.05）。依据NIHSS评分下降比率评估可得,常规治疗组与丁苯酞治疗组总有效率分别为37.50%、63.04%。丁苯酞治疗组患者入院6天后神经功能缺损程度较普通治疗组恢复的好,疗效较常规治疗组显着（P<0.05）。结论:1.脑梗死患者发病时MMP-9浓度、梗死体积大小、NIHSS评分值相互成正向相关。2.NIHSS评分值可以作为中风病中经络与中脏腑分型判断的客观依据。3.脑梗死患者在常规治疗基础上叠加丁苯酞药物联合治疗,能够有效降低脑梗死患者体内MMP-9浓度、提高VEGF浓度。4.脑梗死患者在常规治疗基础上叠加丁苯酞药物治疗,能够有效改善患者的神经功能缺损程度,提高疗效。5.脑梗死疾病治疗中及时抑制MMP-9浓度、提高VEGF浓度,对疾病的愈后有利。
原铭贞[6]（2020）在《血流动力学改变在息肉状脉络膜血管病变发病机制中的作用研究》文中指出第一部分 血流动力学相关影像学变化与息肉状脉络膜血管病变的相关性研究目的:利用多模式影像技术,分析息肉状脉络膜血管病变（polypoidal choroidal vasculopathy,PCV）患者脉络膜血管系统及涡静脉相关影像学表现的改变,并研究相关影像学特征与息肉状脉络膜血管病变的相关性。方法:本研究为横断面研究,收集于2019年4月1日至2019年11月28日就诊我院眼科门诊的PCV患者47例（47只眼）,50名健康志愿者（50只眼）为对照组,分别进行扫频源光学相干断层扫描（Swept source optical coherence tomography,SS-OCT）、扫频源光学相干断层扫描血管成像（SS-OCT angiography,SS-OCTA）以及彩色多普勒超声成像（color Dopplerimagining,CDI）检查,对检查结果进行比较和分析。结果:PCV患眼与对照组眼间的黄斑中心凹下脉络膜厚度（subfoveal choroidal thickness,SFCT）、脉络膜血管分布指数（choroidal vascularity index,CVI）以及脉络膜毛细血管层密度（choroidal capillary vessel density,CCVD）均存在显着性差异（P=0.002,P=0.009,P<0.001）。与对照组眼相比,PCV患眼中涡静脉血流速度、睫状后短动脉及视网膜中央动脉收缩期峰值流速均显着降低（P<0.00I,P=0.05,P=0.017）,视网膜中央动脉阻力指数显着升高（P<0.001）,两组间眼动脉各项血流动力学参数差异无统计学意义（P>0.5）。在PCV患眼CDI血流动力学参数与SFCT、CVI、CCVD的相关性分析结果中,PCV患眼涡静脉血流速度与SFCT、CVI呈负相关,与CCVD呈正相关（P=0.003,P=0.004,P=0.004）;睫状后短动脉收缩期峰值流速与SFCT、CVI呈负相关,与CCVD呈正相关（P=0.021,P<0.001,P=0.001）;睫状后短动脉舒张末期血流速度与SFCT呈显着负相关（P=0.025）;眼动脉及视网膜中央动脉的各项CDI血流参数与SFCT、CVI、CCVD无显着性相关（P>0.05）。结论:PCV患眼中存在脉络膜增厚、脉络膜中/大血管层扩张以及脉络膜毛细血管萎缩的特征,且这些特征与脉络膜循环阻力升高、血流速度下降以及脉络膜血液回流障碍相关。第二部分 房水及玻璃体液细胞因子浓度与息肉状脉络膜血管病变的相关性研究目的:研究PCV患者房水及玻璃体液中的血流动力学相关细胞因子浓度的变化规律,并分析这些细胞因子与PCV的关系。方法:本研究为病例对照研究,分为房水检测组与玻璃体液检测组。房水组收集2018年9月25日至2019年8月2日期间在我院眼科就诊的PCV患者14例（14只眼）作为实验组,选取同期进行白内障手术的单纯年龄相关性白内障患者7例（7只眼）作为对照组,于治疗中收集房水样本;玻璃体液组:收集2019年8月2日至2019年10月22日期间在我院眼科进行玻璃体切除术的PCV患者5例（5只眼）作为实验组,并选取同期进行玻璃体切除术的单纯性黄斑裂孔患者6例（6只眼）作为对照组,于治疗中收集玻璃体液样本。采用细胞因子固相抗体芯片技术,选取血流动力学相关的生物标志物进行检测与分析,研究PCV患眼房水及玻璃体液中的血流动力学相关生物标志物浓度的变化规律,并分析这些生物标志物与PCV的相关性。结果:PCV组与对照组房水内细胞因子存在显着性差异的有:血管生成素（ANG）、血管生成素样蛋白-4（ANGPTL-4）、CXC趋化因子配体-16（CXCL-16）、与细胞生长相关的趋化因子（GRO）、肝细胞生长因子（HGF）、白细胞介素-10（IL-10）、IL-2、干扰素诱导蛋白-10（IP-10）、瘦蛋白（LEP）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、MMP-9、转化生长因子-β1（TGF-β1）、酪氨酸激酶受体-2（Tie-2）、基质金属蛋白酶的抑制酶-1（TIMP-1）、TIMP-2、TIMP-4、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、尿激酶型纤溶酶原激活因子受体（uPAR）、血管内皮生长因子（VEGF）。PCV组与对照组玻璃体液中细胞因子存在显着性差异的有:ANG-2、ANGPTL-4、中性粒细胞活化肽-78（ENA-78）、乱泡抑素（FST）、IL-12p40、HGF、IL-10、IL-6、IL-8、IP-10、LIF、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MMP-1、血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）、TGF-α、TIMP-1、uPAR。房水中CXCL-16、GRO、IL-2与PCV独立相关（P<0.05）,三种细胞因子的水平越高发生PCV的风险越高;玻璃体液中P-10与PCV独立相关（P<0.05）,IP-10的水平越高发生PCV的风险越高,其余细胞因子与PCV发生无明显独立相关性（P>0.05）。结论:血管生成相关因子及其受体、细胞外基质金属蛋白酶及其抑制物、炎症因子及趋化因子共同参与了 PCV的发病过程,可能涉及的机制包括破坏促血管生成因子和抗血管生成因子之间的平衡、诱发炎症反应、导致血液动力学改变、降解细胞外基质、诱导血管平滑肌细胞萎缩凋亡以及血管内皮细胞损伤,具体机制仍有待于进一步研究。第三部分 兔眼涡静脉回流受阻模型的建立目的:建立兔眼涡静脉狭窄模型,探讨涡静脉回流阻力增加能否出现PCV相关影像学表现及病理改变,并分析疾病动物模型眼内液相关细胞因子水平的变化。方法:选取20只青紫蓝兔,分成组1和组2,每组各10只。组1:实验动物两只眼球分别为狭窄组和空白对照组;组2:实验动物两只眼球分别为假手术组和空白对照组。狭窄组为仅部分结扎眼球颞上方和眼球颞下方两条涡静脉,假手术组为分别结扎眼球颞上方和眼球颞下方两条涡静脉后即刻剪开结扎线,空白对照组是指不给予任何处理的对照。三组实验动物于术前1天,以及术后1周、4周、8周、16周分别进行裂隙灯、眼底彩照、SS-OCT、SS-OCTA检查;于术前1天,以及术后1周、术后8周、16周分别进行ICGA及FFA检查,分析实验动物模型有无PCV相关影像学表现。并于术后16周分别抽取三组实验动物眼内房水及玻璃体液进行相关细胞因子检测,分析疾病动物模型眼内液相关细胞因子水平的变化。最后于术后16周摘除每组眼球,分别进行苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE染色）观察大致形态改变,弹性纤维染色（verhoeffs van gieson staining,EVG染色）观察血管弹性纤维的形态以及平滑肌细胞层的改变,VEGF免疫组化染色观察血管内皮细胞破坏情况。结果:三组实验动物术前脉络膜厚度间差异无统计学意义;狭窄组兔眼术后1周、4周、8周、16周的脉络膜厚度均显着高于空白对照组和假手术组（P值均<0.05）。狭窄组兔眼术后可见脉络膜血管紊乱、粗细不均,局部色素沉着,脉络膜厚度明显增厚、脉络膜大血管层明显扩张,部分狭窄组兔眼可出现局部神经上皮隆起、RPE微隆起、IS/OS层破坏的表现,以及FFA及ICGA上的小点状、斑驳状高荧光,随时间延长荧光点数量增多、范围变大。与空白对照组相比,狭窄组房水内IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor,b-FGF）、TNF-α、VEGF、MMP-9表达量升高,玻璃体液中IL-2、IL-8、IL-9、IL-10、PDGF-B、TNF-α、VEGF、MMP-3、MMP-9、TIMP-1表达量升高;与假手术组相比,狭窄组房水内IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、b-FGF、TNF-α、VEGF表达量升高,玻璃体液中IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、PDGF-BB、TNF-α、VEGF表达量升高;而假手术组与空白对照组间的细胞因子均无显着性差异。此外,与空白对照组及假手术组相比,狭窄组兔眼可出现脉络膜血管扩张且不规则、血管壁变薄,并具有空泡样变的脉络膜血管结构,脉络膜血管平滑肌细胞变性、萎缩、坏死,脉络膜血管壁弹性纤维层破坏,脉络膜血管内皮细胞损伤及空泡样变。结论:涡静脉回流受阻疾病动物模型可出现部分与PCV相似的影像学及病理学表现,眼内液中血管生成相关因子及其受体、细胞外基质金属蛋白酶及其抑制物、炎症因子及趋化因子表达量升高,提示涡静脉回流受阻所致脉络膜系统循环障碍及血流动力学改变,可能参与了 PCV的发生发展过程。
曾志刚[7]（2019）在《IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究》文中研究指明目的:骨骼肌损伤是运动医学中最常见的损伤之一。我们之前的研究发现,巨噬细胞剔除导致挫伤骨骼肌中胰岛素样生长因子1（IGF-1）、机械生长因子（MGF）的下调和肌肉再生受损。据此我们假设,注射IGF-1或MGF可能至少部分地改善巨噬细胞剔除导致的肌肉修复受损。因此,我们探讨了注射IGF-1或MGF是否在改善受损肌肉的修复中起重要作用。方法:在C57BL/6小鼠的腓肠肌中建立了IGF-1或MGF注射的肌肉挫伤和巨噬细胞剔除的动物模型。将小鼠随机分为4组:（1）挫伤与安慰剂处理组（C组）,（2）挫伤与巨噬细胞剔除处理组（CD组）,（3）挫伤、巨噬细胞剔除与IGF-1处理组（CDI组）,（4）挫伤、巨噬细胞剔除与MGF处理组（CDM组）。在C、CD、CDI和CDM组中,除第0天（非挫伤小鼠）外,每组小鼠均产生腓肠肌双侧挫伤,并分别在挫伤前（Con）和挫伤后第1、3、7、14天取样。在巨噬细胞剔除和IGF-1或MGF注射后对挫伤的肌肉进行综合的组织形态学和遗传学分析,在挫伤骨骼肌中检测骨骼肌再生（HE染色）、纤维化（masson染色）、巨噬细胞及其亚群表面标志物、炎性细胞因子、趋化因子、肌源性调节因子（MRFs）、血管生成调节因子、氧化应激因子和基质金属蛋白酶（MMP）的表达（实时定量PCR和免疫荧光染色）。结果:1含氯膦酸盐的脂质体对受损骨骼肌巨噬细胞标志物的影响。与单纯肌肉挫伤后相比,巨噬细胞剔除后的巨噬细胞总数（F4/80）明显受到抑制（ρ<0.01）。这些结果表明巨噬细胞有效剔除了。2注射IGF-1未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的再生肌纤维减少和纤维化加重。巨噬细胞剔除后损伤14天的挫伤肌肉中再生肌纤维的总数目、总面积和总直径比单纯肌肉挫伤后的再生肌纤维显着减少（ρ<0.05）,注射IGF-1后受损的肌肉再生没有改善（ρ>0.05）。再者,巨噬细胞剔除引起肌肉挫伤后纤维化明显增加（ρ<0.05）,而增加的纤维化没有通过IGF-1注射得以改善（ρ>0.05）。3注射IGF-1未能促进巨噬细胞剔除后巨噬细胞之间的协调,从而未改善挫伤肌肉的再生和修复。通过注射IGF-1,挫伤后的细胞免疫反应得到了改善,巨噬细胞总数（F4/80）、促炎巨噬细胞（CD68）、抗炎巨噬细胞（CD163和CD206）有一定程度的显着增加（ρ<0.05）。在修复后期,注射IGF-1后的巨噬细胞总数（F4/80）高于单纯肌肉挫伤和巨噬细胞剔除后的巨噬细胞总数（F4/80）（ρ<0.05）,而注射IGF-1后的CD68和CD206巨噬细胞的水平仅高于单纯肌肉挫伤后的水平（ρ<0.05）,CD163巨噬细胞水平低于单纯肌肉挫伤后的水平（ρ<0.01）。4注射IGF-1未能改善巨噬细胞剔除所致的挫伤肌肉延迟修复（其表现为MRFs增加,特别是修复后期）。与单纯肌肉挫伤后的表达水平相比,在巨噬细胞剔除后的不同时间点,MyoD,Myf5,myogenin和Myf6的表达水平显着增加（ρ<0.05）,在注射IGF-1后14d,MyoD和myogenin的表达也显着增加（ρ<0.001）。5注射IGF-1部分改善了巨噬细胞剔除所致的血管生成调节因子的抑制,但未能改善挫伤肌肉的再生受损。与单纯肌肉挫伤后相比,在巨噬细胞剔除后修复的初始阶段HIF-1α和VEGF的表达增加（ρ<0.01）,在巨噬细胞剔除后的所有修复阶段Angpt-1的表达均低于单纯肌肉挫伤后的表达（ρ<0.01）。与巨噬细胞剔除后相比,注射IGF-1后各修复阶段HIF-1α的表达均显着降低（ρ<0.05）,VEGF在修复后期和Angpt-1在所有修复阶段的表达显着增加（ρ<0.001）。然而,注射IGF-1后修复后期HIF-1α、VEGF和Angpt-1的表达均低于单纯肌肉挫伤后的表达（ρ<0.001）。6注射MGF对巨噬细胞剔除后肌纤维再生无保护作用,但减轻挫伤骨骼肌的纤维化。巨噬细胞剔除显着降低了损伤14天后再生肌纤维的总直径、总数量和总面积（ρ<0.01）。然而,注射MGF对再生肌纤维的直径、数量和面积没有影响（ρ>0.05）。再者,与损伤后14天的单纯肌肉挫伤组纤维化比较,巨噬细胞剔除组的骨骼肌纤维化显着增加（ρ<0.01）。然而,与损伤后14天的巨噬细胞剔除组纤维化面积比较,注射MGF后纤维化面积显着降低（ρ<0.05）。同时,在损伤后1天和3天,注射MGF后I型和III型胶原蛋白水平明显低于巨噬细胞剔除后的水平（ρ<0.01）。7注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中卫星细胞的功能状态。巨噬细胞剔除不影响MyoD的表达（ρ>0.05）,但在肌肉损伤后3天显着降低Myogenin的表达（p<0.01）。然而,注射MGF并不影响巨噬细胞剔除后受损骨骼肌中MyoD和Myogenin的表达（ρ>0.05）。8注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的表达,但降低炎性细胞因子和趋化因子的表达。与巨噬细胞剔除相比,注射MGF后挫伤骨骼肌的巨噬细胞标记物表达无明显变化（ρ>0.05）。在骨骼肌损伤后3天,巨噬细胞剔除使促炎细胞因子（TNF-α,IL-1β和TGF-β）的水平显着高于单纯肌肉挫伤（ρ<0.05）。相反,与巨噬细胞剔除相比,注射MGF导致损伤后TNF-α,IFN-γ,IL-1β和TGF-β水平显着降低（ρ<0.05）。再者,巨噬细胞剔除显着增加趋化因子（CCL2、CCL5和CXCR4）的表达（ρ<0.05）。然而,注射MGF显着降低巨噬细胞剔除后受损肌肉组织三种趋化因子（CCL2,CCL5和CXCR4）的表达（ρ<0.05）。9注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中gp91phox的表达。与巨噬细胞剔除比较,注射MGF显着降低了伤后3天gp91phox的表达（ρ<0.01）。10注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中基质金属蛋白酶的表达。巨噬细胞剔除导致损伤骨骼肌中MMP-1,MMP-2,MMP-9,MMP-10和MMP-14水平比单纯肌肉挫伤显着升高（ρ<0.05）。与巨噬细胞剔除比较,注射MGF在损伤后第3天显着抑制其增加（ρ<0.01）。结论:通过上述研究结果得出以下结论:（1）在巨噬细胞持续剔除的情况下,注射IGF-1可以促进巨噬细胞亚群（CD206）和VEGF、Angpt-1的表达的部分恢复。（2）IGF-1注射并不能完全弥补巨噬细胞在肌肉再生相关调节因子、肌源性调节因子和血管生成调节因子中的重要作用。因此,外源性补充IGF-1并不能改善由巨噬细胞剔除引起的小鼠挫伤骨骼肌的再生和修复受损。（3）注射MGF可部分改善由巨噬细胞剔除导致的小鼠骨骼肌再生受损和纤维化。（4）注射MGF降低了巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子、趋化因子、基质金属蛋白酶和gp91phox的表达,有利于减少挫伤骨骼肌的纤维化。
陈凯[8]（2018）在《黄连解胰汤通过抑制肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化介导抗胰腺癌的作用及其机制》文中进行了进一步梳理胰腺癌恶性程度高,治疗效果差,寻找新的治疗手段,是临床上亟待解决的课题。而炎症在胰腺癌恶性进展中扮演着了重要角色。针对该特点,我们以经典方剂黄连解毒汤（黄连、黄芩、黄柏、栀子）为基础,设计了黄连解胰汤方剂（Huang-Lian-Jie-Yi-Tang,HLJYT）。该方剂由黄连、黄芩、黄柏、栀子、柴胡配伍而成,具有清化湿热、泻火解毒的功效。在临床应用中该方具有一定抗肿瘤作用并能改善胰腺癌患者的临床症状。为了探明黄连解胰汤方剂的作用及其机制,本论文通过一系列体外、体内实验,研究了黄连解胰汤对胰腺癌细胞生长转移的影响,并通过基因芯片和生物信息学分析,探讨了黄连解胰汤抗肿瘤的分子机制。第一部分 黄连解胰汤对胰腺癌细胞生长及迁移的影响目的:中医学理论认为,大多数胰腺癌患者以“湿热”为主要证候。临床应用显示,具有清热解毒功效的黄连解胰汤可改善胰腺癌患者的临床症状。本部分旨在研究黄连解胰汤在体外是否能抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长和迁移。方法:应用黄连解胰汤汤剂灌胃及腹主动脉取血法,制备大鼠黄连解胰汤含药血清以及对照血清,作为体外细胞实验用药;应用MTT法观察黄连解胰汤含药血清对PANC-1细胞的生长的作用;应用划痕实验观察黄连解胰汤含药血清对PANC-1细胞的迁移的作用。结果:MTT实验显示黄连解胰汤含药血清对PANC-1细胞体外生长无明显的效应;但划痕实验表明黄连解胰汤含药血清可有效抑制PANC-1细胞的迁移。结论:本部分研究结果发现,虽然黄连解胰汤含药血清对胰腺癌细胞生长并无直接的抑制作用,但可以抑制胰腺癌细胞的迁移能力。第二部分 黄连解胰汤对胰腺癌移植瘤生长的作用目的:本部分拟探讨黄连解胰汤在体内是否能影响裸鼠胰腺癌原位移植瘤的生长。方法:应用水煎剂法制备黄连解胰汤汤剂,作为动物实验用药;应用尾静脉注射二丁基二氯化锡（dibutyltindichloride,DBTC）技术建立裸鼠慢性炎症模型;采用胰腺原位包膜下注射PANC-1细胞悬液构建裸鼠胰腺原位移植瘤模型,及小动物活体成像Luminex技术检测裸鼠体内移植瘤萤光强度,评价移植瘤的生长;剥离瘤体测量并称重。应用免疫组化检测胰腺癌移植瘤组织标本的Ki-67、CD68、CD163的表达。结果:黄连解胰汤抑制胰腺癌移植瘤生长,并且这种抑制作用在具有炎症基础的模型中更为显着;黄连解胰汤抑制肿瘤组织Ki-67表达水平,以及巨噬细胞浸润。结论:本部分研究证实黄连解胰汤能够减少肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）浸润,提示黄连解胰汤可能通过重组胰腺癌的免疫微环境,发挥抗肿瘤作用。第三部分 黄连解胰汤对肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化和血管生成的作用及机制目的:研究表明,肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）更多地类似于M2型巨噬细胞,其释放的细胞因子、趋化因子以及生长因子等涉及肿瘤血管生成及肿瘤细胞浸润转移。本部分旨在研究黄连解胰汤对肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化和血管生成的作用。方法:通过Transwell小室建立巨噬细胞与PANC-1细胞的共培养模型;应用流式细胞术,检测巨噬细胞表面标志物;采用基因芯片和生物信息学方法,检测及分析巨噬细胞的基因表达谱;通过体外血管生成实验检测巨噬细胞条件培养基对体外血管生成的影响结果:黄连解胰汤含药血清可在体外抑制M2型肿瘤相关巨噬细胞的分化;基因芯片及生信分析结果显示黄连解胰汤含药血清处理影响巨噬细胞多个基因表达及多条信号通路的活化,涉及与M2型巨噬细胞分化相关的MAPK信号通路、Notch信号通路、WNT信号通路、JAK/STAT信号通路等;体外血管生成实验显示,巨噬细胞条件培养基（macrophage conditioned medium,MCM）促进血管生成;黄连解胰汤方处理组,肿瘤组织标本中CD34+血管内皮细胞丰度下降、微血管密度（microvessel density,MVD）降低。结论:本部分研究证实黄连解胰汤通过抑制M2型巨噬细胞分化,减少TAMs浸润,调节胰腺癌肿瘤微环境,进而抑制肿瘤血管生成。
成卓[9]（2018）在《骨髓间充质干细胞移植减少缺血诱导的血脑屏障破坏》文中指出背景与目的:缺血性卒中诱导基质金属蛋白酶-9（MMP-9）活化,其通过降解胞外基质增加了血脑屏障通透性。作为干细胞治疗中的常用细胞,间充质干细胞（MSCs）具有治疗缺血性脑损伤的巨大潜力。已有研究表明,骨髓间充质干细胞移植可减少缺血急性期血脑屏障破坏并改善动物神经功能,然而其分子机制并不完全清楚。本研究中,我们检测了缺血性脑损伤后骨髓间充质干细胞是否可通过影响基质金属蛋白酶-9的释放和活化而对维持血脑屏障功能有积极作用,并进一步探讨了与其可能相关的分子机制。我们假设间充质干细胞可通过抑制细胞间粘附因子（ICAM-1）的表达,减少嗜中性粒细胞粘附、浸润和迁移,从而减少由嗜中性粒细胞引起的自身与其他细胞的基质金属蛋白酶-9释放,以减轻血脑屏障破坏。材料与方法:选取118只成年雄性ICR小鼠,采用线栓法对其进行短暂性大脑中动脉栓塞（tMCAO）90分钟,拔掉线栓后20分钟内,在小鼠缺血半暗带纹状体区域,立体定位注射骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）。在体实验分为四个组:假手术组,缺血+生理盐水组,缺血+干细胞组及缺血+SB-3CT（阳性对照）组。造模后1天和3天时对动物进行神经行为学评分。牺牲动物后取脑测定栓塞体积和血脑屏障通透性情况,研究基质金属蛋白酶-9含量水平及活性情况。然后测定嗜中性粒细胞浸润和髓过氧化物酶活力。我们也研究了细胞间粘附因子-1（ICAM-1）分泌的变化。体外实验中,我们使用骨髓间充质干细胞及其条件培养基与进行糖氧剥夺（OGD）后的bEnd.3细胞共培养以模拟在体的缺血再灌注,并检测细胞间粘附因子-1的变化及其可能涉及的通路。结果:相比于生理盐水组,干细胞治疗组的小鼠神经功能缺陷评分,梗死体积,免疫球蛋白G渗出都显着下降（p<0.05）。干细胞治疗减少了紧密连接蛋白occludin、ZO-1和claudin-5的间隙,及IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达（p<0.05）。干细胞治疗也减少了嗜中性粒细胞浸润数量和降低了髓过氧化物酶活性（p<0.05）。此外,我们也证明了干细胞治疗能有效抑制缺血后基质金属蛋白酶-9蛋白和mRNA水平的上调及活力升高,并减少细胞间粘附因子-1的表达（p<0.05）。同时,作为阳性对照应用SB-3CT抑制基质金属蛋白酶-9后,可观察到基质金属蛋白酶-9下调。体外实验应用干细胞及其条件培养基分别与进行糖氧剥夺处理后的bEnd.3细胞共培养,证明了干细胞治疗能减少缺氧缺糖诱导的细胞间粘附因子-1表达及单腺苷酸蛋白激酶的磷酸化。使用单腺苷酸蛋白激酶的抑制物补体C能有效抑制干细胞共培养引起的单腺苷酸蛋白激酶磷酸化。结论:缺血后间充质干细胞移植能通过影响基质金属蛋白酶-9,减轻小鼠缺血性脑损伤后血脑屏障破坏,可能是通过减少内皮细胞细胞间粘附因子-1表达,继而减轻嗜中性粒细胞的粘附与浸润,最后影响其与其他细胞分泌基质金属蛋白酶-9。另外,体外实验提示了间充质干细胞可能是通过单腺苷酸蛋白激酶通路下调细胞间粘附因子-1的表达,这是干细胞旁分泌行为的重要因素之一。研究提示了间充质干细胞治疗缺血性卒中时基质金属蛋白酶-9是一个新的重要靶点。
时会芳[10]（2017）在《肿瘤条件下单核样髓源抑制细胞的形成及作用的机制研究》文中研究表明肿瘤发生和发展过程中通常伴随炎症的发生。肿瘤相关炎症被认为是机体免疫监视过程的屏障,并且能够在多个方面促进肿瘤进展,包括肿瘤细胞转移、新血管生成、突变细胞的增殖等。髓源抑制细胞（MDSC）是一种在病理条件下由造血干细胞异常分化产生的,具有抑制机体免疫应答反应的异质性细胞群。MDSC不仅具有免疫抑制功能,在肿瘤发生和发展的多个过程中都发挥至关重要的作用,包括促进肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞在血行转移过程中的血管壁捕获等。单核样髓源抑制细胞（mo-MDSC）是MDSC的一个亚群,与MDSC的另一亚群粒样髓源抑制细胞（G-MDSC）相比具有更强的免疫抑制活性。本文主要探讨了肿瘤条件下能够诱导mo-MDSC扩增的细胞因子,以及mo-MDSC如何促进肿瘤进展的具体机制。MDSC的扩增与活化受多种因子的影响,包括能刺激骨髓发生并抑制成熟髓样细胞分化的肿瘤细胞分泌因子,以及直接参与MDSC活化的由活化的T细胞和肿瘤相关基质细胞产生的因子。我们的研究首先发现,肿瘤细胞条件培养基能诱导骨髓细胞分化mo-MDSC;通过分析肿瘤细胞条件培养基成分进一步确定,趋化因子CXCL1和CXCL2能促进骨髓细胞向mo-MDSC的分化,并且此过程与mo-MDSC的趋化、增殖以及凋亡作用无关。除肿瘤细胞之外,渗入肿瘤组织中的CD11b+髓样细胞也能产生CXCL1和CXCL2。我们进一步探究了mo-MDSC在肿瘤预转移微环境构建中的作用。研究结果发现,mo-MDSC在G-MDSC之前被募集到肿瘤预转移微环境中,促进肿瘤转移和肿瘤细胞在血管壁上的捕获。相关的机制研究发现,募集到预转移微环境中的mo-MDSC分泌细胞因子IL-1β。IL-1β能够作用于血管内皮细胞,促进内皮细胞中E-selectin的表达,进而促进了肿瘤细胞的捕获和转移。相反,当用抗Gr-1抗体清除体内mo-MDSC,E-selectin的表达相应会下降。通过利用细胞因子微阵列检测预转移微环境中的成分发现,趋化因子CCL12是关键的募集mo-MDSC到达预转移微环境的细胞因子。当干涉掉CCL12之后,mo-MDSC的募集减少,E-selectin的表达也相应降低。我们的研究表明,炎性细胞因子CXCL1和CXCL2对于骨髓分化mo-MDSC具有重要作用,同时也揭示了mo-MDSC促进肿瘤转移的一种新机制。该研究成果进一步证实了肿瘤与炎症之间的相关性,可能为控制肿瘤转移提供新的靶点。
二、血管内皮生长因子对内皮细胞产生基质金属蛋白酶2的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管内皮生长因子对内皮细胞产生基质金属蛋白酶2的影响（论文提纲范文）
（1）内皮和胃癌来源的ADAM28对胃癌细胞凋亡的调控作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 胃癌现状概述 |
| 1.1.1 胃癌概述 |
| 1.1.2 胃癌的治疗现状 |
| 1.2 ADAM28概述 |
| 1.2.1 ADAM28的结构 |
| 1.2.2 ADAM28与肿瘤 |
| 1.3 vWF概述 |
| 1.4 肿瘤微环境概述 |
| 1.5 研究目的、内容、创新点和意义 |
| 1.5.1 研究目的 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 研究创新点和意义 |
| 第2章 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 常用试剂 |
| 2.2 仪器和设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 细胞瞬时转染 |
| 2.3.3 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳和蛋白免疫印迹实验(Western Blot) |
| 2.3.4 细胞中总RNA的提取及反转录PCR |
| 第3章 ADAM28在胃癌中的表达情况和预后研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 细胞株 |
| 3.2.2 主要药品和试剂 |
| 3.2.3 主要仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 数据库分析 |
| 3.3.2 Western Blot检测胃癌细胞系中ADAM28的蛋白表达水平 |
| 3.3.3 qPCR检测胃癌细胞系中ADAM28 mRNA的表达水平 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 基于TCGA数据库的胃癌发展与ADAM28表达关系分析 |
| 3.4.2 ADAM28在胃癌细胞系中表达上调 |
| 3.4.3 胃癌中ADAM28与vWF蛋白表达水平呈负相关 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 体外实验研究胃癌来源ADAM28对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的调控作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 细胞株 |
| 4.2.2 主要药品和试剂 |
| 4.2.3 主要仪器设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 构建ADAM28敲低和过表达质粒 |
| 4.3.2 划痕实验检测胃癌来源ADAM28对胃癌细胞迁移的影响 |
| 4.3.3 胃癌来源ADAM28对胃癌细胞增殖的影响 |
| 4.3.4 流式细胞术检测胃癌来源ADAM28对胃癌细胞凋亡水平的影响 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 ADAM28 shRNA质粒或ADAM28过表达质粒在胃癌细胞中敲低效率或过表达效率验证 |
| 4.4.2 胃癌来源ADAM28促进胃癌细胞的迁移能力 |
| 4.4.3 胃癌来源ADAM28促进胃癌细胞的增殖能力 |
| 4.4.4 胃癌来源ADAM28敲低能够促进胃癌细胞的凋亡 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 胃癌来源ADAM28调控胃癌细胞凋亡的分子机制研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 细胞株 |
| 5.2.2 主要药品和试剂 |
| 5.2.3 主要仪器设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 转染ADAM28 shRNA和ADAM28 pcDNA之后胃癌细胞中vWF的蛋白表达水平 |
| 5.3.2 构建vWF表达敲低质粒 |
| 5.3.3 Western Blot检测vWF敲低效率 |
| 5.3.4 流式细胞术检测敲低vWF的表达对胃癌细胞凋亡水平的影响 |
| 5.3.5 Western Blot检测vWF及下游相关蛋白表达水平 |
| 5.3.6 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 胃癌来源的ADAM28调节vWF的表达 |
| 5.4.2 vWF敲低不诱导胃癌细胞凋亡 |
| 5.4.3 胃癌来源的ADAM28切割vWF从而消除vWF诱导的胃癌细胞凋亡 |
| 5.5 讨论 |
| 第6章 内皮来源ADAM28调控内皮细胞凋亡及其分子机制 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.2.1 细胞株 |
| 6.2.2 主要药品和试剂 |
| 6.2.3 主要仪器设备 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 6.3.2 Western Blot检测凋亡蛋白的表达 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 内皮来源的ADAM28调节vWF的表达 |
| 6.4.2 vWF敲低不诱导内皮细胞凋亡 |
| 6.4.3 内皮来源的ADAM28切割vWF从而消除vWF诱导的内皮细胞凋亡 |
| 6.5 讨论 |
| 第7章 体外实验研究共培养体系中内皮来源ADAM28对胃癌细胞凋亡能力的调控作用 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料 |
| 7.2.1 细胞株 |
| 7.2.2 主要药品和试剂 |
| 7.2.3 主要仪器设备 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 转染ADAM28 shRNA和ADAM28 pcDNA之后内皮细胞中ADAM28的蛋白表达水平检测 |
| 7.3.2 HUVEC与胃癌细胞共培养体系 |
| 7.3.3 流式细胞术检测敲低和过表达内皮细胞中ADAM28的表达对胃癌细胞凋亡的影响 |
| 7.3.4 Western Blot检测共培养体系中胃癌细胞凋亡相关蛋白表达 |
| 7.4 实验结果 |
| 7.4.1 内皮细胞中ADAM28敲低和过表达效率验证 |
| 7.4.2 内皮来源的ADAM28能够抑制共培养系统中胃癌细胞的凋亡 |
| 7.5 讨论 |
| 第8章 共培养体系中内皮来源ADAM28调控胃癌细胞凋亡的分子机制研究 |
| 8.1 引言 |
| 8.2 实验材料 |
| 8.2.1 细胞株 |
| 8.2.2 主要药品和试剂 |
| 8.2.3 主要仪器设备 |
| 8.3 实验方法 |
| 8.3.1 ELISA检测共培养体系中细胞上清vWF的表达 |
| 8.3.2 Western Blot检测vWF及相关蛋白的表达水平 |
| 8.3.3 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 8.4 实验结果 |
| 8.4.1 上室HUVEC的ADAM28敲低会增加共培养体系中vWF的分泌 |
| 8.4.2 内皮来源ADAM28可裂解vWF从而抑制vWF诱导的胃癌细胞凋亡 |
| 8.5 讨论 |
| 第9章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间论文和专利发表情况 |
（2）益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制（论文提纲范文）
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 文献检索和筛选要求 |
| 1.2 文献筛选标准 |
| 1.3 质量评估及数据的提取 |
| 2 结果Results |
| 2.1 血管新生的概念和影响因素 |
| 2.2 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对缺血性脑卒中血管新生的影响 |
| 2.2.1 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对血管内皮生长因子及血管内皮生长因子A的影响 |
| 2.2.2 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对缺氧诱导因子1α的影响 |
| 2.2.3 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对血管生成素的影响 |
| 2.2.4 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对脑源性神经营养因子的影响 |
| 2.2.5 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对碱性成纤维细胞生长因子的影响 |
| 2.2.6 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对整合素αvβ3的影响 |
| 2.2.7 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对基质金属蛋白酶9的影响 |
| 2.2.8 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对Wnt信号通路的影响 |
| 2.2.9 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对Notch信号通路的影响 |
| 2.2.1 0 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对PI3K/Akt信号通路的影响 |
| 3 小结Conclusions |
（3）硫酸肝素蛋白多糖复合碱性成纤维细胞生长因子促进心梗修复的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 细胞外基质 |
| 1.1.1 细胞外基质的组成和结构 |
| 1.1.2 心脏细胞外基质的病理变化 |
| 1.2 HSPG的结构与功能 |
| 1.2.1 HSPG的结构特征 |
| 1.2.2 HSPG的生物合成与调控 |
| 1.2.3 HSPG的生物功能及研究方法 |
| 1.2.4 HSPG与疾病的关系 |
| 1.3 HSPG与生长因子 |
| 1.3.1 HSPG与生长因子相互作用 |
| 1.3.2 碱性成纤维细胞生长因子在心梗中的作用 |
| 1.3.3 HSPG对心血管疾病的影响 |
| 1.4 HSPG及其类似物作为生物材料的研究 |
| 1.4.1 生长因子载药材料 |
| 1.4.2 HSPG及其类似物作为生物材料的价值 |
| 1.5 本论文研究思路与内容 |
| 1.5.1 选题背景与研究思路 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第2章 细胞外基质分子在心肌梗死前后的表达变化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 手术器械 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 心梗模型构建 |
| 2.3.2 测序取样 |
| 2.3.3 转录组测序 |
| 2.3.4 测序数据分析 |
| 2.3.5 数据分析使用的软件 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 大鼠心肌梗死造模 |
| 2.4.2 测序数据质量评估 |
| 2.4.3 细胞外基质差异基因分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 硫酸乙酰肝素蛋白多糖体外对碱性成纤维细胞生长因子的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验试剂及配制 |
| 3.2.2 实验药品及细胞 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 脊髓组织获取 |
| 3.3.2 蛋白聚糖纯化 |
| 3.3.3 碱性成纤维生长因子bFGF的原核表达载体构建与蛋白纯化 |
| 3.3.4 SDS-PAGE电泳 |
| 3.3.5 体外结合实验 |
| 3.3.6 体外释放实验 |
| 3.3.7 心肌细胞的原代提取 |
| 3.3.8 心肌细胞粘附实验 |
| 3.3.9 成纤维细胞的培养 |
| 3.3.10 细胞活性检测 |
| 3.3.11 HSPG对bFGF生物活性的影响 |
| 3.3.12 MMP2的活性检测 |
| 3.3.13 Western blotting检测HSPG对bFGF的保护作用 |
| 3.3.14 统计分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 碱性成纤维细胞生长因子bFGF在大肠杆菌中表达及后期纯化 |
| 3.4.2 体外结合实验 |
| 3.4.3 体外释放实验 |
| 3.4.4 心肌细胞的培养及粘附实验 |
| 3.4.5 HSPG对bFGF活性影响 |
| 3.4.6 HSPG抑止MMP2生物活性 |
| 3.4.7 HSPG对bFGF的保护作用 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 硫酸乙酰肝素蛋白多糖结合碱性成纤维细胞生长因子对心肌梗死的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 实验仪器及主要耗材 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 心肌梗死动物模型构建及治疗 |
| 4.3.2 心肌梗死动物模型成功构建的检测 |
| 4.3.3 硫酸乙酰肝素蛋白多糖结合碱性成纤维细胞生长因子对心梗后血管再生的影响 |
| 4.3.4 组织形态学分析 |
| 4.3.5 TUNEL染色 |
| 4.3.6 小动物心脏超声检测 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 TUNEL染色分析 |
| 4.4.2 组织形态学分析心室重构 |
| 4.4.3 血管再生 |
| 4.4.4 心肌细胞存活 |
| 4.4.5 心脏功能检测 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 综合讨论 |
| 5.2 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（4）促红细胞生成素导致腹主动脉瘤形成的作用及分子机制研究（论文提纲范文）
| 论文Ⅰ 促红细胞生成素诱导小鼠发生腹主动脉瘤的作用及分子机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 论文Ⅱ 促红细胞生成素在血管紧张素II诱导腹主动脉瘤小鼠模型中的作用和机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
| 外文论文3 |
（5）MMP-9、VEGF与中风证型相关性研究以及丁苯酞干预后的差异（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一章 历史回顾 |
| 1 中医对中风病的认识和发展 |
| 1.1 中风病因病机的发展 |
| 1.2 中风辨证分型研究现状 |
| 1.3 中医对中风病的治疗现状 |
| 2 西医对中风的认识现状 |
| 2.1 西医对中风病的认识 |
| 2.2 西医目前对中风病的治疗方法 |
| 第二章 临床研究 |
| 1 临床资料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 相关标准制定 |
| 1.3 病例分组 |
| 1.4 治疗方法 |
| 1.5 量表评定及疗效评估 |
| 1.6 观察指标与方法 |
| 2 研究材料和方法 |
| 2.1 样本存取 |
| 2.2 实验设备及试剂准备 |
| 2.3 实验步骤 |
| 2.4 计算方法 |
| 3 统计学处理 |
| 3.1 统计软件 |
| 3.2 统计方法选择 |
| 4 技术路线图 |
| 5 结果 |
| 5.1 分别将对照组与脑梗死组的性别、年龄进行比较 |
| 5.2 对照组与脑梗死组血浆内MMP-9、VEGF浓度值比较 |
| 5.3 对脑梗死组患者MMP-9 浓度值、NIHSS评分、梗死体积进行相关性分析 |
| 5.4 对中经络组与中脏腑组病例分别进行性别、年龄的比较 |
| 5.5 分别对比中经络组与中脏腑组患者发病时的MMP-9 浓度、NIHSS评分、梗死体积 |
| 5.6 对影响中风中经络、中脏腑分型的因素进行二元逻辑回归分析 |
| 5.7 对常规治疗组与丁苯酞治疗组分别进行年龄、性别的比较 |
| 5.8 对常规治疗组与丁苯酞组的入院第1、3、6天患者血浆MMP-9浓度及治疗前后差值进行比较 |
| 5.9 对常规治疗组与丁苯酞组的入院第1天、第3天、第6天患者血浆VEGF浓度及治疗前后差值比较 |
| 5.10 两组患者治疗前后NIHSS评分比较及疗效评估分析 |
| 讨论 |
| 1 研究目的 |
| 2 基质金属蛋白酶9的相关介绍 |
| 2.1 基质金属蛋白酶与组织金属蛋白酶 |
| 2.2 基质金属蛋白酶9 |
| 2.3 基质金属蛋白酶9与脑梗死发生发展的关联 |
| 3 血管内皮生长因子的相关介绍 |
| 3.1 血管内皮生长因子功能介绍 |
| 3.2 血管内皮生长因子与脑梗死的联系 |
| 4 丁苯酞的相关介绍 |
| 4.1 丁基苯肽在脑梗死疾病中的作用 |
| 5 基质金属蛋白酶9、NIHSS评分、梗死体积与中风病中经络、中脏腑分型的联系及意义 |
| 6 脑梗死治疗中调节基质金属蛋白酶9和血管内皮生长因子的作用及意义 |
| 7 选取丁苯酞作为对照治疗的意义 |
| 8 疗效比较 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 1 不足 |
| 2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附表1 美国国立卫生研究院卒中量表(NIH Stroke Scale,NIHSS)简易版 |
| 简历 |
（6）血流动力学改变在息肉状脉络膜血管病变发病机制中的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 血流动力学相关影像学变化与息肉状脉络膜血管病变的相关性研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 资料与方法 |
| 1.2.1 研究对象 |
| 1.2.2 方法 |
| 1.2.3 统计学方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 PCV患眼与对照组眼间SFCT、CVI、CCVD比较 |
| 1.3.2 PCV患眼与对照组眼间CDI血流动力学参数比较 |
| 1.3.3 PCV组CDI血流动力学参数与SFCT、CVI、CCVD的相关性分析 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二部分 房水及玻璃体液细胞因子浓度与息肉状脉络膜血管病变的相关性研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 资料与方法 |
| 2.2.1 研究对象 |
| 2.2.2 样本收集 |
| 2.2.3 检测方法 |
| 2.2.4 统计学方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 一般临床资料分析 |
| 2.3.2 PCV组与对照酿水细胞因子水平比较分析 |
| 2.3.3 PCV组与对照组玻璃体液细胞因子水平比较分析 |
| 2.3.4 PCV影响因素分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 血管生成相关因子及其受体 |
| 2.4.2 细胞外基质金属蛋白酶及其抑制物 |
| 2.4.3 炎症因子及趋化因子 |
| 2.5 结论 |
| 第三部分 兔眼涡静脉回流受阻模型的建立 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验研究对象 |
| 3.2.2 实验仪器及设备 |
| 3.2.3 实验试剂及药品 |
| 3.2.4 实验分组及步骤 |
| 3.2.5 实验动物模型分析 |
| 3.2.6 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 实验动物影像学分析 |
| 3.3.2 实验动物房水/玻璃体液细胞因子分析 |
| 3.3.3 实验动物病理学分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录一: 英文缩略词表 |
| 附录二：综述 息肉状脉络膜血管病变发病机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录三: 个人简历 |
| 致谢 |
（7）IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 论文总体设计 |
| 第一部分 IGF-1或MGF和巨噬细胞介导的损伤骨骼肌再生的关系研究综述 |
| 1 前言 |
| 2 巨噬细胞及其亚群和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 2.1 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 2.2 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌肌再生调节因子 |
| 2.3 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 2.4 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌趋化因子 |
| 2.5 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 2.6 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 2.7 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌氧化应激因子 |
| 3 IGF-1和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 3.1 在肌再生中IGF-1和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 3.2 在肌再生中IGF-1和巨噬细胞及其亚群 |
| 3.3 在肌再生中IGF-1和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 3.4 在肌再生中IGF-1和骨骼肌趋化因子 |
| 3.5 在肌再生中IGF-1和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 3.6 在肌再生中IGF-1和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 4 MGF和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 4.1 在肌再生中MGF和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 4.2 在肌再生中MGF和巨噬细胞及其亚群 |
| 4.3 在肌再生中MGF和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 4.4 在肌再生中MGF和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 4.5 在肌再生中MGF和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 第二部分 注射IGF-1未改善巨噬细胞剔除所致的骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 骨骼肌挫伤动物模型 |
| 2.4 脂质体注射 |
| 2.5 IGF-1注射 |
| 2.6 肌肉再生和纤维化的组织形态学评价 |
| 2.7 免疫荧光染色 |
| 2.8 RNA分离与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) |
| 2.9 实时定量PCR(Rt-qPCR) |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌再生的影响 |
| 3.2 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌纤维化的影响 |
| 3.3 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞及其亚型的影响 |
| 3.4 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌源性调节因子的影响 |
| 3.5 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌血管生成调节因子的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 注射IGF-1未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的再生肌纤维减少 |
| 4.2 注射 IGF-1 未能改善由巨噬细胞剔除引起的挫伤肌肉的延迟修复(其取决于MRFs 增加),特别是在修复的后期 |
| 4.3 注射 IGF-1 未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的肌肉纤维化加重 |
| 4.4 注射 IGF-1 未能促进巨噬细胞剔除后巨噬细胞亚群之间的协调,从而未改善挫伤肌肉的再生和修复 |
| 4.5 注射IGF-1部分改善了巨噬细胞剔除诱导的血管生成调节因子的抑制,但不能改善挫伤肌肉受损的再生和修复 |
| 5 结论 |
| 第三部分 注射 MGF 对巨噬细胞剔除所致的骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 骨骼肌挫伤模型 |
| 2.3 巨噬细胞剔除 |
| 2.4 MGF处理 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 Masson三色染色 |
| 2.7 免疫荧光染色 |
| 2.8 RNA提取,cDNA合成和实时聚合酶链式反应(PCR) |
| 2.9 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌再生的影响 |
| 3.2 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌纤维化的影响 |
| 3.3 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌卫星细胞功能状态的影响 |
| 3.4 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的影响 |
| 3.5 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子的影响 |
| 3.6 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌趋化因子的影响 |
| 3.7 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌基质金属蛋白酶的影响 |
| 3.8 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌gp91phox的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 注射MGF对巨噬细胞剔除后肌纤维再生无改善作用,但能减轻巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌的纤维化 |
| 4.2 注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌卫星细胞的功能状态 |
| 4.3 注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的表达 |
| 4.4 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子的表达 |
| 4.5 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌趋化因子的表达 |
| 4.6 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌基质金属蛋白酶的表达 |
| 4.7 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌gp91phox的表达 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 缩略词表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间科研与发表论文情况 |
（8）黄连解胰汤通过抑制肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化介导抗胰腺癌的作用及其机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 黄连解胰汤对胰腺癌细胞生长及迁移的影响 |
| 1 材料及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄连解胰汤对胰腺癌移植瘤生长的作用 |
| 1 材料及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 黄连解胰汤对肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化和血管生成的作用及机制 |
| 1 材料及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（9）骨髓间充质干细胞移植减少缺血诱导的血脑屏障破坏（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 绪论 |
| 血脑屏障(BBB) |
| 基质金属蛋白酶(MMPs) |
| 炎症反应 |
| 内皮细胞和细胞间粘附因子(ICAM-1) |
| 骨髓间充质干细胞(MSCs) |
| 单腺苷酸蛋白激酶通路 |
| 第一章 骨髓间充质干细胞的分离培养鉴定 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 研究对象 |
| 1.2.2 主要仪器与试剂 |
| 1.2.3 骨髓间充质干细胞分离 |
| 1.2.4 骨髓间充质干细胞培养 |
| 1.2.5 流式细胞术鉴定 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 骨髓间充质干细胞培养与形态 |
| 1.3.2 骨髓间充质干细胞鉴定 |
| 1.3.3 骨髓间充质干细胞示踪 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 骨髓间充质干细胞在脑缺血急性期的作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 研究对象 |
| 2.2.2 主要仪器与试剂 |
| 2.2.3 实验设计 |
| 2.2.4 短暂性大脑中动脉栓塞模型(t MCAO)的制作 |
| 2.2.5 立体定位注射 |
| 2.2.6 行为学评分(m NSS) |
| 2.2.7 灌注取脑及冰冻切片 |
| 2.2.8 焦油紫染色及梗死统计 |
| 2.2.9 免疫组织化学染色(免疫球蛋白G) |
| 2.2.10 免疫荧光染色 |
| 2.2.11 免疫组化染色(MPO) |
| 2.2.12 髓过氧化物酶活力测定(MPO) |
| 2.2.13 RNA提取 |
| 2.2.14 反转录及PCR |
| 2.2.15 数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 骨髓间充质干细胞改善小鼠脑缺血后的行为学 |
| 2.3.2 骨髓间充质干细胞减轻缺血性脑梗死体积损伤 |
| 2.3.3 骨髓间充质干细胞减轻免疫球蛋白G蛋白的外渗 |
| 2.3.4 骨髓间充质干细胞减少紧密连接蛋白的表达(ZO-1 等) |
| 2.3.5 骨髓间充质干细胞减少炎症因子IL-1 等的表达 |
| 2.3.6 骨髓间充质干细胞减少嗜中性粒细胞的浸润 |
| 2.3.7 骨髓间充质干细胞减少嗜中性粒细胞活力 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 骨髓间充质干细胞对基质金属蛋白酶-9表达的调节作用及其可能机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 研究对象 |
| 3.2.2 主要仪器和试剂 |
| 3.2.3 实验分组及设计 |
| 3.2.4 短暂性大脑中动脉栓塞模型的制作(t MCAO) |
| 3.2.5 SB-CT腹腔给药 |
| 3.2.6 动物组织蛋白质提取 |
| 3.2.7 bEnd.3 培养 |
| 3.2.8 体外糖氧剥夺(OGD)模型 |
| 3.2.9 bEnd.3 与骨髓间充质干细胞共培养 |
| 3.2.10 骨髓间充质干细胞条件培养基的准备 |
| 3.2.11 细胞蛋白提取 |
| 3.2.12 BCA试剂盒测蛋白浓度 |
| 3.2.13 蛋白印迹法(Western Blot) |
| 3.2.14 明胶酶谱 |
| 3.2.15 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 骨髓间充质干细胞移植减少基质金属蛋白酶-9的m RNA产生 |
| 3.3.2 骨髓间充质干细胞移植减少基质金属蛋白酶-9 的蛋白表达 |
| 3.3.3 骨髓间充质干细胞移植减少基质金属蛋白酶-9 的活力 |
| 3.3.4 骨髓间充质干细胞减少在体细胞间粘附因子-1 表达 |
| 3.3.5 体外骨髓间充质干细胞共培养使b End.3 分泌细胞间粘附因子-1减少 |
| 3.3.6 骨髓间充质干细胞对细胞间粘附因子-1 表达的调节作用及其可能机制 |
| 3.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 |
（10）肿瘤条件下单核样髓源抑制细胞的形成及作用的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 研究背景 |
| 一、肿瘤与肿瘤转移 |
| 二、肿瘤预转移微环境 |
| 三、肿瘤与炎症 |
| 四、骨髓起源抑制细胞(MDSC) |
| 五、CXCL1与CXCL2 的研究进展 |
| 六、本论文研究内容和意义 |
| 第二部分 实验材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第三部分 实验结果与分析 |
| 一、肿瘤分泌因子诱导mo-MDSCs的扩增 |
| 二、CXCL1和CXCL2 在肿瘤中高表达,并且能特异性诱导mo-MDSCs的扩增 |
| 三、CXCL1或CXCL2 的降低会减少mo-MDSCs的扩增 |
| 四、CXCL1和CXCL2 不影响mo-MDSCs的趋化、增殖和凋亡 |
| 五、在荷瘤鼠中,mo-MDSCs募集到预转移微环境中 |
| 六、mo-MDSCs促进肿瘤细胞的捕获与转移,并且肿瘤细胞的捕获与E-selectin表达相关 |
| 七、在预转移肺中,募集的mo-MDSCs促进E-selectin的表达 |
| 八、预转移肺中mo-MDSCs通过分泌IL-1β促进内皮细胞中E-selectin的表达 |
| 九、在预转移肺中,IL-1β主要由募集的mo-MDSCs产生 |
| 十、在预转移肺中,CCL12 是主要的募集mo-MDSCs的趋化因子 |
| 第四部分 讨论 |
| 一、CXCL1和CXCL2与mo-MDSC产生 |
| 二、mo-MDSC与肿瘤细胞捕获与转移 |
| 三、mo-MDSC与 E-selectin表达 |
| 四、CCL12 趋化mo-MDSC的募集 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间公开发表论文及着作情况 |
四、血管内皮生长因子对内皮细胞产生基质金属蛋白酶2的影响（论文参考文献）
- [1]内皮和胃癌来源的ADAM28对胃癌细胞凋亡的调控作用及机制研究[D]. 尹倩茹. 华东理工大学, 2021
- [2]益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制[J]. 樊飞燕,张运克. 中国组织工程研究, 2021(13)
- [3]硫酸肝素蛋白多糖复合碱性成纤维细胞生长因子促进心梗修复的研究[D]. 施家佳. 中国科学技术大学, 2021(06)
- [4]促红细胞生成素导致腹主动脉瘤形成的作用及分子机制研究[D]. 章萌. 山东大学, 2020(12)
- [5]MMP-9、VEGF与中风证型相关性研究以及丁苯酞干预后的差异[D]. 徐杨. 江西中医药大学, 2020(05)
- [6]血流动力学改变在息肉状脉络膜血管病变发病机制中的作用研究[D]. 原铭贞. 北京协和医学院, 2020(05)
- [7]IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究[D]. 曾志刚. 上海体育学院, 2019
- [8]黄连解胰汤通过抑制肿瘤微环境M2型巨噬细胞分化介导抗胰腺癌的作用及其机制[D]. 陈凯. 苏州大学, 2018(04)
- [9]骨髓间充质干细胞移植减少缺血诱导的血脑屏障破坏[D]. 成卓. 上海交通大学, 2018(01)
- [10]肿瘤条件下单核样髓源抑制细胞的形成及作用的机制研究[D]. 时会芳. 东北师范大学, 2017(05)
标签：巨噬细胞论文; 对照组论文; 血管内皮生长因子论文; 基质金属蛋白酶论文; epo论文;